CN110455933B - 一种玫瑰花中香气成分含量检测的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种玫瑰花中香气成分含量检测的方法，包括以下步骤：(1)色谱条件与系统适用性试验；(2)内标溶液与标准溶液的制备；(3)供试品溶液的制备；(4)测定。对照品溶液，供试品分别顶空进样注入气相色谱仪，内标法计算香叶醇、橙花醇、2‑苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、香茅醇、十七烷、二十三烷的含量，只测定芳樟醇一个成分实现玫瑰花中其他多个成分的同步测定，提高测定效率，并且顶空气相色谱法测定便于操作，省时省力，测定结果准确可靠，从而可以有效控制玫瑰花的质量。

Description

一种玫瑰花中香气成分含量检测的方法
技术领域
本发明涉及化学检测领域，特别涉及一种玫瑰花中香气成分含量检测的方法。
背景技术
玫瑰是一种直立落叶灌木，蔷薇科，蔷薇属RosarugosaThunb，花型大而美丽，种类繁多，并且香气浓郁。玫瑰原产于中国，栽培历史悠久。是重要的香料植物，油的主要成分为左旋香芳醇，含量最高可达千分之六，供食用及化妆品用，花瓣可以制饼馅、玫瑰酒、玫瑰糖浆，干制后可以泡茶，花蕾入药治肝、胃气痛、胸腹胀满和月经不调。玫瑰含挥发油，油中主要成分为香茅醇、牻牛儿醇，橙花醇、丁香油酚，苯乙醇。此外，尚含槲皮苷、鞣质、脂肪油、有机酸等；玫瑰油对大鼠有促进胆汁分泌作用；玫瑰花对实验性动物心肌缺血有一定的保护作用。
目前对玫瑰花香气成分研究主要是传统的水蒸气蒸馏法，其次是溶剂萃取法。水蒸气蒸馏法利用加热煮沸，在恒温条件下经过一段时间得到的馏出液，在这个过程会产生多种化合物，导致其测定成分不准确；溶剂萃取法虽然可以避免高温下连续加热产生的化合物，但最大的缺点在于在进行成分鉴定时所用的溶剂产生较强的本底干扰，而固态微萃取虽不用溶剂萃取，但仪器昂贵，并没有被广泛应用。
现有文献对玫瑰花香气成分含量的研究报道不多，现有文献中报道了利用SMPE-GC-MS法、GC-MS法对玫瑰原料的香气特点进行分析，主要还是单成分测定，部分多指标评价采取各成分含量分别测定或利用混合对照测定的方式，一测多评的应用仍较少，《中国药典》2015版，将一测多评方法的应用扩展至提取物及中药制剂的多指标质量控制，新增丹参药材、生姜药材、银杏叶片、银杏叶提取物、银杏叶胶囊、银杏叶滴丸、咳特灵片、咳特灵胶囊中典型成分的含量测定。本发明探索出采用气相色谱法顶空进样的一测多评测定玫瑰花香气成分的方法，未见报道。
徐家怡贵州师范大学贵州省山地环境信息系统一测多评法测定食用玫瑰中5种成分的含量，利用HPLC一测多评法同时测定食用玫瑰中绿原酸、金丝桃苷、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素的含量。
该方法仅适用于食用玫瑰中非挥发性物质的检测，本发明适用于挥发性的物质的检测；本发明检测玫瑰花中香气成分的含量，用的是气相色谱仪，顶空进样；本发明前处理更加简单，直接称取加入顶空瓶就可以进行检测。
CN201410075766.6一种采用一测多评检测人参提取物中多个或总人参皂苷含量的方法，其特征在于使用了电喷雾检测器(CAD)流动相补偿技术一测多评人参提取物中多个或总人参皂苷的含量。
CN201710650981.8基于一测多评法的补骨脂药材检测方法提供一种基于一测多评法的补骨脂有效成分的含量测定方法，首先建立补骨脂中10种主要药效成分的HPLC含量测定方法，以补骨脂素作为内标参照物，计算其他9种活性成分的相对校正因子，并考察相对校正因子的系统适用性和方法重现性，根据相对保留时间进行色谱峰定位，再结合相对校正因子计算各待测成分的含量。
《食用玫瑰香气质量评价指标及影响因素》山东轻工业学院食品与生物工程学院苏红霞等报道了采用固相微萃取-气相-质谱联用法对不同处理的玫瑰花的风味物质进行了分析。
《玫瑰花与月季花的性状鉴别及GC-MS分析》湖南中医药大学药学院，湖南长沙410007曾晓艳等报道了玫瑰花鉴定：取提取的挥发油成分1.0μL用GC-MS联用仪进行分析鉴定。通过化学工作站数据处理系统，检索NIST05谱图库，并结合标准质谱图和有关文献进行人工谱图解析，鉴定玫瑰花挥发油中的各种化学成分；通过化学工作站数据处理系统，用峰面积归一化法进行定量分析，得出各成分在挥发性成分中的相对含量。
《静态顶空进样-气质联用法测定玫瑰花香成分》员梦梦河南科技学院园艺园林学院采用静态顶空和气相色谱-质谱联用技术,对比分析“苦水玫瑰”、“丰花玫瑰”和“紫枝玫瑰”鲜花香气成分。
上述方法中供试品处理方法繁杂，对照品成本高，仪器设备要求高，进样时间长，样品回收率低，对检测人员技术要求高。
因此，对玫瑰花香气成分含量的研究，寻找简便、高效的质量检测方法，提高玫瑰花质量的可控性，降低成本，节省时间是申请人要解决的一大难题。
经过长期的理论研究和工业生产实践，申请人找到一种顶空气相色谱法，仪器较简单，样品处理便于操作，玫瑰花香气中多种物质的同步测定既可节省成本、简化操作，提高效率，且检测灵敏度高，稳定性好，测定结果准确可靠，避免高温下化合物的分解，对玫瑰花质量控制和评价具有重大意义。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中对照品成本高、不易得，检测仪器要求高，运行时间长对，供试品处理方法复杂，检测人员技术要求高等缺陷，提供一种采用一测多评法测定玫瑰花香气成分的方法，运用试样中不存在且性能稳定易得的纯物质正丁醇作为内标，以香茅醇为参照物，建立该组分与玫瑰花挥发性成分中各组分之间的相对校正因子，通过校正因子计算玫瑰花香气中各组分的含量，采用顶空气相色谱法法进行测定，具体方法如下：
所述一种玫瑰花中香气成分含量测定的方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备；(2)内标溶液与对照品溶液的制备；(3)色谱条件与系统适用性试验；(4)测定。
所述供试品溶液的制备，其优选方案一包括以下步骤：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下剪碎至1cm2以下的碎片，称取4～6g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1～2mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封，即得供试品溶液。
进一步优选，方案一包括以下步骤：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下剪碎至1cm2以下的碎片，称取4.5～5.5g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1～2mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封，即得供试品溶液。
更进一步优选，方案一包括以下步骤：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下剪碎至1cm2以下的碎片，称取5.0g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封，即得供试品溶液。
所述供试品溶液的制备，其优选方案二(检测效果佳的优选方案)包括以下步骤：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下用研钵研磨至破碎，称取4～6g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1～2mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封。
进一步优选方案二(检测效果较佳的优选方案)包括以下步骤：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下用研钵研磨至破碎，称取4.5～5.5g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封。
更进一步优选方案二(检测效果最佳的优选方案)包括以下步骤：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下用研钵研磨至破碎，称取5.0g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封，超声处理10min即得供试品溶液。
以上供试品溶液制备的方法中，最优选为方案二。
所述内标溶液的制备：精密称取色谱级正丁醇0.1～0.2g，加5～15℃的超纯水溶解定容至100ml，摇匀后置于5～15℃环境1～2小时即得内标溶液；
优选的,所述内标溶液的制备：精密称取色谱级正丁醇0.1g，加5～15℃的超纯水溶解定容至100ml，摇匀后置于5～15℃环境2小时即得内标溶液；
所述对照品溶液的制备：精密称取香茅醇适量,用水定容，取5ml置于20ml顶空瓶中，再加入5ml内标液，加盖密封，即得标准溶液。
所述混合对照品溶液的制备：按重量梯度精密称取香叶醇0.1～1.5g、橙花醇0.05～0.8g、2-苯乙醇0.15～1.8g、丁香酚0.15～1.7g、丁香酚甲醚0.2～2.5g、芳樟醇0.02～0.5g、香茅醇0.3～3.5g、十七烷0.3～3g、二十三烷0.5～6.5g对照品各5份，分别置于5个编号为1号,2号,3号,4号,5号的100ml容量瓶中，用5～15℃超纯水溶解并定容，摇匀即得混合对照品原溶液，进样前取混合对照品原溶液各5ml置于20ml顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封即得混合标准溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ。
优选的，所述混合对照品溶液的制备：
称取：香叶醇1.422g、1.138g、0.568g、0.284g、0.142g；橙花醇0.774g、0.62g、0.31g、0.154g、0.078g；2-苯乙醇1.788g、1.422g、0.712g、0.356g、0.178g；丁香酚1.632g、1.306g、0.652g、0.326g、0.164g；丁香酚甲醚2.444g、1.954g、0.978g、0.488g、0.244g；芳樟醇0.458g、0.366g、0.182g、0.092g、0.046g；香茅醇3.476g、2.78g、1.39g、0.696g、0.348g；十七烷2.99g、2.392g、1.196g、0.598g、0.3g；二十三烷6.254g、5.004g、2.502g、1.25g、0.626g；
以上九种对照品按重量由高到低依次置于5个编号为1号,2号,3号,4号,5号的100ml容量瓶中，用5～15℃超纯水溶解并定容，摇匀即得混合对照品原液，进样前取混合对照品原液溶液各5ml置于20ml顶空瓶中，加入5ml内标溶液和，加盖密封即得混合标准溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ。
所述色谱条件与系统适用性实验：色谱柱为聚乙二醇(PEG-20M)毛细管柱；载气为高纯氮气，检测器为氢离子火焰检测器，标准溶液和供试品溶液顶空进样，采用程序升温，各峰之间分离度大于1.5,且对称性良好，理论塔板数按香茅醇计不低于10000。
含量测定
色谱参数：仪器：Agilent 7890B气相色谱仪，FID检测器，Agilent7697A顶空进样器；
色谱柱：DB-WAX毛细管柱，柱长30m，柱内径0.32mm，薄膜厚度0.25μm；
进样口温度：240～260℃。
检测器温度：240～260℃；
柱温：采用程序升温，具体为40℃保持5min，以5℃/min的升温速率升至100℃，保持10min，以5℃/min的升温速率升至240℃，保持3min；
进样体积：顶空定量环1ml，载气流速2～4ml/min，分流比10～20:1；顶空参数：平衡时间为25～35min，平衡温度为60～80℃，顶空瓶体积：20ml。
校正因子的计算：取混合对照品溶液适量(n＝4)，进样测定，记录各目的峰峰面积，计算各待测成分的校正因子(f＝(As/Cs)÷(Ar/Cr)，式中As为实验内标物质的峰面积，Ar为对照品的峰面积，Cs为内标物质的质量浓度，Cr为对照品的质量浓度)及香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、十七烷、二十三烷相对于香茅醇的相对校正因子(RCF)，再通过各成分与香茅醇的相对校正因子计算出供试品中各成分的含量。
优选的，含量测定
色谱参数：仪器：Agilent 7890B气相色谱仪，FID检测器，Agilent7697A顶空进样器；
色谱柱：DB-WAX毛细管柱，柱长30m，柱内径0.32mm，薄膜厚度0.25μm；
进样口温度：250℃。
检测器温度：250℃；
柱温：采用程序升温，具体为40℃保持5min，以5℃/min的升温速率升至100℃，保持10min，以5℃/min的升温速率升至240℃，保持3min；
进样体积：顶空定量环1ml，载气流速3ml/min，分流比15:1；顶空参数：平衡时间为20min，平衡温度为70℃，顶空瓶体积：20ml。
标准溶液与供试品溶液置于顶空进样器相同条件下平衡相同的时间，顶空进样1ml，注入气相色谱仪，测定，记录55min色谱峰；
所述色谱条件下内标峰塔板数符合要求，见图1，对照品溶液中香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、香茅醇、十七烷、二十三烷各色谱峰分离较好，见图2，供试品图谱中在与对照品峰相应的出峰时间，有相应的峰出现，且与杂质峰分离度大于1.5，见图3。
采用内标法计算，供试品溶液的特征图谱中呈现香茅醇的峰值和玫瑰精油中不同成分的峰值，再通过各成分与香茅醇的相对校正因子计算出精油中各成分的含量。
与现有技术相比，本发明提供的一种玫瑰花中香气成分含量测定的方法具有以下优点：
1、本发明提供的玫瑰花中香气成分含量测定方法中：
1)供试品溶液的制备：方案一、方案二均置于较低环境温度下，即5～15℃，能很好保护玫瑰花瓣中挥发性成分，供试品溶液更稳定，同时有利于检测避免高温浸提、过滤、萃取等繁杂操作规程,避免有效成分被破坏。
2)本发明提供的一种玫瑰花中香气成分含量测定的方法。相对于现有技术，本发明提供的方法供试品制备过程简单，节省大量时间，溶剂廉价易得，稳定性好，灵敏度高。
3)本发明通过只测定芳樟醇一个成分实现玫瑰精油中其他多个成分的同步测定，提高测定效率，并且顶空气相色谱法测定便于操作，提高测定的效率，省时省力，测定结果准确可靠，从而可以有效控制玫瑰花香气成分的质量。
4)采用顶空进样，气相色谱检测，能达到较低的检出限，各目标成分在相应浓度范围内线性关系良好：香叶醇在0.7110-14.22mg.mL-1范围线性方程为Y＝0.0807x-0.005，相关系数R2＝0.9999、橙花醇在0.3870-7.740mg.mL-1范围线性方程为Y＝0.2446x-0.010，相关系数R2＝0.9998、2-苯乙醇在0.8890-17.78范围线性方程为Y＝0.195x-0.0150，相关系数R2＝0.9998、丁香酚在0.8160-16.32范围线性方程为Y＝0.1291x-0.0116，相关系数R2＝0.9999、丁香酚甲醚在1.2215-24.43范围线性方程为Y＝0.1154x-0.0189，相关系数R2＝0.9998、芳樟醇在0.2285-4.570范围线性方程为Y＝0.3346x-0.0083，相关系数R2＝0.9997、香茅醇在1.738-34.75范围线性方程为Y＝0.1028x-0.0167，相关系数R2＝0.9998、十七烷在1.495-29.90范围线性方程为Y＝0.0393x-0.0083，相关系数R2＝0.9995、二十三烷在3.127-62.54范围线性方程为Y＝0.0151x-0.0083，相关系数R2＝0.9993。
附图说明：
图1内标溶液测定结果色谱图
图2标准溶液测定结果色谱图
图3供试品溶液测定结果色谱图，1、二十三烷；2、正丁醇；3、芳樟醇；4、十七烷；5、香茅醇；6、橙花醇；7、香叶醇；8、2-苯乙醇；9、丁香酚甲醚；10、丁香酚。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
内标液的制备：精密称取正丁醇0.2g，加5～15℃超纯水溶解定容至100ml；
供试品溶液的制备：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下剪碎至1cm2以下的碎片，称取4g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1～2mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封，即得供试品溶液。
对照品溶液的制备：精密称取香茅醇0.03g对照品,置于顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封；
混合对照品溶液的制备：按重量梯度精密称取香叶醇0.1～1.5g、橙花醇0.05～0.8g、2-苯乙醇0.15～1.8g、丁香酚0.15～1.7g、丁香酚甲醚0.2～2.5g、芳樟醇0.02～0.5g、香茅醇0.3～3.5g、十七烷0.3～3g、二十三烷0.5～6.5g对照品各5份，分别置于5个编号为1号,2号,3号,4号,5号的100ml容量瓶中，用5～15℃超纯水溶解并定容，摇匀即得混合对照品原溶液，进样前取混合对照品原溶液各5ml置于20ml顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封即得混合标准溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为聚乙二醇毛细管柱。载气为高纯氮气，检测器为氢离子火焰检测器，标准溶液和供试品溶液顶空进样，程序升温，各峰之间分离度大于1.5,且对称性良好，理论塔板数按香茅醇计不低于10000。
色谱参数：仪器：Agilent 7890B气相色谱仪，FID检测器，Agilent7697A顶空进样器；
色谱柱：DB-WAX毛细管柱，柱长30m，柱内径0.32mm，薄膜厚度0.25μm；
进样口温度：250℃。
检测器温度：250℃；
柱温：采用程序升温，具体为40℃保持5min，以5℃/min的升温速率升至100℃，保持10min，以5℃/min的升温速率升至240℃，保持3min；
进样体积：顶空定量环1ml，载气流速3ml/min，分流比15:1；顶空参数：平衡时间为20min，平衡温度为70℃，顶空瓶体积：20ml。对照品溶液与供试品溶液置于顶空进样器相同条件下平衡相同的时间，顶空进样1ml，注入气相色谱仪，测定，记录55min色谱峰；
校正因子的计算：取混合对照品溶液适量(n＝4)，进样测定，记录各目的峰峰面积，计算各待测成分的校正因子(f＝(As/Cs)÷(Ar/Cr)，式中As为实验内标物质的峰面积，Ar为对照品的峰面积，Cs为内标物质的质量浓度，Cr为对照品的质量浓度)及香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、十七烷、二十三烷相对于香茅醇的相对校正因子(RCF)，再通过各成分与香茅醇的相对校正因子计算出供试品中各成分的含量。
实施例2
内标液的制备：精密称取正丁醇0.1g，加5～15℃超纯水溶解定容至100ml；
供试品溶液的制备：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下剪碎至1cm2以下的碎片，称取4.5g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1～2mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封，即得供试品溶液。
对照品溶液的制备：精密称取香茅醇0.04g对照品,置于顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封；
混合对照品溶液的制备：按重量梯度精密称取香叶醇0.1～1.5g、橙花醇0.05～0.8g、2-苯乙醇0.15～1.8g、丁香酚0.15～1.7g、丁香酚甲醚0.2～2.5g、芳樟醇0.02～0.5g、香茅醇0.3～3.5g、十七烷0.3～3g、二十三烷0.5～6.5g对照品各5份，分别置于5个编号为1号,2号,3号,4号,5号的100ml容量瓶中，用5～15℃超纯水溶解并定容，摇匀即得混合对照品原溶液，进样前取混合对照品原溶液各5ml置于20ml顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封即得混合标准溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为聚乙二醇毛细管柱。载气为高纯氮气，检测器为氢离子火焰检测器，标准溶液和供试品溶液顶空进样，程序升温，各峰之间分离度大于1.5,且对称性良好，理论塔板数按香茅醇计不低于10000。
色谱参数：仪器：Agilent 7890B气相色谱仪，FID检测器，Agilent7697A顶空进样器；
色谱柱：DB-WAX毛细管柱，柱长30m，柱内径0.32mm，薄膜厚度0.25μm；
进样口温度：250℃。
检测器温度：250℃；
柱温：采用程序升温，具体为40℃保持5min，以5℃/min的升温速率升至100℃，保持10min，以5℃/min的升温速率升至240℃，保持3min；
进样体积：顶空定量环1ml，载气流速3ml/min，分流比15:1；顶空参数：平衡时间为20min，平衡温度为70℃，顶空瓶体积：20ml。
对照品溶液与供试品溶液置于顶空进样器相同条件下平衡相同的时间，顶空进样1ml，注入气相色谱仪，测定，记录55min色谱峰；校正因子的计算：取混合对照品溶液适量(n＝4)，进样测定，记录各目的峰峰面积，计算各待测成分的校正因子(f＝(As/Cs)÷(Ar/Cr)，式中As为实验内标物质的峰面积，Ar为对照品的峰面积，Cs为内标物质的质量浓度，Cr为对照品的质量浓度)及香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、十七烷、二十三烷相对于香茅醇的相对校正因子(RCF)，再通过各成分与香茅醇的相对校正因子计算出供试品中各成分的含量。
实施例3
内标液的制备：精密称取正丁醇0.1g，加5～15℃超纯水溶解定容至100ml；
供试品溶液的制备：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下剪碎至1cm2以下的碎片，称取5.0g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封，即得供试品溶液。
对照品溶液的制备：精密称取香茅醇0.05g对照品,置于顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封；
混合对照品溶液的制备：按重量梯度精密称取香叶醇0.1～1.5g、橙花醇0.05～0.8g、2-苯乙醇0.15～1.8g、丁香酚0.15～1.7g、丁香酚甲醚0.2～2.5g、芳樟醇0.02～0.5g、香茅醇0.3～3.5g、十七烷0.3～3g、二十三烷0.5～6.5g对照品各5份，分别置于5个编号为1号,2号,3号,4号,5号的100ml容量瓶中，用5～15℃超纯水溶解并定容，摇匀即得混合对照品原溶液，进样前取混合对照品原溶液各5ml置于20ml顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封即得混合标准溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为聚乙二醇毛细管柱。载气为高纯氮气，检测器为氢离子火焰检测器，标准溶液和供试品溶液顶空进样，程序升温，各峰之间分离度大于1.5,且对称性良好，理论塔板数按香茅醇计不低于10000。
色谱参数：仪器：Agilent 7890B气相色谱仪，FID检测器，Agilent7697A顶空进样器；
色谱柱：DB-WAX毛细管柱，柱长30m，柱内径0.32mm，薄膜厚度0.25μm；
进样口温度：250℃。
检测器温度：250℃；
柱温：采用程序升温，具体为40℃保持5min，以5℃/min的升温速率升至100℃，保持10min，以5℃/min的升温速率升至240℃，保持3min；
进样体积：顶空定量环1ml，载气流速3ml/min，分流比15:1；顶空参数：平衡时间为20min，平衡温度为70℃，顶空瓶体积：20ml。
对照品溶液与供试品溶液置于顶空进样器相同条件下平衡相同的时间，顶空进样1ml，注入气相色谱仪，测定，记录55min色谱峰；校正因子的计算：取混合对照品溶液适量(n＝4)，进样测定，记录各目的峰峰面积，计算各待测成分的校正因子(f＝(As/Cs)÷(Ar/Cr)，式中As为实验内标物质的峰面积，Ar为对照品的峰面积，Cs为内标物质的质量浓度，Cr为对照品的质量浓度)及香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、十七烷、二十三烷相对于香茅醇的相对校正因子(RCF)，再通过各成分与香茅醇的相对校正因子计算出供试品中各成分的含量。
实施例4
内标液的制备：精密称取正丁醇0.1g，加5～15℃超纯水溶解定容至100ml；
供试品溶液的制备：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下用研钵研磨至破碎，称取4g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1～2mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封。
对照品溶液的制备：精密称取香茅醇0.03g对照品,置于顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封；
混合对照品溶液的制备：按重量梯度精密称取香叶醇0.1～1.5g、橙花醇0.05～0.8g、2-苯乙醇0.15～1.8g、丁香酚0.15～1.7g、丁香酚甲醚0.2～2.5g、芳樟醇0.02～0.5g、香茅醇0.3～3.5g、十七烷0.3～3g、二十三烷0.5～6.5g对照品各5份，分别置于5个编号为1号,2号,3号,4号,5号的100ml容量瓶中，用5～15℃超纯水溶解并定容，摇匀即得混合对照品原溶液，进样前取混合对照品原溶液各5ml置于20ml顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封即得混合标准溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为聚乙二醇毛细管柱。载气为高纯氮气，检测器为氢离子火焰检测器，标准溶液和供试品溶液顶空进样，程序升温，各峰之间分离度大于1.5,且对称性良好，理论塔板数按香茅醇计不低于10000。
色谱参数：仪器：Agilent 7890B气相色谱仪，FID检测器，Agilent7697A顶空进样器；
色谱柱：DB-WAX毛细管柱，柱长30m，柱内径0.32mm，薄膜厚度0.25μm；
进样口温度：250℃。
检测器温度：250℃；
柱温：采用程序升温，具体为40℃保持5min，以5℃/min的升温速率升至100℃，保持10min，以5℃/min的升温速率升至240℃，保持3min；
进样体积：顶空定量环1ml，载气流速3ml/min，分流比15:1；顶空参数：平衡时间为20min，平衡温度为70℃，顶空瓶体积：20ml。
对照品溶液与供试品溶液置于顶空进样器相同条件下平衡相同的时间，顶空进样1ml，注入气相色谱仪，测定，记录55min色谱峰；校正因子的计算：取混合对照品溶液适量(n＝4)，进样测定，记录各目的峰峰面积，计算各待测成分的校正因子(f＝(As/Cs)÷(Ar/Cr)，式中As为实验内标物质的峰面积，Ar为对照品的峰面积，Cs为内标物质的质量浓度，Cr为对照品的质量浓度)及香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、十七烷、二十三烷相对于香茅醇的相对校正因子(RCF)，再通过各成分与香茅醇的相对校正因子计算出供试品中各成分的含量。
实施例5
内标液的制备：精密称取正丁醇0.1g，加5～15℃超纯水溶解定容至100ml；
供试品溶液的制备：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下用研钵研磨至破碎，称取5.0g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封。
对照品溶液的制备：精密称取香茅醇0.06g对照品,置于顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封；
混合对照品溶液的制备：按重量梯度精密称取香叶醇0.1～1.5g、橙花醇0.05～0.8g、2-苯乙醇0.15～1.8g、丁香酚0.15～1.7g、丁香酚甲醚0.2～2.5g、芳樟醇0.02～0.5g、香茅醇0.3～3.5g、十七烷0.3～3g、二十三烷0.5～6.5g对照品各5份，分别置于5个编号为1号,2号,3号,4号,5号的100ml容量瓶中，用5～15℃超纯水溶解并定容，摇匀即得混合对照品原溶液，进样前取混合对照品原溶液各5ml置于20ml顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封即得混合标准溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为聚乙二醇毛细管柱。载气为高纯氮气，检测器为氢离子火焰检测器，标准溶液和供试品溶液顶空进样，程序升温，各峰之间分离度大于1.5,且对称性良好，理论塔板数按香茅醇计不低于10000。
色谱参数：仪器：Agilent 7890B气相色谱仪，FID检测器，Agilent7697A顶空进样器；
色谱柱：DB-WAX毛细管柱，柱长30m，柱内径0.32mm，薄膜厚度0.25μm；
进样口温度：250℃。
检测器温度：250℃；
柱温：采用程序升温，具体为40℃保持5min，以5℃/min的升温速率升至100℃，保持10min，以5℃/min的升温速率升至240℃，保持3min；
进样体积：顶空定量环1ml，载气流速3ml/min，分流比15:1；顶空参数：平衡时间为20min，平衡温度为70℃，顶空瓶体积：20ml。
对照品溶液与供试品溶液置于顶空进样器相同条件下平衡相同的时间，顶空进样1ml，注入气相色谱仪，测定，记录55min色谱峰；校正因子的计算：取混合对照品溶液适量(n＝4)，进样测定，记录各目的峰峰面积，计算各待测成分的校正因子(f＝(As/Cs)÷(Ar/Cr)，式中As为实验内标物质的峰面积，Ar为对照品的峰面积，Cs为内标物质的质量浓度，Cr为对照品的质量浓度)及香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、十七烷、二十三烷相对于香茅醇的相对校正因子(RCF)，再通过各成分与香茅醇的相对校正因子计算出供试品中各成分的含量。
实施例6
内标液的制备：精密称取正丁醇0.1g，加5～15℃超纯水溶解定容至100ml；
供试品溶液的制备：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下用研钵研磨至破碎，称取5.0g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封，超声处理10min即得供试品溶液。
对照品溶液的制备：精密称取香茅醇0.05g对照品,置于顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封；
混合对照品溶液的制备：按重量梯度精密称取香叶醇0.1～1.5g、橙花醇0.05～0.8g、2-苯乙醇0.15～1.8g、丁香酚0.15～1.7g、丁香酚甲醚0.2～2.5g、芳樟醇0.02～0.5g、香茅醇0.3～3.5g、十七烷0.3～3g、二十三烷0.5～6.5g对照品各5份，分别置于5个编号为1号,2号,3号,4号,5号的100ml容量瓶中，用5～15℃超纯水溶解并定容，摇匀即得混合对照品原溶液，进样前取混合对照品原溶液各5ml置于20ml顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封即得混合标准溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为聚乙二醇毛细管柱。载气为高纯氮气，检测器为氢离子火焰检测器，标准溶液和供试品溶液顶空进样，程序升温，各峰之间分离度大于1.5,且对称性良好，理论塔板数按香茅醇计不低于10000。
色谱参数：仪器：Agilent 7890B气相色谱仪，FID检测器，Agilent7697A顶空进样器；
色谱柱：DB-WAX毛细管柱，柱长30m，柱内径0.32mm，薄膜厚度0.25μm；
进样口温度：250℃。
检测器温度：250℃；
柱温：采用程序升温，具体为40℃保持5min，以5℃/min的升温速率升至100℃，保持10min，以5℃/min的升温速率升至240℃，保持3min；
进样体积：顶空定量环1ml，载气流速3ml/min，分流比15:1；顶空参数：平衡时间为20min，平衡温度为70℃，顶空瓶体积：20ml。
对照品溶液与供试品溶液置于顶空进样器相同条件下平衡相同的时间，顶空进样1ml，注入气相色谱仪，测定，记录55min色谱峰；校正因子的计算：取混合对照品溶液适量(n＝4)，进样测定，记录各目的峰峰面积，计算各待测成分的校正因子(f＝(As/Cs)÷(Ar/Cr)，式中As为实验内标物质的峰面积，Ar为对照品的峰面积，Cs为内标物质的质量浓度，Cr为对照品的质量浓度)及香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、十七烷、二十三烷相对于香茅醇的相对校正因子(RCF)，再通过各成分与香茅醇的相对校正因子计算出供试品中各成分的含量。
实施例7
内标液的制备：精密称取正丁醇0.2g，加5～15℃超纯水溶解定容至100ml；
供试品溶液的制备：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下剪碎至1cm2以下的碎片，称取6g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再取5～15℃的内标液5ml，加盖密封，即得供试品溶液。
对照品溶液的制备：精密称取香茅醇0.07g对照品,置于顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封；
混合对照品溶液的制备：按重量梯度精密称取香叶醇0.1～1.5g、橙花醇0.05～0.8g、2-苯乙醇0.15～1.8g、丁香酚0.15～1.7g、丁香酚甲醚0.2～2.5g、芳樟醇0.02～0.5g、香茅醇0.3～3.5g、十七烷0.3～3g、二十三烷0.5～6.5g对照品各5份，分别置于5个编号为1号,2号,3号,4号,5号的100ml容量瓶中，用5～15℃超纯水溶解并定容，摇匀即得混合对照品原溶液，进样前取混合对照品原溶液各5ml置于20ml顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封即得混合标准溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为聚乙二醇毛细管柱。载气为高纯氮气，检测器为氢离子火焰检测器，标准溶液和供试品溶液顶空进样，程序升温，各峰之间分离度大于1.5,且对称性良好，理论塔板数按香茅醇计不低于10000。
色谱参数：仪器：Agilent 7890B气相色谱仪，FID检测器，Agilent7697A顶空进样器；
色谱柱：DB-WAX毛细管柱，柱长30m，柱内径0.32mm，薄膜厚度0.25μm；
进样口温度：250℃。
检测器温度：250℃；
柱温：采用程序升温，具体为40℃保持5min，以5℃/min的升温速率升至100℃，保持10min，以5℃/min的升温速率升至240℃，保持3min；
进样体积：顶空定量环1ml，载气流速3ml/min，分流比15:1；顶空参数：平衡时间为20min，平衡温度为70℃，顶空瓶体积：20ml。
对照品溶液与供试品溶液置于顶空进样器相同条件下平衡相同的时间，顶空进样1ml，注入气相色谱仪，测定，记录55min色谱峰；校正因子的计算：取混合对照品溶液适量(n＝4)，进样测定，记录各目的峰峰面积，计算各待测成分的校正因子(f＝(As/Cs)÷(Ar/Cr)，式中As为实验内标物质的峰面积，Ar为对照品的峰面积，Cs为内标物质的质量浓度，Cr为对照品的质量浓度)及香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、十七烷、二十三烷相对于香茅醇的相对校正因子(RCF)，再通过各成分与香茅醇的相对校正因子计算出供试品中各成分的含量。
实验例：为证明本发明的科学性与合现性，进行了以下方法学实验研究：
试验例1
1材料、设备及试剂
1.1材料
玫瑰花瓣样品，批号：180421、180422、180423
对照品：香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、香茅醇、十七烷、二十三烷
对照品来源：中国食品药品检定研究院
1.2设备
仪器：Agilent 7890B气相色谱仪(配有FID检测器)；Agilent7697A顶空进样器。
色谱柱：DB-WAX(毛细管柱)，柱长30m，柱内径0.32mm，薄膜厚度0.25μm。
1.3试剂
正丁醇(色谱级)：重庆川东化工(集团)有限公司
水为现制超纯水
2参数设定
色谱参数：色谱柱相似固定相为DB-WAX，柱长30m，柱内径0.32mm，薄膜厚度0.25μm。进样口温度250℃，检测器温度250℃，程序升温的方法：40℃保持5min，以5℃/min的升温速率升至100℃，保持10min。以5℃/min的升温速率升至240℃，保持3min，分流比15:1；流量：3ml/min。
顶空参数：
平衡时间：30min，平衡温度：70℃，顶空瓶体积：20ml。
3测定
供试品溶液的制备为：
方法一：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下剪碎至1cm2以下的碎片，称取4g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封，即得供试品溶液。
方法二：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下剪碎至1cm2以下的碎片，称取5g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封，即得供试品溶液。
方法三：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下剪碎至1cm2以下的碎片，称取6.0g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的2mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封，即得供试品溶液。
方法四：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下用研钵研磨至破碎，称取4g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封。
方法五：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下用研钵研磨至破碎，称取5g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封。
方法六：取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下用研钵研磨至破碎，称取6.0g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的2mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封，超声处理10min即得供试品溶液。
内标溶液的制备
方法一：精密称取色谱级正丁醇0.1g，加5～15℃的超纯水溶解定容至100ml，摇匀后置于5～15℃环境1～2小时即得内标溶液；
方法二：精密称取色谱级正丁醇0.2g，加5～15℃的超纯水溶解定容至100ml，摇匀后置于5～15℃环境1～2小时即得内标溶液；
对照品溶液的制备精密称取香茅醇适量,用5～15℃的超纯水定容，取5ml置于20ml顶空瓶中，再加入5ml内标液，加盖密封，即得标准溶液。
混合对照品溶液的制备称取：香叶醇1.422g、1.138g、0.568g、0.284g、0.142g；橙花醇0.774g、0.62g、0.31g、0.154g、0.078g；2-苯乙醇1.788g、1.422g、0.712g、0.356g、0.178g；丁香酚1.632g、1.306g、0.652g、0.326g、0.164g；丁香酚甲醚2.444g、1.954g、0.978g、0.488g、0.244g；芳樟醇0.458g、0.366g、0.182g、0.092g、0.046g；香茅醇3.476g、2.78g、1.39g、0.696g、0.348g；十七烷2.99g、2.392g、1.196g、0.598g、0.3g；二十三烷6.254g、5.004g、2.502g、1.25g、0.626g；
以上九种对照品按重量由高到低依次置于5个编号为1号,2号,3号,4号,5号的100ml容量瓶中，用5～15℃超纯水溶解并定容，摇匀即得混合对照品原液，进样前取混合对照品原液溶液各5ml置于20ml顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封即得混合标准溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ。
4.1标准曲线的制作
按照5个标准曲线溶液，按照“2”项中参数条件顶空进样分析，将得到的各个成分的峰面积与内标正丁醇峰面积比值为纵坐标，与相应成分的质量浓度为横坐标绘制标准曲线，计算得到标准曲线回归方程。结果表明本发明能达到较低的检出限，各目标成分在相应浓度范围内线性关系良好。结果见表1
表1标准曲线回归方程
Figure GDA0002616137110000181
4.2精密度实验
取上述混合标准溶液溶液3号，移取5ml置于20ml顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封即得混合标准溶液Ⅲ6个平行样，每个样品连续进样1次，按照“2”项中参数条件顶空进样分析，记录各组分与正丁醇的面积之比，结果如表2所示。表明仪器此方法有较高的精密度，适合该方法检测。
表2九种含量测定精密度实验结果
Figure GDA0002616137110000182
Figure GDA0002616137110000191
4.3稳定性实验
取混合标准溶液溶液3号，移取5ml置于20ml顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封即得混合标准溶液Ⅲ，分别于第0,2,4,6,8,24h，按照2中参数条件顶空进样分析，记录各组分与正丁醇的面积之比，香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、香茅醇、十七烷、二十三烷的RSD％分别为0.72％，0.56％，0.85％，1.02％，1.06％，0.98％，1.12％，0.54％，1.32％表明样品放置24h稳定性良好，可满足检测需要。
按“3”项中供试品溶液的制备方法二配制五份供试品溶液，即取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下用研钵研磨至破碎，称取5g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封。分别于第0,2,4,6,8,24h，按照2中参数条件顶空进样分析，记录各组分与正丁醇的面积之比，香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、香茅醇、十七烷、二十三烷的RSD％分别为0.12％，0.89％，0.28％，2.14％，1.72％，0.48％，1.13％，2.04％，1.36％表明样品放置24h稳定性良好。
按“3”项中供试品溶液的制备方法五配制五份供试品溶液，即取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下用研钵研磨至破碎，称取5g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封。分别于第0,2,4,6,8,24h，按照“2”项中参数条件顶空进样分析，记录各组分与正丁醇的面积之比，香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、香茅醇、十七烷、二十三烷的RSD％分别为0.70％，0.51％，0.88％，1.17％，1.26％，0.38％，1.02％，0.84％，0.92％表明样品放置24h稳定性良好。
注：方法一、方法二、三，可以只做一个稳定性实验，因为其制备方法一样，只有参数不同。方法四、五、六可以只做一个稳定性实验，因为其制备方法一样，只有参数不同。
4.4回收率实验
分别精密量取已知含量的破碎的玫瑰花各9份，每份2.5g，分别精密加入一定量的香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、香茅醇、十七烷、二十三烷，按照本发明的上述方法制样，测定各成分含量，各成分平均加样回收率为香叶醇97.8％、橙花醇96.3％、2-苯乙醇97.2％、丁香酚98.4％、丁香酚甲醚94.7％、芳樟醇96.8％、香茅醇98.2％、十七烷99.4％、二十三烷98.9％，该方法回收率，能够满足精密度测试的要求。
4.5样品外标法(ESM)和一测多评法(QAMS)含量计算结果对比
按“3”项中供试品溶液的制备方法二配制3批样品溶液，平行3份，取混合标准溶液溶液3号，移取5ml置于20ml顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封即得混合标准溶液Ⅲ，平行3份，按照“2”项中参数条件顶空进样分析，记录香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、香茅醇、十七烷、二十三烷的的峰面积，分别采用外标法(ESM)和一测多评法(QAMS)计算其含量。结果见表3。由表3可知，外标法和一测多评法测定结果基本一致，RSD≤1.0％，表明一测多评法在玫瑰花香气成分含量测定中的适用性和可行性得到了验证。
表3外标法(ESM)和一测多评法(QAMS)含量结果对比
Figure GDA0002616137110000201
Figure GDA0002616137110000211
4.6各成分色谱峰的相对保留时间
取混合标准溶液溶液3号，移取5ml置于20ml顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封即得混合标准溶液Ⅲ，按照“2”项中参数条件顶空进样分析，计算二十三烷、芳樟醇、十七烷、橙花醇、香叶醇、2-苯乙醇、丁香酚甲醚、丁香酚相对于香茅醇的保留时间差，结果见表4.
Figure GDA0002616137110000212
Figure GDA0002616137110000213
Figure GDA0002616137110000221
结果表明，多个成分的含量重复性良好，准确性均符合要求，仪器精密度好，且供试品溶液在24小时内稳定，通过一测多评法与外标法的相互验证，证明结果无显著差异，本发明方法克服了对照品成本高、不易得等难题，通过相对校正因子及色谱峰定位计算指标成分含量，实现玫瑰花中多种挥发性成分的同步测定，既可节省成本、简化操作，提高效率，且检测灵敏度高，稳定性好，测定结果准确可靠。
试验例2
1、对比例1
取本发明中的玫瑰花瓣5.0g，照《一测多评法测定食用玫瑰中5种成分的含量》徐家怡贵州师范大学贵州省山地环境信息系统中供试品的制备方法，制备供试品溶液，并按照《一测多评法测定食用玫瑰中5种成分的含量》HPLC色谱条件测定香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、香茅醇、十七烷、二十三烷的含量。
在对照品图谱中，各成分峰分离度不符合要求，无法达到检测要求。
说明该方法仅适用于食用玫瑰中非挥发性物质的检测。
本发明适用于玫瑰花中香气成分含量的测定，使用气相色谱仪，顶空进样。本发明前处理更加简单，直接称取加入顶空瓶就可以进行检测。
试验例3
1、对比例2
1.1含量检测对比
取本发明中的玫瑰花瓣5.0g，照《食用玫瑰香气质量评价指标及影响因素》山东轻工业学院食品与生物工程学院中国食品发酵工业研究院蓝贝酒业集团唐山饮料有限公司苏红霞中供试品的制备方法，制备供试品溶液，并按照《食用玫瑰香气质量评价指标及影响因素》中的色谱条件测定香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、香茅醇、十七烷、二十三烷的含量。
本发明中的玫瑰花瓣5.0g，按照本发明实验例1中供试品的制备方法(方法一、方法二、方法三、方法四、方法五、方法六)制备供试品溶液，按照《食用玫瑰香气质量评价指标及影响因素》中的色谱条件测定香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、香茅醇、十七烷、二十三烷的含量。实验结果检见表3
表5含量检测对比结果表
Figure GDA0002616137110000231
以上结果表明：本发明供试品溶液的制备方法制备的供试品溶液，在含量测定的过程中，含量均比对比例1的含量高，说明本发明响应值高，供试品处理过程能有效保护挥发性成分，避免目标成分挥发、分解，本发明供试品处理方法优于对比例1。
2.稳定性实验对比
按实验例1供试品溶液的制备方法二配制五份供试品溶液，即取适量玫瑰花瓣，在5～15℃环境下用研钵研磨至破碎，称取5g破碎的玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再用移液管取5～15℃的1mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封。分别于第0,2,4,6,8,24h，并按照《食用玫瑰香气质量评价指标及影响因素》中的色谱条件测定中参数条件分析，记录各组分与正丁醇的面积之比，香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、香茅醇、十七烷、二十三烷的RSD％分别为2.92％，1.57％，1.45％，2.42％，2.16％，3.98％，1.92％，2.56％，3.32％表明样品放置24h稳定性良好。
取按照《食用玫瑰香气质量评价指标及影响因素》中所述供试品溶液的配制方法制备供试品溶液，移取5ml置于20ml顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封分别于第0,2,4,6,8,24h，并按照《食用玫瑰香气质量评价指标及影响因素》中的色谱条件测定中参数条件分析，记录各组分与正丁醇的面积之比，香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、香茅醇、十七烷、二十三烷的RSD％分别为2.19％，1.29％，3.26％，3.24％，2.02％，4.48％，3.13％，2.24％，3.76％表明样品放置24h稳定性良好，可满足检测需要。但RSD％均高于且本发明供试品溶液24小时内浓度的RSD％值，说明本发明供试品溶液更稳定。
本发明样品处理便于操作，仪器较简单，避免高温下化合物的分解，并同时测定多种香气成分的方法。
结果表明，本发明的检测方法较现有技术好。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (4)

1.一种玫瑰花中香气成分含量检测的方法，其特征在于，所述含量检测方法为气相色谱法，顶空进样，包括以下步骤：
1)供试品溶液的制备
称取4～6g玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再加入5～15℃的1～2mg/ml的正丁醇水溶液4～6ml，加盖密封，即得；
2)内标溶液与混合对照品溶液的制备
内标溶液的制备方法为：精密称取色谱级正丁醇0.1～0.2g，加5～15℃的超纯水溶解定容至100ml，摇匀后置于5～15℃环境1～2小时即得内标溶液；对照品溶液：精密称取香茅醇适量,用5～15℃的超纯水定容，取5ml置于20ml顶空瓶中，再加入5ml内标液，加盖密封，即得对照品溶液；
混合对照品溶液的制备方法为：称取：香叶醇1.422g、1.138g、0.568g、0.284g、0.142g；橙花醇0.774g、0.62g、0.31g、0.154g、0.078g；2-苯乙醇1.788g、1.422g、0.712g、0.356g、0.178g；丁香酚1.632g、1.306g、0.652g、0.326g、0.164g；丁香酚甲醚2.444g、1.954g、0.978g、0.488g、0.244g；芳樟醇0.458g、0.366g、0.182g、0.092g、0.046g；香茅醇3.476g、2.78g、1.39g、0.696g、0.348g；十七烷2.99g、2.392g、1.196g、0.598g、0.3g；二十三烷6.254g、5.004g、2.502g、1.25g、0.626g；以上九种对照品按重量由高到低依次置于5个编号为1号,2号,3号,4号,5号的100ml容量瓶中，用5～15℃超纯水溶解并定容，摇匀即得混合对照品原液，进样前取混合对照品原液溶液各5ml置于20ml顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封即得混合标准溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ；
3)色谱条件与系统适用性试验
色谱柱为聚乙二醇毛细管柱；载气为高纯氮气，检测器为氢离子火焰检测器，对照品溶液和供试品溶液顶空进样，采用程序升温，各峰之间分离度大于1.5,且对称性良好；
色谱参数：仪器：Agilent 7890B气相色谱仪，FID检测器，Agilent7697A顶空进样器；色谱柱：DB-WAX毛细管柱，柱长30m，柱内径0.32mm，薄膜厚度0.25μm；进样口温度为240～260℃，检测器温度为240～260℃；柱温：采用程序升温，具体为40℃保持5min，以5℃/min的升温速率升至100℃，保持10min，再以5℃/min的升温速率升至240℃，保持3min；进样体积：顶空定量环1ml，载气流速2～4ml/min，分流比10～20:1；顶空参数：平衡时间为25～35min，平衡温度为60～80℃，顶空瓶体积为20ml；
4)测定
对照品溶液与供试品溶液置于顶空进样器相同条件下平衡相同的时间，顶空进样1ml，注入气相色谱仪检测，记录各目的峰峰面积，计算各待测成分的校正因子及对照品中香叶醇、橙花醇、2-苯乙醇、丁香酚、丁香酚甲醚、芳樟醇、十七烷、二十三烷相对于香茅醇的相对校正因子，再通过各成分与香茅醇的相对校正因子计算出供试品中各成分的含量。
2.根据权利要求1所述含量检测的方法，其特征在于，步骤(1)中供试品溶液的制备为：称取4.5～5.5g玫瑰花瓣，置20ml顶空瓶中，再加入5～10℃的1mg/ml的正丁醇水溶液5ml，加盖密封，即得。
3.根据权利要求1所述含量检测的方法，其特征在于所述含量检测方法包括以下步骤：
供试品溶液的制备：称取4-6g玫瑰花瓣，置于顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封；
对照品溶液的制备：精密称取香茅醇0.03-0.07g对照品,置于顶空瓶中，加入5ml内标溶液，加盖密封。
4.根据权利要求3所述含量检测的方法，其特征在于所述各成分平均加样回收率为：香叶醇97.8％、橙花醇96.3％、2-苯乙醇97.2％、丁香酚98.4％、丁香酚甲醚94.7％、芳樟醇96.8％、香茅醇98.2％、十七烷99.4％、二十三烷98.9％。
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