CN110342991A - 来源于发酵冬虫夏草的有机肥 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种来源于发酵冬虫夏草的有机肥,所述有机肥由下述制备步骤得到:(1)将冬虫夏草相关菌属或/和附属菌属菌种无菌接入摇瓶培养基中,培养;(2)将摇瓶菌种接入一级种子罐中,培养;(3)将一级种子罐中的全部菌种物料转移至二级种子罐,培养,扩增种子罐菌种量;(4)将菌种无菌接入终端发酵罐中,并进行补料;(5)将发酵液或进行固液分离。本发明解决了冬虫夏草类发酵菌丝体发酵过程中大量的发酵液的处理问题,解决了常规冬虫夏草相关发酵产生的发酵液不能直接应用与有机肥的问题,直接生产获得优良的有机肥或有机肥原料。
Description
技术领域
本发明涉及一种有机肥,具体而言,涉及一种利用冬虫夏草的发酵液生产的有机肥。
背景技术
冬虫夏草的发酵生产是基于模拟野生冬虫夏草的生长环境和条件,采用人工液体发酵的方式生产与野生冬虫夏草成分、功能相近似的发酵冬虫夏草菌丝及产品,用以替代野生冬虫夏草,保护相关自然资源。使用发酵罐营造野生冬虫夏草生长环境,如温度、空气等;使用无危害原料制备培养基取代野生冬虫夏草生长过程中的宿主蝙蝠蛾幼虫,提供真菌生长所需营养;最终获得菌丝体在最大程度上保留野生冬虫夏草的所有组分。但经人工培养发酵后的菌丝体所占比重小,其余成分则以发酵上清液形式作为废液经处理排入环境。经检测,虫草发酵液(指发酵结束后剩余上清液)的COD、BOD5、SS等均远超排放指标,致使虫草发酵液的污水处理方式繁杂、成本高、污染重。
传统有机肥的生产集中的方法为:EM堆腐法、发酵催熟堆腐法、工厂化无害化处理三种。其中前两种周期长,发酵过程基本在室外生产过程中,生产过程中有毒有害气体较多,且有臭味污染环境。第三种的生产过程汇总需要进行脱臭和消毒,此外需要额外的无机物如如磷矿粉、白云石和云母粉等的再添加。现有有机肥的生产技术简介如下:
1)EM堆腐法:肥料堆内温度升到45℃~50℃时翻动一次。一般要翻动3~4次才能完成。一般夏天要7~15天才能处理好,春天要15~25天,冬天则更长。肥料中水分过多会使堆肥失败,产生恶臭味。各地要根据具体条件,反复试验、摸索才行。可控性不强,而且质量不稳地,成分不均一。
2)发酵催熟堆腐法:购买EM原液或自己制作发酵催熟粉。发酵催熟粉的制备(是在60摄氏度以上的温度下发酵30~50天。然后用黑炭粉或沸石粉按1:1重量的比例,进行掺和稀释,仔细搅拌均匀即成,周期长导致成本升高。当具备催熟粉后,采用堆肥方法进行有机肥的制备,具体方法为:堆积10天后可进行第一次翻混,第一次翻混后10天,进行第二次翻混,再过10天后,第三次翻混时,之后不再翻混,等待后熟。后熟一般需3~5天,最多10天即可。后熟完成,堆肥即制成,生产周期较长。
3)工厂化无害化处理:先把粪便收集集中,然后进行脱水,然后把脱过水的粪便输送到一个专门蒸汽消毒房内,经20~30分钟消毒,杀死全部的虫卵、杂草种子及有害的病菌等。消毒房内装有脱臭塔除臭,臭气通过塔内排出。然后将脱臭和消毒的粪便,配上必要的天然矿物,进行造粒,再烘干,即成有机肥料。选址严格,否者运输过程中臭味较大。
经查阅,现有报道多是集中于虫草菌丝体的各类利用上,对虫草发酵液的综合利用技术则鲜有报道。在仅有的文献、期刊、报道中的利用基本局限于进行二次配伍进行保健品生产,例如:
将虫草发酵液浓缩干燥后与菌丝体共同或单独药用;
将虫草发酵液直接应用于菌粉清膏;
将虫草发酵液提取有效成分后药用;
将虫草发酵液添加某些营养成分或中药材后制成滋补保健饮料或营养保健品,如浙江瑞安酵母厂罗南楷等已成功地用深层发酵液生产出保健饮料,陈萍等以虫草菌丝体发酵液为原料,佐以人参、党参、枸杞和何首乌等天然原料,研制成多功能饮料元生宝营养口服液。
对于发酵液进行肥料方面的开发没有相关文献、报道,仅有的与之相似的处理为如下:
将虫草发酵液作为饲料酵母生产的原料,如把发酵废液综合利用起来作为热带假丝酵母、产朊假丝酵母等饲料酵母生产的原料资源;
将虫草发酵液经过一定处理制备成二次发酵的培养液培育微生物,如哈茨木霉、蝉拟青霉等;
将虫草发酵液经过一定处理,添加特定的营养物质后按照特定比例返回培养基循环利用。
目前,对冬虫夏草发酵液的处理:
1)将虫草发酵液提取有效成分后药用,这一过程技术成本高,提取成分后仍会有残液没有充分利用,难以做到资源利用的最大化,不可避免会对环境造成二次污染;
2)虫草发酵液相比菌丝体产量大,而将其作为保健饮料和食品添加剂,需求量少,难以完全消化生产虫草菌丝体所产生的大量发酵液,造成二次浪费;
3)虫草发酵液作为饲料酵母生产原料、制备成二次发酵培养基培育微生物以及返回培养基循环利用,从能量守恒和发酵液有效期的角度上来说,其利用具有一定时限性,最终仍需排放,不可避免会有资源浪费和环境污染的困扰。
常规发酵生产的发酵液,因只关注于菌丝体这一产物的收率和质量标准,上清液成分残留不合理,且次级代谢产物不足,不能直接应用于转化有机肥,处理不当甚至造成土壤二次污染。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是:提供一种来源于发酵冬虫夏草的有机肥,从根本上解决冬虫夏草发酵液造成的环境污染和资源利用率低的问题,本发明,一方面解决了冬虫夏草发酵菌丝体发酵过程中大量的发酵液的处理问题,另一方面是对发酵工艺进行导向控制,增加了专用的基础培养基和补料培养基配方及专用的调控工艺,在产出合格菌丝体同时,产生的发酵液能够直接满足有机肥原料的质量标准,解决了常规发酵冬虫夏草发酵生产所得上清液不满足有机肥条件,不能直接应用于有机肥方向的问题。
本发明提供的技术方案是:一种来源于发酵冬虫夏草的有机肥,所述有机肥由下述制备步骤得到:
(1)制备液体培养基,装入摇瓶中并灭菌备用,将冬虫夏草相关菌属或/和附属菌属菌种无菌接入摇瓶培养基中,在14~30℃条件下培养2~15天;其中,摇瓶培养基配方:蚕蛹粉5~25g/L、葡萄糖13~30g/L、玉米粉5~20g/L、蛋白胨5~18g/L、酵母浸粉2~10g/L、蚕豆粉0~25g/L、玉米浆0~25g/L、麸皮10~30g/L、硫酸镁0.01~3g/L、磷酸氢二钾0.01~3g/L,其余为水;
(2)制备液体培养基,装入种子罐中并灭菌备用,将步骤(1)中培养好的摇瓶菌种无菌接入一级种子罐中,在14~30℃条件下培养2~10天,菌浓达标即可转入下一级种子罐;其中,种子罐培养基配方:蚕蛹粉5~25g/L、葡萄糖13~30g/L、玉米粉5~20g/L、蛋白胨5~18g/L、酵母浸粉2~10g/L、蚕豆粉0~25g/L、玉米浆0~25g/L、麸皮0~30g/L、硫酸镁0.01~3g/L、磷酸氢二钾0.01~3g/L,其余为水;
(3)将步骤(2)中一级种子罐中的全部物料通过管道无菌转移至装有培养基的二级种子罐,种子罐培养基与步骤(2)相同,在14~30℃条件下培养2~10天,如此反复扩增种子罐菌种量,扩增时接种比,即种子量:接种后总量≥3%;
(4)制备液体培养基,装入终端发酵罐中并灭菌备用,将步骤(3)中培养好的种子罐菌种无菌接入终端发酵罐中,在14~30℃条件下培养2~10天,在发酵过程中按照每日1~2次取样频率进行日常监控取样,检测总氨基酸、生化黄腐酸、菌干重浓度指标,根据不同菌种工艺要求,在2~8天进行发酵补料,补料培养基主要以常规碳源和氮源为主,并额外增加植物源物料,保障菌丝正常生长的前提下,大量表达产出黄腐酸、腐殖酸产物,根据目标用途选择相关指标满足标准时即可停止发酵进行发酵放罐,获得含有大量腐殖酸、黄腐酸满足有机肥质量指标的上清液,可直接应用于有机肥行业;其中,终端发酵罐培养基配方:蚕蛹粉5~25g/L、葡萄糖13~30g/L、玉米粉5~20g/L、蛋白胨5~18g/L、酵母浸粉2~10g/L、蚕豆粉0~25g/L、玉米浆0~25g/L、麸皮0~30g/L、硫酸镁0.01~3g/L、磷酸氢二钾0.01~3g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水;
(5)将步骤(4)中的发酵罐发酵液或进行固液分离,固体进入烘干设备进行烘干,液体则直接灌装包装或浓缩或干燥;或直接均质;或额外调配制备特殊用途有机肥。
所述的有机肥,优选地,步骤(1)中所述的冬虫夏草相关菌属和附属菌属菌种为中国被毛孢(Hirsutella sinensis)、蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali Q.T.Chen﹠ R.Q.Dai)、虫草头孢 (Cephalosporium sinensis Chen)(nom. nud.裸名)、蝙蝠蛾被孢霉(Mortierella hepiali C.T. Chen & B. Liu )及粉红胶霉(粉红粘帚霉)(Gliocladium roseum Bainier)中的一种或多种;更为优选,所述的冬虫夏草相关菌属和附属菌属菌种为中国被毛孢(Hirsutella sinensis)、蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali Q.T.Chen﹠ R.Q.Dai)及粉红胶霉(粉红粘帚霉)(Gliocladium roseum Bainier)中的一种或多种。
所述的有机肥,步骤(4)中,按照补料后总体积核算,所述补料培养基配方:蚕蛹粉0~25g/L、葡萄糖13~30g/L、玉米粉5~20g/L、麸皮0~30g/L、小麦粉0~15g/L、高粱米粉0~16g/L、秸秆粉0~16g/L、蛋白胨0~18g/L、酵母浸粉2~10g/L、蚕豆粉0~25g/L、玉米浆0~25g/L、硫酸镁0.01~3g/L、磷酸氢二钾0.01~3g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。
所述的有机肥,优选地,步骤(1)中,所述摇瓶培养基配方:蚕蛹粉8g/L、葡萄糖20g/L、玉米粉7.5g/L、蛋白胨10g/L、蚕豆粉4g/L、玉米浆2g/L、麸皮25g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.02g/L,其余为水。
本发明用到的发酵培养基原料广泛,目前经实验测试确认后:葡萄糖、玉米粉、玉米浆、小麦粉、高梁米粉、秸秆粉、土豆汁、酵母浸粉、废弃牛奶、黄豆饼粉、糖蜜、麸皮、蚕蛹粉、黄粉虫幼虫、蝉蛹、蛋白胨、氯化钠、氯化镁、硫酸镁、氯化锰、氯化钾、氯化钙、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸钠盐、磷酸锌盐、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸锌、氯化锌、钼酸铵、硼酸盐等非污染重金属无机盐中的一种或多种均可。
本发明具有以下有益效果:
本发明一方面解决了冬虫夏草发酵菌丝体发酵过程中大量的发酵液的处理问题,另一方面是对发酵工艺进行导向控制,在产出合格菌丝体同时,产生的发酵液能够直接满足有机肥原料的质量标准。在此生产过中采用单一或多种无害菌种,获得产物无需经过灭菌即可直接用于有机肥制备或土壤直接使用,无需灭菌则不会产生灭菌二次营养破坏。中国被毛孢发酵过程中吸收培养基营养产生菌丝体过程中,同时产生大量有利于土壤的成分,例如腐殖酸、黄腐酸等一些代谢产物。且不同于常规有机肥生产工艺中多种微生物大量分解使用营养物质,此发酵过程中土壤有益成分随菌丝体生长也在不断积累。发酵过程采用先进的控制设备和方法、统一的标准物料和稳定的菌种,所得发酵上清液腐殖酸、氨基酸等成分稳定,批次产品均一,质量可控稳定。稳定的有机肥产品有助于在土壤施肥使用时定量投入、精细化作用土壤,降低肥料乱投乱用、过量使用等对土壤造成破坏。
因此,本发明有机肥生产过程无臭气、有毒有害气体产生,生产便捷方便,用时少且质量可控易达到自动化生产模式;生产过程是无菌生产环境,无需后工序灭菌,保证了有机肥的营养成分;固定生产模式,工艺条件以及工艺参数为确定的,排除人为干扰,使得产品质量均一稳定,具有更强的使用指导性。本发明有机肥可作为液体有机肥使用;可进行一生产多产出,降低物料浪费、能源消耗、人力消耗等多方面,可达到资源利用最大化。整体优势远大于常规的有机肥生产技术。
具体实施方式
下面通过具体实施方式的详细描述来进一步阐明本发明,但并不是对本发明的限制,仅仅作示例说明。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法,所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
实施例1:
本发明来源于发酵冬虫夏草的有机肥的生产工艺流程如下:
1、根据工艺要求称量物料,培养基配方:蚕蛹粉5.5/L、葡萄糖14/L、玉米粉6/L、蛋白胨6.5/L、蚕豆粉1g/L、玉米浆1.5g/L、麸皮12g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,其余为水。制备液体培养基装摇瓶中并灭菌备用。将中国被毛孢菌种(Hirsutella sinensis)无菌接入摇瓶培养基中,根据菌种工艺特性要求,在15℃条件下培养10天。
2、根据种子罐工艺要求称量物料,培养基配方:蚕蛹粉5.5g/L、葡萄糖14g/L、玉米粉6g/L、蛋白胨6.5g/L、酵母浸粉2.5g/L、蚕豆粉1g/L、玉米浆1.5g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,其余为水。制备液体培养基装种子罐中并灭菌备用。将培养好的摇瓶菌种无菌接入1级种子罐中,根据菌种工艺特性要求,在15℃条件下培养9天。菌丝干重浓度≥7g/L即可转入下一级种子罐。
3、转罐时经管道灭菌后,将一级种子罐中的全部物料通过管道无菌转移至装有培养基的二级种子罐,种子罐培养基与步骤2相同,根据菌种工艺特性要求,在15℃条件下培养9天。如此反复扩增种子罐菌种量,根据工艺产量要求,可设计配套种子罐扩增代次。扩增时接种比(即种子量:接种后总量)应≥5%。
4、制备液体培养基,终端发酵罐培养基配方:蚕蛹粉5.5g/L、葡萄糖14g/L、玉米粉6g/L、蛋白胨6.5g/L、酵母浸粉2.5g/L、蚕豆粉1g/L、玉米浆1.5g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,其余为水。装入终端发酵罐中并灭菌备用,将步骤(3)中培养好的种子罐菌种无菌接入终端发酵罐中。根据菌种工艺特性要求,在第5天进行发酵补料,补料培养基不同于原有发酵要求主要以常规碳源和氮源为主,并额外增加植物源物料,保障菌丝正常生长的前提下,大量表达产出黄腐酸、腐殖酸等产物。补料培养基配方(按照补料后总体积核算,浓配补料培养基):蚕蛹粉5g/L、葡萄糖10g/L、玉米粉6g/L、麸皮5g/L、小麦粉3g/L、高粱米粉3g/L、秸秆粉2.5g/L、蛋白胨6.5g/L、酵母浸粉2g/L、玉米浆1g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。其中,培养基制备经过专用的培养基多步制备技术,形成液体培养基才可使用。在15℃条件下培养约10天,在发酵过程中按照每日1次取样频率进行日常监控取样,检测还原糖、氨基氮、溶磷、上清液总氨基酸、腐殖酸、生化黄腐酸及菌干重浓度指标。当生化黄腐酸≥20g/L、菌干重浓度≥18g/L即可停止发酵进行发酵放罐,获得含有大量腐殖酸、黄腐酸等满足有机肥质量指标的上清液,可直接应用于有机肥行业;
5、将发酵罐发酵液进行固液分离,固体进入烘干设备进行烘干,液体则直接灌装包装或浓缩或干燥等;或直接均质;或额外调配等制备特殊用途有机肥。
实施例2:
本发明来源于发酵冬虫夏草的有机肥的生产工艺流程如下:
1、根据工艺要求称量物料,培养基配方:蚕蛹粉10g/L、葡萄糖21g/L、玉米粉11g/L、蛋白胨10.5g/L、蚕豆粉10g/L、玉米浆12g/L、麸皮21g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,其余为水。制备液体培养基装摇瓶中并灭菌备用。将中国被毛孢菌种(Hirsutella sinensis)无菌接入摇瓶培养基中,根据不同菌种工艺特性,在17℃条件下培养10天。
2、根据种子罐工艺要求称量物料,培养基配方:蚕蛹粉10g/L、葡萄糖21g/L、玉米粉11g/L、蛋白胨10.5g/L、酵母浸粉5.5g/L、蚕豆粉10g/L、玉米浆12g/L、麸皮21g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,其余为水。制备液体培养基装种子罐中并灭菌备用。将培养好的摇瓶菌种无菌接入1级种子罐中,根据菌种工艺特性要求,在17℃条件下培养8天。菌干重浓度≥8g/L即可转入下一级种子罐。
3、转罐时经管道灭菌后,将一级种子罐中的全部物料通过管道无菌转移至装有培养基的二级种子罐,种子罐培养基与步骤2相同,根据不同菌种工艺特性,在17℃条件下培养8天。如此反复扩增种子罐菌种量,根据工艺产量要求,可设计配套种子罐扩增代次。扩增时接种比(即种子量:接种后总量)应≥5%。
4、制备液体培养基,终端发酵罐培养基配方:蚕蛹粉10g/L、葡萄糖21g/L、玉米粉11g/L、蛋白胨10.5g/L、酵母浸粉5.5g/L、蚕豆粉10g/L、玉米浆12g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,其余为水。装入终端发酵罐中并灭菌备用,将步骤(3)中培养好的种子罐菌种无菌接入终端发酵罐中。根据菌种工艺特性要求,在第5天进行发酵补料,补料培养基不同于原有发酵要求主要以常规碳源和氮源为主,并额外增加植物源物料,保障菌丝正常生长的前提下,大量表达产出黄腐酸、腐殖酸等产物。补料培养基配方(按照补料后总体积核算,浓配补料培养基):蚕蛹粉8g/L、葡萄糖17g/L、玉米粉10g/L、麸皮12g/L、小麦粉5g/L、高粱米粉5g/L、秸秆粉6.5g/L、蛋白胨9g/L、酵母浸粉5.5g/L、玉米浆16g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。其中,培养基制备经过专用的培养基多步制备技术,形成液体培养基才可使用。在17℃条件下培养约10天,在发酵过程中按照每日1次取样频率进行日常监控取样,检测还原糖、氨基氮、溶磷、上清液总氨基酸、腐殖酸、生化黄腐酸及菌干重浓度指标。当生化黄腐酸≥20g/L、菌干重浓度≥18g/L即可停止发酵进行发酵放罐,获得含有大量腐殖酸、黄腐酸等满足有机肥质量指标的上清液,可直接应用于有机肥行业。
5、将发酵罐发酵液进行固液分离,固体进入烘干设备进行烘干,液体则直接灌装包装或浓缩或干燥等;或直接均质;或额外调配等制备特殊用途有机肥。
实施例3:
本发明来源于发酵冬虫夏草的有机肥的生产工艺流程如下:
1、根据工艺要求称量物料,培养基配方:蚕蛹粉24g/L、葡萄糖28g/L、玉米粉18g/L、蛋白胨17g/L、蚕豆粉22g/L、玉米浆23g/L、麸皮27.5g/L、硫酸镁2.4g/L、磷酸氢二钾2.4g/L,其余为水。制备液体培养基装摇瓶中并灭菌备用。将中国被毛孢菌种(Hirsutella sinensis)无菌接入摇瓶培养基中,根据菌种工艺特性要求,在20℃条件下培养8天。
2、根据种子罐工艺要求称量物料,培养基配方:蚕蛹粉24g/L、葡萄糖28g/L、玉米粉18g/L、蛋白胨17g/L、酵母浸粉9g/L、蚕豆粉22g/L、玉米浆23g/L、麸皮27.5g/L、硫酸镁2.4g/L、磷酸氢二钾2.4g/L,其余为水。制备液体培养基装种子罐中并灭菌备用。将培养好的摇瓶菌种无菌接入1级种子罐中,根据菌种工艺特性要求,在20℃条件下培养8天。菌干重浓度≥8g/L即可转入下一级种子罐。
3、转罐时经管道灭菌后,将一级种子罐中的全部物料通过管道无菌转移至装有培养基的二级种子罐,种子罐培养基与步骤2相同,根据不同菌种工艺特性,在20℃条件下培养8天不等。如此反复扩增种子罐菌种量,根据工艺产量要求,可设计配套种子罐扩增代次。扩增时接种比(即种子量:接种后总量)应≥5%。
4、制备液体培养基,终端发酵罐培养基配方:蚕蛹粉24g/L、葡萄糖28g/L、玉米粉18g/L、蛋白胨17g/L、酵母浸粉9g/L、蚕豆粉22g/L、玉米浆23g/L、硫酸镁2.4g/L、磷酸氢二钾2.4g/L,其余为水。装入终端发酵罐中并灭菌备用,将步骤(3)中培养好的种子罐菌种无菌接入终端发酵罐中。根据菌种工艺特性要求,在第5天进行发酵补料,补料培养基不同于原有发酵要求主要以常规碳源和氮源为主,并额外增加植物源物料,保障菌丝正常生长的前提下,大量表达产出黄腐酸、腐殖酸等产物。补料培养基配方(按照补料后总体积核算,浓配补料培养基):蚕蛹粉16g/L、葡萄糖25g/L、玉米粉15g/L、麸皮19g/L、小麦粉8g/L、高粱米粉8g/L、秸秆粉9g/L、蛋白胨16g/L、酵母浸粉8g/L、玉米浆20g/L、硫酸镁2g/L、磷酸氢二钾2g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。其中,培养基制备经过专用的培养基多步制备技术,形成液体培养基才可使用。在18℃条件下培养约10天,在发酵过程中按照每日1次取样频率进行日常监控取样,检测还原糖、氨基氮、溶磷、上清液总氨基酸、腐殖酸、生化黄腐酸及菌干重浓度指标。当生化黄腐酸≥20g/L、菌干重浓度≥18g/L即可停止发酵进行发酵放罐,获得含有大量腐殖酸、黄腐酸等满足有机肥质量指标的上清液,可直接应用于有机肥行业。
5、将发酵罐发酵液进行固液分离,固体进入烘干设备进行烘干,液体则直接灌装包装或浓缩或干燥等;或直接均质;或额外调配等制备特殊用途有机肥。
实施例4:
本发明来源于发酵冬虫夏草的有机肥的生产工艺流程如下:
1、根据工艺要求称量物料,培养基配方:蚕蛹粉8g/L、葡萄糖20g/L、玉米粉7.5g/L、蛋白胨10g/L、蚕豆粉4g/L、玉米浆2g/L、麸皮25g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.02g/L,其余为水。制备液体培养基装摇瓶中并灭菌备用。将中国被毛孢菌种(Hirsutella sinensis)无菌接入摇瓶培养基中,根据不同菌种工艺特性,在18℃条件下培养8天。
2、根据种子罐工艺要求称量物料,培养基配方:蚕蛹粉8g/L、葡萄糖25g/L、玉米粉7.5g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉2.5g/L、蚕豆粉3g/L、玉米浆5g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.02g/L,其余为水。制备液体培养基装种子罐中并灭菌备用。将培养好的摇瓶菌种无菌接入1级种子罐中,根据菌种工艺特性要求,在18℃条件下培养6天。菌干重浓度≥8g/L即可转入下一级种子罐。
3、转罐时经管道灭菌后,将一级种子罐中的全部物料通过管道无菌转移至装有培养基的二级种子罐,种子罐培养基与步骤2相同,根据不同菌种工艺特性,在18℃条件下培养6天。如此反复扩增种子罐菌种量,根据工艺产量要求,可设计配套种子罐扩增代次。扩增时接种比(即种子量:接种后总量)应≥5%。
4、制备液体培养基,终端发酵罐培养基配方:蚕蛹粉8g/L、葡萄糖25g/L、玉米粉7.5g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉2.5g/L、蚕豆粉3g/L、玉米浆5g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.02g/L,其余为水。装入终端发酵罐中并灭菌备用,将步骤(3)中培养好的种子罐菌种无菌接入终端发酵罐中。根据菌种工艺特性要求,在第5天进行发酵补料,补料培养基不同于原有发酵要求主要以常规碳源和氮源为主,并额外增加植物源物料,保障菌丝正常生长的前提下,大量表达产出黄腐酸、腐殖酸等产物。补料培养基配方(按照补料后总体积核算,浓配补料培养基):蚕蛹粉8g/L、葡萄糖20g/L、玉米粉7.5g/L、麸皮10g/L、小麦粉4g/L、高粱米粉5g/L、秸秆粉5.6g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉2.5g/L、玉米浆4g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.02g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。其中,培养基制备经过专用的培养基多步制备技术,形成液体培养基才可使用。在18℃条件下培养约8天,在发酵过程中按照每日1次取样频率进行日常监控取样,检测还原糖、氨基氮、溶磷、上清液总氨基酸、腐殖酸、生化黄腐酸及菌干重浓度指标。当生化黄腐酸≥20g/L、菌干重浓度≥18g/L即可停止发酵进行发酵放罐,获得含有大量腐殖酸、黄腐酸等满足有机肥质量指标的上清液,可直接应用于有机肥行业;
5、将发酵罐发酵液进行固液分离,固体进入烘干设备进行烘干,液体则直接灌装包装或浓缩或干燥等;或直接均质;或额外调配等制备特殊用途有机肥。
实施例5
本发明来源于发酵冬虫夏草的有机肥的生产工艺流程如下:
1、根据工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖14g/L、玉米粉6g/L、蛋白胨6.5g/L、蚕豆粉8g/L、玉米浆4g/L、麸皮12g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,其余为水。制备液体培养基装摇瓶中并灭菌备用。将蝙蝠蛾拟青霉菌种(Paecilomyces hepiali Q.T.Chen﹠ R.Q.Dai)无菌接入摇瓶培养基中,根据菌种工艺特性要求,在20℃条件下培养3天。
2、根据种子罐工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖14g/L、玉米粉6g/L、蛋白胨6.5g/L、酵母浸粉2.5g/L、蚕豆粉8g/L、玉米浆4g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,其余为水。制备液体培养基装种子罐中并灭菌备用。将培养好的摇瓶菌种无菌接入1级种子罐中,根据菌种工艺特性要求,在20℃条件下培养3天。菌丝干重浓度≥8g/L即可转入下一级种子罐。
3、转罐时经管道灭菌后,将一级种子罐中的全部物料通过管道无菌转移至装有培养基的二级种子罐,种子罐培养基与步骤2相同,根据菌种工艺特性要求,在20℃条件下培养3天。如此反复扩增种子罐菌种量,根据工艺产量要求,可设计配套种子罐扩增代次。扩增时接种比(即种子量:接种后总量)应≥5%。
4、制备液体培养基,终端发酵罐培养基配方:葡萄糖14g/L、玉米粉6g/L、蛋白胨6.5g/L、酵母浸粉2.5g/L、蚕豆粉8g/L、玉米浆4g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,其余为水。装入终端发酵罐中并灭菌备用,将步骤(3)中培养好的种子罐菌种无菌接入终端发酵罐中。根据菌种工艺特性要求,在第2天进行发酵补料,补料培养基不同于原有发酵要求主要以常规碳源和氮源为主,并额外增加植物源物料,保障菌丝正常生长的前提下,大量表达产出黄腐酸、腐殖酸等产物。补料培养基配方(按照补料后总体积核算,浓配补料培养基):葡萄糖10g/L、玉米粉6g/L、麸皮5g/L、小麦粉3g/L、高粱米粉3g/L、秸秆粉2.5g/L、蛋白胨6.5g/L、酵母浸粉2g/L、玉米浆2g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。其中,培养基制备经过专用的培养基多步制备技术,形成液体培养基才可使用。在20℃条件下培养约4天,在发酵过程中按照每12h一次取样频率进行日常监控取样,检测还原糖、氨基氮、溶磷、上清液总氨基酸、腐殖酸、生化黄腐酸及菌干重浓度指标。当生化黄腐酸≥25g/L、菌干重浓度≥18g/L即可停止发酵进行发酵放罐,获得含有大量腐殖酸、黄腐酸等满足有机肥质量指标的上清液,可直接应用于有机肥行业;
5、将发酵罐发酵液进行固液分离,固体进入烘干设备进行烘干,液体则直接灌装包装或浓缩或干燥等;或直接均质;或额外调配等制备特殊用途有机肥。
实施例6:
本发明来源于发酵冬虫夏草的有机肥的生产工艺流程如下:
1、根据工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖22/L、玉米粉10/L、蛋白胨12/L、蚕豆粉12g/L、玉米浆8g/L、麸皮20g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,其余为水。制备液体培养基装摇瓶中并灭菌备用。将蝙蝠蛾拟青霉菌种无菌接入摇瓶培养基中,根据不同菌种工艺特性,在22℃条件下培养3天。
2、根据种子罐工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖22g/L、玉米粉10g/L、蛋白胨12g/L、酵母浸粉5g/L、蚕豆粉12g/L、玉米浆8g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,其余为水。制备液体培养基装种子罐中并灭菌备用。将培养好的摇瓶菌种无菌接入1级种子罐中,根据菌种工艺特性要求,在22℃条件下培养3天。菌丝干重浓度≥8g/L即可转入下一级种子罐。
3、转罐时经管道灭菌后,将一级种子罐中的全部物料通过管道无菌转移至装有培养基的二级种子罐,种子罐培养基与步骤2相同,根据菌种工艺特性要求,在22℃条件下培养3天。如此反复扩增种子罐菌种量,根据工艺产量要求,可设计配套种子罐扩增代次。扩增时接种比(即种子量:接种后总量)应≥5%。
4、制备液体培养基,终端发酵罐培养基配方:葡萄糖22g/L、玉米粉10g/L、蛋白胨12g/L、酵母浸粉5g/L、蚕豆粉12g/L、玉米浆8g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,其余为水。装入终端发酵罐中并灭菌备用,将步骤(3)中培养好的种子罐菌种无菌接入终端发酵罐中。根据菌种工艺特性要求,在第2天进行发酵补料,补料培养基不同于原有发酵要求主要以常规碳源和氮源为主,并额外增加植物源物料,保障菌丝正常生长的前提下,大量表达产出黄腐酸、腐殖酸等产物。补料培养基配方(按照补料后总体积核算,浓配补料培养基):葡萄糖18g/L、玉米粉10g/L、麸皮8g/L、小麦粉5g/L、高粱米粉5g/L、秸秆粉6g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉5g/L、玉米浆8g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。其中,培养基制备经过专用的培养基多步制备技术,形成液体培养基才可使用。在22℃条件下培养约4天,在发酵过程中按照每12h一次取样频率进行日常监控取样,检测还原糖、氨基氮、溶磷、上清液总氨基酸、腐殖酸、生化黄腐酸及菌干重浓度指标。当生化黄腐酸≥25g/L、菌干重浓度≥18g/L即可停止发酵进行发酵放罐,获得含有大量腐殖酸、黄腐酸等满足有机肥质量指标的上清液,可直接应用于有机肥行业;
5、将发酵罐发酵液进行固液分离,固体进入烘干设备进行烘干,液体则直接灌装包装或浓缩或干燥等;或直接均质;或额外调配等制备特殊用途有机肥。
实施例7:
本发明来源于发酵冬虫夏草的有机肥的生产工艺流程如下:
1、根据工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖30/L、玉米粉16/L、蛋白胨15/L、蚕豆粉14g/L、玉米浆12g/L、麸皮30g/L、硫酸镁0.8g/L、磷酸氢二钾0.8g/L,其余为水。制备液体培养基装摇瓶中并灭菌备用。将蝙蝠蛾拟青霉菌种(Paecilomyces hepiali Q.T.Chen﹠ R.Q.Dai)无菌接入摇瓶培养基中,根据不同菌种工艺特性,在25℃条件下培养3天。
2、根据种子罐工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖30g/L、玉米粉16g/L、蛋白胨15g/L、酵母浸粉10g/L、蚕豆粉18g/L、玉米浆12g/L、硫酸镁0.8g/L、磷酸氢二钾0.8g/L,其余为水。制备液体培养基装种子罐中并灭菌备用。将培养好的摇瓶菌种无菌接入1级种子罐中,根据菌种工艺特性要求,在25℃条件下培养3天。菌丝干重浓度≥8g/L即可转入下一级种子罐。
3、转罐时经管道灭菌后,将一级种子罐中的全部物料通过管道无菌转移至装有培养基的二级种子罐,种子罐培养基与步骤2相同,根据菌种工艺特性要求,在25℃条件下培养3天。如此反复扩增种子罐菌种量,根据工艺产量要求,可设计配套种子罐扩增代次。扩增时接种比(即种子量:接种后总量)应≥5%。
4、制备液体培养基,终端发酵罐培养基配方:葡萄糖30g/L、玉米粉16g/L、蛋白胨15g/L、酵母浸粉10g/L、蚕豆粉18g/L、玉米浆12g/L、硫酸镁0.8g/L、磷酸氢二钾0.8g/L,其余为水。装入终端发酵罐中并灭菌备用,将步骤(3)中培养好的种子罐菌种无菌接入终端发酵罐中。根据菌种工艺特性要求,在第2天进行发酵补料,补料培养基不同于原有发酵要求主要以常规碳源和氮源为主,并额外增加植物源物料,保障菌丝正常生长的前提下,大量表达产出黄腐酸、腐殖酸等产物。补料培养基配方(按照补料后总体积核算,浓配补料培养基):葡萄糖28g/L、玉米粉15g/L、麸皮12g/L、小麦粉8g/L、高粱米粉8g/L、秸秆粉9g/L、蛋白胨16g/L、酵母浸粉8g/L、玉米浆12g/L、硫酸镁0.8g/L、磷酸氢二钾0.8g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。其中,培养基制备经过专用的培养基多步制备技术,形成液体培养基才可使用。在25℃条件下培养约4天,在发酵过程中按照每12h一次取样频率进行日常监控取样,检测还原糖、氨基氮、溶磷、上清液总氨基酸、腐殖酸、生化黄腐酸及菌干重浓度指标。当生化黄腐酸≥25g/L、菌干重浓度≥18g/L即可停止发酵进行发酵放罐,获得含有大量腐殖酸、黄腐酸等满足有机肥质量指标的上清液,可直接应用于有机肥行业;
5、将发酵罐发酵液进行固液分离,固体进入烘干设备进行烘干,液体则直接灌装包装或浓缩或干燥等;或直接均质;或额外调配等制备特殊用途有机肥。
实施例8:
本发明来源于发酵冬虫夏草的有机肥的生产工艺流程如下:
1、根据工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖25/L、玉米粉13/L、蛋白胨10/L、蚕豆粉10g/L、玉米浆6g/L、麸皮26g/L、硫酸镁0.02g/L、磷酸氢二钾0.04g/L,其余为水。制备液体培养基装摇瓶中并灭菌备用。将蝙蝠蛾拟青霉菌种(Paecilomyces hepiali Q.T.Chen﹠ R.Q.Dai)无菌接入摇瓶培养基中,根据不同菌种工艺特性,在24℃条件下培养3天。
2、根据种子罐工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖25g/L、玉米粉13g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉5g/L、蚕豆粉10g/L、玉米浆6g/L、硫酸镁0.02g/L、磷酸氢二钾0.02g/L,其余为水。制备液体培养基装种子罐中并灭菌备用。将培养好的摇瓶菌种无菌接入1级种子罐中,根据菌种工艺特性要求,在24℃条件下培养3天。菌丝干重浓度≥8g/L即可转入下一级种子罐。
3、转罐时经管道灭菌后,将一级种子罐中的全部物料通过管道无菌转移至装有培养基的二级种子罐,种子罐培养基与步骤2相同,根据菌种工艺特性要求,在24℃条件下培养3天。如此反复扩增种子罐菌种量,根据工艺产量要求,可设计配套种子罐扩增代次。扩增时接种比(即种子量:接种后总量)应≥5%。
4、制备液体培养基,终端发酵罐培养基配方:葡萄糖25g/L、玉米粉13g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉5g/L、蚕豆粉10g/L、玉米浆6g/L、硫酸镁0.02g/L、磷酸氢二钾0.02g/L,其余为水。装入终端发酵罐中并灭菌备用,将步骤(3)中培养好的种子罐菌种无菌接入终端发酵罐中。根据菌种工艺特性要求,在第2天进行发酵补料,补料培养基不同于原有发酵要求主要以常规碳源和氮源为主,并额外增加植物源物料,保障菌丝正常生长的前提下,大量表达产出黄腐酸、腐殖酸等产物。补料培养基配方(按照补料后总体积核算,浓配补料培养基):葡萄糖22g/L、玉米粉10g/L、麸皮14g/L、小麦粉5g/L、高粱米粉5g/L、秸秆粉4.5g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉5g/L、玉米浆7g/L、硫酸镁0.02g/L、磷酸氢二钾0.02g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。其中,培养基制备经过专用的培养基多步制备技术,形成液体培养基才可使用。在24℃条件下培养约4天,在发酵过程中按照每12h一次取样频率进行日常监控取样,检测还原糖、氨基氮、溶磷、上清液总氨基酸、腐殖酸、生化黄腐酸及菌干重浓度指标。当生化黄腐酸≥25g/L、菌干重浓度≥18g/L即可停止发酵进行发酵放罐,获得含有大量腐殖酸、黄腐酸等满足有机肥质量指标的上清液,可直接应用于有机肥行业。
5、将发酵罐发酵液进行固液分离,固体进入烘干设备进行烘干,液体则直接灌装包装或浓缩或干燥等;或直接均质;或额外调配等制备特殊用途有机肥。
实施例9
本发明来源于发酵冬虫夏草的有机肥的生产工艺流程如下:
1、根据工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖14/L、玉米粉6/L、蛋白胨6.5/L、黄豆粉8g/L、玉米浆4g/L、麸皮12g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,其余为水。制备液体培养基装摇瓶中并灭菌备用。将粉红胶霉菌种无菌接入摇瓶培养基中,根据菌种工艺特性要求,在19℃条件下培养4天。
2、根据种子罐工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖14g/L、玉米粉6g/L、蛋白胨6.5g/L、酵母浸粉2.5g/L、黄豆粉8g/L、玉米浆4g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,其余为水。制备液体培养基装种子罐中并灭菌备用。将培养好的摇瓶菌种无菌接入1级种子罐中,根据菌种工艺特性要求,在19℃条件下培养4天。菌丝干重浓度≥10g/L即可转入下一级种子罐。
3、转罐时经管道灭菌后,将一级种子罐中的全部物料通过管道无菌转移至装有培养基的二级种子罐,种子罐培养基与步骤2相同,根据菌种工艺特性要求,在19℃条件下培养4天。如此反复扩增种子罐菌种量,根据工艺产量要求,可设计配套种子罐扩增代次。扩增时接种比(即种子量:接种后总量)应≥5%。
4、制备液体培养基,终端发酵罐培养基配方:葡萄糖14g/L、玉米粉6g/L、蛋白胨6.5g/L、酵母浸粉2.5g/L、黄豆粉8g/L、玉米浆4g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,其余为水。装入终端发酵罐中并灭菌备用,将步骤(3)中培养好的种子罐菌种无菌接入终端发酵罐中。根据菌种工艺特性要求,在第3天进行发酵补料,补料培养基不同于原有发酵要求主要以常规碳源和氮源为主,并额外增加植物源物料,保障菌丝正常生长的前提下,大量表达产出黄腐酸、腐殖酸等产物。补料培养基配方(按照补料后总体积核算,浓配补料培养基):葡萄糖10g/L、玉米粉6g/L、麸皮5g/L、小麦粉3g/L、高粱米粉3g/L、秸秆粉2.5g/L、蛋白胨6.5g/L、酵母浸粉2g/L、玉米浆2g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。其中,培养基制备经过专用的培养基多步制备技术,形成液体培养基才可使用。在19℃条件下培养约6天,在发酵过程中按照每12h一次取样频率进行日常监控取样,检测还原糖、氨基氮、溶磷、上清液总氨基酸、腐殖酸、生化黄腐酸及菌干重浓度指标。当生化黄腐酸≥25g/L、菌干重浓度≥18g/L即可停止发酵进行发酵放罐,获得含有大量腐殖酸、黄腐酸等满足有机肥质量指标的上清液,可直接应用于有机肥行业。
5、将发酵罐发酵液进行固液分离,固体进入烘干设备进行烘干,液体则直接灌装包装或浓缩或干燥等;或直接均质;或额外调配等制备特殊用途有机肥。
实施例10:
本发明来源于发酵冬虫夏草的有机肥的生产工艺流程如下:
1、根据工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖20/L、玉米粉11/L、蛋白胨12/L、黄豆粉12g/L、玉米浆8g/L、麸皮20g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,其余为水。制备液体培养基装摇瓶中并灭菌备用。将粉红胶霉菌种(Gliocladium roseum Bainier)无菌接入摇瓶培养基中,根据不同菌种工艺特性,在21℃条件下培养4天。
2、根据种子罐工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖20g/L、玉米粉11g/L、蛋白胨12g/L、酵母浸粉5g/L、黄豆粉12g/L、玉米浆8g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,其余为水。制备液体培养基装种子罐中并灭菌备用。将培养好的摇瓶菌种无菌接入1级种子罐中,根据菌种工艺特性要求,在21℃条件下培养4天。菌丝干重浓度≥10g/L即可转入下一级种子罐。
3、转罐时经管道灭菌后,将一级种子罐中的全部物料通过管道无菌转移至装有培养基的二级种子罐,种子罐培养基与步骤2相同,根据菌种工艺特性要求,在21℃条件下培养4天。如此反复扩增种子罐菌种量,根据工艺产量要求,可设计配套种子罐扩增代次。扩增时接种比(即种子量:接种后总量)应≥5%。
4、制备液体培养基,终端发酵罐培养基配方:葡萄糖20g/L、玉米粉11g/L、蛋白胨12g/L、酵母浸粉5g/L、黄豆粉12g/L、玉米浆8g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,其余为水。装入终端发酵罐中并灭菌备用,将步骤(3)中培养好的种子罐菌种无菌接入终端发酵罐中。根据菌种工艺特性要求,在第3天进行发酵补料,补料培养基不同于原有发酵要求主要以常规碳源和氮源为主,并额外增加植物源物料,保障菌丝正常生长的前提下,大量表达产出黄腐酸、腐殖酸等产物。补料培养基配方(按照补料后总体积核算,浓配补料培养基):葡萄糖18g/L、玉米粉10g/L、麸皮8g/L、小麦粉5g/L、高粱米粉5g/L、秸秆粉6g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉5g/L、玉米浆8g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。其中,培养基制备经过专用的培养基多步制备技术,形成液体培养基才可使用。在21℃条件下培养约6天,在发酵过程中按照每12h一次取样频率进行日常监控取样,检测还原糖、氨基氮、溶磷、上清液总氨基酸、腐殖酸、生化黄腐酸及菌干重浓度指标。当生化黄腐酸≥25g/L、菌干重浓度≥18g/L即可停止发酵进行发酵放罐,获得含有大量腐殖酸、黄腐酸等满足有机肥质量指标的上清液,可直接应用于有机肥行业。
5、将发酵罐发酵液进行固液分离,固体进入烘干设备进行烘干,液体则直接灌装包装或浓缩或干燥等;或直接均质;或额外调配等制备特殊用途有机肥。
实施例11:
本发明来源于发酵冬虫夏草的有机肥的生产工艺流程如下:
1、根据工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖30/L、玉米粉16/L、蛋白胨15/L、黄豆粉14g/L、玉米浆12g/L、麸皮30g/L、硫酸镁0.8g/L、磷酸氢二钾0.8g/L,其余为水。制备液体培养基装摇瓶中并灭菌备用。将粉红胶霉菌种(Gliocladium roseum Bainier)无菌接入摇瓶培养基中,根据不同菌种工艺特性,在26℃条件下培养4天。
2、根据种子罐工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖30g/L、玉米粉16g/L、蛋白胨15g/L、酵母浸粉10g/L、黄豆粉18g/L、玉米浆12g/L、硫酸镁0.8g/L、磷酸氢二钾0.8g/L,其余为水。制备液体培养基装种子罐中并灭菌备用。将培养好的摇瓶菌种无菌接入1级种子罐中,根据菌种工艺特性要求,在26℃条件下培养4天。菌丝干重浓度≥10g/L即可转入下一级种子罐。
3、转罐时经管道灭菌后,将一级种子罐中的全部物料通过管道无菌转移至装有培养基的二级种子罐,种子罐培养基与步骤2相同,根据菌种工艺特性要求,在26℃条件下培养4天。如此反复扩增种子罐菌种量,根据工艺产量要求,可设计配套种子罐扩增代次。扩增时接种比(即种子量:接种后总量)应≥5%。
4、制备液体培养基,终端发酵罐培养基配方:葡萄糖30g/L、玉米粉16g/L、蛋白胨15g/L、酵母浸粉10g/L、黄豆粉18g/L、玉米浆12g/L、硫酸镁0.8g/L、磷酸氢二钾0.8g/L,其余为水。装入终端发酵罐中并灭菌备用,将步骤(3)中培养好的种子罐菌种无菌接入终端发酵罐中。根据菌种工艺特性要求,在第2天进行发酵补料,补料培养基不同于原有发酵要求主要以常规碳源和氮源为主,并额外增加植物源物料,保障菌丝正常生长的前提下,大量表达产出黄腐酸、腐殖酸等产物。补料培养基配方(按照补料后总体积核算,浓配补料培养基):葡萄糖28g/L、玉米粉15g/L、麸皮12g/L、小麦粉8g/L、高粱米粉8g/L、秸秆粉9g/L、蛋白胨16g/L、酵母浸粉8g/L、玉米浆12g/L、硫酸镁0.8g/L、磷酸氢二钾0.8g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。其中,培养基制备经过专用的培养基多步制备技术,形成液体培养基才可使用。在26℃条件下培养约6天,在发酵过程中按照每12h一次取样频率进行日常监控取样,检测还原糖、氨基氮、溶磷、上清液总氨基酸、腐殖酸、生化黄腐酸及菌干重浓度指标。当生化黄腐酸≥25g/L、菌干重浓度≥18g/L即可停止发酵进行发酵放罐,获得含有大量腐殖酸、黄腐酸等满足有机肥质量指标的上清液,可直接应用于有机肥行业;
5、将发酵罐发酵液进行固液分离,固体进入烘干设备进行烘干,液体则直接灌装包装或浓缩或干燥等;或直接均质;或额外调配等制备特殊用途有机肥。
实施例12:
本发明来源于发酵冬虫夏草的有机肥的生产工艺流程如下:
1、根据工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖25/L、玉米粉13/L、蛋白胨11/L、黄豆粉12.5g/L、玉米浆6g/L、麸皮26g/L、硫酸镁0.02g/L、磷酸氢二钾0.04g/L,其余为水。制备液体培养基装摇瓶中并灭菌备用。将粉红胶霉菌种(Gliocladium roseum Bainier)无菌接入摇瓶培养基中,根据不同菌种工艺特性,在23℃条件下培养4天。
2、根据种子罐工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖25g/L、玉米粉13g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉5g/L、黄豆粉10g/L、玉米浆6g/L、硫酸镁0.02g/L、磷酸氢二钾0.02g/L,其余为水。制备液体培养基装种子罐中并灭菌备用。将培养好的摇瓶菌种无菌接入1级种子罐中,根据菌种工艺特性要求,在23℃条件下培养4天。菌丝干重浓度≥8g/L即可转入下一级种子罐。
3、转罐时经管道灭菌后,将一级种子罐中的全部物料通过管道无菌转移至装有培养基的二级种子罐,种子罐培养基与步骤2相同,根据菌种工艺特性要求,在23℃条件下培养4天。如此反复扩增种子罐菌种量,根据工艺产量要求,可设计配套种子罐扩增代次。扩增时接种比(即种子量:接种后总量)应≥5%。
4、制备液体培养基,终端发酵罐培养基配方:葡萄糖25g/L、玉米粉13g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉5g/L、黄豆粉10g/L、玉米浆6g/L、硫酸镁0.02g/L、磷酸氢二钾0.02g/L,其余为水。装入终端发酵罐中并灭菌备用,将步骤(3)中培养好的种子罐菌种无菌接入终端发酵罐中。根据菌种工艺特性要求,在第2天进行发酵补料,补料培养基不同于原有发酵要求主要以常规碳源和氮源为主,并额外增加植物源物料,保障菌丝正常生长的前提下,大量表达产出黄腐酸、腐殖酸等产物。补料培养基配方(按照补料后总体积核算,浓配补料培养基):葡萄糖22g/L、玉米粉10g/L、麸皮14g/L、小麦粉5g/L、高粱米粉5g/L、秸秆粉4.5g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉5g/L、玉米浆7g/L、硫酸镁0.02g/L、磷酸氢二钾0.02g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。其中,培养基制备经过专用的培养基多步制备技术,形成液体培养基才可使用。在23℃条件下培养约6天,在发酵过程中按照每12h一次取样频率进行日常监控取样,检测还原糖、氨基氮、溶磷、上清液总氨基酸、腐殖酸、生化黄腐酸及菌干重浓度指标。当生化黄腐酸≥25g/L、菌干重浓度≥18g/L即可停止发酵进行发酵放罐,获得含有大量腐殖酸、黄腐酸等满足有机肥质量指标的上清液,可直接应用于有机肥行业;
5、将发酵罐发酵液进行固液分离,固体进入烘干设备进行烘干,液体则直接灌装包装或浓缩或干燥等;或直接均质;或额外调配等制备特殊用途有机肥。
实施例13
本发明来源于发酵冬虫夏草的有机肥的生产工艺流程如下:
1、根据工艺要求称量物料,培养基配方:蚕蛹粉8g/L、葡萄糖20g/L、玉米粉7.5g/L、蛋白胨10g/L、蚕豆粉4g/L、玉米浆2g/L、麸皮25g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.02g/L,其余为水。制备液体培养基装摇瓶中并灭菌备用。将中国被毛孢菌种(Hirsutella sinensis)无菌接入摇瓶培养基中,根据菌种工艺特性,在18℃条件下培养8天。
2、根据种子罐工艺要求称量物料,培养基配方:蚕蛹粉8g/L、葡萄糖25g/L、玉米粉7.5g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉2.5g/L、蚕豆粉3g/L、玉米浆5g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.02g/L,其余为水。制备液体培养基装种子罐中并灭菌备用。将培养好的摇瓶菌种无菌接入一级种子罐中,根据菌种工艺特性要求,在18℃条件下培养3天。接入混合菌菌种。
3、中国被毛孢菌种转入一级种子罐当天,根据工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖25/L、玉米粉13/L、蛋白胨10/L、蚕豆粉10g/L、玉米浆6g/L、麸皮26g/L、硫酸镁0.02g/L、磷酸氢二钾0.04g/L,其余为水。制备液体培养基装摇瓶中并灭菌备用。将蝙蝠蛾拟青霉菌种(Paecilomyces hepiali Q.T.Chen﹠R.Q.Dai)无菌接入摇瓶培养基中,根据菌种工艺特性,在24℃条件下培养3天。
4、中国被毛孢菌种转入一级种子罐当天,根据工艺要求称量物料,培养基配方:葡萄糖25/L、玉米粉13/L、蛋白胨11/L、黄豆粉12.5g/L、玉米浆6g/L、麸皮26g/L、硫酸镁0.02g/L、磷酸氢二钾0.04g/L,其余为水。制备液体培养基装摇瓶中并灭菌备用。将粉红胶霉菌种(Gliocladium roseum Bainier)无菌接入摇瓶培养基中,根据不同菌种工艺特性,在23℃条件下培养3天。
5、在上述第3和4步骤两种菌种培养完成后,无菌转移至中国被毛孢已经生长3天的一级种子罐中,在18℃条件下继续培养3天。混合菌干重浓度≥8g/L即可转入下一级种子罐。
6、转罐时经管道灭菌后,将一级种子罐中的全部物料通过管道无菌转移至装有培养基的二级种子罐,种子罐培养基与步骤2相同,根据不同菌种工艺特性,在18℃条件下培养6天。如此反复扩增种子罐菌种量,根据工艺产量要求,可设计配套种子罐扩增代次。扩增时接种比(即种子量:接种后总量)应≥5%。
7、制备液体培养基,终端发酵罐培养基配方:蚕蛹粉8g/L、葡萄糖25g/L、玉米粉7.5g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉2.5g/L、蚕豆粉3g/L、玉米浆5g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.02g/L,其余为水。装入终端发酵罐中并灭菌备用,将步骤(3)中培养好的种子罐菌种无菌接入终端发酵罐中。根据菌种工艺特性要求,在第5天进行发酵补料,补料培养基不同于原有发酵要求主要以常规碳源和氮源为主,并额外增加植物源物料,保障菌丝正常生长的前提下,大量表达产出黄腐酸、腐殖酸等产物。补料培养基配方(按照补料后总体积核算,浓配补料培养基):蚕蛹粉8g/L、葡萄糖20g/L、玉米粉7.5g/L、麸皮10g/L、小麦粉4g/L、高粱米粉5g/L、秸秆粉5.6g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉2.5g/L、玉米浆4g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.02g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。其中,培养基制备经过专用的培养基多步制备技术,形成液体培养基才可使用。在18℃条件下培养约8天,在发酵过程中按照每日1次取样频率进行日常监控取样,检测还原糖、氨基氮、溶磷、上清液总氨基酸、腐殖酸、生化黄腐酸及菌干重浓度指标。当生化黄腐酸≥20g/L、菌干重浓度≥18g/L即可停止发酵进行发酵放罐,获得含有大量腐殖酸、黄腐酸等满足有机肥质量指标的上清液,可直接应用于有机肥行业;
8、将发酵罐发酵液进行固液分离,固体进入烘干设备进行烘干,液体则直接灌装包装或浓缩或干燥等;或直接均质;或额外调配等制备特殊用途有机肥。
对上述实施例4、8、12、13制得的冬虫夏草发酵滤液进行了检测(检测方法参见《NY/T 1974-2010 水溶肥料 铜、铁、锰、锌、硼、钼含量的测定》,《NY/T 1975-2010 水溶肥料 游离氨基酸含量的测定》,《HG/T 3276-2012 腐植酸铵肥料分析方法》、《NY/T 1976-2010 水溶肥料 有机质含量的测定》),检测结果见下表。
冬虫夏草发酵滤液检测结果
本发明产品冬虫夏草发酵滤液中有机质含量为15.7%—25.3%,将滤液进行浓缩干燥,即可提高有机质含量,作为有机肥原料。
中华人民共和国农业行业标准NY1106-2010含腐殖酸水溶肥标准里要求大量元素型腐殖酸液体水溶肥的腐殖酸含量至少达到30g/L,本发明产品冬虫夏草发酵滤液中黄腐酸(按照GB/T35111—2017生物质黄腐酸肥料和生物质腐殖酸肥料都归类于生物质腐殖酸类肥料)含量为13.5%—22%,约为135—220g/L,指标远高于行业标准要求。
本发明产品冬虫夏草发酵滤液里含有的黄腐酸、游离氨基酸、铜、铁、钼都是对农作物有益的营养成分。黄腐酸是有机物分解再分解生成的分子量小、全水溶的有机芳香族类物质,不仅是构成土壤腐殖质最好的核心成分和土壤中最好的腐植酸成分,而且是形成土壤团粒结构的核心物质。黄腐酸含有的羧基、酚羟基等官能团,有较强的络合、螯合和表面吸附能力,能减少铵态氮的损失;增加磷在土壤中移动距离,抑制土壤对水溶性磷的固定,使无效磷转化为有效磷,促进根系对磷的吸收;可以吸收存储钾离子,对钾肥的增效尤为明显;与铁、锌等微量元素可以发生螯合反应,生成溶解度好、易被植物吸收的黄腐酸微量元素螯合物。氨基酸作为构成蛋白质的最小分子存在于肥料中,有易于被作物吸收的特点,能提高作物抗病性,促使植物生长健壮,提高光合作用,刺激和调节植物快速生长,促进植物根系发达,改善作物品质。铜参与植物的光合作用,有利于叶片更好地进行光合作用,促进碳水化合物和蛋白质的代谢与合成,使植物抗寒、抗旱能力大为增强。铁有二个重要功能:一是某些酶和许多传递电子蛋白的重要组成,二是调节叶绿体蛋白和叶绿素的合成。钼能促近光合作用的强度以及消除酸性土壤中活性铝在植物体内累积而产生的毒害作用。钼肥充足能大大提高固氮能力,提高蛋白质含量。因此,将冬虫夏草发酵滤液作为肥料是非常具有可行性的,而且具有经济效益和环保效益。
Claims (10)
1.一种来源于发酵冬虫夏草的有机肥,其特征在于:所述有机肥由下述制备步骤得到:
(1)制备液体培养基,装入摇瓶中并灭菌备用,将冬虫夏草相关菌属或/和附属菌属菌种无菌接入摇瓶培养基中,在14~30℃条件下培养2~15天;其中,摇瓶培养基配方:蚕蛹粉5~25g/L、葡萄糖13~30g/L、玉米粉5~20g/L、蛋白胨5~18g/L、酵母浸粉2~10g/L、蚕豆粉0~25g/L、玉米浆0~25g/L、麸皮10~30g/L、硫酸镁0.01~3g/L、磷酸氢二钾0.01~3g/L,其余为水;
(2)制备液体培养基,装入种子罐中并灭菌备用,将步骤(1)中培养好的摇瓶菌种无菌接入一级种子罐中,在14~30℃条件下培养2~10天,菌浓达标即可转入下一级种子罐;其中,种子罐培养基配方:蚕蛹粉5~25g/L、葡萄糖13~30g/L、玉米粉5~20g/L、蛋白胨5~18g/L、酵母浸粉2~10g/L、蚕豆粉0~25g/L、玉米浆0~25g/L、麸皮0~30g/L、硫酸镁0.01~3g/L、磷酸氢二钾0.01~3g/L,其余为水;
(3)将步骤(2)中一级种子罐中的全部物料通过管道无菌转移至装有培养基的二级种子罐,种子罐培养基与步骤(2)相同,在14~30℃条件下培养2~10天,如此反复扩增种子罐菌种量,扩增时接种比,即种子量:接种后总量≥3%;
(4)制备液体培养基,装入终端发酵罐中并灭菌备用,将步骤(3)中培养好的种子罐菌种无菌接入终端发酵罐中,在14~30℃条件下培养2~10天,在发酵过程中按照每日1~2次取样频率进行日常监控取样,检测总氨基酸、生化黄腐酸、菌干重浓度指标,根据不同菌种工艺要求,在2~8天进行发酵补料,补料培养基主要以常规碳源和氮源为主,并额外增加植物源物料,保障菌丝正常生长的前提下,大量表达产出黄腐酸、腐殖酸产物,根据目标用途选择相关指标满足标准时即可停止发酵进行发酵放罐,获得含有大量腐殖酸、黄腐酸满足有机肥质量指标的上清液,可直接应用于有机肥行业;其中,终端发酵罐培养基配方:蚕蛹粉5~25g/L、葡萄糖13~30g/L、玉米粉5~20g/L、蛋白胨5~18g/L、酵母浸粉2~10g/L、蚕豆粉0~25g/L、玉米浆0~25g/L、麸皮0~30g/L、硫酸镁0.01~3g/L、磷酸氢二钾0.01~3g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水;
(5)将步骤(4)中的发酵罐发酵液或进行固液分离,固体进入烘干设备进行烘干,液体则直接灌装包装或浓缩或干燥;或直接均质;或适当调配制备特殊用途有机肥。
2.按照权利要求1所述的有机肥,其特征在于:步骤(1)中所述的冬虫夏草相关菌属和附属菌属菌种为中国被毛孢(Hirsutella sinensis)、蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali Q.T.Chen﹠R.Q.Da)i、虫草头孢 (Cephalosporium sinensis Chen)(nom. nud.裸名)、蝙蝠蛾被孢霉 (Mortierella hepiali C.T. Chen & B. Liu) 及粉红胶霉(粉红粘帚霉)(Gliocladium roseum Bainier)中的一种或多种,可多菌种共生培养,促进产出发酵液的有机酸种类和含量富集,形成高端培植肥。
3.按照权利要求2所述的有机肥,其特征在于:步骤(1)中所述的冬虫夏草相关菌属和附属菌属菌种为中国被毛孢(Hirsutella sinensis)、蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali Q.T.Chen﹠R.Q.Dai)及粉红胶霉(粉红粘帚霉)(Gliocladium roseum Bainier)中的一种或多种。
4.按照权利要求1所述的有机肥,其特征在于:步骤(1)中,所述摇瓶培养基配方:蚕蛹粉8g/L、葡萄糖20g/L、玉米粉7.5g/L、蛋白胨10g/L、蚕豆粉4g/L、玉米浆2g/L、麸皮25g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.02g/L,其余为水。
5.按照权利要求1所述的有机肥,其特征在于:步骤(4)中,按照补料后总体积核算,所述补料培养基配方:蚕蛹粉0~25g/L、葡萄糖13~30g/L、玉米粉5~20g/L、麸皮0~30g/L、小麦粉0~15g/L、高粱米粉0~16g/L、秸秆粉0~16g/L、蛋白胨0~18g/L、酵母浸粉2~10g/L、蚕豆粉0~25g/L、玉米浆0~25g/L、硫酸镁0.01~3g/L、磷酸氢二钾0.01~3g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。
6.按照权利要求1所述的有机肥,其特征在于:步骤(1)中,摇瓶培养基配方:蚕蛹粉5.5/L、葡萄糖14/L、玉米粉6/L、蛋白胨6.5/L、蚕豆粉1g/L、玉米浆1.5g/L、麸皮12g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,其余为水;冬虫夏草相关菌属和附属菌属菌种为中国被毛孢(Hirsutella sinensis);步骤(2),种子罐培养基配方:蚕蛹粉5.5g/L、葡萄糖14g/L、玉米粉6g/L、蛋白胨6.5g/L、酵母浸粉2.5g/L、蚕豆粉1g/L、玉米浆1.5g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,其余为水;步骤(4)中,终端发酵罐培养基配方:蚕蛹粉5.5g/L、葡萄糖14g/L、玉米粉6g/L、蛋白胨6.5g/L、酵母浸粉2.5g/L、蚕豆粉1g/L、玉米浆1.5g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,其余为水;补料培养基配方:蚕蛹粉5g/L、葡萄糖10g/L、玉米粉6g/L、麸皮5g/L、小麦粉3g/L、高粱米粉3g/L、秸秆粉2.5g/L、蛋白胨6.5g/L、酵母浸粉2g/L、玉米浆1g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。
7.按照权利要求1所述的有机肥,其特征在于:步骤(1)中,摇瓶培养基配方:蚕蛹粉10g/L、葡萄糖21g/L、玉米粉11g/L、蛋白胨10.5g/L、蚕豆粉10g/L、玉米浆12g/L、麸皮21g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,其余为水;冬虫夏草相关菌属和附属菌属菌种为中国被毛孢(Hirsutella sinensis);步骤(2),种子罐培养基配方:蚕蛹粉10g/L、葡萄糖21g/L、玉米粉11g/L、蛋白胨10.5g/L、酵母浸粉5.5g/L、蚕豆粉10g/L、玉米浆12g/L、麸皮21g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,其余为水;步骤(4)中,终端发酵罐培养基配方:蚕蛹粉10g/L、葡萄糖21g/L、玉米粉11g/L、蛋白胨10.5g/L、酵母浸粉5.5g/L、蚕豆粉10g/L、玉米浆12g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,其余为水;补料培养基配方:蚕蛹粉8g/L、葡萄糖17g/L、玉米粉10g/L、麸皮12g/L、小麦粉5g/L、高粱米粉5g/L、秸秆粉6.5g/L、蛋白胨9g/L、酵母浸粉5.5g/L、玉米浆16g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。
8.按照权利要求1所述的有机肥,其特征在于:步骤(1)中,摇瓶培养基配方:蚕蚕蛹粉24g/L、葡萄糖28g/L、玉米粉18g/L、蛋白胨17g/L、蚕豆粉22g/L、玉米浆23g/L、麸皮27.5g/L、硫酸镁2.4g/L、磷酸氢二钾2.4g/L,其余为水;冬虫夏草相关菌属和附属菌属菌种为中国被毛孢(Hirsutella sinensis);步骤(2),种子罐培养基配方:蚕蛹粉24g/L、葡萄糖28g/L、玉米粉18g/L、蛋白胨17g/L、酵母浸粉9g/L、蚕豆粉22g/L、玉米浆23g/L、麸皮27.5g/L、硫酸镁2.4g/L、磷酸氢二钾2.4g/L,其余为水;步骤(4)中,终端发酵罐培养基配方:蚕蛹粉24g/L、葡萄糖28g/L、玉米粉18g/L、蛋白胨17g/L、酵母浸粉9g/L、蚕豆粉22g/L、玉米浆23g/L、硫酸镁2.4g/L、磷酸氢二钾2.4g/L,其余为水;补料培养基配方:蚕蛹粉16g/L、葡萄糖25g/L、玉米粉15g/L、麸皮19g/L、小麦粉8g/L、高粱米粉8g/L、秸秆粉9g/L、蛋白胨16g/L、酵母浸粉8g/L、玉米浆20g/L、硫酸镁2g/L、磷酸氢二钾2g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。
9.按照权利要求1所述的有机肥,其特征在于:步骤(1)中,摇瓶培养基配方:葡萄糖14/L、玉米粉6/L、蛋白胨6.5/L、蚕豆粉8g/L、玉米浆4g/L、麸皮12g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,其余为水;冬虫夏草相关菌属和附属菌属菌种为蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali Q.T.Chen﹠R.Q.Dai);步骤(2),种子罐培养基配方:葡萄糖14g/L、玉米粉6g/L、蛋白胨6.5g/L、酵母浸粉2.5g/L、蚕豆粉8g/L、玉米浆4g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,其余为水;步骤(4)中,终端发酵罐培养基配方:葡萄糖14g/L、玉米粉6g/L、蛋白胨6.5g/L、酵母浸粉2.5g/L、蚕豆粉8g/L、玉米浆4g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,其余为水;补料培养基配方:葡萄糖10g/L、玉米粉6g/L、麸皮5g/L、小麦粉3g/L、高粱米粉3g/L、秸秆粉2.5g/L、蛋白胨6.5g/L、酵母浸粉2g/L、玉米浆2g/L、硫酸镁0.01g/L、磷酸氢二钾0.01g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。
10.按照权利要求1所述的有机肥,其特征在于:步骤(1)中,摇瓶培养基配方:葡萄糖20/L、玉米粉11/L、蛋白胨12/L、黄豆粉12g/L、玉米浆8g/L、麸皮20g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,其余为水;冬虫夏草相关菌属和附属菌属菌种为及粉红胶霉(粉红粘帚霉)(Gliocladium roseum Bainier);步骤(2),种子罐培养基配方:葡萄糖20g/L、玉米粉11g/L、蛋白胨12g/L、酵母浸粉5g/L、黄豆粉12g/L、玉米浆8g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,其余为水;步骤(4)中,终端发酵罐培养基配方:葡萄糖20g/L、玉米粉11g/L、蛋白胨12g/L、酵母浸粉5g/L、黄豆粉12g/L、玉米浆8g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,其余为水;补料培养基配方:葡萄糖18g/L、玉米粉10g/L、麸皮8g/L、小麦粉5g/L、高粱米粉5g/L、秸秆粉6g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉5g/L、玉米浆8g/L、硫酸镁0.05g/L、磷酸氢二钾0.05g/L,钼酸铵0.01g/L、磷酸锌0.005g/L、其余为水。
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