CN110412002A - 一种鉴别人源细胞和小鼠源细胞的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种快速鉴别人源细胞和小鼠源细胞的方法，包括步骤：提供人源性/小鼠源性鉴定样本，用DAPI溶液孵育，再清洗样本，然后在荧光显微镜下进行观察鉴别：细胞核存在DAPI聚集斑的是小鼠来源样本，细胞核无DAPI聚集斑的样本来源于人。本发明在试剂和材料方面的损耗成本低廉，在荧光显微镜下即可进行观察实验，成本大概在20元/样，普通实验室均可以轻易实现；本发明鉴别操作流程简单，一般实验者均可轻易掌握操作；实验结果可以在半个小时内即可得出，极大减少了时间成本；该方法弥补了现有技术的缺陷，可以在普通实验室进行人源样本和小鼠源样本的快速分辨，有效增强实验室样本鉴别频率，避免交叉污染、减少不必要的损失。

Description

一种鉴别人源细胞和小鼠源细胞的方法
技术领域
本发明涉及细胞鉴别技术领域，尤其是一种快速鉴别人源细胞和小鼠源细胞的方法。
背景技术
生物医学研究实验室会使用大量的人源性和小鼠源性的实验材料，包括组织材料、原代细胞和细胞株等，对实验材料的鉴定是非常有必要的。据统计约30％细胞系被交叉污染或错误辨识，使用这样细胞会导致研究结论错误、结果无法重复、临床细胞治疗失败，这会浪费大量时间、精力和金钱。细胞短串联重复序列(short tandem repeat,STR)鉴定法是现有细胞鉴定技术的代表。
STR基因位点由长度为3～7个碱基对的短串连重复序列组成，被称为“细胞的DNA指纹”，可作为细胞高度多态性标记。细胞短串联重复序列鉴定法主要步骤包括：待鉴定细胞的STR基因信息在通过多重PCR(聚合酶链式反应)扩增后，再经过毛细管电泳分离，然后用荧光检测来识别；随后通过一定的计算方法得到STR分型结果，该结果与专业的细胞STR数据库比对从而推断出样品所属的细胞系。STR鉴定法需要用到高档仪器，一般实验室难以实施；鉴定过程复杂，要用到多种仪器、试剂和耗材，费用昂贵(鉴定价格大概是2000元/样)；样品鉴定，最快也需要在一天左右才可以得到结果，耗时比较长。
发明内容
基于上述问题，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种可快速鉴别人源细胞和小鼠源细胞的方法，该方法相比STR鉴定法成本更低，耗时更短。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种快速鉴别人源细胞和小鼠源细胞的方法，包括步骤：提供人源性/小鼠源性鉴定样本，用DAPI溶液孵育，再清洗样本，然后在荧光显微镜下进行观察鉴别：细胞核存在DAPI聚集斑的是小鼠来源样本，细胞核无DAPI聚集斑的样本来源于人。
作为上述方案的进一步优化，所述DAPI溶液浓度为10微克/毫升。
作为上述方案的进一步优化，所述DAPI溶液孵育时间为5～10min。
作为上述方案的进一步优化，所述清洗样本的溶液为PBS溶液。
作为上述方案的进一步优化，所述清洗样本的时间为5～10min。
综上所述，本发明的有益效果为：
1)在面临一种细胞可能是人或者小鼠来源而无法判断时，可借助本发明的方法做出快速鉴定；本发明在试剂和材料方面的损耗成本低廉(只需提供待检测样本、DNA荧光染料和PBS溶液)，在荧光显微镜下即可进行观察实验，成本大概在20元/样，普通实验室均可以轻易实现；
2)本发明鉴别操作流程简单，一般实验者均可轻易掌握操作；实验结果可以在半个小时内即可得出，极大减少了时间成本；该方法弥补了现有技术的缺陷，可以在普通实验室进行人源样本和小鼠源样本的快速分辨，有效增强实验室样本鉴别频率，避免交叉污染、减少不必要的损失。另外，也可以评估待鉴定样本STR技术鉴定必要性。
附图说明
图1为小鼠源乳腺肿瘤细胞株4T1的荧光成像图和细胞核结构模型，其中，实线矩形框是虚线矩形框的放大图；
图2为人源乳腺肿瘤细胞株MCF-7的荧光成像图和细胞核结构模型，其中，实线矩形框是虚线矩形框的放大图；
图3为本发明的技术思路。
具体实施方式
在面临一种细胞可能是人来源或者小鼠来源，而无法分辨的情况下，采用本发明的方法通过荧光观察的方法快速判别，在实验室可以轻易实现；拿到样本之后，只需对样本染料孵育和染料清洗即可上样观察，实验成本低廉(成本约20元/样)；实验操作简单易学，结果具有可视化，在半个小时内即可完成鉴定。本发明的低成本、快速鉴别人源细胞和小鼠源细胞的方法，可以弥补STR技术在人/小鼠样本交叉污染方面鉴定的不足，并且在任何实验室均可轻易实施。
在一些实施例中，本发明提出一种快速鉴别人源细胞和小鼠源细胞的方法，包括如下步骤：
实验者只需将待鉴定样本(人源性/小鼠源性)用10微克/毫升DAPI溶液孵育5-10min，再用PBS溶液清洗样本5-10min，即可在荧光显微镜下进行观察鉴别：细胞核存在明显的DAPI聚集斑的是小鼠来源样本，细胞核无DAPI聚集斑的样本来源于人。
需要说明的是，要建立本发明的方法需要经得住大样本量的考验，全面、丰富的样本来源是实现的基础；本发明依托中山大学孙逸仙纪念医院医学研究中心平台的支撑，借助普通荧光显微镜和激光共聚焦显微镜，发明人观察了近六十种的标本样品(包括二十多种人源和小鼠源组织切片、近十种原代提取细胞和三十多种细胞株)，才得出人源细胞核和小鼠源细胞核荧光染色结构存在差异(即细胞核存在明显的DAPI聚集斑的是小鼠来源样本，细胞核无DAPI聚集斑的样本来源于人)的结论，而这个恰恰是本发明建立的关键点和难点。
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。如无特别说明，本发明中的实验方法均为常规方法。
实施例1
本发明的鉴别人源细胞和小鼠源细胞的方法的一种实施例，该方法在细胞标记荧光染料后，基于荧光观察来实现区分，具体包括步骤如下：
样品细胞来源为人和小鼠，可以是组织切片、细胞株和原代细胞等样品形式；荧光染料包括DAPI(中文名：4',6-二脒基-2-苯基吲哚，英文名：4',6-diamidino-2-phenylindole)或者其他DNA标记荧光材料(如：hoechst染料等)；荧光染料稀释为10微克/毫升，孵育细胞样品约5min～10min之后，用磷酸缓冲盐溶液(英文名：phosphate buffersaline，简称PBS溶液)清洗5～10分钟，然后在荧光显微镜下观察分辨。
结果如图1～3所示，图1是小鼠源乳腺肿瘤细胞株4T1的荧光成像图和细胞核结构模型；图2是人源乳腺肿瘤细胞株MCF-7的荧光成像图和细胞核结构模型；图3是本发明的技术思路。发明人通过长期的实验验证，证实在DAPI等DNA染料处理下，小鼠细胞核和人细胞核有着明显的结构差异。具体差异为：小鼠乳腺癌细胞的细胞核在DAPI染色标记之后，存在明显的DAPI聚集斑(参见图1)，而在人乳腺癌细胞的细胞核并没有DAPI聚集斑(参见图2)。依据以上描述细胞核的结构的差异特点，结合光学显微镜技术对细胞种源进行快速鉴别(参见图3)，实验结果可以在半个小时内即可得出。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (5)

1.一种快速鉴别人源细胞和小鼠源细胞的方法，包括步骤：提供人源性/小鼠源性鉴定样本，用DAPI溶液孵育，再清洗样本，然后在荧光显微镜下进行观察鉴别：细胞核存在DAPI聚集斑的是小鼠来源样本，细胞核无DAPI聚集斑的样本来源于人。
2.权利要求1的方法，其中所述DAPI溶液浓度为10微克/毫升。
3.权利要求1的方法，其中所述DAPI溶液孵育时间为5～10min。
4.权利要求1的方法，其中所述清洗样本的溶液为PBS溶液。
5.权利要求4的方法，其中所述清洗样本的时间为5～10min。
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