CN106039164A - 一种用于治疗鸡球虫病的中药散及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种用于治疗鸡球虫病的中药散，它是由下列重量份的原料制成的：花椒油2.5‑10份，鹤虱提取物2.5‑25份，百部提取物15‑25份，南瓜子提取物15‑25份，黄芩提取物10‑15份，凹凸棒石500份。本发明由原来的纯中药粉碎改为应用其提取物，大大提高了其药物的疗效，花椒油与凹凸棒石结合可对花椒油产生保护作用，并对其不稳定的成分进行包合处理，提高花椒油稳定性，对鸡球虫病具有一定的防治效果,抗球虫指数达到193.2以上。

Description

一种用于治疗鸡球虫病的中药散及其制备方法
技术领域
本发明属于兽药技术领域，具体涉及一种用于治疗鸡球虫病的中药散及其制备方法。
背景技术
鸡球虫病是鸡常见且危害十分严重的寄生虫病，是由一种或多种球虫引起的急性流行性寄生虫病。它造成的经济损失是惊人的。10～30日龄的雏鸡或35～60日龄的青年鸡的发病率和致死率可高达80％。病愈的雏鸡生长受阻，增重缓慢；成年鸡一般不发病，但为带虫者，增重和产蛋能力降低，是传播球虫病的重要病源。
鸡球虫病以柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的致病力最强，寄生于盲肠，俗称盲肠球虫病。21～50日龄雏鸡多发。病初羽毛竖立，缩颈、呆立，由于肠上皮细胞的大量破坏和机体中毒，病情转重，出现共济失调，腹泻带血等症状，死亡率高，甚至全群覆没。
长期以来，化学合成类药物和离子载体类抗生素类抗球虫在防治球虫病中发挥了十分重要的作用。由于球虫对抗球虫药物极易产生耐药性，同时容易造成药物在鸡肉及蛋类产品中残留，给食品安全带来了潜在的威胁，迫切需要找到高效、安全、不易产生耐药性和药物残留的抗球虫药物。中药作为天然药物，在防治球虫病方面具有其独特的优势，如来源广泛，抗药性和药物残留少，对动物体兼有药物性及营养性的双重作用等，成为众多学者研究的热点。
我国不少学者都在进行中药抗球虫的研究，但是大多数抗球虫中药的研究还只是在复方的筛选和临床疗效试验上，至于抗球虫药疗效的实际应用情况及产业化，进行的工作很少，也不够系统和深入，这对抗球虫药的发展是很不利的，也对后期新制剂的研发产生负面影响。
本发明在我公司传统中药复方，通过产品提升，由原来的纯中药粉碎改为应用其提取物，并对其不稳定的成分进行包合处理，大大提高了其药物的疗效。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种用于治疗鸡球虫病的中药散及其制备方法。
本发明采用的技术方案为：
一种用于治疗鸡球虫病的中药散，它是由下列重量份的原料制成的：花椒油2.5-10份，鹤虱提取物2.5-25份，百部提取物15-25份，南瓜子提取物15-25份，黄芩提取物10-15份，凹凸棒石500份。
一种用于治疗鸡球虫病的中药散，它是由下列重量份的原料制成的：花椒油6.25份，鹤虱提取物12.5份，百部提取物20份，南瓜子提取物15份，黄芩提取物10份，凹凸棒石500份。
一种如上所述的用于治疗鸡球虫病的中药散的制备方法，先将花椒油加入到凹凸棒石中搅拌均匀，再加入鹤虱提取物、百部提取物、南瓜子提取物和黄芩提取物，搅拌均匀后过筛网即得成品。
鹤虱，苦、辛、平；有小毒。归脾、胃经。杀虫消积。用于蛔虫病，蛲虫病，绦虫病，虫积腹痛，小儿疳积。
百部，甘、苦，微温。归肺经。润肺下气止咳，杀虫灭虱。用于新久咳嗽，肺痨咳嗽，顿咳；外用于头虱，体虱，蛲虫病，阴痒。蜜百部润肺止咳。用于阴虚劳嗽。
南瓜子，甘，平。归胃、大肠经。杀虫。用于绦虫病，蛔虫病及血吸虫病。
黄芩，苦，寒。归肺、胆、脾、大肠、小肠经。清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎。用于湿温、暑湿，胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安。
花椒油的麻香味强弱是由花椒酰胺类物质含量决定的，花椒油中的烯烃和花椒酰胺对氧化和酸碱比较敏感。因此，花椒油性质不稳定，在使用中最好准备成为包合物，增加其稳定性。
凹凸棒石为一种晶质水合镁铝硅酸盐矿物，具有独特的层链状结构特征，在其结构中存在晶格置换，帮晶体中含有不定量的Na+、Ca2+、Fe3+、Al3+，晶体呈针状，纤维状或纤维集合状。凹凸棒石具有独特的分散、耐高温、抗盐碱等良好的胶体性质和较高的吸附能力。由于凹凸棒石独特的晶体结构，使之具有许多特殊的物化及工艺性能。主要物化性能和工艺性能有：阳离子可交换性、吸附性、吸附脱色性，大的比表面积(9.6～36m2/g)以及胶质介和膨胀容。这些性质可保护花椒油不会因为酸碱环境的改变而使其效果减弱，而且其本身能够帮助修复肠道炎症，可使药物在鸡胃肠部接触时间延长，而将其毒副作用下降，同时其稳定性也大大增强。
本发明的有益效果是：本发明由原来的纯中药粉碎改为应用其提取物，大大提高了其药物的疗效，花椒油与凹凸棒石结合可对花椒油产生保护作用，并对其不稳定的成分进行包合处理，提高花椒油稳定性，对鸡球虫病具有一定的防治效果,抗球虫指数达到193.2以上。
具体实施方式
一种用于治疗鸡球虫病的中药散，它是由下列重量份的原料制成的：花椒油2.5-10份，鹤虱提取物2.5-25份，百部提取物15-25份，南瓜子提取物15-25份，黄芩提取物10-15份，凹凸棒石500份。
一种用于治疗鸡球虫病的中药散，它是由下列重量份的原料制成的：花椒油6.25份，鹤虱提取物12.5份，百部提取物20份，南瓜子提取物15份，黄芩提取物10份，凹凸棒石500份。
一种如上所述的用于治疗鸡球虫病的中药散的制备方法，先将花椒油加入到凹凸棒石中搅拌均匀，再加入鹤虱提取物、百部提取物、南瓜子提取物和黄芩提取物，搅拌均匀后过筛网即得成品。
本发明可以制成中药散，还可以制成注射剂、口服液、片剂和胶囊剂等。
所述的过滤用的筛网的目数为100目。
本发明中用到的实验材料，如无特殊说明，均为从常规生化试剂商店购买得到的。
本发明所用到的试剂或药品参见表1。
表1本发明用到的部分药品
名称 含量 生产厂家
花椒油 99％ 郑州雪麦龙食品香料有限公司
鹤虱提取物 20:1 西安森冉生物工程有限公司
百部提取物 20:1 樟树市百草天然香料油厂
南瓜子提取物 20：1 西安天瑞生物技术有限公司
黄芩提取物 20：1 西安中盈科技发展有限公司
凹凸棒石 医用 费森医药有限公司
妥曲珠利 98％ 武汉嘉凯隆科技发展有限公司
花椒油的纯度为99％；鹤虱提取物是以20:1的比例从鹤虱中提取出来的即20kg鹤虱中提取1kg的鹤虱提取物；百部提取物是以20:1的比例从百部中提取出来的即20kg百部中提取1kg的百部提取物；南瓜子是以20:1的比例从南瓜子中提取出来的即20kg南瓜子中提取1kg的南瓜子提取物；黄芩提取物是以20:1的比例从黄芩中提取出来的即20kg黄芩中提取1kg的黄芩提取物；凹凸棒石是医用的凹凸棒石，妥曲珠利的纯度为98％
实施例1
一种治疗鸡球虫病的中药散，由以下重量的原料药组成：
花椒油2.5g，鹤虱提取物25g，百部提取物25g，南瓜子提取物25g，黄芩提取物15g，凹凸棒石500g。
上述治疗鸡球虫病的中药散的制备方法，将上述重量的花椒油加入400g凹凸棒石中混合搅拌1小时，搅拌均匀后，再加入鹤虱提取物、百部提取物、南瓜子提取物和黄芩提取物，再将凹凸棒石加至500g，搅拌0.5小时，过100目筛网，分装，得到本发明的用于治疗鸡球虫病的中药散。
实施例2
一种治疗鸡球虫病的中药散，由以下重量的原料药组成：
花椒油6.25g，鹤虱提取物12.5g，百部提取物20，南瓜子提取物15g，黄芩提取物10g，凹凸棒石500g。
本实施例用于治疗鸡球虫病的中药散的制备方法与实施例1相同。
实施例3
一种治疗鸡球虫病的中药散，由以下重量的原料药组成：
花椒油10g，鹤虱提取物2.5g，百部提取物15g，南瓜子提取物20g，黄芩提取物12.5g，凹凸棒石500g。
本实施例用于治疗鸡球虫病的中药散的制备方法与实施例1相同。
实施例4对照组
一种治疗鸡球虫病的中药散，由以下重量的原料药组成：
妥曲珠利0.25g，凹凸棒石500g。
本实施例用于治疗鸡球虫病的中药散的制备方法与实施例1相同。
本试验使用妥曲珠利药物作为对照，主要考虑它的使用比较普遍，对于结果的判定具有一定的参考价值。
实施例5
一种治疗鸡球虫病的中药散，由以下重量的原料药组成：
花椒油60g，凹凸棒石500g。
本实施例用于治疗鸡球虫病的中药散的制备方法与实施例1相同。
实施例6
一种治疗鸡球虫病的中药散，由以下重量的原料药组成：
鹤虱提取物60g，凹凸棒石500g。
本实施例用于治疗鸡球虫病的中药散的制备方法与实施例1相同。
实施例7
一种治疗鸡球虫病的中药散，由以下重量的原料药组成：
百部提取物60g，凹凸棒石500g。
本实施例用于治疗鸡球虫病的中药散的制备方法与实施例1相同。
实施例8
一种治疗鸡球虫病的中药散，由以下重量的原料药组成：
南瓜子提取物60g，凹凸棒石500g。
本实施例用于治疗鸡球虫病的中药散的制备方法与实施例1相同。
实施例9 药效试验
我国不少学者都在进行中药抗球虫的研究，但是大多数抗球虫中药的研究还只是在复方的筛选和临床疗效试验上，至于抗球虫药疗效的实际应用情况及产业化，进行的工作很少，也不够系统和深入，这对抗球虫药的发展是很不利的，也对后期新制剂的研发产生负面影响。
本发明在我公司传统中药复方，通过产品提升，由原来的纯中药粉碎改为应用其提取物，并对其不稳定的成分进行包合处理，大大提高了其药物的疗效。本试验拟通过不同剂量组的中药散对卵囊孢子化率的影响，来确定本发明的中药散是否具有抗卵囊孢子化的作用，以便更好地指导以后的研究、开发和应用。
由于鸡球虫属直接发育型，需要经过裂殖生殖、配子生殖和孢子生殖三个阶段才能完成整个生活史历程。其中，裂殖生殖和配子生殖在雏鸡的体内进行，而孢子生殖在外界环境中完成，即从被感染鸡体内排出的球虫卵囊需要经过孢子化过程成为孢子化卵囊，才具有感染力。为此，在本次试验中，通过观测本发明的中药散对球虫孢子化率的影响，研究本发明的中药散体外抗柔嫩艾美耳球虫的作用，为研究开发抗球虫药物提供依据。
1 试验材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试验动物
纯种柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)卵囊，由河南农业大学牧医工程学院提供。试验前人工感染无球虫鸡继代1次，收集试验用卵囊。卵囊经离心收集后立即放入4℃冰箱中保存以防止其孢子化；保存备用。接种前进行孢子化。
1.1.2 试验药物
材料:本发明的中药散、所用药品见表1、胃蛋白酶(上海蓝季科技发展有限公司)、氯化钠(青海盐业集团)、重铬酸钾(沈阳市新化试剂厂)。
1.1.3 仪器
电子天平(AB204-N(produced by Mettler-Toledo Group))、数显恒温水浴锅HH-6(常州市华普达教学仪器有限公司)、LD4-2A离心机(江苏江阳科技器械厂)、DHP060恒温培养箱(上海试验仪器厂有限公司)，显微镜K3-210(麦克奥迪实业集团有限公司)。
1.2 试验方法
1.2.1 收集病料：将接种球虫雏鸡进行剖检，取出盲肠，纵向切开，用盖玻片刮出内容物，将内容物放入配好的胃蛋白酶溶液中，搅拌均匀。放置在39℃的水浴中加热2h，依次用50目、100目、200目筛过滤，收集滤液；
1.2.2 将滤液在1500r/min下离心10min，弃去上清液，将沉淀物中加入少量水进行吹打，再加入10倍水进行同条件下离心10min，反复三次，除去蛋白酶；
1.2.3 收集沉淀。沉淀物即为所分离的球虫卵囊。取沉淀物加入10倍量的2.5％重铬酸钾溶液在振荡器上震荡至混合均匀；
1.2.4 将上述混匀液体平均分成八组，一组空白对照(2.5％重铬酸钾)，七组加药组，加相同浓度各组药物。用培养皿培养，培养温度为28℃，震荡器上培养2天；
1.2.5 记录孢子化后球虫卵囊数。将上述培养后液体用吸管吸取加入16×25的细胞计数板上，放入显微镜下，在低倍镜下观察，记录卵囊数(卵囊数/ml＝100小格内的细胞数/100×400×10000×稀释倍数)。将数据进行比较。
孢子化率(％)＝(孢子化卵囊数/记录卵囊总数)×100％
2 结果
通过体外试验获得孢子化率的数据，具体见表2。
表2不同药物的孢子化率
通过表2可以看出：实施例2制备的中药散对孢子化抑制作用最大，其次是实施例1和实施例3制备，说明本发明的中药散均具有抗球虫孢子化作用，其中，实施例2制备的中药散的效果最佳，较对照组作用强。
以实施例2制备的中药散继续进行以下实验。
实施例10本发明的中药散抗鸡柔嫩艾美耳球虫的疗效研究
1 材料与方法
1.1 材料与设备
1.1.1 材料本发明实施例2制备的中药散、胃蛋白酶(上海蓝季科技发展有限公司)和妥曲珠利(武汉嘉凯隆科技发展有限公司)。1日龄海兰褐公雏鸡140只，由河南许昌市鄢陵县马栏镇郑庄养鸡场提供，喂养至13日龄。肉鸡饲料依照标准配制，由河南正大饲料厂提供。
1.1.2 设备电子天平AB204-N(producedby Mettler-Toledo Group)、数显恒温水浴锅HH-6(常州市华普达教学仪器有限公司)、LD4-2A离心机(江苏江阳科技器械厂)、DHP060恒温培养箱(上海试验仪器厂有限公司)显微镜K3-210(麦克奥迪实业集团有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 雏鸡的分组将13日龄雏鸡随机分成7组进行攻虫，具体组为：空白对照组(不攻虫不给药)，对照组(攻虫不给药)，药物对照组(妥曲珠利)及给药组，共有7组，给药组分别为不同剂量的实施例2制备的中药散，药物对照组为妥曲珠利(实施例4)，具体分组情况见表3。
表3雏鸡分组情况
用药 雏鸡数/只
空白对照组 20
对照组 20
给药一组：实施例2的中药散，0.4mg/只 20
给药二组：实施例2的中药散，0.8mg/只 20
给药三组：实施例2的中药散，1.2mg/只 20
给药四组：实施例2的中药散，1.6mg/只 20
药物对照组5：妥曲珠利1.6mg/只 20
1.2.2 球虫的分离及培养收集患有柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)病鸡(由河南农业大学牧医工程学院提供)的粪便，逐日粪检，待到卵囊出现达高峰时，收集粪便，分离卵囊，加入2.5％重铬酸钾，28℃培养，让其孢子化，保存备用。
1.2.3 体内抗球虫试验
1.2.3.1 给药组的雏鸡，分别按隔天0.4、0.8、1.2、1.6mg/只的剂量(试验期为8d)，口服；给药的第1天同时经口灌服接种柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊5×104个/只。
1.2.3.2 攻虫不给药组的雏鸡，接种柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊5×104个/只，且不进行任何其他处理。
1.2.3.3 药物对照组的雏鸡，隔天口服1.6mg的妥曲珠利，同时在给药的第1天接种柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊5×104个/只(试验期连续给药)。
1.2.3.4 临床观察各组雏鸡8d，随时观察和记录动物的行为，外观活动、粪便和体温等情况。
1.2.3.5 试验结束时，对所有鸡进行称重、统计存活率、相对增重率，剖检记录盲肠病变值、盲肠内容物称重及卵囊数量检测等。
1.2.4 治疗指标
1.2.4.1 相对增重率
相对增重率(％)＝感染投药组的平均增重/不感染和不投药组的平均增重×100％。
1.2.4.2 存活率
存活率(％)＝(组内总鸡数－每组因感染球虫死亡的鸡数)/组内总鸡数×100％。
1.2.4.3 血便记分
接种卵囊后第4，5，6，7，8天，参照Morehouse(1970)的方法，按以下标准记分：
0分：100％粪便不带血；
1分：1～25％粪便带血；
2分：26～50％粪便带血；
3分：51～75％粪便带血；
4分：76～100％粪便带血。
1.2.4.4 病变记分
参照Johnson和Reid(1970)的标准，根据剖检后肠道病变的严重程度记分。
0分：无肉眼病变；
1分：盲肠壁有很少散在的癖点，肠壁不增厚，内容物正常；
2分：病变数量较多，盲肠内容物明显带血，盲肠壁稍增厚，内容物正常；
3分：盲肠内有多量血液和肠芯，血凝块可见灰白色干酪样的香蕉型块状物，盲肠壁明显增厚盲肠中粪便含量少；
4分：盲肠中充满大量的血液和肠芯，盲肠肿大，肠芯中含有粪渣或不含，因球虫感染死亡鸡也记为4分。
病变值＝每组平均病变记分×10。
1.2.4.5 卵囊排出情况
在球虫感染后第4天至第8天收集粪便，按照McMaster's法计算克粪便卵囊数(Oocystper gram,OPG)。
方法:将收集的粪便搅匀后，称取2g，加适量饱和食盐水搅匀，用60目网筛充分过滤。
将滤液稀释至60m1，然后用麦氏计数板计数，最后求其平均值。如果卵囊的数量太多，则按照梯度稀释，然后计数，再乘以稀释倍数。
1.2.4.6 盲肠内容物卵囊情况
在球虫感染后第8天，剖杀试验鸡，取出盲肠内容物，按照McMaster's法计数克粪便卵囊数(OPG)。
1.2.4.7 卵囊值
根据盲肠内容物的OPG值，即每克粪便中的卵囊数(柔嫩×106)按角田清方法换算卵囊值:
当OPG值为0～0.1时，卵囊值为0；
当OPG值为0.1～1时，卵囊值为1；
当OPG值为1.1～1.9时，卵囊值为10；
当OPG值为2.0～5.9时，卵囊值为20；
当OPG值为6.0～10.9时，卵囊值为20；
当OPG值为11.0时，卵囊值为40。
1.2.4.8 抗球虫指数(ACI)
采用默克公司的标准计算抗球虫指数:
抗球虫指数(ACI)＝(相对增重率+存活率)﹣(病变值+卵囊值)。
药效判定标准为:
ACI小于120，判疗效差；
ACI为120～160，疗效中等；
ACI为160～180，疗效良好；
ACI大于180，判疗效优秀。
2 结果
2.1 一般观察及存活率试验期间，给药组的雏鸡精神良好，采食正常，只有少部分打蔫，排血便情况也较对照组要好，产生血便较晚，转好相对较快。对照组鸡雏精神沉郁，采食量减少，翅膀下垂，蓬松，泄殖腔周围羽毛被粪便污染，闭目呆卧，继而出现拉稀或者血便等现象。试验结束时，给药组鸡雏存活率高，1.6mg组存活率100％；对照组死亡17只，存活率仅为15.0％(表4)。
表4不同处理组雏鸡存活率(每天的数据是死亡鸡雏数)
对上述存活率的数据进行了方差分析，各给药组与对照组差异极显著，说明本发明的中药散确有抗球虫的功效；给药组与药物对照组和空白对照组的差异也是极显著。
2.2 血便计分接种卵囊后第4、5、6、7、8天，参照以上方法记分，结果见表5。
表5不同处理组雏鸡血便计分
由表5可见，对照组排血便情况明显，病症较重。在第4天出现死亡情况；给药组排血便情况较对照组要轻，而且好转较快。血便的情况与给药浓度有关，随着给药浓度的提高，血便情况逐渐减轻。
2.3体重变化由表6可见，试验前各组鸡的平均体重为125.01g/只，差异不显著。试验结束后，各给药组的日均增重均高于对照组。对各组的末重进行了称重比较，各给药组与对照组及空白对照组检验的结果见表6，从表6的结果可看出给药四组末重与对照组相同。
表6不同处理组雏鸡体重变化情况
2.4 盲肠变化及盲肠内容物卵囊计数：对处理9d的雏鸡进行剖检，按照病变计分标准对盲肠的变化进行记录打分，结果见表7。由表7可见，空白对照组、对照组、给药一组、给药二组、给药三组、给药四组、药物对照组病变值分别为0.0、28.0、20.0、15.0、11.0、5.0、12.0，说明本发明的中药散对鸡球虫有抑制，从而对盲肠有一定的保护作用，降低了损伤程度，盲肠内容物卵囊数多少也是同样的原因。
表7不同处理组抗球虫效果
组别 相对增重率/％ 存活率/％ 病变值 卵囊值 抗球虫指数
空白对照组 100.0 100.0 0.0 0 200
对照组 19.1 15.0 28.0 1 5.1
给药一组 59.2 60.0 20.0 1 98.2
给药二组 71.2 70.0 15.0 1 125.2
给药三组 83.5 80.0 11.0 1 151.5
给药四组 98.2 100.0 5.0 0 193.2
对照组(妥曲珠利) 82.1 75.0 12.0 1 144.1
由表7可知：本发明在0.8mg/只给药组的中药散抗球虫指数为125.2，1.2mg/只给药组及药物对照组均达151.5，药物对照组为144.1，均可判定为中等，1.6mg/只抗球虫指数达193.2，属于疗效优秀；表明本发明的中药散有好的抗鸡球虫的活性。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种用于治疗鸡球虫病的中药散，其特征在于：它是由下列重量份的原料制成的：花椒油2.5-10份，鹤虱提取物2.5-25份，百部提取物15-25份，南瓜子提取物15-25份，黄芩提取物10-15份，凹凸棒石500份。
2.根据权利要求1所述的一种用于治疗鸡球虫病的中药散，其特征在于：它是由下列重量份的原料制成的：花椒油6.25份，鹤虱提取物12.5份，百部提取物20份，南瓜子提取物15份，黄芩提取物10份，凹凸棒石500份。
3.一种如权利要求1-2任意一项所述的用于治疗鸡球虫病的中药散的制备方法，其特征在于：先将花椒油加入到凹凸棒石中搅拌均匀，再加入鹤虱提取物、百部提取物、南瓜子提取物和黄芩提取物，搅拌均匀后过筛网即得成品。
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