CN111965356B - 巯基还原组合物及荧光微球层析试纸和应用 - Google Patents

巯基还原组合物及荧光微球层析试纸和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111965356B
CN111965356B CN201911188040.2A CN201911188040A CN111965356B CN 111965356 B CN111965356 B CN 111965356B CN 201911188040 A CN201911188040 A CN 201911188040A CN 111965356 B CN111965356 B CN 111965356B
Authority
CN
China
Prior art keywords
test paper
fluorescent
sample
detection
pad
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201911188040.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111965356A (zh
Inventor
田洁
朱绍荣
张成林
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SHANGHAI RONGSHENG BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd
Original Assignee
SHANGHAI RONGSHENG BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SHANGHAI RONGSHENG BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd filed Critical SHANGHAI RONGSHENG BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority to CN201911188040.2A priority Critical patent/CN111965356B/zh
Publication of CN111965356A publication Critical patent/CN111965356A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111965356B publication Critical patent/CN111965356B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
    • G01N33/5761—Hepatitis B
    • G01N33/5764—Hepatitis B surface antigen
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

一种巯基还原组合物，包括三(2‑羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽，用量为0.006mg/cm2～1.2mg/cm2。本发明的巯基还原组合物，应用于荧光微球层析试纸的样本结合垫，可将IgM五聚体解离为单体，从而改善荧光微球层析中微球聚集和层析膜堵塞现象，进而显著提高荧光层析试剂的精密度及准确性。

Description

巯基还原组合物及荧光微球层析试纸和应用
技术领域
本发明涉及一种组合物，尤其涉及一种用于荧光检测试剂的组合物，以提高试剂对抗体检测的精密度及准确性。
背景技术
荧光免疫层析技术是基于抗原抗体特异性免疫反应的新型膜检测技术。该技术以固定有检测线(包被抗体或包被抗原)和质控线(抗抗体)的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，荧光标记抗体或抗原固定于连接垫，通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动。对于带有多个抗原决定簇的大分子抗原(蛋白、病毒和致病菌等)，通常采用“三明治”型双抗体夹心免疫层析方法，即待测物在流动相作用下先与荧光标记抗体结合，当到达检测线时再与包被抗体结合形成双抗体夹心的“三明治”型。对于只具有单一抗原表位的小分子抗原(农兽药、违禁药物等)，待测小分子抗原与荧光标记抗体结合后，由于空间位阻作用难以再与检测线上的包被抗体结合。所以，具有单一抗原表位的小分子待测物多采用竞争免疫层析法检测。
专利申请CN201910109523.2公开了一种甲功五项的荧光微球联合检测装置及其制备方法，将甲状腺素、三碘甲状腺原氨酸和促甲状腺激素抗体包被于硝酸纤维膜膜上，特异性强，能同时检测标本中T3抗体、T4抗体、TSH抗体、游离T3抗体、游离T4抗体，操作简便，实用性强。检测装置包括硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜的两端分别与吸收垫、免疫荧光交联抗体玻璃纤维膜搭接，免疫荧光交联抗体玻璃纤维膜另一端与样品垫搭接；硝酸纤维素膜上设置检测线T和质控线C；检测线分别标记甲状腺素抗体、三碘甲状腺原氨酸抗体、促甲状腺激素抗体，质控线C上喷点羊抗鼠IgG多克隆抗体。
专利申请CN201510542660.7公开了一种减少体外检测中生物样本假阳性的封闭液，能减少血清蛋白的非特异性吸附作用，减少血清的基底效应，从而减少体外检测中生物样本假阳性的发生，提高检测的准确度，而且，检测灵敏度高，检测线性宽，稳定性强。该封闭液包括试剂A和试剂B，试剂A为氨基酸溶液，试剂B为3-巯基丙酸溶液。该封闭液用于免疫荧光层析检测系统中的抗体微球的封闭。具体应用过程为：将荧光微球进行预处理，然后与抗体交联得到抗体微球，抗体微球再使用封闭液封闭，最后用缓冲液保存。本发明封闭液中两种试剂反应后得到的离子型氨基酸单层分布在免疫荧光层析检测系统中的抗体微球表面。
总抗体检测试剂盒可同时检测IgG和IgM，而五聚体形式的IgM容易引起荧光微球聚集交联，进而对荧光信号的采集造成影响，导致检测的精密度和准确性不理想。血清/血浆样本中的IgM抗体，占血清免疫球蛋白总量的5％～10％，血清浓度约为1mg/mL。IgM的五聚体形式由5个单体亚单位通过二硫键和J链连接起来，J链是连接五个亚单位的环链。每个单体分子的重链和轻链通过二硫键连接。IgM五聚体具有10个抗原结合片段(Fragment ofbinding，Fab)，可同时结合10个抗原，并更容易产生交联结构，进而导致荧光微球聚集在层析系统的层析膜上，影响信号采集。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种巯基还原组合物，用于荧光微球层析试纸，以利于提高检测的精密度和准确性。
本发明的另一个目的在于提供一种巯基还原组合物，用于荧光微球层析试纸，在涉及IgM抗体的荧光层析检测的精密度和准确性。
本发明的再一个目的在于提供一种巯基还原组合物，将其应用于荧光微球层析试纸的样本结合垫，改善荧光微球层析中微球聚集和层析膜堵塞现象。
本发明的又一个目的在于提供一种巯基还原组合物在制备用于检测乙肝表面抗体阳性血清试剂盒的应用，以利于提高检测的精密度和准确性。
本发明的第五一个目的在于提供一种荧光微球层析试纸，其样本结合垫吸附巯基还原组合物，以利于提高检测的精密度和准确性。
2-巯基乙醇等还原剂，能够裂解二硫键。IgM五聚体的J链及链间二硫键易裂解，而链内二硫键不易裂解。通过控制反应条件，巯基还原剂类物质可将IgM五聚体解离为单体，从而改善荧光微球层析中微球聚集和层析膜堵塞现象，进而提高荧光层析试剂的精密度及准确性。
一种用于荧光微球层析试纸的组合物，其包括三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP·HCl)和还原型谷胱甘肽(GSH)，用量为0.006mg/cm2～1.2mg/cm2。
另一种用于荧光微球层析试纸的组合物，其包括三(2-羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽，用量分别为0.006mg/cm2～0.6mg/cm2。
另一种用于荧光微球层析试纸的组合物，其包括三(2-羧乙基)膦盐酸盐、还原型谷胱甘肽，以及试纸条，试纸条包括样本结合垫，三(2-羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽吸附于样本结合垫上用量分别为0.006mg/cm2～0.6mg/cm2。
另一种用于荧光微球层析试纸的组合物，其为样本垫处理液，包括三(2-羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽，浓度为0.01w/w％～2w/w％。
另一种用于荧光微球层析试纸的组合物，其为样本垫处理液，包括三(2-羧乙基)膦盐酸盐，以及还原型谷胱甘肽，浓度分别为0.01w/w％～1w/w％。
另一种用于荧光微球层析试纸的组合物，其为样本垫处理液，包括三(2-羧乙基)膦盐酸盐，浓度为0.01w/w％～1w/w％，还原型谷胱甘肽，浓度为0.01w/w％～1w/w％，以及试纸条，试纸条包括样本结合垫，用样本垫处理液润湿样本结合垫，使得吸附于样本垫上的三(2-羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽的量分别为0.006mg/cm2～0.6mg/cm2。
本发明提供的组合物，还包括牛血清白蛋白、吐温-20、磷酸缓冲盐溶液和防腐剂Proclin-300等。
将本发明提供的组合物用于检测乙肝表面抗体阳性血清，经验证，在样本结合垫中添加0.006mg/cm2～1.2mg/cm2的本发明的用于荧光微球层析试纸的组合物，可将IgM五聚体解离为单体，从而改善荧光微球层析中微球聚集和层析膜堵塞现象，可降低至10％以下，进而显著提高荧光层析试剂的精密度及准确性。
一种荧光层析试纸，包括样本结合垫，三(2-羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽吸附于样本垫上，三(2-羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽用量分别为0.006mg/cm2～0.6mg/cm2。
具体实施方式
以下详细描述本发明的技术方案。本发明实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。
实施例1
分别将2-巯基乙醇(2-ME)、二硫苏糖醇(DTT)、TCEP·HCl和GSH按0.006mg/cm2～0.6mg/cm2的用量加入荧光检测试纸的样本垫中，并以荧光检测试纸的样本垫作为空白对照，用于检测低浓度样本，其浓度为20mIU的乙肝表面抗体阳性血清具体检测结果详见表1。
表1
表中，*表示p＜0.05。
从表1可见，2-ME、DTT、TCEP·HCl和GSH等四种还原剂单独加入样本垫并用于检测后，其对准确度和精密度的改善接近。当2-ME、DTT、TCEP·HCl和GSH等四种还原剂进行两两组合再加入样本垫后，所得结果中发现TCEP·HCl和GSH组合，能显著提高检测准确度和精密度。
实施例2
分别将2-ME、DTT、TCEP·HCl和GSH按0.006mg/cm2～0.6mg/cm2的用量加入荧光检测试纸的样本垫中，并以荧光检测试纸的样本垫作为空白对照，用于检测中浓度样本，浓度为50mIU的乙肝表面抗体阳性血清，具体检测结果详见表2。
表2
表中，*表示p＜0.05。
从表1可见，2-ME、DTT、TCEP·HCl和GSH等四种还原剂单独加入样本垫并用于检测后，其对准确度和精密度的改善接近。当2-巯基乙醇(2-ME)、二硫苏糖醇(DTT)、TCEP·HCl和GSH等四种还原剂进行两两组合再加入样本垫后，所得结果中发现TCEP·HCl和GSH组合，能显著提高检测准确度和精密度。
实施例3
分别将2-巯基乙醇(2-ME)、二硫苏糖醇(DTT)、TCEP·HCl和GSH按0.006mg/cm2～0.6mg/cm2的用量加入荧光检测试纸的样本垫中，并以荧光检测试纸的样本垫作为空白对照，用于检测高浓度样本，浓度为150mIU的乙肝表面抗体阳性血清，具体检测结果详见表3。
表3
表中，*表示p＜0.05。
从表1可见，2-ME、DTT、TCEP·HCl和GSH等四种还原剂单独加入样本垫并用于检测后，其对准确度和精密度的改善接近。当2-ME、DTT、TCEP·HCl和GSH等四种还原剂进行两两组合再加入样本垫后，所得结果中发现TCEP·HCl和GSH组合，能显著提高检测准确度和精密度。

Claims (1)

1.一种乙肝表面抗体检测荧光层析试纸，包括试纸条，其特征在于所述的试纸条包括样本结合垫，所述样本结合垫用样本垫处理液润湿，所述样本垫处理液包括三(2-羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽，用所述的样本垫处理液润湿所述的样本结合垫之后使得吸附于样本结合垫上的所述的三(2-羧乙基)膦盐酸盐和所述的还原型谷胱甘肽的量分别为0.006mg/cm2~0.6mg/cm2，所述的三(2-羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽可将待测样本中的IgM五聚体解离为单体。
CN201911188040.2A 2019-11-28 2019-11-28 巯基还原组合物及荧光微球层析试纸和应用 Active CN111965356B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911188040.2A CN111965356B (zh) 2019-11-28 2019-11-28 巯基还原组合物及荧光微球层析试纸和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911188040.2A CN111965356B (zh) 2019-11-28 2019-11-28 巯基还原组合物及荧光微球层析试纸和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111965356A CN111965356A (zh) 2020-11-20
CN111965356B true CN111965356B (zh) 2023-09-08

Family

ID=73358014

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911188040.2A Active CN111965356B (zh) 2019-11-28 2019-11-28 巯基还原组合物及荧光微球层析试纸和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111965356B (zh)

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5075221A (en) * 1988-10-07 1991-12-24 Eastman Kodak Company Stabilized extraction composition containing a sulfhydryl-containing reducing agent and its use in chlamydial and gonococcal determinations
JP2006112834A (ja) * 2004-10-12 2006-04-27 Abbott Japan Co Ltd 安定性の向上した還元試薬を用いた免疫学的測定法
WO2006081701A1 (fr) * 2005-02-02 2006-08-10 Peng Cui Kit de detection de l'anticorps du vhc et procede de preparation de celui-ci
CN101511858A (zh) * 2005-07-25 2009-08-19 特鲁比昂药品公司 用于蛋白质解聚的组合物和方法
CN101750494A (zh) * 2009-10-16 2010-06-23 北京科美东雅生物技术有限公司 一种检测乙肝表面抗体的磁性免疫层析试纸条及其制备方法
CN106093402A (zh) * 2016-05-31 2016-11-09 湖南康润药业有限公司 丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂盒
JP2018072045A (ja) * 2016-10-25 2018-05-10 福井県 人血検査方法及び人血検査用キット
CN110133269A (zh) * 2019-05-22 2019-08-16 湖南康润药业股份有限公司 一种丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂的制备方法及检测卡
CN110441515A (zh) * 2019-07-16 2019-11-12 柏荣诊断产品（上海）有限公司 一种便隐血检测试剂盒

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW201138808A (en) * 2010-05-03 2011-11-16 Bristol Myers Squibb Co Serum albumin binding molecules
KR102537099B1 (ko) * 2014-12-22 2023-05-25 유씨비 바이오파마 에스알엘 단백질 제조 방법

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5075221A (en) * 1988-10-07 1991-12-24 Eastman Kodak Company Stabilized extraction composition containing a sulfhydryl-containing reducing agent and its use in chlamydial and gonococcal determinations
JP2006112834A (ja) * 2004-10-12 2006-04-27 Abbott Japan Co Ltd 安定性の向上した還元試薬を用いた免疫学的測定法
WO2006081701A1 (fr) * 2005-02-02 2006-08-10 Peng Cui Kit de detection de l'anticorps du vhc et procede de preparation de celui-ci
CN101511858A (zh) * 2005-07-25 2009-08-19 特鲁比昂药品公司 用于蛋白质解聚的组合物和方法
CN101750494A (zh) * 2009-10-16 2010-06-23 北京科美东雅生物技术有限公司 一种检测乙肝表面抗体的磁性免疫层析试纸条及其制备方法
CN106093402A (zh) * 2016-05-31 2016-11-09 湖南康润药业有限公司 丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂盒
JP2018072045A (ja) * 2016-10-25 2018-05-10 福井県 人血検査方法及び人血検査用キット
CN110133269A (zh) * 2019-05-22 2019-08-16 湖南康润药业股份有限公司 一种丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂的制备方法及检测卡
CN110441515A (zh) * 2019-07-16 2019-11-12 柏荣诊断产品（上海）有限公司 一种便隐血检测试剂盒

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Assembly of IgM-role of disulfide bonding and noncovalent interactions;Wiersma E. J.等;JOURNAL OF IMMUNOLOGY;第154卷(第10期);第5265-5272页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111965356A (zh) 2020-11-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7330945B2 (ja) 分析物検出の改善のためのアッセイ法
EP0303110B1 (en) Immunodiagnostic device and method
US4624930A (en) Immunochemical process
WO2012018057A1 (ja) イムノクロマトグラフィー用試薬組成物およびそれを用いた測定方法
US20090203155A1 (en) Labeled particle obtained by immobilizing a fragmented antibody to a labeling substance
JP7451431B2 (ja) 側方流動アッセイのシグナルを増幅させるシステム、装置および方法
CN105785041A (zh) 用于定量检测钙卫蛋白的试纸条及其制备方法和钙卫蛋白浓度的测定方法
JP2677753B2 (ja) 凝集イムノアッセイ法
CN103940990B (zh) 一种灵敏度增强型金标免疫层析试纸条及其制备方法
CN113024669B (zh) 含氨基或羧基基团物质标记的rbp抗体、人rbp免疫层析检测试剂盒及其制备方法
CN111965356B (zh) 巯基还原组合物及荧光微球层析试纸和应用
WO2010101213A1 (ja) 検査試薬及びそれを用いた被検試料中の被測定物の測定方法
US20240027442A1 (en) Test reagent with improved specificity by suppressing false negatives
JP2007333426A (ja) サンドイッチイムノアッセイ法及びその検出装置
CN113970635A (zh) 一种免疫层析试纸及其制备方法和应用
EP4075132A1 (en) Immunoassay method and immunoassay device
JP2672151B2 (ja) 磁性体を利用した酵素免疫測定法
JP6312555B2 (ja) イムノクロマト法における定量範囲を拡大するための方法
JP2007033378A (ja) 標識試薬の感度調整方法
JP6595215B2 (ja) 免疫クロマト分析装置およびその製造方法並びに免疫クロマト分析方法
Jackson et al. Principles and applications of immunoaffinity chromatography
CN111965349A (zh) 用于荧光免疫层析检测的组合物及在hiv检测中的应用
JP2501960B2 (ja) リガンドを免疫学的に測定するための方法及び試薬
US20240011978A1 (en) Test kit with improved specificity by suppressing false positives
EP0139526A2 (en) An insolubilized stable specific binding protein

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information

Address after: 201108 No. 888 Xiangyang Road, Shanghai, Minhang District

Applicant after: Shanghai Rongsheng Biological Pharmaceutical Co.,Ltd.

Address before: 201108 No. 888 Xiangyang Road, Shanghai, Minhang District

Applicant before: SHANGHAI RONGSHENG BIOTECH CO.,LTD.

CB02 Change of applicant information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant