JPH08506118A

JPH08506118A - ７，４２−ビス（ｏ−デメチル）ラパマイシン

Info

Publication number: JPH08506118A
Application number: JP6517823A
Authority: JP
Inventors: フォード，ブライアン・ダグラス
Original assignee: スミスクライン・ビーチャム・パブリック・リミテッド・カンパニー
Priority date: 1993-02-10
Filing date: 1994-02-10
Publication date: 1996-07-02
Also published as: US5597715A; DE69427286D1; DE69427286T2; GB9302569D0; EP0683784A1; EP0683784B1; WO1994018208A1

Abstract

(57)【要約】式（Ｉ）の化合物は、抗真菌および免疫調節剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシン本発明は新規化合物、その誘導体、その製造法、該化合物を含有する医薬処方物、医学的療法、特に微生物感染症の治療におけるその使用、および免疫調節剤としてのその使用に関する。ラパマイシンは公知化合物であり、真菌であるストレプトマイセス・ハイグロスコピカス（Streptomyces hygroscopicus）の抽出物として初めて単離され、抗真菌活性を有すると報告されている（英国特許第１４３６４４７号）。その後、ラパマイシンは免疫抑制剤として関連付けられた（マーテル、アール・アール（ Martel R.R.）ら、カナディアン・ジャーナル・オブ・フィジオロジー・アンド・ファーマコロジー（Can.J.Physiol.Pharmacol.）５５，４８−５１，１９７７）。多くの微生物が種々の化合物を産生することが判明しており、これらは単離され、有用な治療特性を有することが示されている。新規化合物は、また公知化合物の存在下での微生物のインキュベーションまたは培養によりえられる。このような新規化合物の１つに７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンがある。この新規化合物は有用な抗菌および抗癌および免疫調節活性を有することが判明している。したがって、本発明は７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンおよびぞの誘導体を提供する。第二の態様において、さらに、本発明は７，４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンの製法であって、微生物をラパマイシンと接触させ、次に７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンまたはその誘導体を培養物から単離することからなる製法を提供する。７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンは、式（Ｉ）：で示される構造を有すると考えられる。本明細書において、該化合物は、ジェイ・フィンドレイ（J.Findlay）らの番号付けシステム（Can.J.Chem.（１９８０）５８,５７９）によれば、７,４２− ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンと称される。しかし、ジェイ・マッカルパイン（J.Mc Alpine）らの最新の番号付けシステム（J.Antibiotics（１９９１）４４,６８８）によれば、これは１６,３９−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンとなる。ケミカル・アブストラクツ（Chemical Abstructs（１１th Cumultive Index１９８２−９６ページ、６０７１９ＣＳ））による番号付けシステムに従えって、本発明の化合物を７,４１−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンと称する。式（Ｉ）における化合物は以下の特性を有する：ｉ）高速原子衝撃（ＦＡＢ）質量分析による見かけの分子量が８８６である； ii）ラパマイシンの存在下でのストレプトマイセス属由来の微生物の培養および培地からの７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンまたはその誘導体の回収により得られる； iii）¹³ＣＮＭＲ分光学は、分子中、４９個の炭素の存在を明らかにする； iv）抗真菌活性を示す；ｖ）免疫調節活性を示す。本明細書において用いる「培養」なる語（およびこの語の派生語）は、炭素、窒素、イオウおよび無機塩の同化源の存在下での生物の好気的成長を意味する。このような好気的成長は、固体または半固体栄養培地、または栄養素が溶解または懸濁した液体培地中で起こる。培養は好気的表面または液内培養により起こる。栄養培地は、複合栄養素からなっていてもよく、または化学的に限定されていてもよい。本発明の方法において用いるのに適当な微生物は、７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンの産生能を有するストレプトマイセス属に属する微生物株が含まれることが見いだされた。このような株の一例はｓｐ.ＮＣＩＭＢ４０５３７てあり、これは自然界から単離されるものおよびその変異株であることも見いだされた。本明細書において用いる「変異株」なる語は、自発的に、あるいは故意に投与されるかそうでないかにかかわらず外部剤の効果により生まれる変異株を意味する。変異株を産生する適当な方法としては、国際原子力機関、ウィーン、１９７３年、シンポジウムの議事録、「ラジエーション・アンド・ラジオアイソトープ・フォー・インダストリアル・マイクロオーガニズムズ」、２４１頁における、エイチ・アイ・アドラー（H.I.Adler）による「テクニックス・フォア・ザ・デベロプメント・オブ・マイクロオーガニズムズ」にて概要が示されているものが挙げられ、これは以下のものを含む：（ｉ）電離線（たとえばＸ線およびγ線）、紫外線、紫外線＋光増感剤（例えば８−メトキサレン）、亜硝酸、ヒドロキシルアミン、ピリミジン塩基類似体（例えば５−ブロモウラシル）、アクリジン、アルキル化剤（例えばマスタードガス、メタンスルホン酸エチル）、過酸化水素、フェノール、ホルムアルデヒド、熱、および（ii）例えば組み換え、形質転換、形質導入、溶原化、溶原変換、プロトプラスト融合および自然変異体に関する選択的技術を含む遺伝子技術。ベッカー・ビー、リーチェバリアー・エム・ピー、ゴードン・アール・イー、リーチェバリアー・エイチ・エイ（Becker B.、Lechevalier M.P.、Gordon R.E. 、Lechevalier H.A.）、１９６４、アップル・マイクロバイオール（Appl.Micro biol.）１２、４２１−４２３）およびウィリアムズ・エス・ティー、グッドフェロー・エム、ウェリントン・イー・エム・エイチ、ビッカーズ・ジェイ・シー、アルダーソン・ジー、スネス・ピー・エイチ・エイ、サキン・エム・ジェイおよびモータイマー・エム（Williams S.T.、Goodfellow M、Wellington E.M.H.、 Vickers J.C.、Alderson.G.、Sneath P.H.A.、Sackin M.J.およびMortimer M.）１９８３ジャーナル・オブ・ゼネラル・マイクロバイオロジー（J.Gen.Microb iol.）１２９，１８１５−１８３０）の方法を用いて、Ｓp.ＮＣＩＭＢ４０５３７は未報告の非定型ストレプトマイセス株と確認され、したがって、該株は特に生物学的に純粋な形態にて本発明の一部を形成する。これはナショナル・コレクションズ・オブ・インダストリアル・アンド・マリン・バクテリア社（National Collections of Industrial and Marine Bacteria Ltd.（Ｎ.Ｃ.Ｉ.Ｍ.Ｂ.）、スコットランド、アバディーン）にＮＣＩＭＢ４０５３７の番号で１９９３年１月１８日に寄託されている。ｓｐ.ＮＣＩＭＢ４０５３７を培養するための培地は、適当には、同化炭素および同化窒素源を無機塩と共に含有する。適当な窒素源としては、酵母エキス、大豆粉、肉エキス、綿実、小麦粉、麦芽、蒸留乾燥溶解物、アミノ酸、蛋白加水分解物およびアンモニウムおよび硝酸塩窒素が含まれる。適当な炭素源としては、グルコース、ラクトース、マルトース、デンプンおよびグリセロールが含まれる。適当には、培地は、アルカリ金属イオン（例えば、ナトリウム）、ハロゲンイオン（例えば、クロリド）、およびアルカリ土類金属イオン（例えばカルシウムおよびマグネシウム）ならびに鉄およびコバルトなどの微量元素も含む。培養は適当には、約２０〜３５℃、有利には２０〜３０℃で行い、例えば以下に記載するような単離の後に所望の生成物を最適の収率で得るためには培養物をラパマイシンと７日まで、有利には３〜５日接触させる。所望の生成物またはその誘導体を培地から単離し、後処理し、このような化合物に関する通常の技術を用いて精製する。このような単離および精製法はすべて低温から周囲温度、例えば４〜４０℃、好都合には２０〜３５℃の範囲内の温度で行うのが都合よい。所望の化合物は生物学的活性の試験および／またはｈｐｌｃ保持時間をモニターすることによる通常の方法で容易に同定できる。適当には、分離法は高性能液体クロマトグラフィー工程を、好ましくは最終工程として含む。溶出を行ってもよい。７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンおよびその誘導体は、結晶または非結晶性であってもよく、もし結晶である場合、所望により水和または溶媒和されてもよい。誘導体は、好ましくは医薬上許容される誘導体である。誘導体は、医薬上許容される対イオンとの塩を包含する。本発明の化合物は、適当には、実質的に純粋な形態、例えば少なくとも５０％の純度、適当には少なくとも６０％の純度、有利には少なくとも７５％の純度、好ましくは、少なくとも８５％の純度、より好ましくは少なくとも９５％の純度、とくに少なくとも９８％の純度である（すべての％は重量／重量で計算する）。本発明の化合物の不純またはあまり純粋でない形態は、例えば医薬的用途に適したより純粋な形態の化合物またはその関連化合物（例えば対応する誘導体）の調製に用いられる。７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンおよびその医薬上許容される誘導体は抗真菌活性を有し、動物、とくにヒトを含む噛乳動物、とくにヒトおよび家畜（飼養場の動物を含む）における真菌感染症の予防および治療に有用である。化合物はヒトにおいて、他の微生物の中でも、カンジダ属（例えばカンジダ・アルビカンス（Candida Albicans））、トリコフィトン属（例えばトリコフィトン・メンタグロフィテス（Trichophyton mentagrophytes））、マイクロスポラム属（例えばマイクロスポラム・ジプセウム（Microsporum gypseum））またはエピデルモフィトン属（Epidermophyton）により起こる局所性真菌感染症またはカンジダ・アルビカンスにより起こる粘膜感染症（例えば口腔および膣カンジダ症）の治療に用いられる。これらはまた、例えばカンジダ・アルビカンス、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Cryptococcus neoformans）、アスペルギルス・フミガタス（Aspergillus fumigatus）、コクシジオデス（Coccidiodes）、パラコクシシオデス（Paracocciciodes）、ヒストプラズマ（Histoplasma）またはブラストマイセス（Blastomyces）属により起こる全身性真菌感染症の治療に用いられる。これらはまた真菌腫、色素酵母菌症およびムコール菌症の治療にも有用である。７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンおよびその医薬上許容される誘導体は免疫調節剤としても活性である。本明細書において用いる「免疫調節剤」なる語は、in vitroでのＴ（およびＢ）細胞応答の抑制および／またはアジュバント誘起性関節炎におけ炎症系応答処理二次病変において統計的に有意な減少を起こすことによる免疫抑制誘発能を有する本発明の化合物を意味する。治療の適応症としては、以下の病状の治療が挙げられるが、これに限定されるわけではない：慢性関節リウマチ、全身性紅斑狼瘡、多発性硬化症、急性移植片拒絶反応、重症筋無力症、全身性進行性硬化症、多発性骨髄腫、アトピー性皮膚炎、高イムノグロブリンＥ、Ｂ型肝炎抗原陰性慢性活動性肝炎、ハシモト甲状腺炎、家族性地中海熱、グレイブス病、自己免疫性溶血性貧血、原発性胆汁性肝硬変、炎症性腸炎、インシュリン依存性糖尿病。７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンおよびその医薬上許容される誘導体は発癌性腫瘍に対する活性も有する。とくに、化合物は腫瘍の大きさの減少、腫瘍の増殖の抑制および／または腫瘍を有する動物の生存期間を延長するのに有用である。したがって、本発明は医学的療法、とくに抗真菌剤または免疫調節剤、あるいは発癌性腫瘍に対する薬剤として用いる７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンまたはその医薬上許容される誘導体を提供する。本発明はさらに、有効量の７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンまたはその医薬上許容される誘導体を投与することにより真菌感染症にかかっているヒトまたは動物を治療する方法を提供する。さらに、本発明は、有効量の７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンまたはその医薬上許容される誘導体を投与することにより免疫調節を必要とするヒトまたは動物を治療する方法を提供する。本発明はまた、ヒトまたは動物において発癌性腫瘍を治療する方法であって、このようなヒトまたは動物に有効かつ非毒性量の７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンまたはその医薬上許容される誘導体を投与することからなる方法を提供する。本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩を医薬上許容される希釈剤または担体と共に含有する医薬組成物を提供する。組成物は好ましくはヒトに用いる場合、錠剤、カプセル、または注射可能なまたはクリーム状の形態である。ヒトに用いる場合、７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンまたはその医薬上許容される誘導体は単独で投与できるが、一般には意図する投与経路および標準的調剤実施例に関して選択された医薬担体との混合物として投与される。例えば、これらはデンプンまたはラクトースなどの賦形剤を含有する錠剤の形態、またはカプセルまたは単独または賦形剤と混合した膣坐剤、またはエリキシルの形態または矯味矯臭剤または着色料を含有する懸濁液の形態で経口投与される。これらは非経口的に、例えば静脈内、筋肉内または皮下注射してもよい。非経口投与の場合、これらは他の物質、例えば溶液を等張にするのに十分な塩またはグルコースを含んでもよい滅菌溶液の形態で用いるのが最適である。真菌感染症のヒト患者に経口および非経口投与する場合、式（Ｉ）の抗真菌化合物の一日の投与レベルは、経口または非経口経路により投与する場合には、０ .０５〜１００、好ましくは０.１〜１０ｍｇ／ｋｇ（分割用量）である。このように、化合物の錠剤またはカプセルは、適当ならば１個でまたは一度に２個以上投与する場合、５ｍｇ〜０.５ｇの活性化合物を含有すると考えることができる。医師はどのような場合にも各患者に関してもっとも適当で、特定の患者の年令、体重および反応により変わる実際の投与量を決定する。前記した投与量は平均的なケースの例である。もちろん、より高または低用量がよい場合もありえるが、これも本発明の範囲に含まれる。免疫調節を必要とするヒト患者についても同様に、該化合物またはその誘導体の一日の非経口または経口投与量は、好ましくは、０.１ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇである。当業者は、慣用的実験により、どの有効かつ非毒性量の化合物またはその誘導体が発癌性腫瘍の治療の目的に合うか決定できる。しかし、一般的には、有効量は１日に付き体重１ｋg当たり約０.０５〜１００ミリグラムの範囲である。化合物を前記投与量範囲で投与した場合、許容できない毒学的効果はないと考えられる。本発明の化合物および組成物は、他の抗真菌、抗癌または免疫調節剤と同様にヒトまたは獣医学的医薬において用いるためのいかなる都合のよい方法で投与するようにも処方できる。経口投与用化合物および錠剤およびカプセルは、単位投与形態であり、例えば、シロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガントまたはポリビニルピロリドンなどの結合剤；例えばラクトース、砂糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシンなどの増量剤；例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコールまたはシリカなどの錠剤成型滑沢剤；例えばジャガイモデンプンなどの崩壊剤；およびラウリル硫酸ナトリウムなどの医薬上許容される湿潤剤などの通常の賦形剤を含んでもよい。錠剤は通常の医薬実施例において周知の方法により被覆してもよい。経口液体製剤は、例えば、水性または油性懸濁液、溶液、乳剤、シロップまたはエリキシルの形態であってもよく、あるいは使用前に水または他の適当なビヒクルで復元する乾燥製品にしてもよい。このような液体製剤は、例えばソルビトール、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲルまたは水素化食用油脂などの懸濁化剤；例えばレシチン、ソルビタンモノオレアートまたはアカシアなどの乳化剤；例えばアーモンド油、油性エステル（例えばグリセリン）、プロピレングリコール、またはエチルアルコールなどの非水性ビヒクル（食用油を含んでもよい）；例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピルまたはソルビン酸などの防腐剤、および所望により通常の矯味矯臭剤または着色剤等の通常の添加剤を含んでもよい。局所投与用の本発明の組成物は、例えば、軟膏、クリーム、ローション、眼軟膏剤および点眼剤または点耳剤、含浸包帯剤およびエアゾルなどの形態にしてもよく、防腐剤、薬物の浸透を助ける溶媒、および軟膏およびクリームにおける皮膚軟化薬などの適当な通常の添加剤を含んでもよい。このような局所処方はまた、通常の適合性担体、例えばクリームまたは軟膏基剤およびローション用エタノールまたはオレイルアルコールを含んでもよい。このような担体は、処方の約１％〜約９８重量％を構成する。より一般的には、処方の約８０重量％までを構成する。本発明の組成物は通常の坐剤基剤、例えばカカオ脂または他のグリセリドを含む坐剤に処方してもよい。非経口投与用の本発明の組成物は、流体単位投与形態であるのが好都合で、これは化合物および滅菌ビヒクル、プロピレングリコールを用いて調製できる。化合物は、用いたビヒクルおよび濃度に応じて、ビヒクル中に懸濁または溶解できる。非経口懸濁液は、化合物を溶解するかわりにビヒクル中に懸濁し、滅菌をろ過により行うことができない以外は実質的に同様の方法で調製される。化合物は、滅菌ビヒクル中に懸濁する前に、酸化エチレンに接触させて滅菌してもよい。有利には、界面活性剤または湿潤剤をこのような懸濁液中に配合して、化合物の均一な分散を促進する。本発明の組成物は、吸入により投与してもよい。「吸入」とは、鼻腔内または経口吸入投与を意味する。エアゾル処方物または計量吸入器などのこのような投与に関して適当な投与形態は通常の技術により調製できる。以下の実施例を用いて本発明を説明する。実施例１７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンの調製ラパマイシンから７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンを産生できる培養物は、ストレプトマイセス属と分類され、ナショナル・コレクション・オブ・インダストリアル・アンド・マリン・バクテリア（National Collection of Ind ustrial and Marine Bacteria）、スコットランド、アバディーン・エイ・ビー２１アール・ワイ、マチャー・ドライブ・ストリート、２３番に受入番号ＮＣＩＭＢ４０５３７で寄託されている。培養１００ｍｌＭ２培地［アルカソイ：１０ｇ／ｌ；グリセロール：２０ｇ／ｌ；ＣｏＣｌ₂・６Ｈ₂Ｏ：０.００５ｇ／ｌ；ＭｇＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ：０.１ｇ／ｌ；ＦｅＣｌ₃；０.０３ｇ／ｌ；ＺｎＣｌ₂：０.００５ｇ／ｌ；ＣｕＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ：０.００５ｇ／ｌ；ＭｎＳＯ₄・４Ｈ₂Ｏ：０.００５ｇ／ｌｐＨ６.６未調整］を入れた５個の５００ｍｌフラスコの各々に、ペトリ皿中よく成長させたＡ３寒天上培養物［酵母エキス：５ｇ／ｌ；麦芽エキス：１０ｇ／ｌ；グリセロール :１０ｇ／ｌ；大豆ペプトン：５ｇ／ｌ；寒天Ｎｏ.３：２０ｇ／ｌ；ｐＨ６.５］から２プラグの寒天を接種した。別法として、ペトリ皿からのおおきな白金耳のよく成長させた培養物を３ｍｌのツィーン（Tween）８０と混合し、２８℃、２４０ｒｐｍで３日間成長させた５００ｍｌフラスコ中１００ｍｌのＭ２培地に全内容物を添加し、１ｍｌの培養ブロスに用いて、５個の５００ｍｌフラスコの各々の１００ｍｌのＭ２培地に接種する。ついで、フラスコを２８℃、２４０ｒｐｍで成長させた。インキュベーション５日後、ラパマイシン（２０ｍｇ）をアセトン（３.５ｍｌ）中溶液として各フラスコに添加する。ラパマイシンは、１９９０年９月１４日に寄託されたラパマイシン産生培地、例えばＮＣＩＭＢ４０３１９から得られるか、または米国特許第３９２９９９２号（１９７５年１２月３０日）に開示されているラパマイシン産生微生物ＮＲＲＬ５４９１の培養により得ることができる。フラスコを２８ ℃、２４０ｒｐｍで約２０時間インキュベートした。単離操作溶媒抽出フラスコの内容物を希硫酸で増量させ、ｐＨ４に調節した。５００ｍｌのジクロロメタンを添加し、混合物を２時間攪拌し、遠心分離により相を分離して有機溶媒相を回収し、さらに２００ｍｌのジクロロメタンを添加し、１時間攪拌した。有機溶媒相を合し、真空下に濃縮して油状物にした。該油状物に、１００ｍｌのメタノールを添加し、メタノール抽出物を濾過し、濾液を真空下で濃縮して油状物を得た。シリカクロマトグラフィー該油状物をアセトン：ヘキサン（１５：８５）中充填したKiselgel ６０（７０〜２３０メッシュ）カラム（２５×５０ｍｍ）に添加した。該添加後、カラムをアセトン−ヘキサンの段階勾配で溶出した。７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンを含有するフラクションを合し、真空下で濃縮乾固し、−２０℃で保存した。分取用ｈｐｌｃ貯蔵した固体をメタノール中に溶解し、１００μｌ部を別々に逆相ミクロソルブＣ−１８カラムおよびプレカラム（２１.４ｍｍ×２５ｃｍおよび２１.４×５ｃｍ）（米国、ライニン・インストラメンツ（Rainin Instruments））に注入した。注入後、メタノール：Ｈ₂Ｏ（７８：２２）、６ｍｌ／分で溶出を続け、２７８ｎｍでのＵＶ吸収に関してモニター観察した。目的化合物を含有するフラクションをプールし、真空下で濃縮してメタノールを除去し、凍結乾燥した。目的化合物含有のフラクションを、Spherisorb Ｓ１００ＤＳ２（PhaseSep）カラム（２５ｃｍ×４．６ｍｍ）およびWatersプレカラムを用いて逆相ｈｐｌｃにより分析した。カラムを２７８ｎｍでのＵＶ吸収によりモニター観察し、メタノール：水（７８：２２）で２ｍｌ／分で溶出した。これらの条件下で、目的化合物の保持時間は４．０分であった（ラパマイシン（保持時間１０.６分）と異なる）。分光分析データ表１に示す。実施例２７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンの生物活性化合物を以下のバイオアッセイを用いて抗真菌活性および免疫抑制活性に関して分析した。Ａ．抗真菌活性の分析対数的増殖の酵母生物（サツカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevi siae）を完全寒天培地（ＹＰＤ）上にプレートした。適当な水性または有機溶媒中に溶解した化合物を寒天上に穿孔したウェル中に入れた。プレートを４８時間インキュベートし、抑制領域を測定した。化合物の効力を、抑制領域ｖｓ．薬剤濃度の対数のプロットを回帰分析することにより定量した。Ｂ．免疫抑制活性の有糸分裂誘起分析ＢＤＦＩ雌マウスの脾臓細胞を１０％ウシ胎児血清（５×１０⁶／ｍＬ）を含むＲＰＭＩ中にて確立した。この懸濁液（５×１０⁵細胞）の１００ｍＬアリコートを９６ウェル丸底マイクロタイタープレート（リンブロ（Linbro）、フロー・ラボラトリース（Flow Laboratories））中に分配した。コンカナバリンＡ（５μｇ／ｍｌ）を有糸分裂生起刺激として添加し、マイクロタイターウェル中の最終容積をＲＰＭＩで２００μＬに調節した。細胞培養物を７２時間３７℃で５％ＣＯ₂雰囲気下でインキュベートし、０,５μＣｉ ³Ｈ−チミジン（比活性２. ００Ｃｉ／モル）で７２時間の培養の最後の１８時間パルス処理した。細胞を自動式複数試料収穫装置で収穫し、細胞関連の放射活性をベックマン液体シンチレーションカウンターで計数した。結果を４回の測定の平均値で表わした。細胞生存能をインキュベーションの７２時間後トライパンブルー排除により測定した。試験すべき化合物を細胞の添加の前に適当な希釈度でマイクロタイタープレートに添加した。本発明の化合物に関するこれらの２つの分析の結果を表２に示す。実施例３組成物例Ａ〜ＨＡカプセル組成物カプセルの形態の本発明の医薬組成物を、標準的ツーピースハードゼラチンカプセルに５０ｍｇの粉末形態の本発明の化合物、１００ｍｇのラクトース、３２ｍのタルクおよび８ｍｇのステアリン酸マグネシウムを充填することにより調製する。Ｂ注射可能な非経口組成物注射による投与に適した形態の本発明の医薬組成物を、１.５重量％の本発明の化合物を１０重量％のポリエチレングリコールおよび水中攪拌することにより調製する。溶液を濾過により滅菌する。Ｃ軟膏組成物本発明の化合物１.０ｇ白色軟パラフィン１００.０ｇまで適量本発明の化合物を少量のビヒクル中に分散させ、徐々に多量のビヒクル中に配合して、滑らかで均質な製品を得る。次に折り畳み可能なの金属管に分散液を充填する。Ｄ局所クリーム組成物本発明の化合物１.０ｇポーラワックスＧＰ２００２０.０ｇラノリン無水物２.０ｇ白ミツロウ２.５ｇヒドロキシ安息香酸メチル０.１ｇ蒸留水１００.０ｇまで適量ポーラワックス、ミツロウおよびラノリンを一緒に６０℃で加熱する。ついで本発明の化合物を添加し、よく分散させ、組成物をゆっくり攪拌しながら冷却する。Ｅ局所ローション組成物本発明の化合物１.０ｇソルビタンモノラウレート０.６ｇポリソルベート２００.６ｇセトステアリルアルコール１.２ｇグリセリン６.０ｇヒドロキシ安息香酸メチル０.２ｇ純水Ｂ.Ｐ. １００.００ｍｌまで適量ヒドロキシ安息香酸メチルおよびグリセリンを７０ｍｌの水中に７５℃で溶解する。ソルビタンモノラウレート、ポリソルベート２０およびセトステアリルアルコールを一緒に７５℃で融解させ、該水溶液に添加する。得られた乳濁液を均質化し、一定して攪拌しながら冷却し、本発明の化合物を水中に残存する懸濁液として添加する。全懸濁液を均質化するまで攪拌する。Ｆ点眼組成物本発明の化合物０.５ｇヒドロキシ安息香酸メチル０.０１ｇヒドロキシ安息香酸プロピル０.０４ｇ純水Ｂ.Ｐ.（Ｂ.Ｐ.＝英国薬局方）１００.００ｍｌまで適量ヒドロキシ安息香酸メチルおよびプロピルを７０ｍｌの純水中に７５℃で溶解させ、得られた溶液を冷却する。本発明の化合物を添加し、溶液を膜フィルター（０.２２ｍｕｍ孔径）を通して濾過することにより滅菌し、滅菌的に適当な滅菌容器中に充填する。Ｇ吸入による投与用組成物１５〜２０ｍｌの容積のエアゾル容器に関して：１０ｍｇの本発明の化合物を０.２〜０.２％のポリソルベート８５またはオレイン酸などの滑沢剤と混合し、このような混合物をフレオンなどの噴射剤中に、好ましくは（１,２ジクロロテトラフルオロエタン）およびジクロロメタンとの組合せで分散させ、経鼻または経口吸入投与のいずれかのエアゾル容器アダプターに入れる。Ｈ吸入による投与用組成物１５〜２０ｍｌの容積のエアゾル容器に関して：１０ｍｇの本発明の化合物をエタノール（６〜８ｍｌ）中に溶解し、０.１〜０.２％のポリソルベート８５またはオレイン酸などの滑沢剤を添加し、これをフレオンなどの噴射剤中に、好ましくは（１.２ジクロロテトラフルオロエタン）およびジクロロメタンとの組合せで分散させ、経鼻または経口吸入投与のいずれかのエアゾル容器アダプターに入れる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ１２Ｐ 17/18 Ｃ 7432−4Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:465）

Claims

【特許請求の範囲】１．７,４２−ビス（Ｏ−デメチル）ラパマイシンまたはその医薬上許容される誘導体。２．式（Ｉ）：で示される化合物。３．以下の特性：ｉ）高速原子衝撃（ＦＡＢ）質量分析による見かけの分子量が８８６であり； ii）ラパマイシンの存在下、ＮＣＩＭＢ４０５３７の培養により得られ； iii） ¹³ＣＮＭＲ分光分析が分子中に４９個の炭素の存在を明らかにし； iv）抗真菌活性を示し；ｖ）免疫調節活性を示す；を有する化合物。４．生物学的に純粋な形態である、ストレプトマイセスｓｐ.ＮＣＩＭＢ４０５３７、またはその変異体。５．ストレプトマイセス属由来の微生物をラパマイシンの存在下に培養し、その後、培地から該化合物またはその誘導体を回収することからなる請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物の製法。６．微生物かストレプトマイセスｓｐ．ＮＣＩＭＢ４０５３７またはその変異体である請求項５に記載の製法。７．治療において用いるための請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物。８．抗真菌剤または免疫調節剤として、または抗腫瘍剤として用いるための請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物。９．抗真菌、免疫調節、または抗腫瘍療法において用いる医薬の製造における請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物の使用。１０．請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物と、医薬上許容される希釈剤または担体とからなる医薬組成物。