JPH021554A - 杭ｄ血液型判定用試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はＲｈ式血液型のＲｈｏ　（Ｄ）因子の検出を行
うための抗り血液型判定用試薬に関する。

〔従来の技術］ Ｒｈ式血゛液型はしａｎｄｓｔｅｉｎｅｒ　とＷｉｅｎ
ｅｒにより発見されて以来、不適合輸血や不適合妊娠の
検査としてＡＢＯ式血液型と並び重要視されてきた。現
在Ｒｈ因子（抗原）は４０数種類が見つけられているが
、通常Ｒｈ（＋）または（−）の表現がＤ因子の陽性、
陰性を意味するように、日常検査においてこのＲｈｏ（
Ｄ）因子の検出が最も多く行われている。

Ｒｈｏ（Ｄ）因子の検出には抗Ｄｌｆｌｌ液型判定用試
薬を用いて行うことができる。ところがＲｈ式血液型の
検査ではＡＢＯ式血液型の検査のようにオモテ検査とウ
ラ検査という６′α認の手段がない。

従って、Ｒｈ式血液型の検査を行うにあたっては、操作
に留意すると共に、用いる試薬は特に力価や特異性につ
いて十分に保証されていることが必要である。

従来より抗り血液型判定用試薬としては、抗血清である
抗Ｄポリクローナル抗体を用いた抗り血液型判定用血清
がある。一方、最近では細胞融合の技術による抗Ｄモノ
クローナル抗体もある（例えば、特開昭５９−１３２８
８８号公報、特開昭６０−１３．６５９９号公報）。こ
れは単一の抗体を産生ずるクローンから作られるため、
特定の抗原とのみ反応する高い特異性を有し、それが永
続的に産生できるので、これを用いた抗り血液型判定用
試薬の製造供給には大きな期待がかけられている。

〔発明が解決しようとする課題］ しかし、公知の抗Ｄモノクローナル抗体は特異性には優
れているが、これをそのまま用いてＲｈｏ　（Ｄ）因子
の検出を肉眼で凝集として観察する場合、実用上刃価の
点に問題が残っていた。

通常、生理食塩水中の血球浮遊液（抗原）はマイナス側
に荷電しているため、血球間で互いに反発しあっている
。従って、血球間は一定の距離を保っていてそれ以上近
づ（ことはない。一方、抗体であるＩｇＧの抗原結合部
位の長さは血球間を架橋させるには至らず、ＩｇＧ抗体
と血球は反応していてもＩｇＧ抗体のみでは肉眼的に血
球を凝集させることはできない。このため抗Ｄポリクロ
ーナル抗体を用いた場合では、この凝集反応を補うのに
昔通アルブミンを添加している。その結果血球間の反発
エネルギーが押さえられ、Ｒｈｏ　（Ｄ）因子との凝集
反応が増強されて実用上刃価が上がり、肉眼で充分に凝
集を観察することができる。

しかし、抗Ｄモノクローナル抗体を用いた場合では、こ
のような蛋白質の添加だけではＲｈｏ　（Ｄ）因子との
凝集反応が十分には増強されず、肉眼での凝集の観察は
困難である。従って、抗Ｄモノクローナル抗体を用いた
抗り血液型判定用試薬については、未だ実用上満足でき
るものはない。

本発明の目的は、Ｒｈｏ（Ｄ）因子の検出にあたり抗Ｄ
モノクローナル抗体を用い、さらにその凝集反応を補う
ことにより実用上刃価の高い抗り血液型判定用試薬を確
立することにある。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、このような課題を解決し上述の目的を達
成するため鋭意研究を進めた結果、公知の抗Ｄモノクロ
ーナル抗体に蛋白質、および単糖類または二糖頬よりな
る平均分子量１００００〜２００００００の含＃ａ類高
分子化合物を添加したところ、Ｒｈ。

（Ｄ）因子に対する凝集反応が増強されて実用上刃価が
上がり、肉眼で十分に凝集を観察することができること
を見い出し、更に研究を重ね本発明を完成した。

すなわち、本発明は抗Ｄモノクローナル抗体に蛋白質、
および単ｔｉ類または二ＩＩ！類よりなる平均分子ｆｉ
ｔ　１００００〜２００００００の含＃Ｍ類高分子化合
物を添加してなることを特徴とするＲｈｏ　（Ｄ）因子
検出のための抗り血液型判定用試薬に関するものである
。

本発明の抗り血液型判定用試薬に用いる抗Ｄモノクロー
ナル抗体は、公知のものが使用できるが、そのうちでも
特異性が安定している点から、ヒトヒトハイプリドーマ
から産生されたヒト型抗Ｄモノクローナル抗体が好まし
く、またＩｇＧタイプが好ましい。さらには、抗Ｄモノ
クローナル抗体はＩｇＧタイプとＩｇＭタイプとの混合
物の態様で使用することが好まく、かくしてアルブミン
液抗体血清としての力価試験および食塩法抗体血清とし
ての力価試験の両者において厚生省の定める抗り血液型
判定基準に格別高度に適合することができる。ＩｇＧタ
イプとＩｇＭタイプとの混合割合は、本発明の目的を達
成し得る限り特に限定はないが、通常それぞれの力価と
してｌ：４がら４：１１好ましくはｌ：２から２１の割
合となるように配合される。

この抗Ｄモノクローナル抗体に添加する蛋白質、および
単糖類または二＄１！　１よりなる平均分子量１０００
０〜２００００００の含糖高分子化合物としては、本発
明の目的を満足するものはすべて用いることができる。

具体的に蛋白質の例としては、アルブミンがあげられる
。

単Ｉｌ！類よりなる平均分子量１００００〜２００００
００の含糖高分子化合物としてはグルコースよりなる含
糖高分子化合物が例示され、また二＃ＭＭよりなる平均
分子量１００００〜２００００００の含＄Ｊ！類高分子
化合物としてはサッカロースよりなる含糖高分子化合物
が例示される。このような含糖高分子化合物のより好ま
しい平均分子量は３００００〜５０００００である。更
にこのような含糖高分子化合物は、１種類または複数の
種類のものを混合しても良く、また平均分子量の異なる
ものが複数個であってもよい。

蛋白質、および含糖高分子化合物のそれぞれの添加量は
一概に限定されないが、蛋白質は通常５〜３０％、好ま
しくは１０〜２５％の濃度になるように添加する。また
、含糖高分子化合物は通常１〜３０％、好ましくは２〜
２０％の濃度になるように添、加する。

本発明の抗り血液型判定用試薬は上述のように構成され
ているが、その凝集反応を試験するには通常、凝集力試
験と凝集価試験がある。凝集力試験は定められた条件の
もとて陽性検体を用い、凝集開始までの時間（秒）およ
び凝集塊の大きさが１ｆｆ１１１！に達するまでの時間
（秒）を測定する。また、凝集価試験は定められた条件
のもとで２倍連続希釈し、陽性を示す最高希釈倍数から
凝集価を求める。

凝集力試験および凝集価試験の結果、本発明の抗り血液
型判定用試薬は抗り血液型判定用血清の製造基＄（Ｗ、
生省）に適合したが、抗Ｄモノクローナル抗体のみでは
、この基準に達することができなかった。なお、陽性お
よび陰性の検体との反応を調べる特異性試験では、本発
明の抗り血液型判定用試薬、並びに抗Ｄモノクローナル
抗体ともこの基準に適合した。

〔発明の作用・効果〕

このような試験の結果から、本発明の抗り血液型判定用
試薬は抗Ｄモノクローナル抗体のみに比べＲｈｏ（Ｄ）
因子に対する凝集反応が増強されて実用上刃価が上がり
、抗り血液型判定用血清の基準にも適合することがわか
った。

１９７５年にＫ１１ｈｌｅｒとＭｉｌｓｔｅｉｎらの研
究に始まるモノクローナル抗体の開発技術は急速に発展
し、臨床医学の分野への進出もめざましく、今ではポリ
クローナル抗体からモノクローナル抗体へと時代が移行
している。しかし、モノクローナル抗体を用いてもすべ
て良いことばかりであるとは限らない。

本発明の抗り血液型判定用試薬では蛋白質、および前記
含糖高分子化合物を添加することによってモノクローナ
ル抗体の弱点が補強された。即ち、Ｒｈｏ（Ｄ）因子に
対する凝集反応が増強されて実用上刃価が上がり、この
結果本発明の抗り血液型判定用試薬は、従来の抗Ｄポリ
クローナル抗体を用いた抗り血液型判定用血清にはみら
れない利点を生み出すことができた。

即ち、本発明の抗り血液型判定用試薬は、モノクローナ
ル抗体を用いることにより、ポリクローナル抗体に比べ
て高い特異性のものが永続的に産生できるため、本発明
の抗り血液型判定用試薬は優れた均質な特性のものとし
て、ロフト開蓋なく製造し供給することができるという
効果を生み出した。それゆえ本発明の抗り血液型判定用
試薬は臨床検査の分野に有用なものとして供することが
できる。

また、抗Ｄモノクローナル抗体をＩｇＧタイプとＩｇＭ
タイプとの混合物の態様で使用することによって、アル
ブミン液抗体血清としての力価試験および食塩法抗体血
清としての力価試験の両者において厚生省の定める抗り
血液型判定基準に格別高度に適合することができるとい
う効果を有する。

〔実施例〕

以下に本発明の実施例を示すが、本発明はこれら実施例
に限定されるものではない。

実施例１ 本発明の抗り血液型判定用試薬は次のようにして作製す
ることができる。まずヒト−ヒトハイブリドーマから産
生された抗Ｄモノクローナル抗体（ＩｇＧタイプ）のバ
ルクにウシアルブミンを２０％の濃度になるように加え
る。次にグルコースよりなる平均分子量４０，０００の
含糖高分子化合物を５％の濃度になるように加える。更
に防腐剤としてアジ化ナトリウムを０．１％の濃度にな
るように加えたあと、除菌し無菌的にバイアルに小分け
して作製する。

実施例２ 本発明の抗り血液型判定用試薬はまた次のようにして作
製することができる。すなわち、実施例１で用いたグル
コースよりなる平均分子量４０．０００の含糖高分子化
合物の代わりに、サッカロースよりなる平均分子４３４
０，０００の含糖高分子化合物を１０％の濃度になるよ
うに加えることに代える以外は実施例１と同様に処理し
て作製する。

実施例３ 本発明の抗り血液型判定用試薬は更に次のようにして作
製することができる。すなわち、実施例１で用いた抗Ｄ
モノクローナル抗体（Ｉ　ｇＧタイプ）の代わりに、抗
Ｄモノクローナル抗体（ＩｇＧタイプ）と抗Ｄモノクロ
ーナル抗体（ＩｇＭタイプ）の各バルクを力価として、
２：１の割合となるように混合することに代える以外は
実施例１と同様に処理して作製する。

試験例１ 本発明の抗り血液型判定用試薬の凝集力試験については
次のように実施した。まずＤ陽性血球の４０　ｖ　／　
ｖ％浮遊ン１をウシアルブミン溶液を用いて作製し、載
せガラス上でこの２滴に実施例１および２で作製した抗
り血液型判定用試薬の１滴を混合し、凝集が開始するま
での時間を測定した（測定１）。更にその凝集塊の大き
さが１Ｉｎ１１２に達した時間も測定した（測定２）、
このとき対照として抗り血液型判定用試薬の代わりに、
これを作製するのに用いた抗Ｄモノクローナル抗体、お
よび抗Ｄポリクローナル抗体からなる市販のＤａｄｅ社
製造品も同様に試験した。

その結果は表１のようになり、本発明の抗り血液型判定
用試薬は凝集力試験において満足できる成績を示した。

〔風下余白〕

試験例２ 本発明の抗り血液型判定用試薬の凝集価試験については
次のように実施した。まずＤ陽性血球の２　ｖ　／　ｖ
％浮遊液をウシアルブミン溶液を用いて作製する。次に
実施例１および２で作製した抗り血液型判定用試薬をＡ
Ｂ型血清で２倍連続希釈し、それぞれ０．１　ｄを試験
管にとり、これに上記の血球浮遊液０．１　ｄを加え混
和し静置する。これを遠心沈澱し凝集を観察する。この
凝集を示す最高希釈倍数から凝集価を求める。このとき
対照として実施例３でも用いた抗Ｄモノクローナル抗体
およびＤａｄｅ社製造品も同様に試験した。

その結果は表２のようになり、本発明の抗り血液型判定
用試薬は凝集価試験においても満足できる成績を示した
。

〔以下余白］ 表２

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）抗Ｄモノクローナル抗体に蛋白質、および単糖類
   または二糖類よりなる平均分子量１００００〜２０００
   ０００の含糖類高分子化合物を添加してなることを特徴
   とするＲｈｏ（Ｄ）因子検出のための抗Ｄ血液型判定用
   試薬。
2. （２）蛋白質がアルブミンである請求項（１）記載の試
   薬。
3. （３）単糖類がグルコースである請求項（１）記載の試
   薬。
4. （４）二糖類がサッカロースである請求項（１）記載の
   試薬。
5. （５）抗Ｄモノクローナル抗体がＩｇＧタイプである請
   求項（１）記載の試薬。
6. （６）抗Ｄモノクローナル抗体がＩｇＧタイプとＩｇＭ
   タイプとの混合物である請求項（１）記載の試薬。