JPH05186477A - 免疫抑制剤として有効な新規の親油性マクロライド - Google Patents
免疫抑制剤として有効な新規の親油性マクロライドInfo
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- JPH05186477A JPH05186477A JP4103241A JP10324192A JPH05186477A JP H05186477 A JPH05186477 A JP H05186477A JP 4103241 A JP4103241 A JP 4103241A JP 10324192 A JP10324192 A JP 10324192A JP H05186477 A JPH05186477 A JP H05186477A
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【構成】図示の構造式を有する７，２９−ビスデスメチ
ルラパマイシン、および該化合物を含有する、免疫抑制
活性を有する医薬組成物。 【効果】本発明の組成物は自己免疫疾患の治療、あるい
は臓器移植に伴う拒絶反応の予防・抑制に使用される。
ルラパマイシン、および該化合物を含有する、免疫抑制
活性を有する医薬組成物。 【効果】本発明の組成物は自己免疫疾患の治療、あるい
は臓器移植に伴う拒絶反応の予防・抑制に使用される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、抗菌剤として及び免疫
抑制剤としての活性を有する化合物に係わる。
抑制剤としての活性を有する化合物に係わる。
【０００２】特に本発明は、抗菌剤として有効であると
共に免疫応答の抑制においても有効であるラパマイシン
（ｒａｐａｍｙｃｉｎ）〔即ち式：
共に免疫応答の抑制においても有効であるラパマイシン
（ｒａｐａｍｙｃｉｎ）〔即ち式：
【０００３】
【化２】
【０００４】の化合物〕の類縁体に係わる。
【０００５】
【従来の技術】早くも１９７５年に、イースター島の土
壌試料から単離されたＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙ
ｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ培養体から採取された抗菌抗生
物質としてラパマイシンは同定された〔参照 Ｖｅｚｉ
ｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．２８，７
２１−７２６（１９７５）及び１９７５年１２月３０日
付のＳｅｈｇａｌら名義の米国特許第３，９２９，９９
２号〕。この化合物の免疫応答を阻害する能力は、Ｍａ
ｒｔｅｌ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉ
ｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５５，４８−５１（１９
７７）によって初めて記述された。この論文において、
著者は、ラットにおけるアレルギー性脳脊髄炎、アジュ
バント誘導関節炎及び抗体産生に対する応答を阻害する
上での上記化合物の有用性を示している。より最近で
は、Ｃａｌｎｅ，Ｒ．Ｙ．らが、異所心臓同種移植片を
与えられたラットにおいてラパマイシンが免疫抑制性で
あることを示した〔Ｃａｌｎｅ，Ｒ．Ｙ．ｅｔ ａ
ｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ｖｏｌ．２，ｐ．２２７（１９８
９）〕。ラパマイシンと構造的にやや類似するＦＫ−５
０６〔１９９０年１月１６日付の藤沢薬品工業に譲渡さ
れた米国特許第４，８９４，３６６号〕が、同様に重要
でありながら毒性は予期されたよりも低いことが経験的
に判ったとされている。
壌試料から単離されたＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙ
ｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ培養体から採取された抗菌抗生
物質としてラパマイシンは同定された〔参照 Ｖｅｚｉ
ｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．２８，７
２１−７２６（１９７５）及び１９７５年１２月３０日
付のＳｅｈｇａｌら名義の米国特許第３，９２９，９９
２号〕。この化合物の免疫応答を阻害する能力は、Ｍａ
ｒｔｅｌ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉ
ｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５５，４８−５１（１９
７７）によって初めて記述された。この論文において、
著者は、ラットにおけるアレルギー性脳脊髄炎、アジュ
バント誘導関節炎及び抗体産生に対する応答を阻害する
上での上記化合物の有用性を示している。より最近で
は、Ｃａｌｎｅ，Ｒ．Ｙ．らが、異所心臓同種移植片を
与えられたラットにおいてラパマイシンが免疫抑制性で
あることを示した〔Ｃａｌｎｅ，Ｒ．Ｙ．ｅｔ ａ
ｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ｖｏｌ．２，ｐ．２２７（１９８
９）〕。ラパマイシンと構造的にやや類似するＦＫ−５
０６〔１９９０年１月１６日付の藤沢薬品工業に譲渡さ
れた米国特許第４，８９４，３６６号〕が、同様に重要
でありながら毒性は予期されたよりも低いことが経験的
に判ったとされている。
【０００６】更に最近では、ラパマイシンが、シクロス
ポリンＡ（ＣｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎＡ）との併用療法に
おいて有効であることが判明している。この併用は、例
えば心臓、腎臓、腸、すい臓または他の移植において免
疫抑制作用を生み出すのに必要とされるシクロスポリン
Ａの量を減らし、それによって、シクロスポリンＡを用
いた治療に固有の腎毒性を効果的に低下させるという利
点を有する〔参照Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ，Ｓ．Ｍ．ｅｔ
ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃ
ｅｅｄｉｎｇｓ，ｖｏｌ．２３，ｐｐ５０７−５０８
（１９９１）〕。
ポリンＡ（ＣｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎＡ）との併用療法に
おいて有効であることが判明している。この併用は、例
えば心臓、腎臓、腸、すい臓または他の移植において免
疫抑制作用を生み出すのに必要とされるシクロスポリン
Ａの量を減らし、それによって、シクロスポリンＡを用
いた治療に固有の腎毒性を効果的に低下させるという利
点を有する〔参照Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ，Ｓ．Ｍ．ｅｔ
ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃ
ｅｅｄｉｎｇｓ，ｖｏｌ．２３，ｐｐ５０７−５０８
（１９９１）〕。
【０００７】当業者には理解されるように、またＨａｒ
ｄｉｎｇ，Ｍ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，ｖｏ
ｌ．３４１，ｐ．７５８−７６０（１９８９）、並び
に、Ｄｅｖｌｉｎ，Ｊ．Ｐ．及びＨａｒｇｒａｖｅ，
Ｋ．Ｄ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，ｖｏｌ．４５，ｐ．
４３２７−４３６９（１９８９）によって例証されてい
るように、シクロスポリンＡ，ＦＫ−５０６、ラパマイ
シン及びこれらの類縁体は、いずれも免疫抑制剤として
広範囲にわたる有用性を有すると推定される。シクロス
ポリンＡ、ＦＫ−５０６、ラパマイシン及びこれらの類
縁体は、臓器及び骨髄移植の拒絶反応の予防や、乾せ
ん、並びに、１型真性糖尿病、多発性硬化症、自己免疫
ぶどう膜炎及びリウマチ様関節炎といった多数の自己免
疫疾患の治療に有用である。更なる適応症は後述する。
ｄｉｎｇ，Ｍ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，ｖｏ
ｌ．３４１，ｐ．７５８−７６０（１９８９）、並び
に、Ｄｅｖｌｉｎ，Ｊ．Ｐ．及びＨａｒｇｒａｖｅ，
Ｋ．Ｄ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，ｖｏｌ．４５，ｐ．
４３２７−４３６９（１９８９）によって例証されてい
るように、シクロスポリンＡ，ＦＫ−５０６、ラパマイ
シン及びこれらの類縁体は、いずれも免疫抑制剤として
広範囲にわたる有用性を有すると推定される。シクロス
ポリンＡ、ＦＫ−５０６、ラパマイシン及びこれらの類
縁体は、臓器及び骨髄移植の拒絶反応の予防や、乾せ
ん、並びに、１型真性糖尿病、多発性硬化症、自己免疫
ぶどう膜炎及びリウマチ様関節炎といった多数の自己免
疫疾患の治療に有用である。更なる適応症は後述する。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明は、ラパマイシン
の類縁体であって抗菌剤及び有効な免疫抑制剤でもあ
る、式Ｉ：
の類縁体であって抗菌剤及び有効な免疫抑制剤でもあ
る、式Ｉ：
【０００９】
【化３】
【００１０】の化合物に係わる。
【００１１】式Ｉの化合物は、７，２９−ビスデスメチ
ルラパマイシンとして記述することもできる。本発明は
更に、実質的に純粋な式Ｉの化合物にも係わる。本明細
書において実質的に純粋とは、９８％より高い純度で且
つラパマイシンを含まないことを示す。
ルラパマイシンとして記述することもできる。本発明は
更に、実質的に純粋な式Ｉの化合物にも係わる。本明細
書において実質的に純粋とは、９８％より高い純度で且
つラパマイシンを含まないことを示す。
【００１２】更に本発明は、免疫抑制治療が必要な患者
において免疫抑制を誘導するための医薬組成物であっ
て、医薬担体及び治療上有効量の７，２９−ビスデスメ
チルラパマイシンを含有する医薬組成物に係わる。
において免疫抑制を誘導するための医薬組成物であっ
て、医薬担体及び治療上有効量の７，２９−ビスデスメ
チルラパマイシンを含有する医薬組成物に係わる。
【００１３】その免疫抑制活性の点で、７，２９−ビス
デスメチルラパマイシンは、免疫応答の低下を必要とす
る疾患及び病態の予防及び治療に有効である。即ち７，
２９−ビスデスメチルラパマイシンを使用して、例えば
自己免疫疾患の治療において、または、皮膚、肺、心
臓、心肺、骨髄、腎臓、脾臓及び角膜移植といった移植
の拒絶反応を予防する上で、リンパ球及び免疫細胞の増
殖を抑制することができる。
デスメチルラパマイシンは、免疫応答の低下を必要とす
る疾患及び病態の予防及び治療に有効である。即ち７，
２９−ビスデスメチルラパマイシンを使用して、例えば
自己免疫疾患の治療において、または、皮膚、肺、心
臓、心肺、骨髄、腎臓、脾臓及び角膜移植といった移植
の拒絶反応を予防する上で、リンパ球及び免疫細胞の増
殖を抑制することができる。
【００１４】式Ｉの化合物が有効である特定の自己免疫
疾患としては、シクロスポリン及び／またはＦＫ−５０
６を用いた治療が提案または使用されているもの全て、
例えば、無形成性貧血、真性赤血球性貧血、アイソパテ
ィ性血小板減少症、全身性エリテマトーデス、多発性軟
骨炎、強皮症、ウェジナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、
重症筋無力症、乾せん、スティーヴンス−ジョンソン症
候群、特発性スプルー、クローン症、バセドウ症性眼
病、サルコイドーシス、多発性硬化症、原発性胆汁性肝
硬変、原発性若年性糖尿病、後ぶどう膜炎、間質性肺胞
線維症、乾せん性関節炎、インシュリン依存性真性糖尿
病、ネフローゼ症候群、及びＡＩＤＳを挙げることがで
きる。
疾患としては、シクロスポリン及び／またはＦＫ−５０
６を用いた治療が提案または使用されているもの全て、
例えば、無形成性貧血、真性赤血球性貧血、アイソパテ
ィ性血小板減少症、全身性エリテマトーデス、多発性軟
骨炎、強皮症、ウェジナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、
重症筋無力症、乾せん、スティーヴンス−ジョンソン症
候群、特発性スプルー、クローン症、バセドウ症性眼
病、サルコイドーシス、多発性硬化症、原発性胆汁性肝
硬変、原発性若年性糖尿病、後ぶどう膜炎、間質性肺胞
線維症、乾せん性関節炎、インシュリン依存性真性糖尿
病、ネフローゼ症候群、及びＡＩＤＳを挙げることがで
きる。
【００１５】更に本発明は、免疫抑制療法が必要な被検
体において免疫抑制を誘導するための医薬組成物であっ
て、治療上有効量のシクロスポリンＡ及び７，２９−ビ
スデスメチルラパマイシンを含有する医薬組成物にも係
わる。
体において免疫抑制を誘導するための医薬組成物であっ
て、治療上有効量のシクロスポリンＡ及び７，２９−ビ
スデスメチルラパマイシンを含有する医薬組成物にも係
わる。
【００１６】式Ｉの化合物は都合良くは、ＮＲＲＬ ５
４９１のごときＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏ
ｓｃｏｐｉｃｕｓの培養体の発酵によって調製すること
ができる。ＮＲＲＬ ５４９１株は、ｔｈｅ Ｎａｔｉ
ｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕ
ｒａｌ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，
ＵＳＤＡ，ＡＲＳ，Ｐｅｏｒｉａ Ｉ１１における収蔵
培養体から得ることができる。ＮＲＲＬ ５４９１は、
ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ
Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒ
ｙｌａｎｄからＡＴＣＣ ２９２５３として入手可能で
もある。この微生物及び標準培養方法は、Ｖｅｚｉｎａ
ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．２８，７２１
−７２６（１９７５）、Ｓｅｈｇａｌ ｅｔ ａｌ．，
Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．２８，７２７−７３２及び米国
特許第３，９２９，９９２号に記載されており、これら
参考文献は参照により本明細書の一部を構成するものと
する。
４９１のごときＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏ
ｓｃｏｐｉｃｕｓの培養体の発酵によって調製すること
ができる。ＮＲＲＬ ５４９１株は、ｔｈｅ Ｎａｔｉ
ｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕ
ｒａｌ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，
ＵＳＤＡ，ＡＲＳ，Ｐｅｏｒｉａ Ｉ１１における収蔵
培養体から得ることができる。ＮＲＲＬ ５４９１は、
ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ
Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒ
ｙｌａｎｄからＡＴＣＣ ２９２５３として入手可能で
もある。この微生物及び標準培養方法は、Ｖｅｚｉｎａ
ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．２８，７２１
−７２６（１９７５）、Ｓｅｈｇａｌ ｅｔ ａｌ．，
Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．２８，７２７−７３２及び米国
特許第３，９２９，９９２号に記載されており、これら
参考文献は参照により本明細書の一部を構成するものと
する。
【００１７】当業者には理解されるように、７，２９−
ビスデスメチルラパマイシン製造用の微生物としては、
他の天然または上述の培養体から誘導される人工突然変
異株または変種も挙げることができる。突然変異株の人
工的生産は、例えば紫外線照射またはＮ−ニトロソグア
ニジン処理などの物理的または化学的突然変異誘発物質
によって行なうことができる。原形質体融合、プラスミ
ド組込み、遺伝子移入などの組換えＤＮＡ技術もまた考
えられる。
ビスデスメチルラパマイシン製造用の微生物としては、
他の天然または上述の培養体から誘導される人工突然変
異株または変種も挙げることができる。突然変異株の人
工的生産は、例えば紫外線照射またはＮ−ニトロソグア
ニジン処理などの物理的または化学的突然変異誘発物質
によって行なうことができる。原形質体融合、プラスミ
ド組込み、遺伝子移入などの組換えＤＮＡ技術もまた考
えられる。
【００１８】一般に、７，２９−ビスデスメチルラパマ
イシンの製造は、ＮＲＲＬ ５４９１をサイネフンギン
（ｓｉｎｅｆｕｎｇｉｎ）の存在下に、同化性の炭素、
窒素及び無機塩源を含む適当な栄養培地における通常の
好気的発酵によって培養することにより行ない得る。サ
イネフンギン濃度は０．１〜５．０ｍＭとすることがで
きるが、好ましいのは１．０ｍＭである。
イシンの製造は、ＮＲＲＬ ５４９１をサイネフンギン
（ｓｉｎｅｆｕｎｇｉｎ）の存在下に、同化性の炭素、
窒素及び無機塩源を含む適当な栄養培地における通常の
好気的発酵によって培養することにより行ない得る。サ
イネフンギン濃度は０．１〜５．０ｍＭとすることがで
きるが、好ましいのは１．０ｍＭである。
【００１９】一般に、グルコース、マルトース、マンノ
ース、スクロース、澱粉、グリセリン、キビゼリー（ｍ
ｉｌｌｅｔ ｊｅｌｌｙ）、糖蜜、ダイズなどの多くの
炭水化物を同化性炭素源として使用することができる。
同化性窒素源としては、酵母やカゼインの加水分解物、
一次酵母（ｐｒｉｍａｒｙ ｙｅａｓｔ）、酵母抽出
物、綿実粉、ダイズ固形物、麦芽、肉エキス、ペプト
ン、コーン浸漬液及びアンモニウム塩といった材料を挙
げることができる。培地に配合し得る無機塩栄養素は、
ナトリウム、鉄、マグネシウム、カリウム、コバルト、
リン酸塩などを与える通常の塩である。一般には勿論、
使用する方法は、工業的効率を鑑みて選択される。本明
細書に記載の栄養培地は使用し得る高範囲にわたる培地
を単に説明するためのものであって、限定的なものでは
ない。
ース、スクロース、澱粉、グリセリン、キビゼリー（ｍ
ｉｌｌｅｔ ｊｅｌｌｙ）、糖蜜、ダイズなどの多くの
炭水化物を同化性炭素源として使用することができる。
同化性窒素源としては、酵母やカゼインの加水分解物、
一次酵母（ｐｒｉｍａｒｙ ｙｅａｓｔ）、酵母抽出
物、綿実粉、ダイズ固形物、麦芽、肉エキス、ペプト
ン、コーン浸漬液及びアンモニウム塩といった材料を挙
げることができる。培地に配合し得る無機塩栄養素は、
ナトリウム、鉄、マグネシウム、カリウム、コバルト、
リン酸塩などを与える通常の塩である。一般には勿論、
使用する方法は、工業的効率を鑑みて選択される。本明
細書に記載の栄養培地は使用し得る高範囲にわたる培地
を単に説明するためのものであって、限定的なものでは
ない。
【００２０】発酵は約２０〜３２℃の温度で実施される
が、最適な結果を得るためには、発酵を約２７℃で実施
するのが好ましい。培地のｐＨは、発酵培地に配合され
る適当な有機もしくは無機緩衝液を使用して、または水
酸化ナトリウムのような塩基を定期的に加えることによ
り、ｐＨ約６〜７に調節する。３０〜９６時間以内で十
分な量の７，２９−ビスデスメチルラパマイシンを得る
ことができる。培地または微生物を変えると、７，２９
−ビスデスメチルラパマイシン化合物の収量及びまたは
／その生産速度が変化する。好ましい培地組成は実施例
において示す。“シード（ｓｅｅｄ）”及び“生産培
地”なる用語は当分野の用語として使用する。一般に、
シード培地は微生物の速やかな増殖を支援し、その小部
分（シード）が、大規模発酵用の生産培地に接種するの
に使用される。
が、最適な結果を得るためには、発酵を約２７℃で実施
するのが好ましい。培地のｐＨは、発酵培地に配合され
る適当な有機もしくは無機緩衝液を使用して、または水
酸化ナトリウムのような塩基を定期的に加えることによ
り、ｐＨ約６〜７に調節する。３０〜９６時間以内で十
分な量の７，２９−ビスデスメチルラパマイシンを得る
ことができる。培地または微生物を変えると、７，２９
−ビスデスメチルラパマイシン化合物の収量及びまたは
／その生産速度が変化する。好ましい培地組成は実施例
において示す。“シード（ｓｅｅｄ）”及び“生産培
地”なる用語は当分野の用語として使用する。一般に、
シード培地は微生物の速やかな増殖を支援し、その小部
分（シード）が、大規模発酵用の生産培地に接種するの
に使用される。
【００２１】本発明者らが有利であることを見い出した
発酵、単離及び回収条件の特定の例は後述の実施例セク
ションにおいて与える。
発酵、単離及び回収条件の特定の例は後述の実施例セク
ションにおいて与える。
【００２２】既に述べたように、その免疫抑制活性の点
で７，２９−ビスデスメチルラパマイシンは、免疫応答
の低下を必要とする疾患及び病態の予防及び治療に有効
である。即ち７，２９−ビスデスメチルラパマイシンを
使用して、例えば自己免疫疾患の治療において、また
は、皮膚、肺、心臓、心肺、骨髄、腎臓、脾臓及び角膜
移植といった移植の拒絶反応を予防する上で、リンパ球
及び免疫細胞の増殖を抑制することができる。
で７，２９−ビスデスメチルラパマイシンは、免疫応答
の低下を必要とする疾患及び病態の予防及び治療に有効
である。即ち７，２９−ビスデスメチルラパマイシンを
使用して、例えば自己免疫疾患の治療において、また
は、皮膚、肺、心臓、心肺、骨髄、腎臓、脾臓及び角膜
移植といった移植の拒絶反応を予防する上で、リンパ球
及び免疫細胞の増殖を抑制することができる。
【００２３】式Ｉの化合物が有効である特定の自己免疫
疾患としては、シクロスポリン及びＦＫ ５０６を用い
た治療が提案または使用されている全てのもの、例えば
無形成性貧血、真性赤血球性貧血、アイソパティ性血小
板減少症、全身性エリテマトーデス、多発性軟骨症、強
皮症、ウェジナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、重症筋無
力症、乾せん、スティーヴンス−ジョンソン症候群、特
発性スプルー、クローン症、バセドウ症性眼病、サルコ
イドーシス、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、原発
性若年性糖尿病、後ぶどう膜炎、間質性肺胞線維症、乾
せん性関節炎、インシュリン依存性真性糖尿病、ネフロ
ーゼ症候群、及びＡＩＤＳを挙げることができる。
疾患としては、シクロスポリン及びＦＫ ５０６を用い
た治療が提案または使用されている全てのもの、例えば
無形成性貧血、真性赤血球性貧血、アイソパティ性血小
板減少症、全身性エリテマトーデス、多発性軟骨症、強
皮症、ウェジナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、重症筋無
力症、乾せん、スティーヴンス−ジョンソン症候群、特
発性スプルー、クローン症、バセドウ症性眼病、サルコ
イドーシス、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、原発
性若年性糖尿病、後ぶどう膜炎、間質性肺胞線維症、乾
せん性関節炎、インシュリン依存性真性糖尿病、ネフロ
ーゼ症候群、及びＡＩＤＳを挙げることができる。
【００２４】上記全ての用途において投与量は、当然な
がら、使用する化合物、投与の態様及び所望の処置に従
って変化する。しかしながら一般には、動物体重１ｋｇ
当たり約１ｍｇ〜約２００ｍｇの日投与量を、都合良く
は１日に２〜４回に分割して投与するか、または徐放性
形態で投与すると満足の行く結果が得られる。より大型
の哺乳動物においては、総日投与量は約５０〜約５００
０ｍｇであり、経口投与に適した単位量（例えば２５〜
３００ｍｇ）になるように、固体または液体の医薬担体
または希釈剤と混合した本発明化合物とする。
がら、使用する化合物、投与の態様及び所望の処置に従
って変化する。しかしながら一般には、動物体重１ｋｇ
当たり約１ｍｇ〜約２００ｍｇの日投与量を、都合良く
は１日に２〜４回に分割して投与するか、または徐放性
形態で投与すると満足の行く結果が得られる。より大型
の哺乳動物においては、総日投与量は約５０〜約５００
０ｍｇであり、経口投与に適した単位量（例えば２５〜
３００ｍｇ）になるように、固体または液体の医薬担体
または希釈剤と混合した本発明化合物とする。
【００２５】本発明は更に、例えば医薬担体または希釈
剤と共に式Ｉの化合物を含有する医薬組成物を提供す
る。
剤と共に式Ｉの化合物を含有する医薬組成物を提供す
る。
【００２６】かかる組成物は、例えば溶液、錠剤または
カプセルや、特に乾せんの治療に対しては軟膏の形態と
することができる。
カプセルや、特に乾せんの治療に対しては軟膏の形態と
することができる。
【００２７】７，２９−ビスデスメチルラパマイシン
は、特にシクロスポリンの投与に関して現在実用されて
いる手段に従う任意の通常の経路で、特に例えば臓器移
植のケース、即ち移植の前及び直後や、さもないと吸収
を妨げ得る胃腸障害エピソードにおいては静脈内注入に
よって、また例えば経口溶液の形態で経口的に投与する
ことができる。
は、特にシクロスポリンの投与に関して現在実用されて
いる手段に従う任意の通常の経路で、特に例えば臓器移
植のケース、即ち移植の前及び直後や、さもないと吸収
を妨げ得る胃腸障害エピソードにおいては静脈内注入に
よって、また例えば経口溶液の形態で経口的に投与する
ことができる。
【００２８】
【効果】免疫抑制剤としての生理活性は、インターロイ
キン２産生の阻害及びＴ細胞増殖の阻害において測定す
ることができる（本発明の有用性は、その種々の真菌を
阻害する能力によっても示され得る）。結果は実施例セ
クションにおいて与える。
キン２産生の阻害及びＴ細胞増殖の阻害において測定す
ることができる（本発明の有用性は、その種々の真菌を
阻害する能力によっても示され得る）。結果は実施例セ
クションにおいて与える。
【００２９】イオノマイシン及びホルボールミリステー
トアセテート（ＰＭＡ）で刺激したマウスＴ細胞培養体
においてＴ細胞増殖を測定した（このアッセイは、Ｄｕ
ｍｏｎｔ，Ｆ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．（１９９０）１４４：２５１に詳細に記載されてい
る）。Ｃ５７Ｂ１／６マウス由来の脾細胞懸濁液を調製
し、ナイロンウールカラム上で分離した。回収したＴ細
胞を完全培地中に１０6細胞／ｍｌで懸濁させ、イオノ
マイシン（２５０ｎｇ／ｍｌ）及びＰＭＡ（１０ｎｇ／
ｍｌ）を加えた。細胞懸濁液を即座に９６ウェル平底マ
イクロカルチャープレート中に２００μｌ／ウェルで分
配した。対照培地または種々の濃度の試験化合物をそれ
ぞれ３つのウェルに２０μｌ／ウェルで加えた。これと
並行して、外来ＩＬ−２（５０単位／ｍｌ）を含む培養
液も準備した。プレートを、５％ＣＯ2−９５％空気の
加湿雰囲気中３７℃で４４時間インキュベートした。次
いで培養液にトリチウム化チミジン（２μＣｉ／ウェ
ル）を加えて更に４時間パルス処理し、マルチサンプル
回収装置を使用してファイバガラスフィルター上に細胞
を回収した。取り込まれた放射性物質をＢＥＴＡＰＬＡ
ＴＥ ＣＯＵＮＴＥＲ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ／ＬＫＢ，
Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）において測定し、３つの
試料の平均の１分当たりカウント（ｃｐｍ）値を計算し
た。増殖のパーセント阻害を式：
トアセテート（ＰＭＡ）で刺激したマウスＴ細胞培養体
においてＴ細胞増殖を測定した（このアッセイは、Ｄｕ
ｍｏｎｔ，Ｆ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．（１９９０）１４４：２５１に詳細に記載されてい
る）。Ｃ５７Ｂ１／６マウス由来の脾細胞懸濁液を調製
し、ナイロンウールカラム上で分離した。回収したＴ細
胞を完全培地中に１０6細胞／ｍｌで懸濁させ、イオノ
マイシン（２５０ｎｇ／ｍｌ）及びＰＭＡ（１０ｎｇ／
ｍｌ）を加えた。細胞懸濁液を即座に９６ウェル平底マ
イクロカルチャープレート中に２００μｌ／ウェルで分
配した。対照培地または種々の濃度の試験化合物をそれ
ぞれ３つのウェルに２０μｌ／ウェルで加えた。これと
並行して、外来ＩＬ−２（５０単位／ｍｌ）を含む培養
液も準備した。プレートを、５％ＣＯ2−９５％空気の
加湿雰囲気中３７℃で４４時間インキュベートした。次
いで培養液にトリチウム化チミジン（２μＣｉ／ウェ
ル）を加えて更に４時間パルス処理し、マルチサンプル
回収装置を使用してファイバガラスフィルター上に細胞
を回収した。取り込まれた放射性物質をＢＥＴＡＰＬＡ
ＴＥ ＣＯＵＮＴＥＲ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ／ＬＫＢ，
Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）において測定し、３つの
試料の平均の１分当たりカウント（ｃｐｍ）値を計算し
た。増殖のパーセント阻害を式：
【００３０】
【化４】
【００３１】に従って計算した。
【００３２】
【実施例】以下の実施例は上記化合物の製造を説明する
ものであって、各請求項で定義された本発明を制限する
ものではない。
ものであって、各請求項で定義された本発明を制限する
ものではない。
【００３３】実施例１ ７，２９−ビスデスメチルラパマイシンの製造 ラパマイシン製造のための産生培養体は、ＡＴＣＣ＃２
９２５３としても公知のＮＲＲＬ ５９４１であった。
シード培養は、０．１％酵母抽出物、０．１％牛肉エキ
ス、０．２％Ｎ−Ｚ ＡＭＩＮＥ Ａ及び１．０％グル
コースからなるＢｅｎｎｅｔｔｓ寒天培地上で増殖させ
た、十分に胞子形成した傾斜培養体、または１０％グリ
セロール中に保存され且つ−７９℃で保管されていた３
×１０9の胞子１００μｌから出発した。シード培地Ａ
は以下の成分からなる。
９２５３としても公知のＮＲＲＬ ５９４１であった。
シード培養は、０．１％酵母抽出物、０．１％牛肉エキ
ス、０．２％Ｎ−Ｚ ＡＭＩＮＥ Ａ及び１．０％グル
コースからなるＢｅｎｎｅｔｔｓ寒天培地上で増殖させ
た、十分に胞子形成した傾斜培養体、または１０％グリ
セロール中に保存され且つ−７９℃で保管されていた３
×１０9の胞子１００μｌから出発した。シード培地Ａ
は以下の成分からなる。
【００３４】成分 ｇ／Ｌ ＫＮＯ3 ２．０ グルコース ２０．０ 酵母抽出物 ２０．０ ＨＹＣＡＳＥ ＳＦ1 ２０．０ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０２５ ＮａＣｌ（１２．５％） ４．０ｍｌ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ（１２．５％） ４．０ｍｌ ＭｎＳＯ4・Ｈ2Ｏ（０．５％） １．０ｍｌ ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ（１．０％） １．０ｍｌ Ｃａ2Ｃｌ2・２Ｈ2Ｏ（２．０％） １．０ｍｌ ｐＨを７．０に調整してから滅菌した。
【００３５】1．ＨＹＣＡＳＥ ＳＦはＳＨＥＦＦＩＥ
ＬＤ ＰＲＯＤＵＣＴＳ，Ｎｏｒｗｉｃｈ，Ｎ．Ｙ．の
製品である。
ＬＤ ＰＲＯＤＵＣＴＳ，Ｎｏｒｗｉｃｈ，Ｎ．Ｙ．の
製品である。
【００３６】シードインキュベーションは、２５０ｍｌ
のバッフル付きエーレンマイヤーフラスコにおいて４４
ｍｌの培地を用いて実施し、前述のものを接種した後、
２７℃及び２２０ｒｐｍで４８〜７２時間インキュベー
トした。
のバッフル付きエーレンマイヤーフラスコにおいて４４
ｍｌの培地を用いて実施し、前述のものを接種した後、
２７℃及び２２０ｒｐｍで４８〜７２時間インキュベー
トした。
【００３７】生産フラスコにおいては１．０〜１．５ｍ
ｌのシード培養液を、試験管発酵においては０．１ｍｌ
のシード培養液を、下記の成分からなる生産培地ＲＡＰ
−２１にそれぞれ接種した。
ｌのシード培養液を、試験管発酵においては０．１ｍｌ
のシード培養液を、下記の成分からなる生産培地ＲＡＰ
−２１にそれぞれ接種した。
【００３８】成分 ｇ／Ｌ グルコース ２０．０ グリセロール ２０．０ （ＮＨ4）2ＳＯ4 ５．０ ＫＨ2ＰＯ4 ２．５ Ｋ2ＨＰＯ4 ２．５ Ｌ−リシン ４．０ ＮＵＴＲＩＳＯＹ1 ３０．０ モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ） ２１．３ ｐＨを６．３に調整してから殺菌した。
【００３９】1．ＮＵＴＲＩＳＯＹは、ＡＲＣＨＥＲ
ＤＡＮＩＥＬＳ，Ｍｉｄｌａｎｄ，Ｍｉｃｈｉｇａｎの
製品である。
ＤＡＮＩＥＬＳ，Ｍｉｄｌａｎｄ，Ｍｉｃｈｉｇａｎの
製品である。
【００４０】生産インキュベーションは、２５０ｍｌの
バッフルなしエーレンマイヤーフラスコにおいては３０
〜４４ｍｌの培地を、また２５×１５０ｍｍ試験管にお
いては３．０ｍｌの培地をそれぞれ用い、２２０ｒｐｍ
で振盪しながら２５℃で実施した。４３〜４８時間後に
無菌サイネフンギン溶液をフラスコに、終濃度が０．１
〜１．０ｍＭとなるように加え、更に２４〜４８時間発
酵を継続させた。
バッフルなしエーレンマイヤーフラスコにおいては３０
〜４４ｍｌの培地を、また２５×１５０ｍｍ試験管にお
いては３．０ｍｌの培地をそれぞれ用い、２２０ｒｐｍ
で振盪しながら２５℃で実施した。４３〜４８時間後に
無菌サイネフンギン溶液をフラスコに、終濃度が０．１
〜１．０ｍＭとなるように加え、更に２４〜４８時間発
酵を継続させた。
【００４１】発酵物を回収し、等容積のＭｅＯＨを用い
て発酵ブロスを抽出した。３０分間振盪した後、抽出物
を遠心分離し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）によって上清を分析した。
て発酵ブロスを抽出した。３０分間振盪した後、抽出物
を遠心分離し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）によって上清を分析した。
【００４２】ＨＰＬＣ分析は以下のようにした。
【００４３】溶出液組成１：ＷＡＴＥＲＳ ５１０ポン
プ（ＷＡＴＥＲＳ ＡＳＳＯＣＩＡＴＥＳ，Ｍｉｌｆｏ
ｒｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を用い、ＭｅＯＨ
／水（７６：２４）からなる移動相を１．０ｍｌ／分で
送入する。
プ（ＷＡＴＥＲＳ ＡＳＳＯＣＩＡＴＥＳ，Ｍｉｌｆｏ
ｒｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を用い、ＭｅＯＨ
／水（７６：２４）からなる移動相を１．０ｍｌ／分で
送入する。
【００４４】組成２：アセトニトリル／Ｈ2Ｏ（６０：
４０）の初期組成を５分間維持し、次いで２０分間でア
セトニトリル／Ｈ2Ｏ（７５：２５）にまで変化させる
比例勾配条件。最終組成を１０分間維持してから、カラ
ムを初期条件で再平衡化した。
４０）の初期組成を５分間維持し、次いで２０分間でア
セトニトリル／Ｈ2Ｏ（７５：２５）にまで変化させる
比例勾配条件。最終組成を１０分間維持してから、カラ
ムを初期条件で再平衡化した。
【００４５】溶出液ＤＥＳＲＡＰ：ＭｅＯＨ／０．１％
Ｈ3ＰＯ4（６８：３２）の初期条件を３０分間で比（８
３：１７）にまで比例変化させてから、初期条件で再平
衡化する勾配溶剤。
Ｈ3ＰＯ4（６８：３２）の初期条件を３０分間で比（８
３：１７）にまで比例変化させてから、初期条件で再平
衡化する勾配溶剤。
【００４６】カラム：ＷＨＡＴＭＡＮ ＰＡＲＴＩＳＩ
Ｌ ５ ＯＤＳ−３ ４．０×２５０ｍｍを室温で操作
した。
Ｌ ５ ＯＤＳ−３ ４．０×２５０ｍｍを室温で操作
した。
【００４７】検出器：ＷＡＴＥＲＳ Ｍｏｄｅｌ ４９
０可変波長検出器及びＷＡＴＥＲＳＭｏｄｅｌ ９９０
光ダイオードアレー検出器。最適検出波長は２７７ｎｍ
であった。
０可変波長検出器及びＷＡＴＥＲＳＭｏｄｅｌ ９９０
光ダイオードアレー検出器。最適検出波長は２７７ｎｍ
であった。
【００４８】ＤＥＳＲＡＰ溶出条件を使用し、サイネフ
ンギン処理した発酵物のメタノール抽出物２０μｌを注
入すると、得られたクロマトグラムは、ラパマイシンの
Ｒｔが２４．６分にあるのに対して７，２９−ビスデス
メチルラパマイシンのＲｔは１６．３分であることを示
した。
ンギン処理した発酵物のメタノール抽出物２０μｌを注
入すると、得られたクロマトグラムは、ラパマイシンの
Ｒｔが２４．６分にあるのに対して７，２９−ビスデス
メチルラパマイシンのＲｔは１６．３分であることを示
した。
【００４９】実施例２ デスメチル類縁体の製造に使用される方法は前述の方法
に従う。０．０１％ＴＷＥＥＮ ８０（ポリエチレンソ
ルビタン）及び１０％グリセロール中に凍結しておいた
胞子ストックを使用した。０．１ｍｌのアリコートを、
５０ｍｌのシード培地Ａを含むシードフラスコに接種し
た。フラスコを２７℃，２２０ｒｐｍで４３時間インキ
ュベートした。１．０及び０．１ｍｌのシードアリコー
トを、３４ｍｌのＲＡＰ−２１培地を含む生産フラスコ
及び３．４ｍｌのＲＡＰ−２１を含む２５×１５０ｍｍ
試験管にそれぞれ接種した。生産試験管またはフラスコ
を２６℃、２４０ｒｐｍでインキュベートした。３２時
間後、サイネフンギンをフラスコ及び試験管に、それぞ
れ２つのフラスコの終濃度が０．０、０．５または１．
０ｍＭとなり、それぞれ３つの試験管の終濃度が０．
０、０．２５、０．５０、０．７５または１．００ｍＭ
となるように加えた。フラスコ及び試験管を５６時間後
に回収し、等容積のＭｅＯＨを使用して抽出し、３０分
間振盪した。
に従う。０．０１％ＴＷＥＥＮ ８０（ポリエチレンソ
ルビタン）及び１０％グリセロール中に凍結しておいた
胞子ストックを使用した。０．１ｍｌのアリコートを、
５０ｍｌのシード培地Ａを含むシードフラスコに接種し
た。フラスコを２７℃，２２０ｒｐｍで４３時間インキ
ュベートした。１．０及び０．１ｍｌのシードアリコー
トを、３４ｍｌのＲＡＰ−２１培地を含む生産フラスコ
及び３．４ｍｌのＲＡＰ−２１を含む２５×１５０ｍｍ
試験管にそれぞれ接種した。生産試験管またはフラスコ
を２６℃、２４０ｒｐｍでインキュベートした。３２時
間後、サイネフンギンをフラスコ及び試験管に、それぞ
れ２つのフラスコの終濃度が０．０、０．５または１．
０ｍＭとなり、それぞれ３つの試験管の終濃度が０．
０、０．２５、０．５０、０．７５または１．００ｍＭ
となるように加えた。フラスコ及び試験管を５６時間後
に回収し、等容積のＭｅＯＨを使用して抽出し、３０分
間振盪した。
【００５０】生成物の分析は、ＷＨＡＴＭＥＮ ＰＡＲ
ＴＩＳＩＬ Ｃ８またはＷＨＡＴＭＡＮ ＰＡＲＴＩＳ
ＩＬ ５ ＯＤＳ−３ ＨＰＬＣカラムで、６０℃にお
いて、比５０／５０から出発して２０分間で６５／３５
にまで比例変化する１．０ｍｌ／分のアセトニトリル／
０．１％Ｈ3ＰＯ4の移動相を用いて実施した。２７７ｎ
ｍにおいて単色光検出を実施し、選択されたピークのＵ
Ｖ／可視スペクトルをＷＡＴＥＲＳ ９９０光ダイオー
ドアレー検出器を使用して調べた。本発明の化合物は、
ラパマイシンが３３．５分であるのに対して１８．０分
のＲｔを有した。
ＴＩＳＩＬ Ｃ８またはＷＨＡＴＭＡＮ ＰＡＲＴＩＳ
ＩＬ ５ ＯＤＳ−３ ＨＰＬＣカラムで、６０℃にお
いて、比５０／５０から出発して２０分間で６５／３５
にまで比例変化する１．０ｍｌ／分のアセトニトリル／
０．１％Ｈ3ＰＯ4の移動相を用いて実施した。２７７ｎ
ｍにおいて単色光検出を実施し、選択されたピークのＵ
Ｖ／可視スペクトルをＷＡＴＥＲＳ ９９０光ダイオー
ドアレー検出器を使用して調べた。本発明の化合物は、
ラパマイシンが３３．５分であるのに対して１８．０分
のＲｔを有した。
【００５１】対照発酵物及び処理発酵物を、Ｃ−１８
ＳＥＰ−ＰＡＫ（ＷＡＴＥＲＳ ＡＳＳＯＣＩＡＴＥ
Ｓ）カートリッジに吸着させ、次いで注目の化合物を選
択的に溶出することにより部分精製した。手順は、Ｍｅ
ＯＨ／Ｈ2Ｏ（１：１）を用いて抽出した発酵物ブロス
３．０ｍｌを活性化ＳＥＰ−ＰＡＫカートリッジに通
し、次いで注目の化合物をまず（７５：２５）または
（８：２）いずれかのＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏで、次いで純粋
なＭｅＯＨを用いて溶出することからなった。この手順
によりほとんどの高極性材料が排除され、近似の保持時
間を有する化合物を除いた２種類の最も極性の高いラパ
マイシン類縁体に濃縮された。ＳＥＰ−ＰＡＫでＭｅＯ
Ｈ／Ｈ2Ｏ（８：２）を用いて溶出すると、濃縮された
本発明物質が与えられた。
ＳＥＰ−ＰＡＫ（ＷＡＴＥＲＳ ＡＳＳＯＣＩＡＴＥ
Ｓ）カートリッジに吸着させ、次いで注目の化合物を選
択的に溶出することにより部分精製した。手順は、Ｍｅ
ＯＨ／Ｈ2Ｏ（１：１）を用いて抽出した発酵物ブロス
３．０ｍｌを活性化ＳＥＰ−ＰＡＫカートリッジに通
し、次いで注目の化合物をまず（７５：２５）または
（８：２）いずれかのＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏで、次いで純粋
なＭｅＯＨを用いて溶出することからなった。この手順
によりほとんどの高極性材料が排除され、近似の保持時
間を有する化合物を除いた２種類の最も極性の高いラパ
マイシン類縁体に濃縮された。ＳＥＰ−ＰＡＫでＭｅＯ
Ｈ／Ｈ2Ｏ（８：２）を用いて溶出すると、濃縮された
本発明物質が与えられた。
【００５２】質量分析同定のため実施された、より完全
な単離手順は以下の通りである。
な単離手順は以下の通りである。
【００５３】ステップＡ ９００ｍｌの全ブロスをＳＵＰＥＲ−ＣＥＬプレコート
を使用して濾過した。菌糸体ケーキを４００ｍｌのアセ
トンと一緒にスラリーにし、２時間十分に震盪して撹拌
した。混合物を濾過し、菌糸体ケーキを除去した。アセ
トン濾液を５０ｍｌの水性液に濃縮し、５０ｍｌの酢酸
エチルで３回抽出した。３回の抽出物を混合し、硫酸ナ
トリウムで脱水した。脱水した抽出物を濃縮乾固した。
を使用して濾過した。菌糸体ケーキを４００ｍｌのアセ
トンと一緒にスラリーにし、２時間十分に震盪して撹拌
した。混合物を濾過し、菌糸体ケーキを除去した。アセ
トン濾液を５０ｍｌの水性液に濃縮し、５０ｍｌの酢酸
エチルで３回抽出した。３回の抽出物を混合し、硫酸ナ
トリウムで脱水した。脱水した抽出物を濃縮乾固した。
【００５４】ステップＢ ステップＡの生成物を２．５ｍｌの酢酸エチル中に溶解
した。溶液を、予め酢酸エチルで平衡化しておいたＥ．
ＭＥＲＣＫシリカゲル（０．０４〜０．０６ｍｍ）２５
０ｍｌ上でクロマトグラフィー分析した。８ｍｌ／分の
酢酸エチルを用い、１００ｍｌの前画分と１００個の８
ｍｌ画分とを回収するクロマトグラフィーを実施し、９
８個の８ｍｌ画分を回収した。次いで溶出液を９７／
２．５ ｖ／ｖの酢酸エチル／メタノールに切換え、９
８個の８ｍｌ画分を回収した。溶出液を９５／５ ｖ／
ｖの酢酸エチル／メタノールに切換え、４個の２５０ｍ
ｌ画分を回収した。ＨＰＬＣ分析に基づき、画分６６〜
１９８を混合した。混合画分の１０％アリコートを濃縮
乾固した。
した。溶液を、予め酢酸エチルで平衡化しておいたＥ．
ＭＥＲＣＫシリカゲル（０．０４〜０．０６ｍｍ）２５
０ｍｌ上でクロマトグラフィー分析した。８ｍｌ／分の
酢酸エチルを用い、１００ｍｌの前画分と１００個の８
ｍｌ画分とを回収するクロマトグラフィーを実施し、９
８個の８ｍｌ画分を回収した。次いで溶出液を９７／
２．５ ｖ／ｖの酢酸エチル／メタノールに切換え、９
８個の８ｍｌ画分を回収した。溶出液を９５／５ ｖ／
ｖの酢酸エチル／メタノールに切換え、４個の２５０ｍ
ｌ画分を回収した。ＨＰＬＣ分析に基づき、画分６６〜
１９８を混合した。混合画分の１０％アリコートを濃縮
乾固した。
【００５５】ステップＣ ステップＢの生成物を７５ｍｌのメタノール中に溶解
し、ＷＨＡＴＭＡＮ ＰＡＲＴＩＳＩＬ １０ ＯＤＳ
−３カラム０．９４×５０ｃｍにおいて室温で、６７／
３３ｖ／ｖのメタノール／水溶出系を流量４．５ｍｌ／
分で使用してクロマトグラフィー分析した。溶出流を２
７７ｎｍにおいてモニターし、Ｕ．Ｖ．追跡に基づいて
画分を回収した。保持時間４９分の画分２及び３を混合
し、濃縮乾固すると、１．０ｍｇの式Ｉの化合物が得ら
れた。
し、ＷＨＡＴＭＡＮ ＰＡＲＴＩＳＩＬ １０ ＯＤＳ
−３カラム０．９４×５０ｃｍにおいて室温で、６７／
３３ｖ／ｖのメタノール／水溶出系を流量４．５ｍｌ／
分で使用してクロマトグラフィー分析した。溶出流を２
７７ｎｍにおいてモニターし、Ｕ．Ｖ．追跡に基づいて
画分を回収した。保持時間４９分の画分２及び３を混合
し、濃縮乾固すると、１．０ｍｇの式Ｉの化合物が得ら
れた。
【００５６】ＦＡＢ−ＭＳ 本物質は、ＦＡＢ−ＭＳによって測定すると（リチウム
衝撃スペクトル（Ｍ＋Ｌｉ）がｍ／ｚ８９２に認められ
た）、分子量８８５を有することが判明した。ＥＩスペ
クトルは、ｍ／ｚ１７５及び３０４に特性イオンを示
す。
衝撃スペクトル（Ｍ＋Ｌｉ）がｍ／ｚ８９２に認められ
た）、分子量８８５を有することが判明した。ＥＩスペ
クトルは、ｍ／ｚ１７５及び３０４に特性イオンを示
す。
【００５７】生理活性 ラパマイシン類縁体の生理活性は、サイネフンギン処理
した発酵抽出物及び未処理の発酵抽出物をＳＥＰ−ＰＡ
Ｋ精製して得られた濃縮溶出物の分画したものにつき評
価した。画分を、溶出物１ｍｌ当たり５０μｌの０．２
５Ｍ ＭＥＳを加えることにより中和し、凍結乾燥装置
において乾燥し、抗菌アッセイ（ＡＦＡ）において抗菌
活性を、また改良Ｔ細胞増殖アッセイ法によって免疫抑
制活性を評価した。ＡＦＡの結果は下記の表１に示す。
した発酵抽出物及び未処理の発酵抽出物をＳＥＰ−ＰＡ
Ｋ精製して得られた濃縮溶出物の分画したものにつき評
価した。画分を、溶出物１ｍｌ当たり５０μｌの０．２
５Ｍ ＭＥＳを加えることにより中和し、凍結乾燥装置
において乾燥し、抗菌アッセイ（ＡＦＡ）において抗菌
活性を、また改良Ｔ細胞増殖アッセイ法によって免疫抑
制活性を評価した。ＡＦＡの結果は下記の表１に示す。
【００５８】
【表１】
【００５９】上記データは、サイネフンギンで処理しな
かった（ａ）試料においては、ＨＰＬＣクロマトグラム
の１７分領域のものに抗菌活性が伴わないことを示して
いる。しかしながら、サイネフンギンで処理した（ｂ）
試料には、同じ領域のものに活性があり、この活性は、
領域３２で溶出したラパマイシンと抗菌スペクトルが類
似であった。
かった（ａ）試料においては、ＨＰＬＣクロマトグラム
の１７分領域のものに抗菌活性が伴わないことを示して
いる。しかしながら、サイネフンギンで処理した（ｂ）
試料には、同じ領域のものに活性があり、この活性は、
領域３２で溶出したラパマイシンと抗菌スペクトルが類
似であった。
【００６０】Ｔ細胞増殖アッセイに使用する試料を、注
目の領域を含む１．０分画分において分画した。ＡＦＡ
分析において上述したＳＥＰ−ＰＡＫから溶出した同じ
試料をＴ細胞増幅分析にも使用した。１．０ｍｌの１．
０分画分を５０μｌの０．２５Ｍ ＭＥＳ，ｐＨ７．３
を用いてそれぞれ中和し、蒸発乾固した。Ｔ細胞アッセ
イを実施する際に、試料を１００μｌのＭｅＯＨ中に１
／１００、１／５００、１／２５００及び１／１２５０
０に希釈して再溶解した。アッセイにおいて、５０％以
上の阻害レベルを示したときに試料は陽性であるとみな
した。１７〜１８分のピークを、ＳＥＰ−ＰＡＫで８０
％ＭｅＯＨを用いて溶出した。サイネフンギン処理試料
に加え、未処理対照における領域を８０％メタノールで
溶出させて分画した。Ｔ細胞増殖データは表２にまとめ
て示す。
目の領域を含む１．０分画分において分画した。ＡＦＡ
分析において上述したＳＥＰ−ＰＡＫから溶出した同じ
試料をＴ細胞増幅分析にも使用した。１．０ｍｌの１．
０分画分を５０μｌの０．２５Ｍ ＭＥＳ，ｐＨ７．３
を用いてそれぞれ中和し、蒸発乾固した。Ｔ細胞アッセ
イを実施する際に、試料を１００μｌのＭｅＯＨ中に１
／１００、１／５００、１／２５００及び１／１２５０
０に希釈して再溶解した。アッセイにおいて、５０％以
上の阻害レベルを示したときに試料は陽性であるとみな
した。１７〜１８分のピークを、ＳＥＰ−ＰＡＫで８０
％ＭｅＯＨを用いて溶出した。サイネフンギン処理試料
に加え、未処理対照における領域を８０％メタノールで
溶出させて分画した。Ｔ細胞増殖データは表２にまとめ
て示す。
【００６１】
【表２】
【００６２】上記表は、１７〜１８分領域に見られる新
たなピークが、１対２５００に希釈されてさえＴ細胞増
殖阻害活性を有することを示している。対照画分は、試
験したうち最も高い濃度でさえ５０％以上の阻害活性を
示さなかった。
たなピークが、１対２５００に希釈されてさえＴ細胞増
殖阻害活性を有することを示している。対照画分は、試
験したうち最も高い濃度でさえ５０％以上の阻害活性を
示さなかった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｄ 221:00 309:00 273:00） (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:55） (72)発明者 ロバート・テイー・ゲージエルマン アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージイ・ 07036、リンデン、アカデミー・テラス・ 437 (72)発明者 オツトー・ヘンセンス アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージイ・ 07701、レツド・バンク、リバー・プラザ、 アレクサンダー・ドライブ・65 (72)発明者 ルイス・カプラン アメリカ合衆国、ニユー・ヨーク・10956、 ニユー・シテイ、ロツクランド・カントリ ー、レキシントン・ロード・７ (72)発明者 ジエロルド・エム・リース アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージイ・ 08550、プリンストン・ジヤンクシヨン、 シヤーブローク・ドライブ・10
Claims (2)
- 【請求項１】 ７，２９−ビスデスメチルラパマイシン
である式Ｉ： 【化１】 の化合物またはその医薬的に容認可能な塩。 - 【請求項２】 免疫抑制治療が必要な患者において免疫
抑制を誘導するための医薬組成物であって、無毒治療上
有効量の請求項１に記載の化合物及び医薬的に容認可能
な担体を含有する前記組成物。
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|---|---|---|---|
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| US07/690,410 US5093338A (en) | 1991-04-23 | 1991-04-23 | Lipophilic macrolide useful as an immunosuppressant |
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| JPH078873B2 JPH078873B2 (ja) | 1995-02-01 |
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| JP (1) | JPH078873B2 (ja) |
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| DK1889198T3 (da) | 2005-04-28 | 2015-02-09 | Proteus Digital Health Inc | Farma-informatiksystem |
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- 1991-04-23 US US07/690,410 patent/US5093338A/en not_active Expired - Fee Related
-
1992
- 1992-04-21 EP EP92303529A patent/EP0510904A1/en not_active Withdrawn
- 1992-04-21 CA CA002066494A patent/CA2066494A1/en not_active Abandoned
- 1992-04-22 JP JP4103241A patent/JPH078873B2/ja not_active Expired - Lifetime
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