CN110441515A - 一种便隐血检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种便隐血检测试剂盒，包括样品稀释液，校准品，质控品，试剂1和试剂2，试剂1为反应缓冲液，试剂2为血红蛋白抗体致敏乳胶溶液，样品稀释液、校准品的背景缓冲液、质控品的背景缓冲液、试剂1和/或试剂2中添加有：三(2‑羧乙基)膦1g/L；谷胱甘肽1‑2g/L；谷氨酸1‑2g/L；精氨酸0.1‑0.2g/L；半胱氨酸0.1‑0.2g/L；乙二胺四乙酸二钠1‑2g/L。本发明可提高HB储存及检测反应过程中的稳定性，各试剂原料简单易得，配置方便，应用范围广。

Description

一种便隐血检测试剂盒
技术领域
本发明涉及医疗检测领域，更具体的说是涉及一种便隐血检测试剂盒。
背景技术
便隐血(fecal occμLt blood简称FOB)：又称便潜血，是指消化道少量出血，红细胞被消化破坏，大便中含有少量的被破坏的红细胞；粪便外观无异常改变，肉眼和显微镜下均不能证实出血。便隐血是消化道疾病的重要信息，是消化道恶性肿瘤早期诊断的重要筛查指标，利用检测粪便中的血红蛋白(简称HB)进行大便隐血检测筛查能够早期发现消化道病变。
常规的便隐血检测方法包括胶体金法和胶乳免疫比浊法。目前国内大多采用价格便宜的胶体金法进行便隐血的检测，然而该方法不能定量，检测灵敏度低，易漏检。
胶乳免疫比浊法对试剂要求较为严格，血红蛋白HB极易氧化降解，粪便采集后血红蛋白会在上机测试前的时间内，存储于样本采集管的样本稀释液中，如何保障在上机测试前，样本稀释液中的HB不降解，不造成检测结果假阴性漏检是本领域一大难题。胶乳免疫比浊检测过程中，样本会和试剂1、试剂2混合后在37℃条件下免疫反应3-10min，试剂1、2如果无法维持HB的稳定性，检测过程HB不断降解，会造成灵敏度降低，检测重复性差，严重的导致漏检发生。此外，由于HB极不稳定，故很难获得稳定的校准品和质控品；没有稳定的校准品和质控品，无法保证检测准确度。
日本荣研化学(Eiken)所研制的胶乳免疫比浊法检测试剂能够很好地解决HB不稳定的问题，于样品稀释液中4℃保存HB14d仍具有良好的稳定性，校准品及质控品4℃存储6个月，复溶后7d稳定性良好；然而其检测成本较高，国内仅超大型三甲医院如北京协和医院能够开展，无法广泛应用。
因此，如何提供一种能够定量检测，检测稳定性强并且成本低廉的便隐血检测试剂盒成为本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种便隐血检测试剂盒，通过对样品稀释液、校准品的背景缓冲液、质控品的背景缓冲液、试剂1和/或试剂2的组成进行优化，提高HB储存及检测反应过程中的稳定性，各试剂原料简单易得，配置方便，应用范围广。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种便隐血检测试剂盒，包括样品稀释液，校准品，质控品，试剂1和试剂2，试剂1为反应缓冲液，试剂2为血红蛋白抗体致敏乳胶溶液，其特征在于，样品稀释液、校准品的背景缓冲液、质控品的背景缓冲液、试剂1和/或试剂2中添加有：
三(2-羧乙基)膦1g/L；
谷胱甘肽1-2g/L；
谷氨酸1-2g/L；
精氨酸0.1-0.2g/L；
半胱氨酸0.1-0.2g/L；
乙二胺四乙酸二钠1-2g/L。
谷胱甘肽可有效防止HB氧化，然而谷胱甘肽本身易分解，因此，本发明按照特定的用量添加了其降解产物谷氨酸，精氨酸和半胱氨酸，以维持谷胱甘肽在溶液中的动态平衡，减缓其分解；并且上述物质的添加不会对样品检测造成影响。
优选地，样品稀释液包括如下组分：
4-羟乙基哌嗪乙磺酸11.9-23.8g/L，氯化钠46.8-58.4g/L，海藻糖30g/L，蔗糖60-80g/L，月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠10g/L，三(2-羧乙基)膦1g/L，谷胱甘肽1-2g/L，谷氨酸1-2g/L，精氨酸0.1-0.2g/L，半胱氨酸0.1-0.2g/L，乙二胺四乙酸二钠1-2g/L，IgG free级牛血清白蛋白1-2g/L，氢氧化钠调PH 6.90-7.20。
以高浓度盐配合海藻糖，蔗糖，谷胱甘肽及其降解产物等成分共同维持样品中HB的稳定性。
优选地，样品稀释液还包括防腐剂ProClin300 0.6ml/L。
优选地，校准品的背景缓冲液或质控品的背景缓冲液包括如下组分：
5-羟乙基哌嗪乙磺酸5.96-11.9g/L，氯化钠2.9-5.8g/L，海藻糖45g/L，麦芽糖10-20g/L，三(2-羧乙基)膦1g/L，谷胱甘肽1-2g/L，谷氨酸1-2g/L，精氨0.1-0.2g/L，半胱氨酸0.1-0.2g/L，乙二胺四乙酸二钠1-2g/L，甘露醇2g/L，无支原体衣原体级胎牛血清50-100ml/L，氢氧化钠调PH 6.90-7.20。
便隐血检测校准品及质控品通常制成冻干品，因此，需要合适的背景缓冲液以利于冻干；本发明采用低浓度的氯化钠、海藻糖、麦芽糖配合其他成分，有效防止HB氧化，同时降低了各成分冻干结晶对冻干品蓬松度和吸湿性的影响，使冻干品更加稳定。
使用校准品、质控品的背景缓冲液冻干校准品、质控品时，预冻时间3小时，预冻温度-48℃，气压110kpa；真空冷冻干燥时间20小时，温度-46～-48℃，气压12～30pa。
优选地，使用校准品、质控品的背景缓冲液将校准品、质控品配置成130ng/ml-1300ng/ml后进行冻干。
优选地，校准品的背景缓冲液或质控品的背景缓冲液包括防腐剂ProClin3000.6ml/L。
优选地，试剂1包括如下组分：
4-羟乙基哌嗪乙磺酸23.8-47.6g/L，氯化钠70.1-87.6g/L，三(2-羧乙基)膦1g/L，谷胱甘肽1-2g/L，谷氨酸1-2g/L，精氨酸0.1-0.2g/L，半胱氨酸0.1-0.2g/L，乙二胺四乙酸二钠1-2g/L，IgG free级牛血清白蛋白1-2g/L，聚乙二醇6000 10g/L，吐温-20 2-5ml/L，阻断剂2-3ml/L，氢氧化钠调PH6.90-7.20。
优选地，试剂1还包括防腐剂ProClin300 0.6ml/L；阻断剂为HBR-X 2ml/L，或E-015 3ml/L。
优选地，试剂2包括如下组分：
三羟甲基甲胺基丙磺酸12.2g/L，海藻糖45g/L，300nm胶乳微球1.8-2.5g/L兔抗人血红蛋白多克隆抗体30-40ml/L，三(2-羧乙基)膦1g/L，谷胱甘肽1-2g/L，谷氨酸1-2g/L，精氨酸0.1-0.2g/L，半胱氨酸0.1-0.2g/L，乙二胺四乙酸二钠1-2g/L，IgG free级牛血清白蛋白1-2g/L，吐温-20 2-5ml/L，氢氧化钠调PH 7.10-7.40。
本发明在试剂1中添加了高浓度氯化钠，试剂2中未添加氯化钠，提高检测反应过程中HB稳定性的同时兼顾试剂储存稳定性。
优选地，还包括防腐剂ProClin300 0.6ml/L。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明充分考虑HB在储存及检测阶段的稳定性要求以及检测准确性、灵敏度的要求，对样品稀释液、校准品的背景缓冲液、质控品的背景缓冲液、试剂1和/或试剂2的组成进行优化，保证了不同应用场景下HB的稳定性；各试剂原料简单易得，配置方便，可大大降低检测成本，实现便隐血准确定量分析的广泛应用。
附图说明
图1所示为实施例4实验组10与对照组6检测结果对比；
图2所示为实施例4实验组11与对照组6检测结果对比；
图3所示为实施例4实验组12与对照组6检测结果对比。
具体实施方式
下面将结合本实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1验证试剂1、试剂2对便隐血检测稳定性的影响
使用实验组1-3及对照组配方分别配置试剂1、试剂2，溶剂为水，各组抗体均按照常规化学偶联法标记到胶乳微球上。
实验组1
试剂1：4-羟乙基哌嗪乙磺酸23.8g/L，氯化钠70.1g/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽1g/L，谷氨酸1g/L，精氨酸0.1g/L，半胱氨酸0.1g/L，乙二胺四乙酸二钠1g/L，牛血清白蛋白(IgG free级)1g/L，聚乙二醇6000 10g/L，吐温-20 2ml/L，阻断剂HBR-X(Scantibody公司)2ml/L，氢氧化钠调PH6.90，防腐剂ProClin300 0.6ml/L。
试剂2：三羟甲基甲胺基丙磺酸12.2g/L，海藻糖45g/L，300nm胶乳微球1.8g/L，兔抗人血红蛋白多克隆抗体(Dako公司，货号为A0118)30ml/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽1g/L，谷氨酸1g/L，精氨酸0.1g/L，半胱氨酸0.1g/L，乙二胺四乙酸二钠1g/L，牛血清白蛋白(IgG free级)1g/L，吐温-20 2ml/L，氢氧化钠调PH7.1，防腐剂ProClin3000.6ml/L。
实验组2
试剂1：4-羟乙基哌嗪乙磺酸47.6g/L，氯化钠87.6g/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽2g/L，谷氨酸2g/L，精氨酸0.2g/L，半胱氨酸0.2g/L，乙二胺四乙酸二钠2g/L，牛血清白蛋白(IgG free级)2g/L，聚乙二醇6000 10g/L，吐温-20 5ml/L，阻断剂015(菲鹏生物，货号HIER-E-015)3ml/L，氢氧化钠调PH7.20，防腐剂ProClin300 0.6ml/L。
试剂2：三羟甲基甲胺基丙磺酸12.2g/L，海藻糖45g/L，300nm胶乳微球2.5g/L，兔抗人血红蛋白多克隆抗体(Dako公司，货号为A0118)40ml/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽2g/L，谷氨酸2g/L，精氨酸0.2g/L，半胱氨酸0.2g/L，乙二胺四乙酸二钠2g/L，牛血清白蛋白(IgG free级)2g/L，吐温-20 5ml/L，氢氧化钠调PH7.40，防腐剂ProClin3000.6ml/L。
实验组3
试剂1：4-羟乙基哌嗪乙磺酸30g/L，氯化钠75g/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽1.5g/L，谷氨酸1.5g/L，精氨酸0.15g/L，半胱氨酸0.15g/L，乙二胺四乙酸二钠1.5g/L，牛血清白蛋白(IgG free级)1.5g/L，聚乙二醇6000 10g/L，吐温-20 3ml/L，阻断剂015(菲鹏生物，货号HIER-E-015)3ml/L，氢氧化钠调PH 7.05，防腐剂ProClin300 0.6ml/L。
试剂2：三羟甲基甲胺基丙磺酸12.2g/L，海藻糖45g/L，300nm胶乳微球2.1g/L，兔抗人血红蛋白多克隆抗体(Dako公司，货号为A011835ml/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽1.5g/L，谷氨酸1.5g/L，精氨酸0.15g/L，半胱氨酸0.15g/L，乙二胺四乙酸二钠1.5g/L，牛血清白蛋白(IgG free级)1.5g/L，吐温-20 3ml/L，氢氧化钠调PH 7.25，防腐剂ProClin300 0.6ml/L。
对照组1
试剂1：4-羟乙基哌嗪乙磺酸47.6g/L，氯化钠9g/L，聚乙二醇6000 10g/L，吐温-205ml/L，阻断剂HBR-X(Scantibody公司)2ml/L，氢氧化钠调PH7.00，防腐剂ProClin3000.6ml/L。
试剂2：三羟甲基甲胺基丙磺酸12.2g/L，300nm胶乳微球2g/L，兔抗人血红蛋白多克隆抗体(Dako公司货号为A0118)35ml/L，牛血清白蛋白(IgG free级)1g/L，聚乙二醇600010g/L，吐温-20 5ml/L，氢氧化钠调PH7.20，防腐剂ProClin300 0.6ml/L。
取8μL Eiken校准品，分别与各组试剂1160μL及试剂280μL混合，使用日立7180生化分析仪于37℃反应时间10分钟，600nm波长下18-34读点定标，比较反应信号值ΔABS差异，各组定标数据如表1。
表1
由表1可知，对照组较低浓度的HB几乎没有反应，说明在免疫反应过程中，HB已经降解，对照组定标无法通过，不进行后续测试；而实验组情况良好，抗体用量差异导致的灵敏度差异。
进一步地，使用日本光电血球仪定值130g/L的全血样本，用Eiken样本缓冲液稀释成梯度1300μg/L、650μg/L、130μg/L三个梯度；取各梯度样本8μL，与各实验组试剂1160μL及试剂280μL混合，使用日立7180生化分析仪进行测定，结果如表2所示。
表2
由表2可知，实验组测试结果均非常理想，与理论浓度偏差均小于15％，证明试剂1和试剂2的配方能够使检测过程中HB保持稳定，结果准确。
实施例2验证样本稀释液对样本储存稳定性的影响
实验组4样本稀释液：4-羟乙基哌嗪乙磺酸11.9/L，氯化钠46.8g/L，海藻糖30g/L，蔗糖60g/L，月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠10g/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽1g/L，谷氨酸1g/L，精氨酸0.1g/L，半胱氨酸0.1g/L，乙二胺四乙酸二钠1g/L，牛血清白蛋白(IgGfree级)1g/L，氢氧化钠调PH6.90，防腐剂ProClin300 0.6ml/L；溶剂为水。
实验组5样本稀释液：4-羟乙基哌嗪乙磺酸23.8g/L，氯化钠58.4g/L，海藻糖30g/L，蔗糖80g/L，月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠10g/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽2g/L，谷氨酸2g/L，精氨酸0.2g/L，半胱氨酸0.2g/L，乙二胺四乙酸二钠2g/L，牛血清白蛋白(IgG free级)2g/L，氢氧化钠调7.20，防腐剂ProClin300 0.6ml/L；溶剂为水。
实验组6样本稀释液：4-羟乙基哌嗪乙磺酸15g/L，氯化钠50g/L，海藻糖30g/L，蔗糖70g/L，月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠10g/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽1.5g/L，谷氨酸1.5g/L，精氨酸0.15g/L，半胱氨酸0.15g/L，乙二胺四乙酸二钠1.5g/L，牛血清白蛋白(IgG free级)1.5g/L，氢氧化钠调PH 7.05，防腐剂ProClin300 0.6 ml/L；溶剂为水。
对照组2样本稀释液为0.9％生理盐水，溶剂为水。
对照组3样本稀释液为4-羟乙基哌嗪乙磺酸23.8g/L，氯化钠58.4g/L，葡萄糖40g/L，月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠10g/L，牛血清白蛋白(IgG free级)2g/L，氢氧化钠调7.20，防腐剂ProClin300 0.6ml/L；溶剂为水。
对照组4样本稀释液为Eiken样本稀释液。
使用以上各组样本稀释液稀释实施例1中的全血样本，制得理论浓度为130μg/L、650μg/L、1300μg/L的样本，各浓度样本分别在4℃下存放0-21天；使用实施例1中实验组2已经验证过的试剂1和试剂2，以及Eiken校准品在日立7180生化分析仪上进行检测，反应体系中样本8μL、试剂1160μL、试剂280μL，600nm波长，37℃反应时间10分钟，18-34读点，测试结果如表3所示。
表3
实验组样本稀释液能够使HB在4℃下维持长达21天的稳定状态，测定结果与理论值偏差小于10％，与Eiken几乎无差异，在临床使用中可以替代Eiken样本稀释液；对照组2生理盐水4℃0天结果已经大幅度低于理论值，说明刚稀释完，还未测试HB就已经大幅度降解，4℃1天几乎完全降解，测试结果接近于零。对照组3使用文献报道的利于HB稳定的葡萄糖替代本发明的蔗糖，海藻糖以及三(2-羧乙基)膦(TCEP)、谷胱甘肽、谷氨酸、精氨酸、半胱氨酸、乙二胺四乙酸二钠，但HB稳定效果与生理盐水组相比无显著差异；考虑为文献报道有误，葡萄糖对稳定HB并无太大作用；或由于葡萄糖不适合于与发明中其他成分互相配合，无法达到稳定HB的作用。
实施例3校准品/质控品背景缓冲液对储存稳定性的影响
实验组7校准品/质控品背景缓冲液：4-羟乙基哌嗪乙磺酸5.96g/L，氯化钠2.9g/L，海藻糖45g/L，麦芽糖10g/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽1g/L，谷氨酸1g/L，精氨酸0.1g/L，半胱氨酸0.1g/L，乙二胺四乙酸二钠1g/L，甘露醇2g/L，胎牛血清(无支原体衣原体级)50ml/L，氢氧化钠调PH6.90，防腐剂ProClin300 0.6ml/L，溶剂为水。
实验组8校准品/质控品背景缓冲液：4-羟乙基哌嗪乙磺酸11.9g/L，氯化钠5.8g/L，海藻糖45g/L，麦芽糖20g/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽2g/L，谷氨酸2g/L，精氨酸0.2g/L，半胱氨酸0.2g/L，乙二胺四乙酸二钠2g/L，甘露醇2g/L，胎牛血清(无支原体衣原体级)100ml/L，氢氧化钠调PH7.20，防腐剂ProClin300 0.6ml/L；溶剂为水。
实验组9校准品/质控品背景缓冲液：4-羟乙基哌嗪乙磺酸8g/L，氯化钠4g/L，海藻糖45g/L，麦芽糖15g/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽1.5g/L，谷氨酸1.5g/L，精氨酸0.15g/L，半胱氨酸0.15g/L，乙二胺四乙酸二钠1.5g/L，甘露醇2g/L，胎牛血清(无支原体衣原体级)75ml/L，氢氧化钠调PH 7.05，防腐剂ProClin300 0.6ml/L；溶剂为水。
对照组5校准品/质控品背景缓冲液(常规冻干背景缓冲液)：PH7.0 50mM/L磷酸盐缓冲液，山梨醇1g/L，牛血清白蛋白5g/L，防腐剂ProClin300 0.6ml/L。
按照上述配方配制好各组校准品/质控品背景缓冲液，使用实施例2中实验组5的样本稀释液先稀释实施例1中的全血样本至26000μg/L浓度的中间体，再使用各组校准品/质控品背景缓冲液将26000μg/L的中间体分别稀释至130μg/L、650μg/L、1300μg/L三个浓度。
按照如下工艺每组每浓度水平各冻干8瓶，作为校准品/质控品。冻干瓶为25ml无色玻璃瓶(底部外表面直径27mm)，每瓶分装1ml，并做好标记。
冻干机型号：上海田枫牌TF-FD-1普通型实验室冻干机。
1.预冻：分装好的冻干瓶置于冷冻盘，冷冻盘置于冷冻架中部，直接在冷阱中预冻，冷阱上覆盖保温隔热板，开始预冻。预冻时间3小时，预冻温度-48℃，气压110kpa。
2.真空干燥：预冻结束后，样品位置不变，取下隔热板，盖上有机玻璃罩，关闭通气阀，确认冻干机密封，打开真空泵开始真空干燥。注意，此步骤须快速完成，避免样品升温后熔化，并且不能关闭冷冻功能，必须保持低温冷冻。真空冷冻干燥时间20小时(若瓶子底面直径增大，冻干时间可适当减少)，温度-48℃，气压30pa。
3.干燥终点和通气：打开通气阀，关闭真空泵，待气压恢复，取下有机玻璃罩，取出冻干样品，迅速盖上盖子，防止吸潮。关闭并清洁冻干机。
被冻干试剂状态：被冻干试剂固体固定于瓶底，外形平整，并且结构疏松多孔。
注意：冻干过程蛋白均会有变性损失，通常冻干后浓度会比理论浓度偏低10-20％
冻干后各组校准品/质控品存储于4℃冰箱中，于0天，2周，4周，2个月，5个月，8个月分别取三个水平各一瓶，1ml纯化水复溶，使用实施例1实验组2的参数及试剂进行测试，比较冻干校准品/质控品HB稳定性；并额外取8个月的三个水平各一瓶，1ml纯化水复溶，同实施例2的方式观察复溶后校准品/质控品4℃稳定性。
实验结果见表4、5。
表4
各实验组校准品/质控品背景缓冲液冻干损失在可控范围内，存储8个月的测定结果和0天相比偏差在10％以内，说明实验组均能够有效保证HB稳定性，达到临床至少6个月效期的需求。
反观常规的校准品/质控品背景缓冲液，冻干后损失已经非常大，存储值4周时已经几乎降解完，无法进行后续复溶稳定性观察实验。
表5
复溶后的校准品/质控品在4℃条件下，随着时间推移，HB慢慢降解，实验组存放9天时与复溶时偏差小于10％，超过临床使用最低的7天的要求；综合冻干存储稳定性及复溶存储稳定性，实验组的校准品/质控品背景缓冲液能够有效维持HB稳定性，满足临床使用需求。
实施例4便隐血检测
使用本发明试剂盒与荣研试剂平行比对，以验证试剂盒整体用于粪便检测的可行性。
实验组10：
试剂1：4-羟乙基哌嗪乙磺酸23.8g/L，氯化钠70.1g/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽1g/L，谷氨酸1g/L，精氨酸0.1g/L，半胱氨酸0.1g/L，乙二胺四乙酸二钠1g/L，牛血清白蛋白(IgG free级)1g/L，聚乙二醇6000 10g/L，吐温-20 2ml/L，阻断剂HBR-X(Scantibody公司)2ml/L，氢氧化钠调PH6.90，防腐剂ProClin300 0.6ml/L；溶剂为水。
试剂2：三羟甲基甲胺基丙磺酸12.2g/L，海藻糖45g/L，300nm胶乳微球1.8g/L，兔抗人血红蛋白多克隆抗体(Dako公司，货号为A0118)30ml/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽1g/L，谷氨酸1g/L，精氨酸0.1g/L，半胱氨酸0.1g/L，乙二胺四乙酸二钠1g/L，牛血清白蛋白(IgG free级)1g/L，吐温-20 2ml/L，氢氧化钠调PH7.1，防腐剂ProClin3000.6ml/L；溶剂为水。
样本稀释液：4-羟乙基哌嗪乙磺酸11.9/L，氯化钠46.8g/L，海藻糖30g/L，蔗糖60g/L，月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠10g/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽1g/L，谷氨酸1g/L，精氨酸0.1g/L，半胱氨酸0.1g/L，乙二胺四乙酸二钠1g/L，牛血清白蛋白(IgG free级)1g/L，氢氧化钠调PH6.90，防腐剂ProClin300 0.6ml/L；溶剂为水。
校准品/质控品背景缓冲液：4-羟乙基哌嗪乙磺酸5.96g/L，氯化钠2.9g/L，海藻糖45g/L，麦芽糖10g/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽1g/L，谷氨酸1g/L，精氨酸0.1g/L，半胱氨酸0.1g/L，乙二胺四乙酸二钠1g/L，甘露醇2g/L，胎牛血清(无支原体衣原体级)50ml/L，氢氧化钠调PH6.90，防腐剂ProClin300 0.6ml/L；溶剂为水。
实验组11：
试剂1：4-羟乙基哌嗪乙磺酸47.6g/L，氯化钠87.6g/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽2g/L，谷氨酸2g/L，精氨酸0.2g/L，半胱氨酸0.2g/L，乙二胺四乙酸二钠2g/L，牛血清白蛋白(IgG free级)2g/L，聚乙二醇6000 10g/L，吐温-20 5ml/L，阻断剂015(菲鹏生物，货号HIER-E-015)3ml/L，氢氧化钠调PH7.20，防腐剂ProClin300 0.6ml/L；溶剂为水。
试剂2：三羟甲基甲胺基丙磺酸12.2g/L，海藻糖45g/L，300nm胶乳微球2.5g/L，兔抗人血红蛋白多克隆抗体(Dako公司，货号为A0118)40ml/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽2g/L，谷氨酸2g/L，精氨酸0.2g/L，半胱氨酸0.2g/L，乙二胺四乙酸二钠2g/L，牛血清白蛋白(IgG free级)2g/L，吐温-20 5ml/L，氢氧化钠调PH7.40，防腐剂ProClin3000.6ml/L；溶剂为水。
样本稀释液：4-羟乙基哌嗪乙磺酸23.8g/L，氯化钠58.4g/L，海藻糖30g/L，蔗糖80g/L，月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠10g/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽2g/L，谷氨酸2g/L，精氨酸0.2g/L，半胱氨酸0.2g/L，乙二胺四乙酸二钠2g/L，牛血清白蛋白(IgG free级)2g/L，氢氧化钠调7.20，防腐剂ProClin300 0.6ml/L，溶剂为水；溶剂为水。
校准品/质控品背景缓冲液：4-羟乙基哌嗪乙磺酸11.9g/L，氯化钠5.8g/L，海藻糖45g/L，麦芽糖20g/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽2g/L，谷氨酸2g/L，精氨酸0.2g/L，半胱氨酸0.2g/L，乙二胺四乙酸二钠2g/L，甘露醇2g/L，胎牛血清(无支原体衣原体级)100ml/L，氢氧化钠调PH7.20，防腐剂ProClin300 0.6ml/L，溶剂为水；溶剂为水。
实验组12：
试剂1：4-羟乙基哌嗪乙磺酸30g/L，氯化钠75g/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽1.5g/L，谷氨酸1.5g/L，精氨酸0.15g/L，半胱氨酸0.15g/L，乙二胺四乙酸二钠1.5g/L，牛血清白蛋白(IgG free级)1.5g/L，聚乙二醇6000 10g/L，吐温-20 3ml/L，阻断剂015(菲鹏生物，货号HIER-E-015)3ml/L，氢氧化钠调PH 7.05，防腐剂ProClin300 0.6ml/L；溶剂为水。
试剂2：三羟甲基甲胺基丙磺酸12.2g/L，海藻糖45g/L，300nm胶乳微球2.1g/L，兔抗人血红蛋白多克隆抗体(Dako公司，货号为A0118)35ml/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽1.5g/L，谷氨酸1.5g/L，精氨酸0.15g/L，半胱氨酸0.15g/L，乙二胺四乙酸二钠1.5g/L，牛血清白蛋白(IgG free级)1.5g/L，吐温-20 3ml/L，氢氧化钠调PH 7.25，防腐剂ProClin300 0.6ml/L；溶剂为水。
样本稀释液：4-羟乙基哌嗪乙磺酸15g/L，氯化钠50g/L，海藻糖30g/L，蔗糖70g/L，月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠10g/L，三(2-羧乙基)膦(TCEP)1g/L，谷胱甘肽1.5g/L，谷氨酸1.5g/L，精氨酸0.15g/L，半胱氨酸0.15g/L，乙二胺四乙酸二钠1.5g/L，牛血清白蛋白(IgGfree级)1.5g/L，氢氧化钠调PH7.05，防腐剂ProClin300 0.6 ml/L；溶剂为水。
Eiken全套稀释液，试剂，作为对照组6。
选择20位正常志愿者及10位便隐血病患，分别取其粪便样本，使用实验组10、11、12与对照组6试剂进行便隐血测定。
其中，实验组10-12分别按照实施例3中方法自制校准品定标，采用沃文特生物的粪便取样器取样10mg，使用10ml样本稀释液稀释后，再取8μL稀释样本，分别与各组试剂1160μL及试剂280μL混合，使用日立7180生化分析仪于37℃反应时间10分钟，600nm波长，测定样本中HB浓度。
对照组6采用其配套的取样器取样10mg，使用10ml样本稀释液稀释后，取8μL稀释样本，与试剂1160μL及试剂280μL混合，按照产品说明在OC-Sensor Io仪器上进行测定。
比较实验组10-12及对照组6测定结果(表6)，以对照组6为X轴，各实验组为Y轴，计算相关系数及线性趋势线公式，如图1-3所示。
表6
由上可知，实验组10、11、12与对照组6(Eiken)测定结果非常接近，相关性系数>0.99，系统相对偏差在15％以内，即公式x前系数在0.85-1.15之间；说明实验组在测定粪便样本时，达到了和Eiken相同的效果，可以替代使用。
综合实施例1、2、3、4，在本发明的特殊配方条件下，便隐血检测试剂盒样本稀释液，校准品、质控品，试剂1，试剂2，均能满足临床需求，达到替代Eiken的效果，且配制简单，可利于降低成本，降低医院检测费用。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的装置而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (9)

1.一种便隐血检测试剂盒，包括样品稀释液，校准品，质控品，试剂1和试剂2，所述试剂1为反应缓冲液，所述试剂2为血红蛋白抗体致敏乳胶溶液，其特征在于，所述样品稀释液、所述校准品的背景缓冲液、所述质控品的背景缓冲液、所述试剂1和/或所述试剂2中添加有：
三(2-羧乙基)膦1g/L；
谷胱甘肽1-2g/L；
谷氨酸1-2g/L；
精氨酸0.1-0.2g/L；
半胱氨酸0.1-0.2g/L；
乙二胺四乙酸二钠1-2g/L。
2.根据权利要求1所述的一种便隐血检测试剂盒，其特征在于，所述样品稀释液包括如下组分：
4-羟乙基哌嗪乙磺酸11.9-23.8g/L，氯化钠46.8-58.4g/L，海藻糖30g/L，蔗糖60-80g/L，月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠10g/L，三(2-羧乙基)膦1g/L，谷胱甘肽1-2g/L，谷氨酸1-2g/L，精氨酸0.1-0.2g/L，半胱氨酸0.1-0.2g/L，乙二胺四乙酸二钠1-2g/L，IgG free级牛血清白蛋白1-2g/L，氢氧化钠调PH 6.90-7.20。
3.根据权利要求2所述的一种便隐血检测试剂盒，其特征在于，所述样品稀释液还包括防腐剂ProClin300 0.6ml/L。
4.根据权利要求1所述的一种便隐血检测试剂盒，其特征在于，所述校准品的背景缓冲液或所述质控品的背景缓冲液包括如下组分：
4-羟乙基哌嗪乙磺酸5.96-11.9g/L，氯化钠2.9-5.8g/L，海藻糖45g/L，麦芽糖10-20g/L，三(2-羧乙基)膦1g/L，谷胱甘肽1-2g/L，谷氨酸1-2g/L，精氨0.1-0.2g/L，半胱氨酸0.1-0.2g/L，乙二胺四乙酸二钠1-2g/L，甘露醇2g/L，无支原体衣原体级胎牛血清50-100ml/L，氢氧化钠调PH 6.90-7.20。
5.根据权利要求4所述的一种便隐血检测试剂盒，其特征在于，所述校准品的背景缓冲液或所述质控品的背景缓冲液包括防腐剂ProClin300 0.6ml/L。
6.根据权利要求1所述的一种便隐血检测试剂盒，其特征在于，所述试剂1包括如下组分：
4-羟乙基哌嗪乙磺酸23.8-47.6g/L，氯化钠70.1-87.6g/L，三(2-羧乙基)膦1g/L，谷胱甘肽1-2g/L，谷氨酸1-2g/L，精氨酸0.1-0.2g/L，半胱氨酸0.1-0.2g/L，乙二胺四乙酸二钠1-2g/L，IgG free级牛血清白蛋白1-2g/L，聚乙二醇6000 10g/L，吐温-20 2-5ml/L，阻断剂2-3ml/L，氢氧化钠调PH6.90-7.20。
7.根据权利要求6所述的一种便隐血检测试剂盒，其特征在于，所述试剂1还包括防腐剂ProClin300 0.6ml/L；所述阻断剂为HBR-X 2ml/L，或阻断剂015 3ml/L。
8.根据权利要求1所述的一种便隐血检测试剂盒，其特征在于，所述试剂2包括如下组分：
三羟甲基甲胺基丙磺酸12.2g/L，海藻糖45g/L，300nm胶乳微球1.8-2.5g/L兔抗人血红蛋白多克隆抗体30-40ml/L，三(2-羧乙基)膦1g/L，谷胱甘肽1-2g/L，谷氨酸1-2g/L，精氨酸0.1-0.2g/L，半胱氨酸0.1-0.2g/L，乙二胺四乙酸二钠1-2g/L，IgG free级牛血清白蛋白1-2g/L，吐温-20 2-5ml/L，氢氧化钠调PH 7.10-7.40。
9.根据权利要求8所述的一种便隐血检测试剂盒，其特征在于，还包括防腐剂ProClin300 0.6ml/L。
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