CN110403943B

CN110403943B - Cc-115在制备抗真菌药物中的应用及其药物组合物

Info

Publication number: CN110403943B
Application number: CN201910764962.7A
Authority: CN
Inventors: 刘伟; 温芝潼; 陆琪; 王胜正
Original assignee: Shaanxi University of Science and Technology
Current assignee: Shaanxi University of Science and Technology
Priority date: 2019-08-19
Filing date: 2019-08-19
Publication date: 2022-05-17
Anticipated expiration: 2039-08-19
Also published as: CN110403943A

Abstract

本发明涉及医药技术领域，提供CC‑115在制备抗真菌药物中的应用及其药物组合物。体外实验表明，化合物CC‑115对真菌有较好的抑制效果，并能使抗真菌药物氟康唑恢复对耐药真菌的作用，因此化合物CC‑115可用作抗真菌药物及抗真菌药物的增效剂。本发明为化合物CC‑115开辟了新的用途，将其用于抗真菌药物及抗真菌药物的增效剂，不仅为真菌治疗提供了新的先导化合物或候选药物，而且提高了现有药物的抗真菌作用，在临床真菌耐药性日趋普遍、耐药程度日趋严重的情况下，使抗真菌药物恢复对耐药真菌的作用，降低了抗真菌药物的用药剂量，从而为患者节省了医疗费用，减少药物的毒副作用。

Description

CC-115在制备抗真菌药物中的应用及其药物组合物

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体为CC-115在制备抗真菌药物中的应用及其药物组合物。

背景技术

化合物1-乙基-7-[2-甲基-6-(4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-3-基]-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮(常用名为CC-115)是一种有效的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)和DNA依赖蛋白激酶(DNA dependent proteinkinase，DNA-PK)的双重抑制剂。现代药理研究显示，该化合物具有治疗或预防癌症、炎症性疾病、免疫性疾病、神经退行性疾病、糖尿病、肥胖症、神经系统疾病、年龄相关疾病或心血管疾病等作用。国内外未见CC-115化合物抗真菌作用的报道，也未见与抗真菌唑类药物联合使用治疗真菌感染的报道。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种CC-115在制备抗真菌药物中的应用及其药物组合物。

本发明是通过以下技术方案来实现：

CC-115在制备抗真菌药物中的应用。

优选的，所述真菌为敏感真菌菌株或耐药真菌菌株。

进一步的，所述敏感真菌菌株为对氟康唑敏感的敏感真菌菌株，所述耐药真菌菌株为对氟康唑耐受的耐药真菌菌株。

优选的，所述真菌为敏感白念珠菌(SC5314)、近平滑念珠菌(22019)、新生隐球菌(32609)、耐药白念珠菌(103)、热带念珠菌或光滑念珠菌(ATCC2281)。

优选的，CC-115的MIC值为32或64μg/mL。

一种抗真菌药物，由CC-115和药物辅料制成。

一种抗真菌药物组合物，包括CC-115和氟康唑。

优选的，所述真菌为耐药白念珠菌，氟康唑的MIC值为0.5μg/mL，CC-115的MIC值为1μg/mL。

优选的，所述真菌为近平滑念珠菌，氟康唑的MIC值1μg/mL，CC-115的MIC值为1μg/mL。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

本发明通过体外抗菌实验表明，CC-115单独使用对敏感白念珠菌(SC5314)、近平滑念珠菌(22019)、新生隐球菌(32609)、耐药白念珠菌(103)、热带念珠菌和光滑念珠菌(ATCC2281)都具有一定的抗菌活性。当抗真菌药物氟康唑和CC-115化合物合用时，能明显降低抗真菌药物的用药剂量，并增强对耐药真菌的抑制作用，使抗真菌药物恢复对耐药真菌的作用。因此可将CC-115化合物用作抗真菌药物及抗真菌药物的增效剂。本发明为该CC-115化合物开辟了新的用途，将其用于制备抗真菌药物及抗真菌药物的增效剂，不仅为真菌治疗提供了新的候选药物，而且提高了现有药物的抗真菌作用，在临床真菌耐药性日趋普遍、耐药程度日趋严重的情况下，使抗真菌药物恢复对耐药真菌的作用，降低了抗真菌药物的用药剂量，从而为患者节省了医疗费用，减少药物的毒副作用，为发现具有全新结构类型的抗真菌药物奠定基础。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。

本发明为发现具有全新结构类型的抗真菌药物奠定基础，其中：所述化合物为1-乙基-7-[2-甲基-6-(4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-3-基]-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮，常用名为CC-115，CAS号为1228013-15-7。

本发明中，所述真菌包括敏感白念珠菌(SC5314)，近平滑念珠菌(22019)，新生隐球菌(32609)，耐药白念珠菌(103)，热带念珠菌，光滑念珠菌(ATCC2281)。

本发明中，所述耐药菌株是对氟康唑耐受，敏感菌株是对氟康唑敏感。

实施例1化合物CC-115单独使用对不同真菌的作用

材料和方法

1.试药：

化合物CC-115(CAS:1228013-15-7)：购于上海丹荃医药科技有限公司，纯度≥99％。

氟康唑：sigma公司，批号036M4709V。

二甲亚砜(DMSO)：天津市天力化学试剂有限公司。

各试药用DMSO配制，置于-20℃保存。实验前，将药物取出置于35℃温箱融化，充分混匀。

2.菌株：

使用的菌株：包括1)敏感菌株：敏感白念珠菌(SC5314)，近平滑念珠菌(22019)，新生隐球菌(32609)；2)耐药菌株：耐药白念珠菌(103)，耐药热带念珠菌，天然耐药克柔念珠菌(ATCC2340)，天然耐药光滑念珠菌(ATCC2281)。菌株均惠赠于第二军医大学姜远英老师课题组，并经形态学和生化学鉴定。

所有实验用菌株均于沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)划板活化，白念珠菌、热带念珠菌、新生隐球菌等球状菌于35℃培养2-3天后，分别挑取单克隆再次划板活化，取第二次所得单克隆置SDA斜面，用上述方法培养后于4℃保存备用。

3.培养液：

1)RPMI 1640液体培养液：

RPMI1640(Gibco)10g，NaHCO₃ 2.0g，吗啡啉丙磺酸(Sigma)34.5g(0.165mol)，加三蒸水900mL溶解，1mol/L NaOH调pH至7.0，三蒸水定容至1000mL，0.22μm微孔滤膜(Millipore)过滤除菌，分装后于4℃保存备用。

2)沙堡葡萄糖琼脂固体培养基(SDA)：

蛋白胨10g，葡萄糖40g，加三蒸水900mL溶解，加琼脂18g，调整pH至7.0，以三蒸水定容至1000mL，高压灭菌(121℃，20min)后，倒9cm平皿中，待冷却凝固，4℃保存备用。

3)YEPD培养液：

酵母浸膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，加三蒸水900mL溶解，三蒸水定容至1000mL，高压灭菌(121℃，20min)后于4℃保存备用。

4.仪器设备：

GHP-9080型隔水式恒温培养箱(上海一恒科学仪器有限公司)；

THZ-98C型恒温震荡箱(上海一恒科学仪器有限公司)；

SW-CT-IF型超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司)。

5.化合物CC-115贮备液：

将化合物CC-115和氟康唑用DMSO溶解，配成母液浓度为6.4mg/mL，于-20℃保存备用。

6.菌液制备：

实验前，用接种圈从4℃保存的SDA培养基上分别挑取白念珠菌、热带念珠菌、新生隐球菌各球状菌少量，分别接种至1mL YEPD培养液，于35℃，200rpm振荡培养，活化16h，使真菌处于指数生长期后期。然后将各菌液分别加至1mLYEPD培养液中，用上述方法再次活化，培养16h，用血细胞计数板计数，以RPMI 1640培养液分别调整各菌液浓度至1×10³～5×10³CFU/mL。

7.药敏板制备：

各菌株分别取无菌96孔板一块，于每排1号孔加RPMI 1640液体培养基100μL作空白对照；3～12号孔各加上述新鲜配制的菌液100μL；2号孔加菌液200μL；12号孔不含药物，只加菌液100μL作阳性生长对照。在每排的2号孔加母液浓度为6.4mg/mL的化合物CC-115或氟康唑各2μL。

对2～11号孔进行倍比稀释，使各孔的最终CC-115药物浓度分别为64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25和0.125μg/mL，氟康唑的药物浓度分别为64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μg/mL。各孔中DMSO含量均低于1％。将各药敏板于35℃恒温箱培养。

8.MIC值判定：

在305℃恒温箱中，念珠菌培养24h，新生隐球菌培养72h，观察实验结果，并确定其MIC值。观察结束后，放回恒温培养箱中，继续培养。当药物的MIC值超过测定浓度范围时，按以下方法进行统计：MIC值高于最高浓度64μg/mL时，计为“>64μg/mL”；MIC值为最低浓度或在最低浓度以下时，不作区别，均计为“≤0.125μg/mL”。上述实验均平行操作3次，当MIC值能准确重复或只差一个浓度时才被接受，并以较高浓度作为MIC值；当MIC值相差两个浓度以上时，则需重新实验，直到符合要求为止。实验结果见表1。

表1 化合物CC-115单独使用对各种真菌的MIC值(μg/mL)

由表1可知，24h，化合物CC-115对克柔念珠菌的MIC值最大，为大于64μg/ml；对敏感白念珠菌、耐药白念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌以及新生隐球菌等其他6种真菌的MIC值为32或64μg/mL。实验数据显示：CC-115化合物对敏感白念珠菌、耐药白念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、新生隐球菌这6种真菌具有一定的抗真菌活性。

实施例2.化合物CC-115与氟康唑合用对真菌的作用

1、药物，菌株，材料同实施例1

2、实验步骤：取无菌96孔板一块，于每排1号孔加RPMI 1640液体培养基100μL作空白对照；3～12号孔各加上述新鲜配制的耐药白念珠菌菌液(1×10³～5×10³CFU/mL)100μL；2号孔加菌液200μL；12号孔不含药物，只加菌液100μL作阳性生长对照。使各孔的最终氟康唑药物浓度分别为64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25和0.125μg/mL，合用的CC-115药物浓度为16、8、4、2、1μg/mL，单用的药物浓度分别为64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25和0.125μg/mL。各孔中DMSO含量均低于1％。将96孔板于35℃恒温箱培养。

在35℃恒温箱中，念珠菌培养24h，观察实验结果。当药物的MIC值超过测定浓度范围时，按以下方法进行统计：MIC值高于最高浓度64μg/mL时，计为“>64μg/mL”；MIC值为最低浓度或在最低浓度以下时，不作区别，均计为“≤0.125μg/mL”。上述实验均平行操作3次，当MIC值能准确重复或只差一个浓度时才被接受，并以较高浓度作为MIC值；当MIC值相差两个浓度以上时，则需重新实验，直到符合要求为止。实验结果见表2。

表2 化合物CC-115与氟康唑单用和联用后对真菌的MIC值(μg/mL)

表2所示：CC-115单用时对耐药白念珠菌和近平滑念珠菌的MIC值分别为32μg/mL和64μg/m，氟康唑单用时对耐药白念珠菌和近平滑念珠菌的MIC值分别为>64μg/mL和4μg/m，当两药合用后，两药对耐药白念珠菌的MIC值均分别为氟康唑降至0.5μg/mL，CC-115降至1μg/mL；两药对近平滑念珠菌的MIC值均分别为氟康唑降至1μg/mL，CC-115降至1μg/mL。两药合用后，对耐药白念珠菌和近平滑念珠菌的部分抑菌浓度指数(Fractional inhibitoryconcentration index，FICI)值分别为0.04和0.27，均小于0.5，提示两药合用表现为协同作用。

Claims

1.CC-115和氟康唑在制备抗真菌药物中的应用，其特征在于，所述真菌为耐药白念珠菌或近平滑念珠菌；

所述真菌为耐药白念珠菌时，氟康唑的MIC值为0.5 μg/mL，CC-115的MIC值为1 μg/mL；

所述真菌为近平滑念珠菌时，氟康唑的MIC值1 μg/mL，CC-115的MIC值为1 μg/mL。