CN109613265A

CN109613265A - 一种用胶乳免疫比浊法测定载脂蛋白c3的试剂盒

Info

Publication number: CN109613265A
Application number: CN201811642467.0A
Authority: CN
Inventors: 解苇生; 王飞; 刘安娜; 隗勇
Original assignee: Sino Bio Ltd
Current assignee: Sino Bio Ltd
Priority date: 2018-12-29
Filing date: 2018-12-29
Publication date: 2019-04-12

Abstract

本发明公开了一种测定载脂蛋白C3的试剂盒，试剂盒含有试剂R1、试剂R2和校准品，其中试剂R1组成为：缓冲液、电解质、表面活性剂、反应增强剂、稳定剂、防腐剂；试剂R2组成为：缓冲液、羊抗人载脂蛋白C3抗体胶乳颗粒、电解质、表面活性剂、稳定剂、防腐剂；校准品组成为：缓冲液、重组载脂蛋白C3、牛血清白蛋白、甘露糖醇、叠氮钠。本发明的载脂蛋白C3试剂盒为液体双试剂，无需复溶配制，开瓶可以直接使用。得到的胶乳颗粒稳定性较好，大大提升了检测结果的准确性；利用高碘酸钠将载脂蛋白C3抗体的Fc端的残糖基氧化为醛基，提高抗体的结合率和稳定性，有效保护抗体与抗原结合的活性区域，提高了检测试剂的灵敏度和稳定性。

Description

一种用胶乳免疫比浊法测定载脂蛋白C3的试剂盒

技术领域

本发明涉及医学免疫体外诊断试剂领域，具体涉及一种用胶乳免疫比浊法测定载脂蛋白 C3的试剂盒。

背景技术

载脂蛋白是个庞大的家族，包括A、B、C、E等家族，载脂蛋白是一类特殊的蛋白质，在脂质转运过程中，必须和载脂蛋白结合后，才能正常转运。

载脂蛋白C3是由79个氨基酸组成的糖蛋白，在C族中浓度最高，主要调节高三酰甘油血症中的三酰甘油脂蛋白（TRLs）的分解与代谢，主要在富含三酰甘油的脂蛋白（TRLs）中存在，包括极低密度脂蛋白和乳糜微粒，极少部分存在于高密度脂蛋白。载脂蛋白主要在肝脏合成，少部分在肠道合成，乳糜微粒及极低密度脂蛋白通过脂蛋白脂酶（LPL）在毛细血管及肝外组织水解成脂蛋白残余物，最终，肝脏通过受体介导机制重新将残余物摄取，而血浆载脂蛋白C3通过对LPL的辅因子的非竞争性的抑制作用而阻断TRLs水解，同时可抑制肝脏对TRLs残余物的摄取，从而使得TRLs及其残余物在血浆滞留时间延长，血浆三酰甘油水平升高。此外，载脂蛋白还可调节肠道脂质吸收，促进肝脏合成和分泌富含三酰甘油的极度密度脂蛋白，这些作用使载脂蛋白C3成为高三酰甘油症的重要因素。除了升高三酰甘油的水平外，载脂蛋白还导致内皮功能障碍并使其黏连性增加，并有致动脉粥样硬化的作用，LDL和HDL的上的载脂蛋白C3含量决定了动脉粥样硬化的程度。因此测定血清载脂蛋白 C3 含量对研究血脂代谢类疾病有重要意义。

载脂蛋白C3测定方法主要有酶联免疫法和免疫比浊法。酶联免疫法需要手工操作，耗时较长，步骤比较繁琐，价格不菲。免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法，当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物，使反应液出现浊度。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。免疫比浊法不需要昂贵的设备，可广泛的应用于全自动生化分析仪，测定大量标本，因此受到临床广泛推广。在普通的免疫比浊法（例如CN 103076454 A中所公开的试剂盒）中，样品中的抗原抗体交联能力有限，形成的免疫复合物的数量、大小也有限，检测的灵敏度会较低，而加大抗体抗原的用量又会增加检测成本。胶乳免疫比浊技术属于普通免疫比浊技术的衍生技术，其本质和普通免疫比浊技术一样，通过在反应体系中检测抗原抗体形成的免疫复合物来分析样品中的待测物，但其通过抗体偶联胶乳微球来放大反应信号。常用的制备胶乳-抗体蛋白复合物的方法有两种，物理吸附法和化学偶联法，物理吸附法会引起胶乳微球表面蛋白的部分解析及结构的变化，制备的胶乳-抗体蛋白复合物的特异性较低，容易受其它物质（比如类风湿因子和嗜异性抗体）的干扰，在生物诊断中的应用受到限制，而化学偶联法能最大限度控制吸附中出现的问题，但化学偶联法连接抗体的Fab片段和Fc具有随机性，进而影响试剂的灵敏度和稳定性。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种灵敏度高及稳定性好，生产成本低的用胶乳免疫比浊法测定载脂蛋白 C3的试剂盒。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种用胶乳免疫比浊法测定载脂蛋白 C3的试剂盒，该试剂盒含有试剂R1、试剂R2和校准品，其中试剂R1组成为：

缓冲液 10~200mmol/L

电解质 100 ~150mmol/L

表面活性剂 0.1 ~10 g/L

反应增强剂 50-60 g/L

稳定剂 0.1 ~10 g/L

防腐剂 0.1 ~10 g/L

试剂R2组成为：

缓冲液 10~200mmol/L

羊抗人载脂蛋白C3抗体胶乳颗粒 20~50ml/L

电解质 100 ~150mmol/L

表面活性剂 0.1 ~10 g/L

稳定剂 0.1 ~10 g/L

防腐剂 0.1 ~10 g/L

校准品组成为：

缓冲液 10~200mmol/L

重组载脂蛋白C3 10～15mg/dl

牛血清白蛋白 0.1～10g/L

山梨醇 0.1～10g/L

叠氮钠 0.1～10g/L

上述所述试剂 R2中的羊抗人载脂蛋白C3抗体胶乳颗粒为载脂蛋白C3抗体定向包被聚苯乙烯胶乳颗粒，制备方法采用以下步骤：

（1）聚苯乙烯氨基胶乳颗粒的激活：聚苯乙烯胶乳微球中加入乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺室温反应1小时；加入N-羟基琥珀酰亚胺，4℃反应过夜后离心，然后用缓冲液重复清洗沉淀，去上清，再用缓冲液重悬、震荡、超声处理后得到激活的聚苯乙烯胶乳颗粒；

（2）载脂蛋白C3抗体的氧化：用高碘酸钠将载脂蛋白C3抗体非结合活性区域Fc 端糖残基氧化成醛基；

（3）载脂蛋白C3抗体与聚苯乙烯胶乳颗粒的偶联：将载脂蛋白C3抗体加入到活化的聚苯乙烯微球溶液中，进行搅拌反应2小时，用葡萄糖溶液封闭后离心，并用缓冲液重复清洗沉淀后，再用缓冲液重悬、震荡、超声处理后，即得到偶联载脂蛋白C3抗体的聚苯乙烯胶乳微球。

优选地，所述试剂R2中的胶乳微球的平均粒径为50-200nm。

优选地，所述试剂R1的 pH 为5.0-10.0，试剂 R2 中的的pH为5.0-10.0，校准品的pH为6.5-10.0。

优选地，所述试剂R1 中反应增强剂为 PEG6000、PEG8000 和 PEG12000中的一种或多种。

优选地，所述试剂R1中的缓冲液为磷酸盐溶液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、HEPES缓冲液、CAPSO、MOPS一种或多种；所述试剂R2 中的缓冲液为磷酸盐溶液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、HEPES缓冲液、CAPSO、MOPS一种或多种；

所述试剂R1 中电解质为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁和碳酸钠中的一种或多种；试剂R2 中电解质为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁和碳酸钠中的一种或多种；

所述试剂R1中的稳定剂为丙三醇、丙二醇、蔗糖、海藻糖、山梨醇、BSA的一种或多种；所述试剂R2中的稳定剂为丙三醇、丙二醇、蔗糖、海藻糖、山梨醇、BSA的一种或多种。

优选地，所述试剂R1中的表面活性剂为曲拉通系列、吐温系列、brij-35、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚、聚氧乙烯辛基苯醚的一种或多种；所述试剂R2中的表面活性剂为曲拉通系列、吐温系列、brij-35、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚、聚氧乙烯辛基苯醚的一种或多种；

所述试剂R1中的防腐剂为山梨酸钾、苯甲酸钠、叠氮钠、亚硝酸钠和Proclin300一种或多种；所述试剂R2中的防腐剂为山梨酸钾、苯甲酸钠、叠氮钠、亚硝酸钠和Proclin300一种或多种。

优选地，所述试剂R2中的抗体为多克隆抗体或单克隆抗体。

优选地，所述试剂R1与试剂R2的体积比为 1~5:1，更优选体积比为3:1。

上述所述的试剂盒的应用，用于非疾病的诊断和治疗目的测定载脂蛋白C3的浓度。

有益效果

1）本发明的载脂蛋白C3试剂盒为液体双试剂，无需复溶配制，开瓶可以直接使用。

2）本发明试剂盒中的 R2 制备采用定向化学偶联法，得到的致敏胶乳颗粒稳定性较好，抗体不会从胶乳颗粒上脱落，而且由于化学偶联过程中，Fc 端发生了结构上的改变，因此不会受到类风湿性因子 (RF) 和嗜异性抗体的干扰，大大提升了检测结果的准确性。

3）本发明所述试剂盒利用高碘酸钠将载脂蛋白C2抗体的Fc端的残糖基氧化为醛基，醛基可以与表面带有氨基末端基团的载体反应，使抗体通过化学交联的方法偶联于胶乳微球表面，固定化发生在远离抗原决定簇的Fc端，提高抗体的结合率和稳定性，有效地保护抗体与抗原结合的活性区域，提高了检测试剂的灵敏度和稳定性。

附图说明

图1为对比例1与实施例的相关性曲线；

图2为对比例1和对比例2的相关性曲线；

图3为实施例1与对比例2、对比例3、对比例4的稳定性对比。

具体实施方式

下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

本发明试剂盒测定血清中载脂蛋白C3的测试条件为：方法：终点法；主/副波长：340nm/800nm；温度：37℃；校正类型：线性；校准方法：多点定标；反应方向：向上。

具体操作如表1所示。

表1载脂蛋白C2测定试剂操作步骤

计算结果：

样品浓度= × 标准浓度

样本要求：

1．新鲜血清作为样本。

2．4℃或-20℃可稳定10天。

实施例1

一种灵敏度高、稳定性好的测定载脂蛋白C3的试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。

其中试剂 R1 组成为：

磷酸盐缓冲液 160mmol/L

氯化钠 140mmol/L

曲拉通100 1 g/L

PEG6000 52g/L

海藻糖 1 g/L

叠氮钠 1 g/L

pH 7.5

试剂R2组成为：

磷酸盐缓冲液 150mmol/L

羊抗人载脂蛋白C3抗体胶乳颗粒 42ml/L

氯化钠 120mmol/L

曲拉通100 1 g/L

牛血清白蛋白 1 g/L

叠氮钠 1 g/L

pH 8.0

校准品组成为：

磷酸盐缓冲液 160mmol/L

重组载脂蛋白C3 13mg/dl

牛血清白蛋白 1g/L

山梨醇 1g/L

叠氮钠 1g/L

pH 7.5

上述载脂蛋白C3测定试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

a) 试剂R1的配制，量取配制体积等体积的纯化水，选取磷酸盐缓冲液，其终浓度为160mmol/L，按配制体积计算并称取适量的磷酸盐加入，调节pH至7.5，按配制体积计算并称取适量的氯化钠，PEG6000、海藻糖等，搅拌均匀即为试剂R1。

b) 试剂R2中胶乳微球的配制方法，取0.1ml （100mg/ml）聚苯乙烯胶乳微球，用0.9ml，0.2M pH5.0的MES溶液（2-吗啉乙磺酸缓冲液）洗涤三次，分散；加入0.05ml用0.2M，pH5.0的MES溶液新鲜配制的10mg/ml乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺EDAC溶液，室温反应1小时；加入0.5ml用0.2M，pH5.0的MES溶液新鲜配制的100mg/ml N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶液，4℃反应过夜后离心；用0.2M，pH5.0的MES溶液洗涤两次，0.1M，pH7.5的磷酸盐缓冲液洗涤一次，分散备用；取2.4ml羊多克隆抗体（12mg/ml）溶液，加入0.75ml用0.1M，pH7.5的磷酸盐缓冲液配制的10mg/ml的高碘酸钠溶液，室温混合15分钟；将氧化好的抗体加入到激活的胶乳微球溶液中，加入0.5ml 10%牛血清白蛋白溶液，4℃反应2小时；加入0.6ml 10%葡萄糖溶液，4℃反应过夜，10000r/min 离心 20min；用 0.1M，pH7.5Tris 溶液洗涤 3 次，加入0.1M，pH7.5 Tris 溶液 (含1％BSA，0.2％NaN₃的Tris缓冲液 ) 至胶乳终浓度为 0.2％。

c) 试剂R2的配制：量取配制体积等体积的纯化水，选取磷酸盐缓冲液，其终浓度为150mmol/L，按配制体积计算并称取适量的磷酸盐加入，调节pH至8.0，按配制体积计算并称取适量的羊抗人载脂蛋白C2抗体胶乳颗粒、氯化钠等，搅拌均匀即为试剂R2。

d)校准品的配制，量取配制体积等体积的纯化水，选取磷酸盐缓冲液，其终浓度为160mmol/L，按配制体积计算并称取适量的磷酸盐加入，调节pH至7.5，按配制体积计算并称取适量的重组载脂蛋白C3，终浓度为13mg/ml；按配制体积计算并称取适量的牛血清白蛋白、山梨醇等，搅拌均匀即为校准品。

实施例2

试剂 R1 组成为：

磷酸盐缓冲液 160mmol/L

氯化钠 100mmol/L

brij-35 1 g/L

PEG6000 50g/L

海藻糖 1 g/L

叠氮钠 1 g/L

pH 7.5

试剂R2组成为：

磷酸盐缓冲液 120mmol/L

羊抗人载脂蛋白C3抗体胶乳颗粒 40ml/L

氯化钠 120mmol/L

brij-35 1 g/L

丙二醇 1 g/L

叠氮钠 1 g/L

pH 8.0

校准品组成为：

磷酸盐缓冲液 160mmol/L

重组载脂蛋白C3 15mg/dl

牛血清白蛋白 1g/L

山梨醇 1g/L

叠氮钠 1g/L

pH 7.5

制备方法同实施例1。

实施例3

试剂 R1 组成为：

HEPES缓冲液 160mmol/L

氯化镁 145mmol/L

brij-35 1 g/L

PEG6000 50g/L

海藻糖 1 g/L

叠氮钠 1 g/L

pH 7.5

试剂R2组成为：

HEPES缓冲液 120mmol/L

羊抗人载脂蛋白C3抗体胶乳颗粒 35ml/L

氯化镁 130mmol/L

brij-35 1 g/L

丙二醇 1 g/L

叠氮钠 1 g/L

pH 8.0

校准品组成为：

HEPES缓冲液 160mmol/L

重组载脂蛋白C3 15mg/dl

牛血清白蛋白 1g/L

山梨醇 1g/L

叠氮钠 1g/L

pH 7.5

制备方法同实施例1。

对比例1

市售载脂蛋白C3(Apo C3)酶联免疫试剂盒

对比例2

专利CN 103076454 A所采用的的载脂蛋白C3测定试剂盒

试剂R1组成为：

磷酸盐缓冲液 120mM

氯化钠 5g/L

曲拉通100 5g/L

叠氮钠 4g/L

乙二醇聚氧乙烯醚 50g/L

牛血清白蛋白 5g/L

pH 7.0

试剂R2组成为：

羊抗人载脂蛋白C3抗体 15%(w/v)

磷酸盐缓冲液 100mM

牛血清白蛋白 5g/L

氯化钠 8.5g/L

叠氮钠 5g/L

pH 7.5

校准品组成为：

乙二胺四乙酸二钠 5g/L

叠氮钠 6g/L

牛血清白蛋白 5g/L

二丁基羟基甲苯 1.5g/L

载脂蛋白C3抗原相应量

按照需要的校准品浓度将相应量的载脂蛋白 C3 抗原添加到上述校准品溶液中，制备得到载脂蛋白 C3 校准品。

对比例3

与实施例 1 中载脂蛋白C3测定试剂盒的区别仅在于胶乳微球与抗体偶联方式为普通化学偶联法，而非定向化学偶联法，即抗体不经过高碘酸钠氧化，其它与实施例1相同。对比例4与实施例 1 中载脂蛋白C3测定试剂盒的区别仅在于试剂2中不含有稳定剂牛血清白蛋白，其它与实施例1相同。

性能验证

试验一将实施例1和对比例1、3进行相关性试验，试验方案为：实施例1和对比例1、3，同时检测了40个临床血清样本，检测结果如表2所示，对检测结果进行相关性分析，计算相关系数r；以比对对比例1检测结果作为靶值，分别计算40对数据的相对偏差（Bias％）。要求r不小于0.990，相对偏差不超过±10%。

表2相关性对比实验结果

通过表2、表3和图1、图2的检测数据可知，实施例1 检测试剂盒与对比例1检测试剂盒的检测结果相关性为 0.9983，相关性比较好，实施例1和对比例1的检测结果非常接近，准确度较好。对比例1检测试剂盒与对比例3检测试剂盒的检测结果相关性为0.9913，相关性较虽然大于0.9906，但相对来说相关性稍差，说明定向化学偶联法，提高的抗体与胶乳微球结合的稳定性，进而提升了检验结果的准确性。

表3实施例1、对比例3分别与对比例1的相关系数

试验二

用本发明载脂蛋白C3测定试剂盒测试已知浓度在8.1mg/dL 的样本，记录吸光度差值。分别利用实施例 1和对比例1、2、3的试剂进行检测。检测结果如表 5所示。

表4 分析灵敏度检测结果

通过检测数据可知，实施例 1检测试剂盒的吸光度差值均比对比例2、3 的高，说明在试剂中加入的定向化学偶联法的载脂蛋白C3胶乳颗粒后，提高抗体的结合率和稳定性，有效地保护抗体与抗原结合的活性区域，提高了检测灵敏度。

试验三

对实施例1和对比例2、3提供的载脂蛋白C3测定试剂盒进行抗干扰性试验，试验方案为：取靶值为靶值为7.98±1.2 mg/dL的朗道血脂质控品，分成4等份，然后将每等份再分成5等份，加入不同的干扰物质，使其在血清中的浓度达到表3的要求，然后分别采用实施例1和对比例2、3所得的试剂，测定质控品中载脂蛋白C3的含量，其中相对偏差(%)=(干扰样本的测定均值－对照样本的测定均值)/对照样本的测定均值×100%。

表5抗干扰性能试验结果比较

由表3可以看出，本发明试剂盒对检测结果没有明显干扰，而对比例试剂在上述浓度干扰物质存在时，受到明显干扰，说明本发明的试剂盒抗干扰能力优于对比例试剂，说明在试剂中加入的定向化学偶联法的载脂蛋白C3胶乳颗粒后，有效避免了其它物质的干扰，提高了试剂的抗干扰性能。

试验三

最后对实施例1和对比例2、3、4提供的载脂蛋白C3进行稳定性试验，试验方案为：对实施例1和对比例2、3、4提供的试剂，一起放入 37℃水浴箱中，每天检测靶值为7.98±1.2mg/dL的质控品，并监测质控品测定值的变化。

表6试剂热稳定性验证结果

由表6和图3可以看出，本发明提供的实施例1试剂在37℃水浴条件下10天内基本无变化，稳定性较好；而对比例2、3、4试剂在37℃水浴条件下10天内衰减明显，稳定性差，说明在试剂中加入的定向化学偶联法的载脂蛋白C3胶乳颗粒和牛血清白蛋白，对载脂蛋白C3试剂具有良好的协同稳定作用。

本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。

尽管对本发明已作出了详细的说明并引证了一些具体实施例，但是对本领域熟练技术人员来说，只要不离开本发明的精神和范围可作各种变化或修正是显然的。

Claims

1.一种用胶乳免疫比浊法测定载脂蛋白 C3的试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有试剂R1、试剂R2和校准品，其中试剂R1组成为：

缓冲液 10~200mmol/L

电解质 100 ~150mmol/L

表面活性剂 0.1 ~10 g/L

反应增强剂 50-60 g/L

稳定剂 0.1 ~10 g/L

防腐剂 0.1 ~10 g/L

试剂R2组成为：

缓冲液 10~200mmol/L

羊抗人载脂蛋白C3抗体胶乳颗粒 20~50ml/L

电解质 100 ~150mmol/L

表面活性剂 0.1 ~10 g/L

稳定剂 0.1 ~10 g/L

防腐剂 0.1 ~10 g/L

校准品组成为：

缓冲液 10~200mmol/L

重组载脂蛋白C3 10～15mg/dl

牛血清白蛋白 0.1～10g/L

山梨醇 0.1～10g/L

叠氮钠 0.1～10g/L 。

2.根据权利要求1所述的载脂蛋白 C3测定试剂盒，其特征在于，所述试剂 R2中的羊抗人载脂蛋白C3抗体胶乳颗粒为载脂蛋白C3抗体定向包被聚苯乙烯胶乳颗粒，制备方法采用以下步骤：

3.根据权利要求1所述的载脂蛋白 C3测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的胶乳微球的平均粒径为50-200nm。

4.根据权利要求1所述的载脂蛋白 C3测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的 pH 为5.0-10.0，试剂 R2 中的的pH为5.0-10.0，校准品的pH为6.5-10.0。

5.根据权利要求1所述的载脂蛋白 C3测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1 中反应增强剂为 PEG6000、PEG8000 和 PEG12000中的一种或多种。

6.根据权利要求1所述的载脂蛋白 C3测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的缓冲液为磷酸盐溶液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、HEPES缓冲液、CAPSO、MOPS一种或多种；所述试剂R2 中的缓冲液为磷酸盐溶液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、HEPES缓冲液、CAPSO、MOPS一种或多种；所述试剂R1 中电解质为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁和碳酸钠中的一种或多种；所述试剂R2 中电解质为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁和碳酸钠中的一种或多种；所述试剂R1中的稳定剂为丙三醇、丙二醇、蔗糖、海藻糖、山梨醇、BSA的一种或多种；所述试剂R2中的稳定剂为丙三醇、丙二醇、蔗糖、海藻糖、山梨醇、BSA的一种或多种。

7.根据权利要求1所述的载脂蛋白 C3测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的表面活性剂为曲拉通系列、吐温系列、brij-35、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚、聚氧乙烯辛基苯醚的一种或多种；所述试剂R2中的表面活性剂为曲拉通系列、吐温系列、brij-35、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚、聚氧乙烯辛基苯醚的一种或多种；所述试剂R1中的防腐剂为山梨酸钾、苯甲酸钠、叠氮钠、亚硝酸钠和Proclin300一种或多种；所述试剂R2中的防腐剂为山梨酸钾、苯甲酸钠、叠氮钠、亚硝酸钠和Proclin300一种或多种。

8.根据权利要求1所述的载脂蛋白 C3测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的抗体为多克隆抗体或单克隆抗体。

9.根据权利要求1所述的载脂蛋白 C3测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1与试剂R2的体积比为 1~5:1，优选体积比为3:1。

10.一种权利要求1-9之一所述的试剂盒的应用，用于非疾病的诊断和治疗目的测定载脂蛋白C3的浓度。