JPS62209362A - 免疫凝集反応用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は間接担体凝集反応、凝集抑制反応等の抗原−抗
体凝集反応に用いる、抗原（または抗体）感作担体を含
む水性組成物、特に長期間にわたり安定的に使用できる
ように改良されたそのような組成物に間する。

検体中の抗原または抗体の測定を、対応する抗体または
抗原を感作した感作担体と検体との凝集反応によって行
う、いわゆる間接担体凝集反応はすでに確立されている
方法である。

この方法は、操作が簡便で、判定が容易、短時間で判定
可能、比較的高感度、再現性が高い、経費が少なくて済
む、特別な機器が不要でどこでも手軽に実施できる、な
どの種々の利点により広く一般に利用されている。

一般に、抗原または抗体を感作させる担体としては、哺
乳類または鳥類由来の固定または固定しない赤血球、あ
るいはラテックス、スチレン重合体、ゼラチン、エポキ
シ樹脂１．セルロース樹脂、活性炭束などの人口担体が
用いられる。赤血球の固定は、一般に、ホルムアルデヒ
ド、グルタルアルデヒド、ピルビンアルデヒド等のアル
デヒド類で行われ、その保存性を高めるためである。こ
れらの担体に抗原あるいは抗体を感作した感作担体の水
性浮遊液は、一応の保存安定性を有し、およそ２〜３ケ
月は使用可能である。しかしながら、感作担体を工業的
に製造するためには、１年以上の保存安定性が要求され
ている。

そこで、感作担体の水性浮遊液を凍結乾燥し。

更に保存安定性を延ばそうという試みがなされている。

しかしながら、水性浮遊液の状態で凍結乾燥を行うと、
凍結乾燥しないものと比べて凍結乾燥後は、外見の形状
の悪化（縮まった状態、カルメラ状ｅｔｃ）　、反応パ
ターンの悪化、保存安定性が良くない、再現性が悪い等
の問題が生ずる。これは明らかに凍結乾燥工程が感作担
体に悪影響を与えるためと思われる。

従って、凍結乾燥を行わなくて済むか、あるいは凍結乾
燥しても凍結乾燥前後で反応パターンに変化がなく、外
見の形状も良く、更に１年以上安定的に使用できるよう
な感作担体の浮遊液が要求されている。

本発明者らは、鋭意研究した結果、感作担体の水性浮遊
液即ち懸濁液に特定量の糖またはアルブミンあるいは両
者の組み合わせを存在させることによって、上記諸問題
を一挙に解決しうろことを見出し、本発明を完成するに
至った。

すなわち、本発明は、間接担体凝集反応、凝集抑制反応
等の抗原−抗体凝集反応に用いる感作担体の水性浮遊液
を製造する際に、感作担体の保存安定性を高める目的で
感作担体水性浮遊液中に特定の安定剤物質を特定量で添
加して改良された保存安定性の高い感作担体含有水性組
成物を提供することにある。

そのような特定量の特定の安定剤とは、（イ）約０．０
δ〜５Ｗ／Ｖ％のアルブミン（ロ）約２〜２０Ｗ／Ｖ％
のグルコース、ラクトースまたはサッカロース （ハ）約０．０５〜５Ｗ／Ｖｔ９ｇのアルブミンと約２
〜２０Ｗ／Ｖ％のグルコース、ラクトースまたはサッカ
ロースとの組み合わせ である。

（イ）のアルブミン単味で使用する場合、０．０５Ｗ／
Ｖ％以下では効果がなく、また５Ｗ／Ｖ％以上では効果
上差がない。好ましいのはＩＷ／Ｖ％以上で、外見、保
存安定性共に良好な結果を示す。

アルブミンは、ヒト、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ウサ
ギ、ニワトリ由来などのいずれを用いてもよいが、とり
わけ、ウシ又はヒトの血清アルブミンを使用するのが好
都合である。アルブミンを単味で用いる場合の最も好ま
しい濃度は、経済性も考慮にいれると、約１〜３Ｗ／Ｖ
％程度である。

（０）のグルコース、ラクトース、またはサッカロース
は、約２Ｗ／Ｖ％より少ないと保存安定性を高める効果
は弱く、約２０Ｗ／Ｖ％より多いと外見が非常に悪くな
る傾向があり、また粘度の増大あるいは溶解が困難とな
り、本発明の目的に適さない。単味で添加する場合の好
ましいグルコース濃度は約３〜１５Ｗ／Ｖ％、ラクトー
ス濃度は約３〜１５Ｗ／Ｖ％、サッカロース濃度は約３
〜２０Ｗ／Ｖ％であり、最も好ましい濃度は、グルコー
ス５Ｗ／Ｖ％程度、ラクトース５Ｗ／Ｖ％程度、サッカ
ロース５Ｗ／Ｖ％程度である。また、使用する糖のうち
で好ましいのはサッカロースとラクトースであり、最も
好ましいのはラクトース下ある。

（Ｊｌ）のアルブミンと糖を組み合わせて添加する場合
には、単味添加の場合と比べて、効果は更に増幅される
。この増幅効果は好ましい濃度の組み合わせにおいて特
に顕著である。組み合わせて添加する場合、特に重要な
ことは、単味使用に比べてアルブミン濃度をかなり下げ
ても、外見、保存安定性の向上に大きな効果がみられる
ことである。

アルブミンは高価な物質であるので、アルブミンの使用
が少なくてすむことは、経済的意義が極めて大である。

アルブミンと糖を組み合わせて用いる場合の好ましい条
件は、およそ、アルブミン０、０５〜２　Ｗ　／　Ｖ　
％＋グルーｘ−ス２〜１５Ｗ／Ｖ％、アルブミン０．０
５〜２Ｗ／Ｖ％＋ラクトース２〜１５Ｗ／Ｖ％、アルブ
ミン０．０δ〜２Ｗ／Ｖ％＋サッカロース２〜２０Ｗ／
Ｖ％程度であり、アルブミン０．０５〜ＩＷ／Ｖ％＋グ
／ｌ、コース５．０〜１０Ｗ／Ｖ％、アルブミン０．０
５〜ＩＷ／Ｖ％＋ラクトース５．０〜ＩＯＷ／Ｖ％、ア
ルブミン０゜０５〜ＩＷ／Ｖ％＋サッカロース５〜１０
Ｗ／ｖ％の組み合わせが最も好ましい。

感作担体を０．５〜ＩＯＷ／Ｖ％の割合に含有する水性
浮遊液に、上記の安定剤を添加しよく混和後、バイアル
に分注し、そのまま保存してもよＩＩ）が、さらに好ま
しいのは、このバイアルを、前もって−４０〜−４５℃
程度に冷却しておりまた凍結乾燥機のチャンバー内の棚
にいれ、２４時間から４８時間にわたって真空凍結乾燥
する。その後、真空状態または窒素ガスを充填したのち
封栓をして、凍結乾燥感作担体ができあがる。

凍結乾燥感作担体は、水または適当な希釈液を加えて復
元し、そのままの濃度で、あるいは必要に応じて希釈に
より濃度を調整して、間接担体凝集反応等に用いること
が出来る。

本発明による安定剤を用いて凍結乾燥した感作担体は、
４°Ｃ保存２年間以上にわたって使用可能である。

本発明による安定剤の添加は、感作担体だけではなく、
固定血球を担体として使用した場合には担体そのものの
保存安定性を高め得る。従って、本発明は担体として血
球を使用する場合に極めて有利に適用できる。また、感
作担体浮遊液に本発明による安定剤を添加したままの状
態、即ち凍結乾燥を行わず液体状態のままで保存した場
合においても、感作担体は少なくとも４℃、６ケ月は充
分安定的に使用可能であり、凍結乾燥による不都合を避
けなければならない用途には極めて有効である。

かくして、本発明によれば、優れた品質を長期間安定的
に保持することの出来る感作担体を工業的に生産するこ
とが可能となり、病院や臨床検査センター等の日常の臨
床検査業務用として安価に供給できる。

担体に感作する物質としては、何らかの方法で担体に感
作できるものであれば全ての抗原性物質、抗体を対象と
できる。

また感作担体を浮遊させる溶液は、感作担体に悪影響を
及ぼさないものであればいかなるものでもよく、一般的
には生理食塩液、ＰＢＳ　（リン酸緩衝食塩液）などが
使用できる。

以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明する。

実　　施　　例　　１ 〔羊赤血球の固定〕 羊の血液を１００ｍ１採血し、オルセパ液１００１と混
合し、ガーゼ濾過し、ヘマトクリットにより血球の濃度
を測定した。生理食塩液で５回洗浄し、その後“Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　１ｍ
ｍｕｎ。

ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ｖｏｌ、ＶＩ　　ｐｐ、３３〜３
４１９７７年（讐ＩＬＬＩＡＭｓ、ＣＨＡＳＥｔＪｉ　
　　Ａｃａｄｅｍｉｃ　　Ｐｒｅｓｓ　　Ｎｅｗ　　Ｙ
ｏｒｋ）　”　の　Ａｂｒａｍ　　Ｂ、５ｔａＶ　ｉ　
ｔｓｋｙの記載に従い、ホルマリン固定羊血球を調製し
た。

すなわち、洗浄遠心した赤血球の沈澱の８倍量の冷３Ｖ
／Ｖ％ホルムアルデヒド生理食塩液を加え４℃２４時間
ゆっくり攪はんする。さらにその２倍量の冷４０　Ｖ／
Ｖ％ホルムアルデヒド生理食塩液を加え２４時間攪はん
した。次いで、赤血球をガーゼで濾過し、生理食塩液で
８回洗浄し、ＰＢＳ（Ｍ／１５リン酸緩衝食塩液ｐＨ７
，２）で２．５Ｖ／Ｖ％’になるように懸濁し、窒化ソ
ーダ０、ＩＷ／Ｖ％を加え４℃にて保存した。

〔サイログロブリン感作担体の作製〕

上記で調製した固定羊赤血球をさらにＰＢＳで２回洗浄
し、ＰＢＳ中赤中球血球濃度、５Ｖ／Ｖ％になるように
懸濁した。“Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ　ａｎｄ　１ｍｓ＋ｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　
ｖｏｌ、ｒＶ　ｐｐ、３６”　（前出）を参考に、抗原
を固定羊赤血球に感作した。抗原としては生化学工業（
株）より購入したサイログロブリンを用いた。すなわち
、タンニン酸をＰＢＳで０．０ＯＩＷ／Ｖ％に希釈し、
６００ｍ１の２゜５Ｖ／Ｖ％羊固定赤血球と等量混合し
、３７℃４５分反応させた。その後、Ｐ　ＩＩｓで３回
洗浄し、６００ｍ１のＰＢＳに再懸濁した。このタンニ
ン酸処理赤血球６００１にサイログロブリンの５０μｇ
／ｍ１ＰＢｓ溶液６００１を加え、３７℃３０分感作し
た。ＰＢＳで３回洗浄したのち、０．１Ｗ／Ｖ％窒化ソ
ーダを含むＰＢ９１５００ｍｌで懸濁し間接担体凝集反
応用のサイログロブリン感作血球をＩ　Ｖ／Ｖ％濃度で
１５００ｍｌ得た。

〔凍結乾燥〕

上で得たサイログロブリン感作血球Ｉ　Ｖ／Ｖ％浮遊液
に、第１表の各安定剤を加えて、凍結乾燥用１０ｍ１バ
イアルに２．５１ずつ分注し、前もって−４５℃に冷却
しておいた真空凍結乾燥機のチャンバー内に入れ、−５
０℃で２時間、−５０〜＋１５℃で１０時間、＋２０℃
で１２時間の温度推移で凍結乾燥した。乾燥終了後バイ
アル内に窒素ガスを充填したのち封栓した。かくして得
られた凍結乾燥感作血球の性状を比較した結果を第１表
に示す。なお、凍乾後の外見は縮んだ形態の程度で判定
した。反応パターンは、各々の凍結乾燥感作血球に水２
．５　ｍｌを加えてＩ　Ｖ／Ｖ％感作血球浮遊液に復元
したものを用いて、抗サイログロブリン抗体陽性血清お
よび陰性血清を検体として、常法に従って間接担体（血
球）凝集反応を行ったときの陽性パターン、陰性パター
ンより判定した。

Ｘと判定したものは、陰性パターンの陽性化がみられた
ものである。反応パターンについては、その安定性を経
時的に試験した。その結果、第１表で有効性Ｏとしたサ
ンプルは、保存安定性が著しく向上したものである。

実　　施　　例　　２ 実施例１で作製したサイログロブリン感作血球Ｉ　Ｖ／
Ｖ％浮遊液に、第２表で示すような各々の安定剤を加え
て、以下実施例１と同様にして凍結乾燥し、作製した凍
結乾燥感作血球の性状を実施例１と同様にして比較した
結果を第２表に示す。

第１表は安定剤を単味で用いたときの効果を調べたもの
であり、第２表はアルブミンと糖を組み合わせて添加し
たときの効果を調べたものである。

実　　施　　例　　３ 実施例１、実施例２の表１、表２の中で、著しく有効で
あった安定剤サンプルＮｏ、３．４．１０．１６．２２
．３１，３３．３５．３７．３９．４１の１１サンプル
について、４℃で長期間保存した後の凍結乾燥感作血球
の力価を試験した結果が第３表である。いずれのサンプ
ルも４℃２年間安定であった。

実　　施　　例　　４ 実施例１．２で著しく有効であった保護剤１１サンプル
について、凍結乾燥を行わないで液状のままの製品につ
いて実施例３と同様な保存安定性を調べた。結果は第４
表のとおりであり、６ケ月〜１年の安定性を有していた
。

実　　施　　例　　５ サイログロブリン感作ラテツクスについて実験した。

ラテックスの感作方法は公知の方法（例えば、小田隆弘
　他ニラテックス凝集反応を用いたブドウ球菌エンテロ
トキシンの食品等からの検出、７１岡市衛試報、４．３
３−３７．１９７９）に従った。すなわち、ラテックス
（ポリスチレンラテックス５ＤＬ−５９，試用薬品工業
）をＰＢＳで０゜０２５Ｗ／Ｖ％に希釈し、サイログロ
ブリンＰＢＳ溶液２５μｇ／ｍｌを等量加えて室温で１
時間感作した。ＰＢＳで３回遠心洗浄したのち、ＰＢＳ
で浮遊させ、さらに窒化ソーダを０．１Ｗ／Ｖ％加え、
０．０２５Ｗ／Ｖ％惑作ラテックス浮遊液を作った。こ
れに第５表に示す安定剤を各々添加した浮遊液とし、そ
のまま液状で保存した場合、あるいは実施例１と同様に
して凍結乾燥し、乾燥状態で保存した場合について、そ
の保存安定性を経時的に調べた０反応パターンに間する
判定法は実施例１に準じ、力価は感作ラテツクス凝集反
応マイクロタイター法の常法に従った。結果は第５表の
通りであり、液状で６ケ月〜１年の安定性を有し、乾燥
状態で２年以上の安定性を有していた。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）抗原または抗体感作担体の水性懸濁液からなり、
   安定剤としての（イ）約０．０５〜５Ｗ／Ｖ％のアルブ
   ミン、（ロ）約２〜２０Ｗ／Ｖ％のグルコース、ラクト
   ースまたはサッカロース、または（ハ）約０．０５〜５
   Ｗ／Ｖ％のアルブミンと約２〜２０Ｗ／Ｖ％のグルコー
   ス、ラクトースまたはサッカロースを含むことを特徴と
   する免疫凝集反応用組成物。
2. （２）凍結乾燥してなる特許請求の範囲第（１）項記載
   の組成物。