CN110398558B - 基于dia技术挖掘性成熟前后藏绵羊睾丸差异蛋白质的方法 - Google Patents
基于dia技术挖掘性成熟前后藏绵羊睾丸差异蛋白质的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110398558B CN110398558B CN201910665529.8A CN201910665529A CN110398558B CN 110398558 B CN110398558 B CN 110398558B CN 201910665529 A CN201910665529 A CN 201910665529A CN 110398558 B CN110398558 B CN 110398558B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- protein
- testis
- tibetan sheep
- database
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明公开了一种基于DIA技术挖掘性成熟前后藏绵羊睾丸差异蛋白质的方法，包括以下步骤：组织收集、蛋白样本制备、建立谱图数据库、蛋白质定性定量分析和差异表达蛋白质筛选。本发明选取3月龄和1岁龄藏绵羊睾丸组织，运用常规DDA质谱检测技术分析并建立图谱数据库，随后采用DIA方法进行质谱数据采集，并对样品中的蛋白质进行定性定量分析，从而获得藏绵羊睾丸中的差异表达蛋白质。利用该方法可实现对藏绵羊睾丸差异表达蛋白的定量筛选，这对于后续从蛋白质组学角度研究在高海拔条件下藏绵羊睾丸发育或精子发生的分子机制提供了十分重要的理论基础。
Description
技术领域
本发明涉及DIA定量方法技术领域，尤其涉及一种基于DIA技术挖掘性成熟前后藏绵羊睾丸差异蛋白质的方法。
背景技术
藏绵羊作为中国3大原始绵羊品种之一，主要分布于海拔3000m以上青藏高原的西藏、青海以及甘肃、四川等地，是产区农牧民重要的生产和生活资料，对带动当地的经济社会可持续发展和维持生态平衡具有十分重要的作用。但由于长期放牧且缺乏补饲，导致其生产性能低、繁殖力低下、性成熟晚，严重限制了藏绵羊群的繁殖，进而制约了牧区的经济社会发展。蛋白质是有机体生命活动过程中的主要参与者和执行者。因而探究不同发育期藏绵羊睾丸组织蛋白质组学，进而筛选各个时期的特异表达蛋白或极显著差异表达蛋白，对于揭示藏绵羊睾丸发育的分子机制具有十分重要的意义，也可为后续的分子辅助育种提供理论依据。
近些年，生物学、精准医学越来越多的需要蛋白质组学数据，其大样品量对蛋白质组方法的重现性和通量提出了越来越高的要求。常规的数据依赖采集模式下，母离子采集的随机性会造成肽段鉴定的重现性差。因此，近年来，数据非依赖(DIA)的采集模式已经得到了广泛的关注。它的主要优势在于可以实现信息的无损采集，且数据之间具有很高的重现性。
本发明涉及一种基于重复性更好、通量更高、定量更为准确的DIA蛋白定量技术全面扫描并筛选不同发育期藏绵羊睾丸差异表达蛋白质的方法。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种基于DIA技术挖掘性成熟前后藏绵羊睾丸差异蛋白质的方法。
本发明的技术方案如下：
一种基于DIA技术挖掘性成熟前后藏绵羊睾丸差异蛋白质的方法，包括以下步骤：
步骤A、组织收集
羊屠宰后，取出睾丸组织，用PBS清洗外部血渍并剥除白膜后，将其剪成0.5cm×0.5cm×0.5cm的小组织快，迅速冻存于液氮中用于蛋白样本的制备；
步骤B、蛋白样本制备
向睾丸组织中加入裂解液，超声裂解；4℃，14000rpm条件下离心25-35min后，吸取上清液，用BCA蛋白定量法测定蛋白浓度；取50μg蛋白质稀释至50μL，随后加入1M DTT 1μL，在55℃孵育50-75min；加入1M碘乙酰胺(IAA)5μL，室温避光50-75min；加入300μL预冷的丙酮沉淀105-140min，沉淀用胰蛋白酶酶解过夜；
步骤C、建立谱图数据库
将所有酶解后的肽段混合物溶解于缓冲液甲(20mM甲酸铵水溶液，pH＝10.0)中，用Ultimate 3000系统连接反向柱进行高pH反向分离，分离使用线性梯度，40min内5％溶液乙至45％溶液乙；柱子在初始条件下平衡15min，柱流速维持在1mL/min，柱温维持在30℃；收集到6个部分，各个部分在真空浓缩仪中干燥；将除盐冻干后的肽段重溶于溶液丙中，后经由配备在线纳喷离子源的LC-MS/MS分析；整套系统为串联EASY-nLC 1200系统的轨道阱质谱仪；总共上样3μL，以120min梯度分离：5％溶液丁至35％溶液丁；柱流量控制在200nL/min，电喷雾电压2kV；
轨道阱质谱仪在数据依赖采集模式下运行，自动在MS和MS/MS采集间切换；质谱参数设置如下：(1)MS：扫描范围(m/z)：350–1500；分辨率：120,000；AGC target：4e5；最大注入时间：50ms；动态排除时间：30s；(2)HCD-MS/MS：分辨率：15,000；AGC target＝5e4；最大注入时间：35ms；碰撞能量：32；
原始数据通过Spectronaut X(Biognosys AG)合并分析搜库，数据库使用Uniprot或提供的数据库，另外同时搜索污染序列库，以判断样本是否存在污染，设置胰蛋白酶酶解；搜库参数：固定修饰：脲甲基化，可变修饰：蛋氨酸氧化；母离子和肽段水平的假阳性率(FDR)都设置为1％；
各样品加入30μL溶液丙制成悬浮液，取出9μL加入1μL 10×iRT肽段，混合后用纳米液相色谱分离，经在线电喷雾串联质谱分析；整套实验系统为串联EASY-nLC 1200系统的轨道阱质谱仪；总共上样3μL，以120min梯度分离：5％溶液丁至35％溶液丁；柱流量控制在200nL/min，电喷雾电压2kV；
质谱参数设置如下：(1)MS:扫描范围(m/z)：350–1500；分辨率：120,000；AGCtarget：4e6；最大注入时间：50ms；(2)HCD-MS/MS：分辨率：30,000；AGC target：1e6；碰撞能量：32；能量增加：5％；(3)可变窗口采集，设置了60个窗口，设置重叠串口，每个窗口重叠1m/z；
步骤D、蛋白质定性定量分析
采用QuiC(Biognosys)软件对原始质谱数据进行质控后，运用Pulsar软件对DDA采集模式得到的数据进行建库，建库鉴定标准为：前体阈值1.0％FDR，蛋白质阈值1.0％FDR，用于后续DIA数据的定性分析；
步骤E、差异表达蛋白质筛选
以相对定量值差异倍数的绝对值＞2.0倍，并且Student′s t-test qvalue(检测Q值)<0.05筛选差异表达蛋白质。
优选的，所述的步骤A中，本专利所述的睾丸组织来自性成熟前(3月龄)和性成熟后(1岁龄)2个关键发育时期具有相似遗传背景(同父异母)的雄性藏绵羊；
优选的，所述的步骤B中，所述的裂解液，由以下成分组成：7M尿素，2％SDS，0.1％PMSF和65mMDTT。
优选的，所述的步骤C中，所述的缓冲液甲，由以下成分组成：20mM甲酸铵水溶液，pH＝10.0。
优选的，所述的步骤C中，所述的溶液乙，由以下成分组成：80％ACN中加入20mM甲酸铵，氨水调节至pH 10.0。
优选的，所述的步骤C中，所述的溶液丙为0.1％甲酸水溶液。
优选的，所述的步骤C中，所述的溶液丁为0.1％甲酸乙腈溶液。
本发明的有益之处在于：本发明选取3月龄和1岁龄藏绵羊睾丸组织，运用常规DDA质谱检测技术分析并建立图谱数据库，随后采用DIA方法进行质谱数据采集，并对样品中的蛋白质进行定性定量分析，从而获得藏绵羊睾丸中的差异表达蛋白质。利用该方法可实现对藏绵羊睾丸差异表达蛋白的定量筛选，这对于后续从蛋白质组学角度研究在高海拔条件下藏绵羊睾丸发育或精子发生的分子机制提供了十分重要的理论基础。
具体实施方式
实施例1：
一种基于DIA技术挖掘性成熟前后藏绵羊睾丸差异蛋白质的方法，包括以下步骤：
步骤A、组织收集
所述的步骤A中，本专利所述的睾丸组织来自性成熟前(3月龄)和性成熟后(1岁龄)2个关键发育时期具有相似遗传背景(同父异母)的雄性藏绵羊；羊屠宰后，取出睾丸组织，用PBS清洗外部血渍并剥除白膜后，将其剪成0.5cm×0.5cm×0.5cm的小组织快，迅速冻存于液氮中用于蛋白样本的制备；
步骤B、蛋白样本制备
向睾丸组织中加入裂解液(7M尿素，2％SDS，0.1％PMSF，65mMDTT)，超声裂解；4℃，14000rpm条件下离心30min后，吸取上清液，用BCA蛋白定量法测定蛋白浓度；取50μg蛋白质稀释至50μL，随后加入1M DTT 1μL，在55℃孵育1h；加入1M碘乙酰胺(IAA)5μL，室温避光1h；加入300μL预冷的丙酮沉淀2h，沉淀用胰蛋白酶酶解过夜；
步骤C、建立谱图数据库
将所有酶解后的肽段混合物溶解于缓冲液甲(20mM甲酸铵水溶液，pH＝10.0)中，用Ultimate 3000系统连接反向柱进行高pH反向分离，分离使用线性梯度，40min内5％溶液乙至45％溶液乙(溶液乙:80％ACN中加入20mM甲酸铵，氨水调节至pH 10.0)；柱子在初始条件下平衡15min，柱流速维持在1mL/min，柱温维持在30℃；收集到6个部分，各个部分在真空浓缩仪中干燥；将除盐冻干后的肽段重溶于溶液丙(溶液丙:0.1％甲酸水溶液)后经由配备在线纳喷离子源的LC-MS/MS分析；整套系统为串联EASY-nLC 1200系统的轨道阱质谱仪；总共上样3μL，以120min梯度分离：5％溶液丁至35％溶液丁(溶液丁:0.1％甲酸乙腈溶液)；柱流量控制在200nL/min，电喷雾电压2kV；
轨道阱质谱仪在数据依赖采集模式下运行，自动在MS和MS/MS采集间切换；质谱参数设置如下：(1)MS：扫描范围(m/z)：350–1500；分辨率：120,000；AGC target：4e5；最大注入时间：50ms；动态排除时间：30s；(2)HCD-MS/MS：分辨率：15,000；AGC target＝5e4；最大注入时间：35ms；碰撞能量：32；
原始数据通过Spectronaut X(Biognosys AG)合并分析搜库，数据库使用Uniprot或提供的数据库，另外同时搜索污染序列库，以判断样本是否存在污染，设置胰蛋白酶酶解；搜库参数：固定修饰：Carbamidomethyl(C)，可变修饰：methionine氧化；母离子和肽段水平的假阳性率(FDR)都设置为1％；
各样品加入30μL溶液丙(溶液丙：0.1％甲酸水溶液)制成悬浮液，取出9μL加入1μL10×iRT肽段，混合后用nano-LC分离，经在线电喷雾串联质谱分析；整套实验系统为串联EASY-nLC 1200系统的轨道阱质谱仪；总共上样3μL，以120min梯度分离：5％溶液丁至35％溶液丁(溶液丁:0.1％甲酸乙腈溶液)；柱流量控制在200nL/min，电喷雾电压2kV；
质谱参数设置如下：(1)MS:扫描范围(m/z)：350–1500；分辨率：120,000；AGCtarget：4e6；最大注入时间：50ms；(2)HCD-MS/MS：分辨率：30,000；AGC target：1e6；碰撞能量：32；能量增加：5％；(3)可变窗口采集，设置了60个窗口，设置重叠串口，每个窗口重叠1m/z；
步骤D、蛋白质定性定量分析
采用QuiC(Biognosys)软件对原始质谱数据进行质控后，运用Pulsar软件对DDA采集模式得到的数据进行建库，建库鉴定标准为：Precursor Threshold 1.0％FDR，ProteinThreshold 1.0％FDR，用于后续DIA数据的定性分析；
步骤E、差异表达蛋白质筛选
以在3月龄和1岁龄两组间鉴定到的蛋白质相对定量值差异倍数的绝对值＞2.0倍，并且Student′s t-test qvalue<0.05的标准筛选差异表达蛋白质。
与3月龄(性成熟前)组相比，性成熟后藏绵羊睾丸中共鉴定到3719个差异表达蛋白，其中1295个蛋白表达上调，2424个蛋白表达下调。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.一种基于DIA技术挖掘性成熟前后藏绵羊睾丸差异蛋白质的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤A、组织收集
羊屠宰后，取出睾丸组织，用PBS清洗外部血渍并剥除白膜后，将其剪成0.5cm×0.5cm×0.5cm的小组织快，迅速冻存于液氮中用于蛋白样本的制备；
步骤B、蛋白样本制备
向睾丸组织中加入裂解液，超声裂解；4℃，14000rpm条件下离心25-35min后，吸取上清液，用BCA蛋白定量法测定蛋白浓度；取50μg蛋白质稀释至50 μL，随后加入1M DTT 1μL，在55℃孵育50-75min；加入1M碘乙酰胺IAA5μL，室温避光50-75min；加入300μL预冷的丙酮沉淀105-140min，沉淀用胰蛋白酶酶解过夜；
步骤C、建立谱图数据库
将所有酶解后的肽段混合物溶解于缓冲液甲中，缓冲液甲为20mM甲酸铵水溶液，pH=10.0， 用Ultimate 3000系统连接反向柱进行高pH反向分离，分离使用线性梯度，40min 内5% 溶液乙至45% 溶液乙；柱子在初始条件下平衡15min，柱流速维持在1mL/min，柱温维持在30℃；收集到6个部分，各个部分在真空浓缩仪中干燥；将除盐冻干后的肽段重溶于溶液丙中，后经由配备在线纳喷离子源的LC-MS/MS分析；整套系统为串联EASY-nLC 1200系统的轨道阱质谱仪；总共上样3μL，以120 min梯度分离：5%溶液丁至35%溶液丁；柱流量控制在200 nL/min，电喷雾电压2 kV；
轨道阱质谱仪在数据依赖采集模式下运行，自动在MS和MS/MS采集间切换；质谱参数设置如下：(1) MS：扫描范围m/z：350–1500；分辨率：120,000；AGC target：4e5；最大注入时间：50 ms；动态排除时间：30 s； (2)HCD-MS/MS：分辨率：15,000；AGC target=5e4；最大注入时间：35 ms；碰撞能量：32；
原始数据通过Spectronaut X合并分析搜库，数据库使用Uniprot或提供的数据库，另外同时搜索污染序列库，以判断样本是否存在污染，设置胰蛋白酶酶解；搜库参数：固定修饰：脲甲基化，可变修饰：蛋氨酸氧化；母离子和肽段水平的假阳性率FDR都设置为1%；
各样品加入30μL 溶液丙制成悬浮液，取出9 μL加入1 μL 10×iRT肽段，混合后用纳米液相色谱分离，经在线电喷雾串联质谱分析；整套实验系统为串联EASY-nLC 1200系统的轨道阱质谱仪；总共上样3 μL，以120 min梯度分离：5%溶液丁至35%溶液丁；柱流量控制在200nL/min，电喷雾电压2 kV；
质谱参数设置如下：(1) MS: 扫描范围m/z：350–1500；分辨率：120,000; AGC target：4e6; 最大注入时间：50 ms；(2) HCD-MS/MS：分辨率：30,000；AGC target：1e6；碰撞能量：32；能量增加：5%；(3)可变窗口采集，设置了60个窗口，设置重叠窗口，每个窗口重叠1m/z；
步骤D、蛋白质定性定量分析
采用QuiC软件对原始质谱数据进行质控后，运用Pulsar软件对DDA采集模式得到的数据进行建库，建库鉴定标准为：前体阈值1.0% FDR，蛋白质阈值1.0% FDR，用于后续DIA数据的定性分析；
步骤E、差异表达蛋白质筛选
以相对定量值差异倍数的绝对值＞2.0倍，并且Student′s t-test qvalue（检测Q值）<0.05筛选差异表达蛋白质；
所述的步骤A中，睾丸组织来自性成熟前和性成熟后2个关键发育时期具有相似遗传背景的雄性藏绵羊；
所述的步骤B中，所述的裂解液，由以下成分组成：7M尿素，2% SDS，0.1%PMSF和65mMDTT;
所述的步骤C中，所述的缓冲液甲，由以下成分组成：20mM甲酸铵水溶液，pH=10.0；
所述的步骤C中，所述的溶液乙，由以下成分组成：80% ACN 中加入20mM 甲酸铵，氨水调节至pH 10.0；
所述的步骤C中，所述的溶液丙为0.1%甲酸水溶液；
所述的步骤C中，所述的溶液丁为0.1%甲酸乙腈溶液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910665529.8A CN110398558B (zh) | 2019-07-23 | 2019-07-23 | 基于dia技术挖掘性成熟前后藏绵羊睾丸差异蛋白质的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910665529.8A CN110398558B (zh) | 2019-07-23 | 2019-07-23 | 基于dia技术挖掘性成熟前后藏绵羊睾丸差异蛋白质的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110398558A CN110398558A (zh) | 2019-11-01 |
| CN110398558B true CN110398558B (zh) | 2022-04-01 |
Family
ID=68325720
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910665529.8A Active CN110398558B (zh) | 2019-07-23 | 2019-07-23 | 基于dia技术挖掘性成熟前后藏绵羊睾丸差异蛋白质的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110398558B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114354733B (zh) * | 2021-12-31 | 2022-11-25 | 北京大学 | 基于dia的定量化学蛋白质组学筛选靶标的方法 |
| CN115327016B (zh) * | 2022-08-24 | 2024-03-01 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种烟草原生质体蛋白质组的提取和检测方法 |
| CN115856112B (zh) * | 2022-11-08 | 2024-05-24 | 吉林大学 | 基于dia技术探究和分析不同民族人乳中差异蛋白的方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014098712A (ja) * | 2007-09-11 | 2014-05-29 | Cancer Prevention And Cure Ltd | ヒト肺組織の病態を示すヒト血清中のタンパク質の同定 |
| CN105467022A (zh) * | 2014-09-05 | 2016-04-06 | 天士力制药集团股份有限公司 | 一种与神经元损伤相关的差异表达蛋白的分析方法 |
| CN106916217A (zh) * | 2017-03-17 | 2017-07-04 | 华南农业大学 | 应用iTRAQ技术研究弓形虫慢性感染小鼠脑组织差异表达蛋白质组的方法 |
| CN108398494A (zh) * | 2018-02-02 | 2018-08-14 | 塔里木大学 | 新疆多浪羊不同生理时期繁殖相关蛋白的筛选与鉴定方法 |
| CN108627585A (zh) * | 2018-05-28 | 2018-10-09 | 天津大学 | 基于iTRAQ蛋白组学识别D-乳酸发酵过程中显著差异表达蛋白的方法 |
| CN109613253A (zh) * | 2018-11-03 | 2019-04-12 | 杭州市农业科学研究院 | 利用dda-dia交替采集定量筛选红颊草莓柱头差异蛋白的方法 |
| CN109946413A (zh) * | 2019-03-26 | 2019-06-28 | 西湖大学 | 脉冲式数据非依赖性采集质谱检测蛋白质组的方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2348187T3 (es) * | 2007-10-05 | 2010-12-01 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Amplificacion proteomica de pequeñas moleculas que se unen a proteinas celulares diana. |
| CN102507937A (zh) * | 2011-09-27 | 2012-06-20 | 中国人民解放军第四军医大学 | 一种基于生精细胞特异性单克隆抗体筛选和鉴定肿瘤/睾丸抗原的方法 |
| WO2013064555A1 (en) * | 2011-11-02 | 2013-05-10 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Method for predicting the presence of reproductive cells in testis |
-
2019
- 2019-07-23 CN CN201910665529.8A patent/CN110398558B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014098712A (ja) * | 2007-09-11 | 2014-05-29 | Cancer Prevention And Cure Ltd | ヒト肺組織の病態を示すヒト血清中のタンパク質の同定 |
| CN105467022A (zh) * | 2014-09-05 | 2016-04-06 | 天士力制药集团股份有限公司 | 一种与神经元损伤相关的差异表达蛋白的分析方法 |
| CN106916217A (zh) * | 2017-03-17 | 2017-07-04 | 华南农业大学 | 应用iTRAQ技术研究弓形虫慢性感染小鼠脑组织差异表达蛋白质组的方法 |
| CN108398494A (zh) * | 2018-02-02 | 2018-08-14 | 塔里木大学 | 新疆多浪羊不同生理时期繁殖相关蛋白的筛选与鉴定方法 |
| CN108627585A (zh) * | 2018-05-28 | 2018-10-09 | 天津大学 | 基于iTRAQ蛋白组学识别D-乳酸发酵过程中显著差异表达蛋白的方法 |
| CN109613253A (zh) * | 2018-11-03 | 2019-04-12 | 杭州市农业科学研究院 | 利用dda-dia交替采集定量筛选红颊草莓柱头差异蛋白的方法 |
| CN109946413A (zh) * | 2019-03-26 | 2019-06-28 | 西湖大学 | 脉冲式数据非依赖性采集质谱检测蛋白质组的方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| High throughput and accurate serum proteome profiling by integrated sample preparation technology and single-run data independent mass spectrometry analysis;Lin Lin et al.;《Journal of Proteomics》;20181231;第174卷;第9-16页 * |
| High-precision iRT prediction in the targeted analysis of data-independent acquisition and its impact on identification and quantitation;Roland Bruderer et al.;《Proteomics》;20161231;第16卷;第2246–2256页 * |
| 牦牛卵巢Label-free蛋白组学分析及相关蛋白在生殖系统的表达;陈虹;《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(博士)农业科技辑》;20181025(第10期);第17-18页 * |
| 藏药多血康胶囊对HAPC模型大鼠蛋白质表达影响的作用机制研究;赵可惠;《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士)医药卫生科技辑》;20190115(第12期);第46页 * |
| 颅内生殖细胞肿瘤患者脑脊液差异蛋白组学研究;周翔;《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(博士)医药卫生科技辑》;20171115(第11期);第22、25-28页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110398558A (zh) | 2019-11-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110398558B (zh) | 基于dia技术挖掘性成熟前后藏绵羊睾丸差异蛋白质的方法 | |
| CN109060989B (zh) | 应用iTRAQ技术研究三阴性乳腺癌外泌体差异表达蛋白的方法 | |
| DE60109490T2 (de) | Umgekehrtes labelierungsverfahren zur schnellen identifikation von marker/ziel-proteinen | |
| CN113176361B (zh) | 一种蜂花粉致敏蛋白的鉴定方法及应用 | |
| CN111272889B (zh) | 基于蛋白质组学定量技术分析嗜水气单胞菌感染日本沼虾血细胞差异表达蛋白质的方法 | |
| Zhao et al. | imFASP: an integrated approach combining in-situ filter-aided sample pretreatment with microwave-assisted protein digestion for fast and efficient proteome sample preparation | |
| Hnilica et al. | Fractionation and analysis of nuclear proteins in sea urchin embryos | |
| CN107064338B (zh) | 一种基于iTRAQ标记测定烟碱诱导细胞差异表达蛋白质的方法 | |
| CN108226317B (zh) | 一种基于细胞层面进行全蛋白质组学分析的方法 | |
| CN111060696B (zh) | 一种降低植物小分子信号肽假阳性率的方法 | |
| CN109900814B (zh) | 基于糖苷键质谱可碎裂型化学交联剂的分析方法及应用 | |
| CN111220679B (zh) | 基于化学交联质谱解析的质膜蛋白质相互作用的鉴定方法 | |
| CN113687002A (zh) | 一种排除样本异质性及高丰度干扰能力的质控方法 | |
| CN112816287A (zh) | 一种磷酸化蛋白质富集和分析方法 | |
| Qin et al. | A new strategy of studying protein–protein interactions: Integrated strong anion exchange/reversed‐phase chromatography/immunoprecipitation coupled with mass spectrometry for large‐scale identification of proteins interact with immunoglobulin G in HeLa cells | |
| CN112458082A (zh) | 快速一步法核酸提取试剂及其制备方法 | |
| JP7203407B2 (ja) | 質量分析用のペプチド試料の調製方法 | |
| CN112924693B (zh) | 一种上清和沉淀协同定量的蛋白质热稳定性分析方法 | |
| CN104833738A (zh) | 一种酶解蛋白质的方法 | |
| CN114106109B (zh) | 一种细胞质靶向的rna结合蛋白富集试剂及其制备方法及应用 | |
| CN113527410B (zh) | 基于金属钛离子亲和色谱的核酸-蛋白复合物提取方法 | |
| Chen et al. | Protocol for Site-Specific Photo-Crosslinking Proteomics to Identify Protein-Protein Interactions in Mammalian Cells | |
| CN118047830A (zh) | 一种富集泛素化蛋白质的方法 | |
| CN116448915A (zh) | 阿胶中的特征多肽和小分子代谢物同步快速分析的方法 | |
| CN114646764A (zh) | 一种arhgap35蛋白在猪x和y精子鉴定或分离中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Li Taotao Inventor after: Ma Youji Inventor after: Wang Xia Inventor after: Zhang Hongyu Inventor before: Ma Youji Inventor before: Li Taotao Inventor before: Wang Xia Inventor before: Zhang Hongyu |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |