CN110373495A - 用于鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度的引物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了用于鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度的引物及其应用，属于茄子种植技术领域，所述引物包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：1)提取‘丰宝’茄子杂交种的父本、母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA；2)以基因组DNA为模板，用所述的引物进行PCR扩增获得扩增产物；3)对扩增产物进行电泳，根据电泳条带确定所述待鉴定的杂交种样品是否为纯杂交种；4)用鉴定为纯杂交种的待鉴定杂交样品数量除以待鉴定杂交种样品的总数量获得杂交种子的纯度。本发明提供的应用，快速、准确。
Description
技术领域
本发明属于茄子种植技术领域，尤其涉及用于鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度的引物及其应用。
背景技术
茄子是亚洲、中欧、南欧和非洲重要的农作物，拥有极高的经济价值。目前，茄子制种主要采用去雄制种技术，如果去雄不彻底或开花去雄，都会导致生产上繁制的茄子种子纯度不合格，因此杂交种子在销售之前必须进行纯度鉴定。传统上杂交种纯度鉴定主要采用田间种植，不仅耗费大量时间，空间，人力，物力，鉴定技术还依靠个人的经验；费事费力还不准确。落后的杂交种子纯度鉴定方法在一定程度上影响了种子的销售速度。
现有的分子技术可以作为纯度鉴定的有SSR、SNP，InDel标记等，但是SNP，Indel标记都是基于双亲重测序的基础上，成本较高，不利于普通杂交种子的鉴定工作。
目前，对于‘丰宝’茄子杂交种子纯度的鉴定尚没有一种高效、准确的引物以及鉴定方法。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度的引物及其应用；所述引物能够快速、准确地鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种用于鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度的引物，包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
本发明提供了所述的引物在鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度中的应用。
所述的应用，优选的包括以下步骤：
1)提取‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA；
2)分别以步骤1)中提取的‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA为模板，用所述的引物进行PCR扩增，获得杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定杂交种样品的扩增产物；
3)对步骤2)中获得的杂交种的父本、母本以及待鉴定杂交种样品的扩增产物进行电泳，若杂交种的父本扩增产物显示为一条带、杂交种的母本的扩增产物显示为一条带，待鉴定的杂交种样品的扩增产物显示为两条带，并且分别与杂交种的父本和杂交种母本的扩增产物显示的条带对应，则认为所述待鉴定的杂交种样品为纯杂交种；
4)用鉴定为纯杂交种的待鉴定杂交样品数量除以待鉴定杂交种样品的总数量获得杂交种子的纯度。
优选的，步骤1)中所述‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA的提取组织为幼苗子叶。
优选的，所述基因组DNA的提取方法如下：分别将‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的幼苗子叶破碎后，固液分离，收集上清液即为基因组DNA。
优选的，所述破碎为将所述幼苗子叶、研磨珠和1×TPS提取液混合后，以2500～3500rpm的转速涡旋震荡破碎。
优选的，所述固液分离的方式为离心，所述离心的转速为11000～13000rpm，所述离心的时间为8～12min。
优选的，步骤2)中所述PCR扩增的体系，以10μL计，包括以下组分：
优选的，步骤2)中所述PCR扩增的程序如下：
94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃保持7min。
优选的，步骤3)中所述的电泳的电压为115～125V，所述电泳的时间为80～100min。
本发明的有益效果：本发明提供的用于鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度的引物，所述引物能够扩增‘丰宝’茄子父本、母本共显性差异标记条带；所述共显性差异标记扩增的带型清晰、重复性好；所述引物扩增能产生母本特异性标记和父本特异性标记；利用本发明提供的方法进行杂交种子纯度的鉴定，能够将杂交种子与其父母本种子进行有效区分，用时短、结果准确，一天内可以出鉴定结果，常规的田间鉴定则需要2～3个月时间，本发明所述的应用极大的提高了‘丰宝’茄子杂交种子纯度的鉴定效率。
附图说明
图1为本发明提供的引物扩增‘丰宝’茄子父本和母本获得的特异性条带；
图2为实施例2的部分电泳结果图片。
具体实施方式
本发明提供了一种用于鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度的引物，包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：TGTGGAATCAAGAGAATCTA，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示：CATCAGAAATGAAACCTTCAT。
本发明提供了所述的引物在鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度中的应用。
在本发明中，所述应用优选的包括以下步骤：1)提取‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA；2)分别以步骤1)中提取的丰宝茄子’杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA为模板，用所述的引物进行PCR扩增，获得杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定杂交种样品的扩增产物；3)对步骤2)中获得的杂交种的父本、母本以及待鉴定杂交种样品的扩增产物进行电泳，若杂交种的父本扩增产物显示为一条带、杂交种的母本的扩增产物显示为一条带，待鉴定的杂交种样品的扩增产物显示为两条带，并且分别与杂交种的父本和杂交种母本的扩增产物显示的条带对应，则认为所述待鉴定的杂交种样品为纯杂交种；4)用鉴定为纯杂交种的待鉴定杂交样品数量除以待鉴定杂交种样品的总数量获得杂交种子的纯度。
在本发明中，首先提取‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA。在本发明中，所述‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA的提取组织优选为幼苗子叶。在本发明具体实施过程中，所述基因组DNA的提取方法优选如下：分别将‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的幼苗子叶破碎后，固液分离，收集上清液即为基因组DNA。在本发明中，所述破碎优选为将所述幼苗子叶、研磨珠和1×TPS提取液混合后，以2500～3500rpm的转速涡旋震荡破碎。在本发明中，剪取幼苗子叶的大小优选为3～5mm×10mm；上述大小的幼苗子叶对应的1×TPS提取液的体积优选为200～500μL，更优选为500μL；在本发明中，优选的将所述幼苗子叶、研磨珠和1×TPS提取液置于离心管中进行涡旋震荡，优选的每一个离心管中放置一个研磨珠。本发明中，所述涡旋震荡的转速优选为3000rpm，所述涡旋震荡使用的仪器优选为涡旋震荡仪。在本发明中，所述固液分离的方式优选为离心，所述离心的转速优选为11000～13000rpm，更优选为12000rpm，所述离心的时间优选为8～12min，更优选为10min。
本发明在获得所述基因组DNA后，分别以提取的丰宝茄子’杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA为模板，用所述的引物进行PCR扩增，获得杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定杂交种样品的扩增产物。在本发明中，所述PCR扩增的体系，以10μL计，优选的包括以下组分：基因组DNA 1μL，上游引物1μL，下游引物1μL，TP-link Mix 5μL，ddH2O 2μL。所述PCR扩增的程序优选的如下：94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃保持7min。
本发明在所述PCR扩增结束后，对获得的杂交种的父本、母本以及待鉴定杂交种样品的扩增产物进行电泳。在本发明中，所述电泳的凝胶优选为双垂直非变性浓度为8％的聚丙烯酰胺凝胶；所述的电泳的电压优选为115～125V，更优选为120V；所述电泳的时间优选为80～100min，更优选为90min。本发明在所述电泳结束后，优选的进行银染、显色和拍照；所述银染优选为用0.1wt％的AgNO3溶液银染15min；所述显色用的试剂优选的包括以下浓度的组分：2wt％NaOH、0.4wt％甲醛和0.04wt％Na2CO3。
本发明在所述电泳后，观察电泳条带；若杂交种的父本扩增产物显示为一条带、杂交种的母本的扩增产物显示为一条带，待鉴定的杂交种样品的扩增产物显示为两条带，并且分别与杂交种的父本和杂交种母本的扩增产物显示的条带对应，则认为所述待鉴定的杂交种样品为纯杂交种；若所述待鉴定的杂交种样品的扩增产物不满足上述条件，则为非纯杂交种。本发明在具体实施过程中，用鉴定为纯杂交种的待鉴定杂交样品数量除以待鉴定杂交种样品的总数量获得杂交种子的纯度。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
1、筛选纯度鉴定的SSR引物。
从所公布的茄子SSR引物在亲本间进行筛选，选出共显性差异标记条带的一对引物序列如下所示：
FBF:TGTGGAATCAAGAGAATCTA；
FBR:CATCAGAAATGAAACCTTCAT
2、利用上述特异性引物对杂交茄子‘丰宝’种子进行纯度鉴定。
(1)茄子DNA的快速提取
实验材料为茄子‘丰宝’商品种及其母本P1长茄、父本P2子叶DNA。
步骤如下：
①茄子幼苗子叶展开时，用剪刀剪取3～5mm×3～5mm叶片置于96孔PCR板中，加研磨珠和50μL(1×TPS)提取液，在涡旋仪(3000rpm)上震动破碎。
②12000rpm离心10min，取上清液1μL作为PCR模板。
(2)PCR扩增：
PCR体系(10μL)
PCR扩增程序:
94℃预变性5min后；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环后；72℃保持7min，然后置于4℃保存待检测。
(3)凝胶电泳
扩增产物在双垂直非变性浓度为8％的聚丙烯酰胺凝胶上电泳，120V稳压1.5h，电泳结束后进行0.1wt％AgNO3银染15min；银染后用2wt％NaOH、0.4wt％甲醛、0.04wt％Na2CO3显色，显色后在灯箱上拍照分析。
(4)扩增结果
扩增结果见图1，其中M为marker，a为母本P1扩增出的特异性条带141bp，b为父本P2扩增出特异性条带153bp；(见图1)
回收特异条带，送上海生工测序。条带的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示，杂交种子中与父本、母本扩增产物的序列相符其中，加粗序列为差异序列。
a条带序列为:
b条带序列为：
实施例2
采用实施例1的方法对制种基地提供的‘丰宝’1份样本Q1进行种子纯度鉴定，样本Q1共46株，对其单株进行编号，提取单株基因组DNA进行检测，结果表明样本Q1中的46株同时包含两亲本条带为纯杂交种子，种子纯度为100％，与田间调查结果一致，准确率为100％(结果如图2所示)。
实施例3
采用实施例1的方法，对公司制种部提高的3份‘丰宝’茄子杂交种样本进行检测结果如表1。
表13份‘丰宝’茄子杂交种样本杂交种子纯度鉴定结果
经过检测，该公司制种部提供的杂种纯度Q2/Q3纯度均在60％以下，均达不到销售标准，说明在制种过程中存在一定的问题，种子及时处理，避免给农民造成经济损失。
本发明提供的鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度的方法，比田间纯度鉴定快了2～3个月，不经能够加快公司推广力度，同时也能让公司提前了解种子纯度，安排制种计划。
以上实施例表明，本发明的方法可将‘丰宝’杂交种子与其父母本种子进行有效区分，一天内可以出结果；快速、精准，极大提高鉴定效率。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 广东省农业科学院蔬菜研究所
<120> 用于鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度的引物及其应用
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 1
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<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 2
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<210> 3
<211> 141
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 4
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cttcaagctc tccagctcca gctccagctc cagctccagc tccagctcca gctccagctc 120
cagattcagc ttcaaagatg aagtttgact taa 153
Claims (10)
1.一种用于鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度的引物，其特征在于，包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQID NO.2所示。
2.权利要求1所述的引物在鉴定‘丰宝’茄子杂交种子纯度中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：
1)提取‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA；
2)分别以步骤1)中提取的丰宝茄子’杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA为模板，用权利要求1中所述的引物进行PCR扩增，获得杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定杂交种样品的扩增产物；
3)对步骤2)中获得的杂交种的父本、母本以及待鉴定杂交种样品的扩增产物进行电泳，若杂交种的父本扩增产物显示为一条带、杂交种的母本的扩增产物显示为一条带，待鉴定的杂交种样品的扩增产物显示为两条带，并且分别与杂交种的父本和杂交种母本的扩增产物显示的条带对应，则认为所述待鉴定的杂交种样品为纯杂交种；
4)用鉴定为纯杂交种的待鉴定杂交样品数量除以待鉴定杂交种样品的总数量获得杂交种子的纯度。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤1)中所述‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的基因组DNA的提取组织为幼苗子叶。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述基因组DNA的提取方法如下：分别将‘丰宝’茄子杂交种的父本、杂交种的母本以及待鉴定的杂交种样品的幼苗子叶破碎后，固液分离，收集上清液即为基因组DNA。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述破碎为将所述幼苗子叶、研磨珠和1×TPS提取液混合后，以2500～3500rpm的转速涡旋震荡破碎。
7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述固液分离的方式为离心，所述离心的转速为11000～13000rpm，所述离心的时间为8～12min。
8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤2)中所述PCR扩增的体系，以10μL计，包括以下组分：
9.根据权利要求3或8所述的应用，其特征在于，步骤2)中所述PCR扩增的程序如下：
94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃保持7min。
10.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤3)中所述的电泳的电压为115～125V，所述电泳的时间为80～100min。
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Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070180582A1 (en) * | 2003-05-07 | 2007-08-02 | Byung-Dong Kim | Dna fragment specific to cytoplasmic male sterile pepper and use thereof |
| CN101017151A (zh) * | 2007-02-09 | 2007-08-15 | 南京农业大学 | 一种基于pcr技术的番茄杂交种纯度检测方法 |
| US20090165166A1 (en) * | 2007-12-19 | 2009-06-25 | Monsanto Technology Llc | Method to enhance yield and purity of hybrid crops |
| CN101712998A (zh) * | 2009-11-03 | 2010-05-26 | 上海交通大学 | 基于srap标记的茄子亲缘关系的检测方法 |
| CN104830839A (zh) * | 2015-05-25 | 2015-08-12 | 天津科润农业科技股份有限公司蔬菜研究所 | 一种茄子单粒种子dna快速提取用于杂交种纯度鉴定的方法 |
| WO2016067284A1 (en) * | 2014-10-28 | 2016-05-06 | Equi-Nom Ltd. | Production of hybrid seeds lot using natural pollination |
| CN108660247A (zh) * | 2018-05-24 | 2018-10-16 | 武汉市农业科学院 | 一种基于SNP标记的紫龙三号茄子纯度鉴定的引物SmemboI-2及应用 |
| CN109207626A (zh) * | 2018-10-31 | 2019-01-15 | 宁夏泰金种业股份有限公司 | 一种番茄杂交种纯度的InDel标记及鉴定方法 |
-
2019
- 2019-09-03 CN CN201910827646.XA patent/CN110373495A/zh active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070180582A1 (en) * | 2003-05-07 | 2007-08-02 | Byung-Dong Kim | Dna fragment specific to cytoplasmic male sterile pepper and use thereof |
| CN101017151A (zh) * | 2007-02-09 | 2007-08-15 | 南京农业大学 | 一种基于pcr技术的番茄杂交种纯度检测方法 |
| US20090165166A1 (en) * | 2007-12-19 | 2009-06-25 | Monsanto Technology Llc | Method to enhance yield and purity of hybrid crops |
| CN101712998A (zh) * | 2009-11-03 | 2010-05-26 | 上海交通大学 | 基于srap标记的茄子亲缘关系的检测方法 |
| WO2016067284A1 (en) * | 2014-10-28 | 2016-05-06 | Equi-Nom Ltd. | Production of hybrid seeds lot using natural pollination |
| CN104830839A (zh) * | 2015-05-25 | 2015-08-12 | 天津科润农业科技股份有限公司蔬菜研究所 | 一种茄子单粒种子dna快速提取用于杂交种纯度鉴定的方法 |
| CN108660247A (zh) * | 2018-05-24 | 2018-10-16 | 武汉市农业科学院 | 一种基于SNP标记的紫龙三号茄子纯度鉴定的引物SmemboI-2及应用 |
| CN109207626A (zh) * | 2018-10-31 | 2019-01-15 | 宁夏泰金种业股份有限公司 | 一种番茄杂交种纯度的InDel标记及鉴定方法 |
Non-Patent Citations (9)
| Title |
|---|
| KUMAR等: "Identification and validation of informative SSR markers suitable for ensuring the genetic purity of brinjal (Solanum melongena L.) hybrid seeds", 《SCIENTIA HORTICULTURAE》 * |
| 刘军等: "茄子杂交品种种子纯度的SSR分子标记鉴定", 《分子植物育种》 * |
| 张敏等: "SSR分子标记技术在茄子杂交种子纯度鉴定中的应用", 《湖北农业科学》 * |
| 李倩等: "两个茄子品种纯度SSR鉴定与田间检测分析", 《分子植物育种》 * |
| 林师森等: "海南冬季反季节茄子引种试验", 《热带生物学报》 * |
| 温武东等: "惠州市无公害茄子标准化生产技术规程", 《广东农业科学》 * |
| 王利英等: "茄子SSR多态性引物的筛选及品种纯度鉴定", 《华北农学报》 * |
| 王艳娜等: "利用SSR分子标记技术鉴定和分析茄子杂种F_1的纯度", 《南方农业学报》 * |
| 肖熙鸥等: "茄子种质资源的ISSR遗传多样性分析", 《华南农业大学学报》 * |
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