CN105381024A - 一种用于治疗鸡球虫病的药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于治疗鸡球虫病的药物组合物,是由按照重量份计的以下组分制备得到的:伊维菌素0.25-2.5份,常山提取物2.5-25份,黄芪提取物15-25份,乌梅提取物15-25份,仙鹤草提取物10-15份,纯化凹凸棒石500份;并提供了其制备方法。本发明的有益效果为:本发明提供的药物组合物,抗球虫指数达到为195以上,该配方由中西药组成,口服制剂中辅料是凹凸棒石,故有缓释作用,且不易出现残留,因此具有明显的优势。通过体外抗球虫孢子化试验及对人工感染球虫雏鸡的处理效果试验,确定本发明的中药组合物的抗球虫效果,为进一步确定复方药的应用范围,为相应企业开发高品质的产品提供新途径,拓展药物资源应用的新领域,研发抗球虫新药提供良好基础,具有明显意义。
Description
技术领域
本发明涉及药物组合物技术领域,具体涉及一种用于治疗鸡球虫病的药物组合物及其制备方法。
背景技术
伊维菌素是广谱抗寄生虫药,对体内、外寄生虫特别是线虫和节肢动物有良好的驱杀作用。杀虫机理是药物与靶虫细胞上的特异性高亲合力的位点结合,影响了细胞膜对Cl-的通透性,继而引起线虫的神经细胞及节肢动物的肌细胞抑制性神经递质γ-氨基丁酸(GABA)的释放量增加,以及打开谷氨酸控制的Clˉ通道,增强神经膜对Clˉ的通透性,GABA作用于突触前神经末梢,减少兴奋性递质的释放,使突触后膜产生兴奋性突触后电位减弱,突触后神经元因膜电位的去极化程度达不到阈值而不能进入兴奋状态,从而引起抑制,虫体麻痹、死亡。鸡球虫病是由艾美耳属的多种球虫寄生于鸡肠上皮细胞内所引起的一种原虫病。该病分布广、危害大,是全球性流行的严重危害养鸡业的疾病之一,在各种鸡病中,球虫病的发生率最高,占1/6-1/5,严重威胁养禽业的发展。为更好地控制鸡球虫病,世界各国对球虫病都进行了深入细致的研究。目前,虽然国内外专家学者对球虫疫苗的研究有了一定进展,但因球虫疫苗的研制和应用尚存在许多关键性问题,在短期内还难以推广应用。因此,控制球虫病的主要手段仍然是化学药物防治。由于长期使用化学药物,耐药性与药物残留两大问题又日趋严重。球虫的耐药性问题及所造成的高发病率和死亡率一直阻碍着养鸡业的健康发展。近年来,应用中草药防治鸡球虫病的研究取得了一定进展,既可防治球虫病,又可解决肉蛋中的药物残留,但是单纯应用中药通常见效慢,影响临床应用。本发明应用中西药结合取得了较好的效果。
凹凸棒石粘土是指以凹凸棒石为主要组分的一种粘土矿物。凹凸棒石为一种晶质水合镁铝硅酸盐矿物,具有独特的层链状结构特征,在其结构中存在晶格置换,帮晶体中含有不定量的Na+、Ca2+、Fe3+、Al3+,晶体呈针状,纤维状或纤维集合状。凹凸棒石具有独特的分散、耐高温、抗盐碱等良好的胶体性质和较高的吸附能力。由于凹凸棒石独特的晶体结构,使之具有许多特殊的物化及工艺性能。主要物化性能和工艺性能有:阳离子可交换性、吸附性、吸附脱色性,大的比表面积(9.6~36m2/g)以及胶质价和膨胀容。这些性质可保护伊维菌素不会因为酸碱环境的改变而使其效果减弱,而且其本身能够帮助修复炎症肠道,可使药物在鸡胃肠部接触时间延长,而对将其毒副作用下降,同时其稳定性也大大增强。故提高了其生物活性。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷,提供了一种用于治疗鸡球虫病的药物组合物及其制备方法。
为了实现上述目的,本发明提供的技术方案为:一种用于治疗鸡球虫病的药物组合物,是由按照重量份计的以下组分制备得到的:伊维菌素0.25-2.5份,常山提取物2.5-25份,黄芪提取物15-25份,乌梅提取物15-25份,仙鹤草提取物10-15份,纯化凹凸棒石500份。
进一步的,上述的一种用于治疗鸡球虫病的药物组合物,是由按照重量份计的以下组分制备得到的:伊维菌素1.38份,常山提取物13.75份,黄芪提取物20份,乌梅提取物27.5份,仙鹤草提取物12.5份,纯化凹凸棒石500份。
进一步的,上述的一种用于治疗鸡球虫病的药物组合物,是由按照重量份计的以下组分制备得到的:伊维菌素0.25份;常山碱提取物25份;黄芪提取物25份;乌梅提取物25份;仙鹤草提取物15份,纯化凹凸棒石500份。
本发明的第二个目的是提供了上述一种用于治疗鸡球虫病的药物组合物的制备方法,先按照重量配比称取各组分,将伊维菌素加入到纯化凹凸棒石中,搅拌1小时后,再加入常山提取物、黄芪提取物、乌梅提取物和仙鹤草提取物,搅拌0.5小时后,过100目筛即得到用于防治鸡球虫病的药物组合物。
试验证明,凹凸棒石与伊维菌素结合可对其产生保护作用,提高伊维菌素稳定性,增强对鸡球虫病的防治效果,并可吸附肠道液体,帮助修复炎症。
药物组合物的剂型为散剂,在本发明的试验部分,本申请人将其制备成散,事实上,本发明药物的剂型并不限于口服制剂,也可采用常规的辅料将其制成注射剂、口服液、片剂、胶囊剂等剂型。不同剂型药物的治疗效果相近。
本发明的有益效果为:本发明提供的一种用于治疗鸡球虫病的药物组合物及其制备方法,将伊维菌素、凹凸棒石、常山提取物、黄芪提取物、乌梅提取物及仙鹤草提取物进行组方用于治疗鸡球虫病,抗球虫指数达到为195以上。该配方由中西药组成,口服制剂中辅料是凹凸棒石,故有缓释作用,且不易出现残留,因此具有明显的优势。通过体外抗球虫孢子化试验及对人工感染球虫雏鸡的处理效果试验,确定本发明的中药组合物的抗球虫效果,为进一步确定复方药的应用范围,为相应企业开发高品质的产品提供新途径,拓展药物资源应用的新领域,研发抗球虫新药提供良好基础,具有较明显的意义。
具体实施方式
本发明所用到的试剂或药品参见表1。
表1
实施例1:
本发明的用于治疗鸡球虫病的中西药散的配方如下:
伊维菌素0.25g;
常山提取物25g;
黄芪提取物25g;
乌梅提取物25g;
仙鹤草提取物15g;
凹凸棒石500g。
本发明的用于治疗鸡球虫病的中西药散的制备方法如下:
将配方量的伊维菌素加入400g凹凸棒石中混合搅拌1小时,搅拌均匀后,再加入常山提取物、黄芪提取物、乌梅提取物和仙鹤草提取物,再用凹凸棒石加至500g,搅拌0.5小时,过筛(100目),分装,得到本发明的用于治疗鸡球虫病的中药组合物。
实施例2:
本发明的用于治疗鸡球虫病的中药组合物的配方如下:
伊维菌素1.38g;
常山提取物13.75g;
黄芪提取物20g;
乌梅提取物27.5g;
仙鹤草提取物12.5g;
凹凸棒石500g。
本实施例的用于治疗鸡球虫病的中西药散的制备方法与实施例1相同。
实施例3:
本发明的用于治疗鸡球虫病的中西药组合物的配方如下:
伊维菌素2.5g;
常山提取物2.5g;
黄芪提取物15g;
乌梅提取物15g;
仙鹤草提取物10g;
凹凸棒石500g。
本实施例的用于治疗鸡球虫病的中西药散的制备方法与实施例1相同。
实施例4:
对照组:
配方为:
妥曲珠利0.25g;
凹凸棒石500g。
制备方法同实施例1。
本试验使用妥曲珠利药物作为对照,主要考虑它的使用比较普遍,对于结果的判定具有一定的参考价值。
实施例5:
配方为:
伊维菌素2.5g;
凹凸棒石500g。
制备方法同实施例1。
实施例6:
药效试验:
现有技术中,很多学者都在进行中西药抗球虫的研究,但是大多数抗球虫中药的研究还只是在复方的筛选和临床疗效试验上,至于抗球虫药疗效的实际应用情况及产业化,进行的工作很少,也不够系统和深入,这对抗球虫药的发展是很不利的,也对后期新制剂的研发产生负面影响。
本发明拟通过不同剂量组的中西药组合物对卵囊孢子化率的影响,来确定本发明的中西药组合物是否具有抗卵囊孢子化的作用,以便更好地指导以后的研究、开发和应用。
由于鸡球虫属直接发育型,需要经过裂殖生殖、配子生殖和孢子生殖三个阶段才能完成整个生活史历程。其中,裂殖生殖和配子生殖在雏鸡的体内进行,而孢子生殖在外界环境中完成,即从被感染鸡体内排出的球虫卵囊需要经过孢子化过程成为孢子化卵囊,才具有感染力,为此,在本次试验中,通过观测本发明的中西药组合物对球虫孢子化率的影响,来研究本发明的中西药组合物体外抗柔嫩艾美耳球虫的作用,为研究开发抗球虫药物提供依据。
1试验材料与方法:
1.1试验材料:
1.1.1试验动物:
纯种柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)卵囊,由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所药物室提供。试验前人工感染无球虫鸡继代1次,收集试验用卵囊。卵囊经离心收集后立即放入4℃冰箱中保存以防止其孢子化;保存备用。接种前进行孢子化。
1.1.2试验药物:
材料:本发明的中西药组合物、所用药品见表1、胃蛋白酶(上海蓝季科技发展有限公司)、氯化钠(青海盐业集团)、重铬酸钾(沈阳市新化试剂厂)。
1.1.3仪器:
电子天平(AB204-N(producedbyMettler-ToledoGroup))、数显恒温水浴锅HH-6(常州市华普达教学仪器有限公司)、LD4-2A离心机(江苏江阳科技器械厂)、DHP060恒温培养箱(上海试验仪器厂有限公司),显微镜K3-210(麦克奥迪实业集团有限公司)。
1.2试验方法:
1.2.1收集病料:将接种球虫雏鸡进行剖检,取出盲肠,纵向切开,用盖玻片刮出内容物,将内容物放入配好的胃蛋白酶溶液中,搅拌均匀。放置在39℃的水域中加热2h,依次用50目、100目、200目筛过滤,收集滤液;
1.2.2将滤液在1500r/min下离心10min,弃去上清液,将沉淀物中加入少量水进行吹打,再加入10倍水进行同条件下离心10min,反复三次,除去蛋白酶;
1.2.3收集沉淀:沉淀物即为所分离的球虫卵囊。取沉淀物加入10倍量的2.5%重铬酸钾溶液在振荡器上震荡至混合均匀;
1.2.4将上述混匀液体平均分成六组,一组空白对照(2.5%重铬酸钾),六组加药组,加相同浓度各组药物。用培养皿培养,培养温度为28℃,震荡器上培养2天;
1.2.5记录孢子化后球虫卵囊数。将上述培养后液体用吸管吸取加入16×25的细胞计数板上,放入显微镜下,在低倍镜下观察,记录卵囊数(卵囊数/ml=100小格内的细胞数/100×400×10000×稀释倍数)。将数据进行比较。
孢子化率(%)=(孢子化卵囊数/记录卵囊总数)×100%。
2、结果:
通过体外试验获得孢子化率的数据,具体如表2不同药物的孢子化率所示。
表2
通过表2可以看出:实施例2制备的中西药组合物对孢子化抑制作用最大,其次是实施例3制备、实施例1制备,说明本发明的中西药组合物均具有抗球虫孢子化作用,其中,实施例2制备的中西药组合物的效果最佳,较对照组作用强。以实施例2制备的中西药组合物继续进行以下实验。
实施例9:
本发明的中药组合物抗鸡柔嫩艾美耳球虫的疗效研究:
1材料与方法:
1.1材料与设备:
1.1.1材料:本发明实施例2制备的中西药组合物、胃蛋白酶(上海蓝季科技发展有限公司)和妥曲珠利(武汉嘉凯隆科技发展有限公司)。1日龄海兰褐公雏鸡126只,由甘肃陇华鸡场提供,喂养至13日龄。肉鸡饲料依照标准配制,由甘肃省饲料厂提供。
1.1.2设备:电子天平AB204-N(producedbyMettler-ToledoGroup)、数显恒温水浴锅HH-6(常州市华普达教学仪器有限公司)、LD4-2A离心机(江苏江阳科技器械厂)、DHP060恒温培养箱(上海试验仪器厂有限公司)显微镜K3-210(麦克奥迪实业集团有限公司)。
1.2方法:
1.2.1雏鸡的分组:将13日龄雏鸡随机分成7组,对照组攻虫不给药,对照组(伊维菌素)、对照组(妥曲珠利)及给药组共有4组,分别为不同剂量的实施例2制备的中药组合物,药物对照组为复合妥曲珠利(实施例4),雏鸡具体分组情况如表3所示。
表3
1.2.2球虫的分离及培养:收集患有柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenella)病鸡(由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所药物室提供)的粪便,逐日粪检,待到卵囊出现达高峰时,收集粪便,分离卵囊,加入2.5%重铬酸钾,28℃培养,让其孢子化,保存备用。
1.2.3体内抗球虫试验:
1.2.3.1给药组的雏鸡,分别按隔天0.5、1、1.5、2.0mg/只的剂量(试验期为8d),口服;给药的第1天同时经口灌服接种柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊5×104个/只。
1.2.3.2攻虫不给药组的雏鸡,接种柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊5×104个/只,且不进行任何其他处理。
1.2.3.3药物对照组的雏鸡,隔天口服1.6mg的复合妥曲珠利、伊维菌素,同时在给药的第1天接种柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊5×104个/只(试验期连续给药)。
1.2.3.4临床观察各组雏鸡8d,随时观察和记录动物的行为,外观活动、粪便和体温等情况。
1.2.3.5试验结束时,对所有鸡进行称重、统计存活率、相对增重率,剖检记录盲肠病变值、盲肠内容物称重及卵囊数量检测等。
1.2.4治疗指标:
1.2.4.1相对增重率:
相对增重率(%)=感染投药组的平均增重/不感染不投药组的平均增重×100%。
1.2.4.2存活率:
存活率(%)=(组内总鸡数-每组因感染球虫死亡的鸡数)/组内总鸡数×100%。
1.2.4.3血便记分:
接种卵囊后第4,5,6,7,8天,参照Morehouse(1970)的方法,按以下标准记分:
0分:100%粪便不带血;
1分:1~25%粪便带血;
2分:26~50%粪便带血;
3分:51~75%粪便带血;
4分:76~100%粪便带血。
1.2.4.4病变记分
参照Johnson和Reid(1970)的标准,根据剖检后肠道病变的严重程度记分。
0分:无肉眼病变;
1分:盲肠壁有很少散在的癖点,肠壁不增厚,内容物正常;
2分:病变数量较多,盲肠内容物明显带血,盲肠壁稍增厚,内容物正常;
3分:盲肠内有多量血液和肠芯,血凝块可见灰白色干酪样的香蕉型块状物,盲肠壁明显增厚盲肠中粪便含量少;
4分:盲肠中充满大量的血液和肠芯,盲肠肿大,肠芯中含有粪渣或不含,因球虫感染死亡鸡也记为4分。
病变值=每组平均病变记分×100。
1.2.4.5卵囊排出情况:
在球虫感染后第4天至第8天收集粪便,按照McMaster's法计算克粪便卵囊数(Oocystpergram,OPG)。
方法:将收集的粪便搅匀后,称取2g,加适量饱和食盐水搅匀,用60目网筛充分过滤。
将滤液稀释至60m1,然后用麦氏计数板记数,最后求其平均值。如果卵囊的数量太多,则按照梯度稀释,然后计数,再乘以稀释倍数。
1.2.4.6盲肠内容物卵囊情况:
在球虫感染后第8天,剖杀试验鸡,取出盲肠内容物,按照McMaster's法计数克粪便卵囊数(OPG)。
1.2.4.7卵囊值
根据盲肠内容物的OPG值,即每克粪便中的卵囊数(柔嫩×106)按角田清方法换算卵囊值:
当OPG值为0~0.1时,卵囊值为0;
当OPG值为0.11~1时,卵囊值为1;
当OPG值为1.1~1.9时,卵囊值为10;
当OPG值为2.0~5.9时,卵囊值为20;
当OPG值为6.0~10.9时,卵囊值为20;
当OPG值为11.0时,卵囊值为40。
1.2.4.8抗球虫指数(ACI):
采用默克公司的标准计算抗球虫指数:
抗球虫指数(ACI)=(相对增重率+存活率)﹣(病变值+卵囊值)。
药效判定标准为:
ACI小于120,判疗效差;
ACI为120~160,疗效中等;
ACI为160~180,疗效良好;
ACI大于180,判疗效优秀。
2结果:
2.1一般观察及存活率试验期间,给药组的雏鸡精神良好,采食正常,只有少部分打蔫,排血便情况也较对照组要好,产生血便较晚,转好相对较快。对照组鸡雏精神沉郁,采食量减少,翅膀下垂,蓬松,泄殖腔周围羽毛被粪便污染,闭目呆卧,继而出现拉稀或者血便等现象。试验结束时,给药组鸡雏存活率高,1.6mg只存活率100%;对照组死亡16只,存活率仅为20.0%。表4显示为不同处理组雏鸡存活率(每天的数据是死亡鸡雏数)。
表4
组别 | 初始数量 | 4d | 5d | 6d | 7d | 8d | 存活率 |
对照组 | 20 | 2 | 7 | 4 | 2 | 1 | 20.0 |
给药一组 | 20 | 2 | 3 | 3 | 1 | 0 | 55.0 |
给药二组 | 18 | 1 | 3 | 2 | 1 | 0 | 61.1 |
给药三组 | 18 | 0 | 2 | 1 | 1 | 1 | 72.2 |
给药四组 | 20 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 100.0 |
对照组(伊维菌素) | 18 | 1 | 2 | 2 | 1 | 0 | 66.7 |
对照组(妥曲珠利) | 12 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 100.0 |
对上述存活率的数据进行了方差分析,各给药组与对照组差异极显著,说明本发明的中西药组合物确有抗球虫的功效;给药组与药物对照组和空白对照组的差异也是极显著。
2.2血便计分:接种卵囊后第4、5、6、7、8天,参照以上方法记分,不同处理组雏鸡血便记分结果如表5所示。
表5
组别 | 4d | 5d | 6d | 7d | 8d | 平均 |
对照组 | 1 | 3 | 3 | 4 | 4 | 3.0 |
给药一组 | 1 | 2 | 4 | 3 | 1 | 2.2 |
给药二组 | 0 | 2 | 3 | 1 | 1 | 1.4 |
给药三组 | 0 | 1 | 2 | 1 | 0 | 0 |
给药四组 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
对照组(伊维菌素) | 0 | 0 | 1 | 1 | 0 | 0.4 |
对照组(妥曲珠利) | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
由表5可见,对照组排血便情况明显,病症较重。在第4天出现死亡情况;给药组排血便情况较对照组要轻,而且好转较快。血便的情况与给药浓度有关,随着给药浓度的提高,血便情况逐渐减轻。
2.3体重变化:不同处理组雏鸡体重变化情况,由表6可见,试验前各组鸡的平均体重为125.01g/只,差异不显著。试验结束后,各给药组的日均增重均高于对照组。对各组的末重进行了称重比较,各给药组与对照组及空白对照组检验的结果见表6,从表6的结果可看出多数给药组末重明显高于对照组(伊维菌素)。
表6
组别 | 初重/g | 末重/g | 净增重/g | 日均增重/g | 相对增重/% |
对照组 | 124.01 | 139.00 | 14.99 | 1.87 | 20.0 |
给药一组 | 124.08 | 164.00 | 39.92 | 4.99 | 54.2 |
给药二组 | 126.14 | 175.89 | 49.75 | 6.22 | 67.6 |
给药三组 | 125.28 | 187.9 | 62.62 | 7.83 | 85.1 |
给药四组 | 124.31 | 197.66 | 73.48 | 9.19 | 99.9 |
对照组(伊维菌素) | 124.18 | 178.21 | 54.03 | 6.75 | 73.3 |
对照组(妥曲珠利) | 127.2 | 201.0 | 73.9 | 9.2 | 100 |
2.4盲肠变化及盲肠内容物卵囊计数:对处理9d的雏鸡进行剖检,按照病变计分标准对盲肠的变化进行记录打分,不同处理组抗球虫效果如表7所示。由表7可见,对照组、给药一组、给药二组、给药三组、给药四组、药物对照组、空白对照组病变值分别为28、27、25、20、20、10、0。说明本发明的中西药组合物对鸡球虫有抑制,从而对盲肠有一定的保护作用,降低了损伤程度,盲肠内容物卵囊数多少也许是同样的原因。
表7
组别 | 相对增重率/% | 存活率/% | 病变值 | 卵囊值 | 抗球虫指数 |
对照组 | 19.3 | 20.1 | 28 | 1 | 10.6 |
给药一组 | 44.1 | 60.1 | 27 | 1 | 86.2 |
给药二组 | 54.2 | 72.3 | 25 | 1 | 110.6 |
给药三组 | 69.3 | 77.9 | 20 | 1 | 136.1 |
给药四组 | 88.4 | 100.0 | 10 | 1 | 198.1 |
对照组(伊维菌素) | 69.1 | 83.4 | 20 | 1 | 158.4 |
对照组(妥曲珠利) | 100.0 | 100.0 | 0 | 0 | 200.0 |
由表7可知:本发明的中西药组合物抗球虫指数在0.8mg/只给药组为110.6,可判定为中等,1.2mg/只给药组及药物对照组均达130以上,可判定为疗效良好,1.6mg/只抗球虫指数达198.1,属于疗效优秀;表明本发明的中药组合物有好的抗鸡球虫的活性。
最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种用于治疗鸡球虫病的药物组合物,其特征在于,是由按照重量份计的以下组分制备得到的:伊维菌素0.25-2.5份,常山提取物2.5-25份,黄芪提取物15-25份,乌梅提取物15-25份,仙鹤草提取物10-15份,纯化凹凸棒石500份。
2.根据权利要求1所述的一种用于治疗鸡球虫病的药物组合物,其特征在于,是由按照重量份计的以下组分制备得到的:伊维菌素1.38份,常山提取物13.75份,黄芪提取物20份,乌梅提取物27.5份,仙鹤草提取物12.5份,纯化凹凸棒石500份。
3.根据权利要求1所述的一种用于治疗鸡球虫病的药物组合物,其特征在于,是由按照重量份计的以下组分制备得到的:伊维菌素0.25份;常山碱提取物25份;黄芪提取物25份;乌梅提取物25份;仙鹤草提取物15份,纯化凹凸棒石500份。
4.根据权利要求1-3任一所述的一种用于治疗鸡球虫病的药物组合物的制备方法,其特征在于,先按照重量配比称取各组分,将伊维菌素加入到纯化凹凸棒石中,搅拌1小时后,再加入常山提取物、黄芪提取物、乌梅提取物和仙鹤草提取物,搅拌0.5小时后,过100目筛即得到用于防治鸡球虫病的药物组合物。
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