CN110499345B - 一种维生素k2(MK-7型)的发酵方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种维生素k2(MK‑7型)的发酵方法，使用的菌种为纳豆芽孢杆菌，培养基采用浓配方，发酵过程中流加葡萄糖，有效补充菌体生长所需的营养，发酵过程中补加磷酸、氨水，分阶段分阶段严格控制pH，有效保障菌体生长代谢最适PH，通过调节转速、空气流量、罐压分阶段控制溶氧，有效提高氧的利用率减少氧对菌体细胞损伤，流加葡萄糖后，发酵液总糖浓度控制在0.3‑0.7％左右，在这个范围内菌丝的正常生长且代谢稳定，本发明可将维生素k2(MK‑7型)发酵单位提高至80mg/L，既能显著提高发酵单位，又为维生素k2(MK‑7型)的发酵产业化提供一个良好的方法。
Description
技术领域：
本发明属于微生物发酵技术领域，尤其涉及一种维生素k2(MK-7型)的发酵方法。
背景技术：
K族维生素是人体必需的四种脂溶性维生素之一，按照来源不同可以分为k1和k2两种，其中，k1主要来源于植物，也称叶绿醌，k2主要来源于微生物也称甲萘醌。因其在食品中量极少。素有“铂金维生素”之称，在骨质疏松症的预防和治疗方面具有显著的效果，被科为“第四代抗骨质疏检产品”；还可防止肝硬化肝纤推化转化为肝癌，促进肝细胞再生；同时在预贴和治疗的金森在方面也其行定的疗效。
天然维生素K2，为MK-7型，仅能通过微生物发酵法获得，相比通过化学合成的维生素K2，天然维生素K2活性更高。为满足天然维生素K2不断增长的市场需求、克服化学法来源维生素K2的缺点，市场上急需通过微生物发酵规模化生产天然维生素K2。
目前，利用微生物发酵生产维生素K2主要包括利用纳豆芽孢杆菌、黄杆菌、乳酸菌等，本发明所采用的菌种为纳豆芽孢杆菌，属于枯草牙孢杆菌(Bacillus subtilis)，该菌为美国FDA公布的40种益生菌之一，食用安全，是维生素K2生产的优良菌种。但是，采用纳豆芽孢杆菌发酵发酵水平不高，CN201410472873.2，CN 104328064 A采用新型供氧策略优化菌种发酵工艺，并进行发酵罐放大，最终维生素K2产量达到60.54mg/L。此外，维生素K2产业化难度较大，目前报道较少。
发明内容：
针对上述问题，本发明要解决的技术问题是提供一种维生素k2(MK-7型)的发酵方法。
本发明的一种维生素k2(MK-7型)的发酵方法，使用的菌种为纳豆芽孢杆菌，包括以下步骤：
(1)将保存在甘油管的菌株接入固体培养基中进行菌种活化，37℃培养箱中培养，20～28h，连续活化两代，固体培养基配方为：葡萄糖3％L，蛋白胨2％，NaCl 0.5％，酵母膏0.5％，琼脂2％，溶剂为水；
(2)利用灭菌后的生理盐水将斜面上的菌洗下，接入装有种子培养基的种子罐中，种量0.1％(v/v)，通气量0.5～1.0vvm，搅拌转速200～400rpm，罐温35～37℃，培养18～24h，获得种子液，种子培养基配方为葡萄糖1-5％，蛋白胨2-8％，K2HPO4 0.1-0.2％，LKH2PO4 0.01-0.1％NaCl 0.2-0.4％，MgSO4·7H2O 0.01-0.1％，溶剂为水；
(3)将种子液接入装有发酵培养基的发酵罐中，接种量5～10％(v/v)，发酵过程中温度35～37℃，起始通气量0.5～2.0VVM，罐压0.04～0.07Mpa，培养72-120h，发酵生产维生素K2，发酵培养基配方为葡萄糖4-6.0％，甘油1-4.0％，酵母粉0.5-1.5％，大豆蛋白胨0.5-1.5％，NaCl 0.2-0.35％，KH2PO4 0.05-0.1％，MgSO4·7H2O 0.05-0.15％，溶剂为水；
所述发酵方法采用浓配方高密度发酵，该方法的发酵条件为：
S1、发酵培养基配方:葡萄糖4-6.0％，甘油1-4.0％，酵母粉0.5-1.5％，大豆蛋白胨0.5-1.5％，NaCl 0.2-0.35％，KH2PO4 0.05-0.1％，MgSO4·7H2O 0.05-0.15％，溶剂为水；
S2、发酵过程中温度35～37℃，起始通气量0.5～0.8VVM，起始罐压0.04～0.06Mpa，起始搅拌转速100～250rpm；
S3、分阶段溶氧控制：发酵培养基灭菌至121℃保压时，校正溶氧0％，移种后刚开始发酵培养时校正溶氧100％，发酵过程中逐渐调高通气量、转速与罐压使溶氧在0-10h不低于30％，在11-24h控件控制5-15％，在25-60h控制20～40％，在61h后控制40～60％之间，转速最高转速最高650rpm，通气量最大2.0VVM，最小0.5VVM，罐压最高0.07Mpa、最小0.04Mpa；
S4、分阶段严格控制pH：发酵0-10h，开始补加氨水，控制pH6.5～6.8，发酵10-24h，补加磷酸或氨水，控制pH7.0～7.2，发酵24-60h，补加磷酸或氨水，控制pH7.5～7.8，发酵60h后，补加磷酸或氨水，控制pH8.0～8.5；
S5、发酵24h后，开始流加葡萄糖，使发酵液总糖浓度控制在0.3-0.7％，直到发酵结束；
S6、发酵培养期72-120h后放罐。
优选的，所述发酵培养基优选配方为葡萄糖6.0％，甘油3.0％，酵母粉1.2％，大豆蛋白胨1.2％，NaCl 0.28％，KH2PO4 0.05％，MgSO4·7H2O 0.05％，溶剂为水，pH7.0～7.2。
本发明有益效果：本发明提供一种维生素k2(MK-7型)的发酵方法，在该方法中使用的菌种为纳豆芽孢杆菌，本发明培养基采用浓配方，发酵过程中流加葡萄糖，能够有效补充菌体生长所需的营养；发酵过程中补加磷酸、氨水，分阶段分阶段严格控制pH，能有效保障菌体生长代谢最适PH；发酵过程中，通过调节转速、空气流量、罐压分阶段控制溶氧，能有效提高氧的利用率减少氧对菌体细胞损伤。流加葡萄糖后，发酵液总糖浓度控制在0.3-0.7％左右，在这个范围内菌丝的正常生长且代谢稳定，过低和过高都影响正常代谢。现有维生素k2(MK-7型)的发酵技术中，维生素k2(MK-7型)的发酵单位约为60mg/L左右，本发明发酵方法可将发酵单位提高至80mg/L。因此，本发明既能显著提高维生素k2(MK-7型)的发酵单位，又为维生素k2(MK-7型)的发酵产业化提供一个良好的方法。
附图说明：
图1为本发明的工艺流程图。
具体实施方式：
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面通过具体实施例来描述本发明。但是应该理解，这些描述只是示例性的，而并非要限制本发明的范围。此外，在以下说明中，省略了对公知结构和技术的描述，以避免不必要地混淆本发明的概念。
本实施例的一种一种维生素k2(MK-7型)的发酵方法，使用的菌种为纳豆芽孢杆菌，包括以下步骤：
(1)将保存在甘油管的菌株接入固体培养基中进行菌种活化，37℃培养箱中培养，20～28h，连续活化两代，固体培养基配方为：葡萄糖3％L，蛋白胨2％，NaCl 0.5％，酵母膏0.5％，琼脂2％，溶剂为水；
(2)利用灭菌后的生理盐水将斜面上的菌洗下，接入装有种子培养基的种子罐中，种量0.1％(v/v)，通气量0.5～1.0vvm，搅拌转速200～400rpm，罐温35～37℃，培养18～24h，获得种子液，种子培养基配方为葡萄糖1-5％，蛋白胨2-8％，K2HPO4 0.1-0.2％，LKH2PO4 0.01-0.1％NaCl 0.2-0.4％，MgSO4·7H2O 0.01-0.1％，溶剂为水；
(3)将种子液接入装有发酵培养基的发酵罐中，接种量5～10％(v/v)，发酵过程中温度35～37℃，起始通气量0.5～2.0VVM，罐压0.04～0.07Mpa，培养72-120h，发酵生产维生素K2，发酵培养基配方为葡萄糖4-6.0％，甘油1-4.0％，酵母粉0.5-1.5％，大豆蛋白胨0.5-1.5％，NaCl 0.2-0.35％，KH2PO4 0.05-0.1％，MgSO4·7H2O 0.05-0.15％，溶剂为水；
所述发酵方法采用浓配方高密度发酵，该方法的发酵条件为：
S1、发酵培养基配方:葡萄糖4-6.0％，甘油1-4.0％，酵母粉0.5-1.5％，大豆蛋白胨0.5-1.5％，NaCl 0.2-0.35％，KH2PO4 0.05-0.1％，MgSO4·7H2O 0.05-0.15％，溶剂为水；
S2、发酵过程中温度35～37℃，起始通气量0.5～0.8VVM，起始罐压0.04～0.06Mpa，起始搅拌转速100～250rpm；
S3、分阶段溶氧控制：发酵培养基灭菌至121℃保压时，校正溶氧0％，移种后刚开始发酵培养时校正溶氧100％，发酵过程中逐渐调高通气量、转速与罐压使溶氧在0-10h不低于30％，在11-24h控件控制5-15％，在25-60h控制20～40％，在61h后控制40～60％之间，转速最高转速最高650rpm，通气量最大2.0VVM，最小0.5VVM，罐压最高0.07Mpa、最小0.04Mpa；
S4、分阶段严格控制pH：发酵0-10h，开始补加氨水，控制pH6.5～6.8，发酵10-24h，补加磷酸或氨水，控制pH7.0～7.2，发酵24-60h，补加磷酸或氨水，控制pH7.5～7.8，发酵60h后，补加磷酸或氨水，控制pH8.0～8.5；
S5、发酵24h后，开始流加葡萄糖，使发酵液总糖浓度控制在0.3-0.7％，直到发酵结束；
S6、发酵培养期72-120h后放罐。
具体地，所述发酵培养基优选配方为葡萄糖6.0％，甘油3.0％，酵母粉1.2％，大豆蛋白胨1.2％，NaCl 0.28％，KH2PO4 0.05％，MgSO4·7H2O 0.05％，溶剂为水，pH7.0～7.2。
实施例1：
不同发酵培养基对维生素k2(MK-7型)的发酵单位的影响：
发酵条件如下:
(1)发酵培养基1：葡萄糖4.0％，甘油1％，酵母粉0.5％，大豆蛋白胨0.5％，NaCl0.2％，KH2PO4 0.05％，MgSO4·7H2O 0.05％，溶剂为水，pH7.0～7.2。
发酵培养基2：葡萄糖6.0％，甘油4.0％，酵母粉1.5％，大豆蛋白胨1.5％，NaCl0.35％，KH2PO4 0.1％，MgSO4·7H2O 0.15％，溶剂为水，pH7.0～7.2。
发酵培养基3：葡萄糖5.0％，甘油3.0％，酵母粉1.0％，大豆蛋白胨1.0％，NaCl0.3％，KH2PO4 0.75％，MgSO4·7H2O 0.10％，溶剂为水，pH7.0～7.2。
发酵培养基4：葡萄糖6.0％，甘油3.0％，酵母粉1.2％，大豆蛋白胨1.2％，NaCl0.28％，KH2PO4 0.05％，MgSO4·7H2O 0.05％，溶剂为水，pH7.0～7.2。
(2)发酵过程中温度35～37℃，起始通气量0.5～0.8VVM，起始罐压0.04～0.06Mpa，起始搅拌转速100～250rpm。
(3)分阶段溶氧控制：发酵培养基灭菌至121℃保压时，校正溶氧0％，移种后刚开始发酵培养时校正溶氧100％；发酵过程中逐渐调高通气量、转速与罐压使溶氧在0-10h不低于30％，在11-24h控件控制5-15％，在25-60h控制20～-40％，在61h后控制40～60％之间；转速最高转速最高650rpm，通气量最大2.0VVM、最小0.5VVM，罐压最高0.07Mpa、最小0.04Mpa。
(4)分阶段严格控制pH：发酵0-10h，开始补加氨水，控制pH6.5～6.8；发酵10-24h，补加磷酸或氨水，控制pH7.0～7.2；发酵24-60h，补加磷酸或氨水，控制pH7.5～7.8；发酵60h后，补加磷酸或氨水，控制pH8.0～8.5。
(5)发酵24h后，开始流加葡萄糖，使发酵液总糖浓度控制在0.3-0.7％，直到发酵结束。
(6)发酵培养期72-120h后放罐。
实验结果如下表1：
表1：维生素k2(MK-7型)发酵结果：
表1的实验结果表明：采用发酵培养基配方为葡萄糖4-6.0％；甘油1-4.0％，酵母粉0.5-1.5％，大豆蛋白胨0.5-1.5％，NaCl 0.2-0.35％，KH2PO4 0.05-0.1％，MgSO4·7H2O0.05-0.15％，溶剂为水，能显著提高维生素k2(MK-7型)的发酵单位。其中，发酵培养基优选配方为：葡萄糖6.0％，甘油3.0％，酵母粉1.2％，大豆蛋白胨1.2％，NaCl 0.28％，KH2PO40.05％，MgSO4·7H2O 0.05％，溶剂为水。
实施例2：
不同溶氧控制条件对维生素k2(MK-7型)的发酵单位的影响：
发酵条件如下:
(1)发酵培养基：葡萄糖6.0％，甘油3.0％，酵母粉1.2％，大豆蛋白胨1.2％，NaCl0.28％，KH2PO4 0.05％，MgSO4·7H2O 0.05％，溶剂为水，pH7.0～7.2。
(2)发酵过程中温度35～37℃，起始通气量0.5～0.8VVM，起始罐压0.04～0.06Mpa，起始搅拌转速100～250rpm。
(3)实验1分阶段溶氧控制：发酵培养基灭菌至121℃保压时，校正溶氧0％，移种后刚开始发酵培养时校正溶氧100％；发酵过程中通过调控通气量、转速与罐压使溶氧在0-10h不低于30％，在11-24h控件控制5-15％，在25-60h控制20～-40％，在61h后控制40～60％之间；转速最高转速最高650rpm，通气量最大2.0VVM、最小0.5VVM，罐压最高0.07Mpa、最小0.04Mpa。
实验2分阶段溶氧控制：发酵培养基灭菌至121℃保压时，校正溶氧0％，移种后刚开始发酵培养时校正溶氧100％；发酵过程中通过调控通气量、转速与罐压使溶氧在0-10h不低于30％，在11-24h控件控制0-5％，在25-60h控制20～-40％，在61h后控制40～60％之间；转速最高转速最高650rpm，通气量最大2.0VVM、最小0.5VVM，罐压最高0.07Mpa、最小0.04Mpa。
实验3分阶段溶氧控制：发酵培养基灭菌至121℃保压时，校正溶氧0％，移种后刚开始发酵培养时校正溶氧100％；发酵过程中通过调控通气量、转速与罐压使溶氧在0-10h不低于30％，在11-24h控件控制5-15％，在25-60h控制5～-15％，在61h后控制40～60％之间；转速最高转速最高650rpm，通气量最大2.0VVM、最小0.5VVM，罐压最高0.07Mpa、最小0.04Mpa。
实验4分阶段溶氧控制：发酵培养基灭菌至121℃保压时，校正溶氧0％，移种后刚开始发酵培养时校正溶氧100％；发酵过程中通过调控通气量、转速与罐压使溶氧在0-10h不低于30％，在11-24h控件控制5-15％，在25-60h控制20～-40％，在61h后控制20～40％之间；转速最高转速最高650rpm，通气量最大2.0VVM、最小0.5VVM，罐压最高0.07Mpa、最小0.04Mpa。
(4)分阶段严格控制pH：发酵0-10h，开始补加氨水，控制pH6.5～6.8；发酵10-24h，补加磷酸或氨水，控制pH7.0～7.2；发酵24-60h，补加磷酸或氨水，控制pH7.5～7.8；发酵60h后，补加磷酸或氨水，控制pH8.0～8.5。
(5)发酵24h后，开始流加葡萄糖，使发酵液总糖浓度控制在0.3-0.7％，直到发酵结束。
(6)发酵培养期72-120h后放罐。
实验结果如下表2：
表2：维生素k2(MK-7型)发酵结果：
表2的实验结果表明：分阶段溶氧控制能显著提高维生素k2(MK-7型)的发酵单位，分阶段溶氧控制最优选方法为：发酵培养基灭菌至121℃保压时，校正溶氧0％，移种后刚开始发酵培养时校正溶氧100％；发酵过程中通过调控通气量、转速与罐压使溶氧在0-10h不低于30％，在11-24h控件控制5-15％，在25-60h控制20～-40％，在61h后控制40～60％之间；转速最高转速最高650rpm，通气量最大2.0VVM、最小0.5VVM，罐压最高0.07Mpa、最小0.04Mpa。
实施例3：
不同pH控制条件对维生素k2(MK-7型)的发酵单位的影响：
发酵条件如下:
(1)发酵培养基：葡萄糖6.0％，甘油3.0％，酵母粉1.2％，大豆蛋白胨1.2％，NaCl0.28％，KH2PO4 0.05％，MgSO4·7H2O 0.05％，溶剂为水，pH7.0～7.2。
(2)发酵过程中温度35～37℃，起始通气量0.5～0.8VVM，起始罐压0.04～0.06Mpa，起始搅拌转速100～250rpm。
(3)分阶段溶氧控制：发酵培养基灭菌至121℃保压时，校正溶氧0％，移种后刚开始发酵培养时校正溶氧100％；发酵过程中逐渐调高通气量、转速与罐压使溶氧在0-10h不低于30％，在11-24h控件控制5-15％，在25-60h控制20～-40％，在61h后控制40～60％之间；转速最高转速最高650rpm，通气量最大2.0VVM、最小0.5VVM，罐压最高0.07Mpa、最小0.04Mpa。
(4)实验5分阶段严格控制pH：发酵过程全程不控PH。
实验6分阶段严格控制pH：发酵0-10h，开始不补加氨水，不控PH；发酵10-24h，补加磷酸或氨水，控制pH7.0～7.2；发酵24-60h，补加磷酸或氨水，控制pH7.5～7.8；发酵60h后，补加磷酸或氨水，控制pH8.0～8.5。
实验7分阶段严格控制pH：发酵0-10h，开始补加氨水，控制pH6.5～6.8；发酵10-60h，补加磷酸或氨水，控制pH7.5～7.8；发酵60h后，补加磷酸或氨水，控制pH8.0～8.5。
实验8分阶段严格控制pH：发酵0-10h，开始补加氨水，控制pH7.0～7.2；发酵10-24h，补加磷酸或氨水，控制pH7.0～7.2；发酵24-60h，补加磷酸或氨水，控制pH7.5～7.8；发酵60h后，补加磷酸或氨水，控制pH8.0～8.5。
(5)发酵24h后，开始流加葡萄糖，使发酵液总糖浓度控制在0.3-0.7％，直到发酵结束。
(6)发酵培养期72-120h后放罐。
实验结果如下表3：
表3：维生素k2(MK-7型)发酵结果：
| 项目 | 批次 | 发酵单位g/l | 体积L | 产量g |
| 实验1 | 4 | 80.8 | 36.1 | 2.92 |
| 实验5 | 4 | 68.6 | 36.2 | 2.48 |
| 实验6 | 4 | 75.4 | 36.0 | 2.71 |
| 实验7 | 4 | 76.9 | 36.0 | 2.77 |
| 实验8 | 4 | 75.4 | 35.9 | 2.70 |
表3的实验结果表明：分阶段严格控制pH能显著提高维生素k2(MK-7型)的发酵单位，分阶段严格控制pH最优选方法为：发酵0-10h，开始补加氨水，控制pH6.5～6.8；发酵10-24h，补加磷酸或氨水，控制pH7.0～7.2；发酵24-60h，补加磷酸或氨水，控制pH7.5～7.8；发酵60h后，补加磷酸或氨水，控制pH8.0～8.5。
实施例4：
不同发酵总糖浓度对维生素k2(MK-7型)的发酵单位的影响：
发酵条件如下:
(1)发酵培养基：葡萄糖6.0％，甘油3.0％，酵母粉1.2％，大豆蛋白胨1.2％，NaCl0.28％，KH2PO4 0.05％，MgSO4·7H2O 0.05％，溶剂为水，pH7.0～7.2。
(2)发酵过程中温度35～37℃，起始通气量0.5～0.8VVM，起始罐压0.04～0.06Mpa，起始搅拌转速100～250rpm。
(3)分阶段溶氧控制：发酵培养基灭菌至121℃保压时，校正溶氧0％，移种后刚开始发酵培养时校正溶氧100％；发酵过程中逐渐调高通气量、转速与罐压使溶氧在0-10h不低于30％，在11-24h控件控制5-15％，在25-60h控制20～-40％，在61h后控制40～60％之间；转速最高转速最高650rpm，通气量最大2.0VVM、最小0.5VVM，罐压最高0.07Mpa、最小0.04Mpa。
(4)分阶段严格控制pH：发酵0-10h，开始补加氨水，控制pH6.5～6.8；发酵10-24h，补加磷酸或氨水，控制pH7.0～7.2；发酵24-60h，补加磷酸或氨水，控制pH7.5～7.8；发酵60h后，补加磷酸或氨水，控制pH8.0～8.5。
(5)发酵24h后，开始流加葡萄糖，使发酵液总糖浓度控制在X％，直到发酵结束。
(6)发酵培养期72-120h后放罐。
实验结果如下表4：
表4：维生素k2(MK-7型)发酵结果：
| X | 批次 | 发酵单位g/l | 体积L | 产量g |
| 0.2 | 4 | 72.4 | 36.1 | 2.61 |
| 0.3 | 4 | 79.9 | 36.2 | 2.89 |
| 0.4 | 4 | 80.4 | 36.0 | 2.89 |
| 0.5 | 4 | 81.5 | 36.0 | 2.93 |
| 0.6 | 4 | 80.7 | 35.9 | 2.89 |
| 0.7 | 4 | 80.3 | 36.0 | 2.89 |
表4的实验结果表明：发酵24h后，开始流加葡萄糖，使发酵液总糖浓度控制在0.3-0.7％，直到发酵结束，能显著提高维生素k2(MK-7型)的发酵单位。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (2)
1.一种维生素k2 MK-7型的发酵方法，使用的菌种为纳豆芽孢杆菌，其特征在于：包括以下步骤：
（1）将保存在甘油管的菌株接入固体培养基中进行菌种活化，37℃培养箱中培养，20～28h，连续活化两代，固体培养基配方为：葡萄糖3%，蛋白胨2%，NaCl 0.5%，酵母膏0.5%，琼脂2%，溶剂为水；
（2）利用灭菌后的生理盐水将斜面上的菌洗下，接入装有种子培养基的种子罐中，接种量0.1％(v/v)，通气量0.5～1.0vvm，搅拌转速200～400rpm，罐温35～37℃，培养18～24h，获得种子液，种子培养基配方为葡萄糖1-5%，蛋白胨2-8%，K2HPO4 0.1-0.2%，KH2PO4 0.01-0.1%，NaCl 0.2-0.4%，MgSO4·7H2O 0.01-0.1%，溶剂为水；
（3）将种子液接入装有发酵培养基的发酵罐中，接种量5～10％(v/v)，发酵过程中温度35~37℃，通气量0.5~2.0VVM，罐压0.04~0.07Mpa，培养72-120h，发酵生产维生素 K2，发酵培养基配方为葡萄糖4.0-6.0%，甘油1.0-4.0%，酵母粉0.5-1.5%，大豆蛋白胨0.5-1.5%，NaCl 0.2-0.35%，KH2PO4 0.05-0.1%，MgSO4·7H2O 0.05-0.15%，溶剂为水；
所述发酵方法采用浓配方高密度发酵，该方法的发酵条件为：
S1、发酵培养基配方:葡萄糖4.0-6.0%，甘油1.0-4.0%，酵母粉0.5-1.5%，大豆蛋白胨0.5-1.5%，NaCl 0.2-0.35%，KH2PO4 0.05-0.1%，MgSO4·7H2O 0.05-0.15%，溶剂为水；
S2、发酵过程中温度35~37℃，起始通气量0.5~0.8VVM，起始罐压0.04~0.06Mpa，起始搅拌转速100～250rpm；
S3、分阶段溶氧控制：发酵培养基灭菌至121℃保压时，校正溶氧0%，移种后刚开始发酵培养时校正溶氧100%，发酵过程中逐渐调高通气量、转速与罐压使溶氧在0-10h不低于30%，在11-24h控制5-15%，在25-60h控制20~40%，在61h后控制40~60%之间，转速最高650rpm；
S4、分阶段严格控制pH：发酵0-10h，开始补加氨水，控制pH6.5~6.8，发酵10-24h，补加磷酸或氨水，控制pH7.0~7.2，发酵24-60h，补加磷酸或氨水，控制pH7.5~7.8，发酵60h后，补加磷酸或氨水，控制pH8.0~8.5；
S5、发酵24h后，开始流加葡萄糖，使发酵液总糖浓度控制在0.3-0.7%，直到发酵结束；
S6、发酵培养后放罐。
2.根据权利要求1所述的一种维生素k2 MK-7型的发酵方法，其特征在于，所述发酵培养基配方为葡萄糖6.0%，甘油3.0%，酵母粉1.2%，大豆蛋白胨1.2%，NaCl 0.28%，KH2PO40.05%，MgSO4·7H2O 0.05%，溶剂为水，pH7.0~7.2。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
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Denomination of invention: A fermentation method of vitamin K2 (MK-7 type) Effective date of registration: 20220420 Granted publication date: 20210528 Pledgee: Fujian Straits bank Limited by Share Ltd. Fuqing branch Pledgor: FUJIAN KANGHONG BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2022350000042 |
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Date of cancellation: 20230413 Granted publication date: 20210528 Pledgee: Fujian Straits bank Limited by Share Ltd. Fuqing branch Pledgor: FUJIAN KANGHONG BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2022350000042 |
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| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: A Fermentation Method for Vitamin k2 (MK-7 Type) Effective date of registration: 20230418 Granted publication date: 20210528 Pledgee: Fujian Straits bank Limited by Share Ltd. Fuqing branch Pledgor: FUJIAN KANGHONG BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2023350000121 |
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| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Granted publication date: 20210528 Pledgee: Fujian Straits bank Limited by Share Ltd. Fuqing branch Pledgor: FUJIAN KANGHONG BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2023350000121 |
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| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: A fermentation method for vitamin k2 (MK-7 type) Granted publication date: 20210528 Pledgee: Fujian Straits bank Limited by Share Ltd. Fuqing branch Pledgor: FUJIAN KANGHONG BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2024350000040 |