CN107032886A - 一种富硒天然多功能叶面肥及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种富硒天然多功能叶面肥及其制备方法，富硒菌株选育，种子培养液制备，发酵培养，富硒酵母水解物的获得，盐肤木提取液制备，微量元素溶液制备，富硒天然多功能叶面肥制作。本发明采用富硒酵母C.utilis cas3发酵可高效生产有机硒，可以迅速被植物吸收利用。一方面克服了直接施用含有亚硒酸盐的普通硒肥可能对环境和人体造成的污染伤害，另一方面可以大大提升植物对硒的吸收利用，提高蔬菜水果等作物中硒的含量，打造高富硒产品。

Description

一种富硒天然多功能叶面肥及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种叶面肥，尤其涉及的是一种富硒天然多功能叶面肥及其制备方法。
背景技术
硒是生物体生命活动所必需的微量元素之一，具有营养和修补心肌、清除体内自由基、延缓衰老、调节人体微循环系统等重要功能。目前，随着人们生活水平的不断提高，人们对健康的追求更加迫切，对富硒食品的需求也越来越多。生物富硒是获取有机硒的有效途径，摄取富含硒的水果蔬菜等食物，是人体获取有机硒的最重要的方式。然而，天然水果蔬菜中硒元素含量较少，大多需要施用硒肥对作物进行强化补给，以生产出富硒农产品。
目前大部分硒肥是通过在普通肥料中添加亚硒酸盐或富硒矿石制成。该方法虽然成本低廉，操作简单，却存在一些缺陷。硒酸盐和亚硒酸盐的本身毒性较大，如果施用不当，容易对土壤造成污染甚至对人体造成伤害；富硒矿石由于成分复杂，矿石中硒元素的并不容易为植物吸收利用，生物有效性低。因此，迫切需要开发安全可靠、生物有效性高的富硒肥料，对于促进硒肥产业可持续发展，发展功能农业具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种富硒天然多功能叶面肥及其制备方法，能够将有机硒、盐肤木提取液以及天然黏土进行复配，制成生物有效性高、富硒多功能缓释叶面肥。
本发明是通过以下技术方案实现的：本发明的一种富硒天然多功能叶面肥的制备方法，包括以下步骤：
(1)富硒菌株选育
将产朊假丝酵母Candida utilis进行氮离子注入诱变，经过多次诱变筛选，获得耐受高浓度亚硒酸钠的酵母突变菌株C.utilis cas3；
(2)种子培养液制备
将上述产朊假丝酵母突变菌株C.utiliscas3接种在斜面培养基，得到斜面菌株，再将斜面菌株接种于种子培养基中，得到种子培养液；
(3)发酵培养
将种子培养液按体积百分含量8～12％的接种量接种至含有发酵培养基中发酵10～12h至对数生长期，在发酵产物中补加终浓度为150～180mg/L的亚硒酸钠，继续发酵培养20～24h，收集发酵产物；
(4)富硒酵母水解物的获得
将酵母发酵液，离心洗涤后加入混合酶制剂，酶法水解后得到富含有机硒和氨基酸的酵母水解物，水解产物干燥后得到淡黄色固体粉末状制品，水分含量小于10％；
(5)盐肤木提取液制备
取盐肤木叶子、嫩枝和果皮中的一种或多种，干燥后粉碎得到盐肤木细粉；将盐肤木细粉按1g：10～30ml的料液比加入至提取液进行提取，得到盐肤木提取液；
(6)微量元素溶液制备
将硼酸、一水硫酸锌、七水硫酸亚铁、一水硫酸锰按照重量比1～3：2～4：1～2：3～5的比例混合，溶于一千倍质量的水中，搅拌混匀，即制得微量元素溶液；
(7)富硒天然多功能叶面肥制作
将富硒酵母水解物、盐肤木提取液、微量元素液按照重量比1～3：20～30：1～2的比例复配，混合后加热至60～70℃，搅拌至充分溶解后，再加入凹凸棒土继续搅拌至充分溶解后即可。
所述步骤(1)中，包括以下步骤：
(11)产朊假丝酵母Candida utilis采用YEPD培养平板上培养24～30h，挑取单菌落至含YEPD液体培养基的培养瓶中，160～180rpm，震荡培养24～30h，菌液离心洗涤，制成单细胞悬液，使细胞浓度在108～109个/mL；
(12)将菌悬液均匀涂布到无菌培养皿中，风干制成菌膜；
(13)在N+注入机中进行离子注入，能量14～18KeV；
(14)每个菌株做6个梯度剂量，每个剂量两个平板，N+注入剂量分别为2.5×1014、4.5×1014、6.5×1014、8.5×1014、1.5×1015、1.8×1015ion/cm2，并做真空对照平板；
(15)诱变完成后，加入无菌水洗涤菌体制成菌悬液；
(16)将菌悬液稀释104～108倍涂布于含亚硒酸钠的筛选培养基，经过多次诱变筛选，获得耐受高浓度亚硒酸钠的酵母突变菌株，而且其发酵生物量在同等条件下比出发菌株提高了2倍以上，命名为C.utilis cas3。
所述步骤(2)中，斜面培养基包括以下组分：葡萄糖15～20g/L，蛋白胨15～20g/L，酵母膏5～10g/L，亚硒酸钠20～30mg/L，琼脂12～18g/L。
所述步骤(2)中，种子培养基包括以下组分：麦芽抽提物10～20g/L，蛋白胨10～15g/L，酵母膏5～10g/L，亚硒酸钠30～60mg/L。
所述步骤(3)中，发酵培养基包括以下组分：可发酵还原糖300～400g/L，硫酸铜0.035～0.05g/L，硫酸锰0.03～0.04g/L，硫酸亚铁0.35～0.45g/L，硫酸镁5.5～7.0g/L，硫酸锌2.5～3.5g/L，氯化钙3.5～5.5g/L，硫酸铵5～7g/L，氯化钠8.5～11g/L，谷氨酸7～11g/L，L-半胱氨酸为11～13g/L，其余部分用蒸馏水补足至1L。
所述步骤(3)中，将种子培养液按体积百分含量8～12％的接种量接种至含有发酵培养基的50L发酵罐中，装液量为40～50％，25～30℃，溶氧控制50～70％，pH 5.5～6.0，发酵10～12h至对数生长期，在发酵产物中补加终浓度为150～180mg/L的亚硒酸钠，继续发酵培养20-24h，收集发酵产物。
所述步骤(5)中，取盐肤木叶子、嫩枝和果皮中的一种或多种，干燥后粉碎，过600～800筛，得到盐肤木细粉；将过筛后的盐肤木细粉按1g：10～30ml的料液比加入至50～98％乙醇溶液中浸泡6～10小时，加热搅拌提取，搅拌速度10～50rpm，提取时间为1～2小时，提取次数至少为2次，提取出来的初步提取液经过滤后，收集滤液，3000～4000rpm离心20～30min，上清液即为盐肤木提取液。
所述步骤(7)中，将富硒酵母水解物与盐肤木提取液、微量元素液按照重量比1～3:20～30:1～2的比例复配，混合后加热至60～70℃，10～50rpm搅拌1～2h，至充分溶解后，再加入凹凸棒土，所述凹凸棒土为100～200目，加入量为0.4～1g/L，10～50rpm继续搅拌1～2h，充分溶解后，分装入瓶。
一种使用富硒天然多功能叶面肥的制备方法制得的叶面肥。
本发明相比现有技术具有以下优点：本发明采用富硒酵母C.utilis cas3发酵可高效生产有机硒，可以迅速被植物吸收利用。一方面克服了直接施用含有亚硒酸盐的普通硒肥可能对环境和人体造成的污染伤害，另一方面可以大大提升植物对硒的吸收利用，提高蔬菜水果等作物中硒的含量，打造高富硒产品。
本发明首次以传统药用植物盐肤木的活性提取液作为叶面肥的主要原料，并与富硒酵母水解物、微量元素复配，打造富硒天然多功能叶面肥。盐肤木活性提取液含有大量多酚，多酚中含有多个多羟基基团，具有较好的化学配位性质，能与Zn、Cu、Cl、Fe等微量元素发生络合作用，使得这些微量元素具有良好的水溶性、稳定性，从而有效解决植物缺乏微量元素而导致的产量降低和抗逆性下降的问题。同时，活性提取液中含有的多酚等活性物质还对对害虫有拒食效应，对病原菌等微生物具有抑制效应，因此对植物病虫害有良好的预防效果，具有很好的增产效果。同时，本发明的叶面肥还复配有具备缓释作用的天然黏土材料凹凸棒土，从而使得本发明的叶面肥也具备缓释性能，缓释效果明显，持效期长，减少生产中的用量，使用成本进一步降低。
本发明提供的叶面肥天然、绿色、环保、高效，能预防植物病虫害，增产效果明显且无农药化肥残留，能够生产出富硒、有机无公害的农产品，产品品质好，尤其适用于有机富硒农业。
本发明的叶面肥制作方法工艺简单，步骤少，取材便利，仅需简单的设备即可完成，成本低，容易推广。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例的叶面肥的制备过程如下：
(1)富硒菌株选育
将产朊假丝酵母Candida utilis进行氮离子注入诱变，经过多次诱变筛选，获得耐受高浓度亚硒酸钠的酵母突变菌株C.utilis cas3；
产朊假丝酵母C.utilis采用YEPD培养平板上培养24～30h，挑取单菌落至含100mlYEPD液体培养基的250ml三角瓶中，160～180rpm，震荡培养24～30h，菌液离心洗涤3次，制成单细胞悬液，使细胞浓度在108～109个/mL。取0.1mL菌悬液均匀涂布到无菌培养皿中,置于超净工作台风干制成菌膜。在N+注入机中进行离子注入,能量18KeV。每个菌株做6个梯度剂量，每个剂量两个平板。N+注入剂量分别为2.5×1014、4.5×1014、6.5×1014、8.5×1014、1.5×1015、1.8×1015ion/cm2，并做真空对照平板。诱变完成后，加入1ml无菌水洗涤菌体制成菌悬液。将菌悬液稀释104～108倍涂布于含亚硒酸钠的筛选培养基，采用3,3'-二氨基联苯胺盐酸盐法测定酵母菌株硒的含量。经过多次诱变筛选，获得耐受高浓度亚硒酸钠(180mg/L)的酵母突变菌株，而且其发酵生物量在同等条件下较出发菌株提高了近2.5倍，命名为C.utilis cas3。
(2)种子培养液制备
将上述产朊假丝酵母C.utilis cas3接种在斜面培养基28℃培养16h，得到斜面菌株，斜面培养基成分组成为：葡萄糖15g/L,蛋白胨15g/L,酵母膏5g/L,亚硒酸钠20mg/L，琼脂12g/L。
将上述斜面菌株接种于80mL的种子培养基中，28℃、160r/min、振荡培养16h，得到种子培养液。种子培养基成分组成为：麦芽抽提物10g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，亚硒酸钠30mg/L。
(3)发酵培养
发酵培养基成分组成为：可发酵还原糖300g/L，硫酸铜0.035g/L，硫酸锰0.03g/L，硫酸亚铁0.35g/L，硫酸镁5.5g/L，硫酸锌2.5g/L，氯化钙3.5g/L，硫酸铵5g/L，氯化钠8.5g/L，谷氨酸7g/L，L-半胱氨酸为11g/L，其余部分用蒸馏水补足至1L。
将种子培养液按体积百分含量8％的接种量接种至含有发酵培养基的50L发酵罐中(装液量为40％)，28℃，溶氧控制50％，pH维持5.5，发酵10h至对数生长期，在发酵产物中补加终浓度为150mg/L的亚硒酸钠，继续发酵培养20h，收集发酵产物。
(4)富硒酵母水解物的获得
收集经过上述步骤制得的酵母发酵液，离心机离心，洗涤，加入按质量比1:1混合的破壁酶、木瓜蛋白酶的混合酶制剂，酶法水解10h，得到富含有机硒和氨基酸的酵母水解物。水解产物采用120℃喷粉干燥，得到淡黄色固体粉末状制品，水分含量小于8％。
(5)盐肤木提取液制备
取盐肤木叶子、嫩枝和果皮中的一种或多种，干燥后粉碎，过600筛，得到盐肤木细粉；将过筛后的盐肤木细粉按1g:10ml的料液比加入至提取液(50％乙醇溶液)中浸泡6小时，加热搅拌提取。加热搅拌的搅拌速度10rpm，提取时间为1小时，提取次数为2次；提取出来的初步提取液经过滤后，收集滤液，3000rpm，离心20min，上清液即为盐肤木提取液。
(6)微量元素溶液制备
将硼酸、一水硫酸锌、七水硫酸亚铁、一水硫酸锰四种原料按照重量比1:2:1:3的比例混合，溶于一千倍质量的自来水中，搅拌混匀，即制得微量元素溶液。
(7)富硒天然多功能叶面肥制作
将富硒酵母水解物与盐肤木提取液、微量元素液三者按照重量比1:20:1的比例复配，其余部分用水补足，混合后加热至60℃，10rpm搅拌1h，至充分溶解后，再加入凹凸棒土(200目，0.4g/L)，10rpm继续搅拌1h，充分溶解后，分装入瓶。
将本实施例在某农田中进行试验，分为三个组别：处理一、处理二和对照组，每组的面积为200m2。
处理一：施用普通叶面肥，分别于西红柿盛花前期及幼果膨大期施用，每次每亩1kg，稀释100倍后，喷施于西红柿叶片背面表面。
处理二：施用本实施例制备的富硒天然多功能叶面肥，分别于西红柿盛花前期及幼果膨大期施用，每次每亩1kg，稀释100倍，喷施于叶片背面表面。
对照组：不施用任何肥料。
试验方法：西红柿收获后，统计各处理西红柿产量，同时随机选取部分西红柿，检测西红柿内番茄红素含量，维生素C，氨基酸含量，氨基酸，硒等营养物质含量。
表1 实施例1中不同处理番茄的营养品质比较分析
试验结果：与对照组(不施用任何肥料)相比，处理一(普通叶面肥)和处理二(富硒天然多功能叶面肥)均能大幅提高西红柿产量和品质，且处理二提高幅度更大。其中，处理二中西红柿产量提高了27.56％，番茄红素含量提高61.81％，维生素C含量提高了40.95％，可溶性糖含量提高了63.68％。而处理一中西红柿产量仅提高了24.87％，番茄红素含量提高34.55％，维生素C含量提高了25.65％，可溶性糖含量提高了42.42％。同时，处理二中西红柿中，硒的含量达到0.016mg·Kg-1，营养价值大大提高。富硒天然多功能叶面肥对西红柿产量和品质的提升效果优于普通叶面肥。
实施例2
本实施例的叶面肥的制备过程如下：
(1)富硒菌株选育
本实施例的富硒菌株选育过程如实施例1相同。
(2)种子培养液制备
将上述产朊假丝酵母C.utilis cas3接种在斜面培养基28℃培养20h，得到斜面菌株，斜面培养基成分组成为：葡萄糖18g/L,蛋白胨18g/L,酵母膏8g/L,亚硒酸钠25mg/L，琼脂15g/L。
将上述斜面菌株接种于80mL的种子培养基中，28℃、170r/min、振荡培养20h，得到种子培养液。种子培养基成分组成为：麦芽抽提物15g/L，蛋白胨12g/L，酵母膏8g/L，亚硒酸钠50mg/L。
(3)发酵培养
发酵培养基成分组成为：可发酵还原糖350g/L，硫酸铜0.045g/L，硫酸锰0.035g/L，硫酸亚铁0.40g/L，硫酸镁6.5g/L，硫酸锌2.8g/L，氯化钙4.5g/L，硫酸铵6.5g/L，氯化钠10.0g/L，谷氨酸8g/L，L-半胱氨酸为12g/L，其余部分用蒸馏水补足至1L。
将种子培养液按体积百分含量10％的接种量接种至含有发酵培养基的50L发酵罐中(装液量为45％)，28℃，溶氧控制55％，pH维持5.5，发酵10h至对数生长期，在发酵产物中补加终浓度为160mg/L的亚硒酸钠，继续发酵培养22h，收集发酵产物。
(4)富硒酵母水解物的获得
收集经过上述步骤制得的酵母发酵液，离心机离心，洗涤，加入按质量比1:1混合的破壁酶、木瓜蛋白酶的混合酶制剂，酶法水解20h，得到富含有机硒和氨基酸的酵母水解物。水解产物采用140℃喷粉干燥，得到淡黄色固体粉末状制品，水分含量小于8％。
(5)盐肤木提取液制备
取盐肤木叶子、嫩枝和果皮中的一种或多种，干燥后粉碎，过600筛，得到盐肤木细粉；将过筛后的盐肤木细粉按1g:20ml的料液比加入至提取液(60％乙醇溶液)中浸泡10小时，加热搅拌提取。加热搅拌的搅拌速度40rpm，提取时间为2小时，提取次数为2次；提取出来的初步提取液经过滤后，收集滤液，4000rpm，离心30min，上清液即为盐肤木提取液。
(6)微量元素溶液制备
将硼酸、一水硫酸锌、七水硫酸亚铁、一水硫酸锰四种原料按照重量比2:3:2:4的比例混合，溶于一千倍质量的自来水中，搅拌混匀，即制得微量元素溶液。
(7)富硒天然多功能叶面肥制作
将富硒酵母水解物与盐肤木提取液、微量元素液三者按照重量比2:25:2的比例复配，其余部分用水补足，混合后加热至65℃，40rpm搅拌2h，至充分溶解后，再加入凹凸棒土(200目，0.8g/L)，50rpm继续搅拌2h，充分溶解后，分装入瓶。
将本实施例在某农田中进行试验，分为三个组别：处理一、处理二和对照组，每组的面积为200m2。
处理一：施用普通叶面肥，分别于西红柿盛花前期及幼果膨大期施用，每次每亩1kg，稀释100倍后，喷施于西红柿叶片背面表面。
处理二：施用本实施例制备的富硒天然多功能叶面肥，分别于西红柿盛花前期及幼果膨大期施用，每次每亩1kg，稀释100倍，喷施于叶片背面表面。
对照组：不施用任何肥料。
试验方法：西红柿收获后，统计各处理西红柿产量，同时随机选取部分西红柿，检测西红柿内番茄红素含量，维生素C，氨基酸含量，氨基酸，硒等营养物质含量。
表2 实施例2中不同处理番茄的营养品质比较分析
试验结果：与对照组(不施用任何肥料)相比，处理一(普通叶面肥)和处理二(富硒天然多功能叶面肥)均能大幅提高西红柿产量和品质，且处理2提高幅度更大。其中，处理二中西红柿产量提高了29.05％，番茄红素含量提高67.27％，维生素C含量提高了45.76％，可溶性糖含量提高了73.18％。而处理1中西红柿产量提高了24.87％，番茄红素含量提高34.55％，维生素C含量提高了25.65％，可溶性糖含量提高了42.42％。同时，处理二中西红柿中，硒的含量达到0.019mg·Kg-1，营养价值大大提高。富硒天然多功能叶面肥对西红柿产量和品质的提升效果优于普通叶面肥。
实施例3
本实施例的叶面肥的制备过程如下：
(1)富硒菌株选育
本实施例的富硒菌株选育过程如实施例1相同。
(2)种子培养液制备：
将上述产朊假丝酵母C.utilis cas3接种在斜面培养基28℃培养24h，得到斜面菌株，斜面培养基成分组成为：葡萄糖20g/L,蛋白胨20g/L,酵母膏10g/L,亚硒酸钠30mg/L，琼脂18g/L。
将上述斜面菌株接种于80mL的种子培养基中，28℃、180r/min、振荡培养24h，得到种子培养液。种子培养基成分组成为：麦芽抽提物20g/L，蛋白胨15g/L，酵母膏10g/L，亚硒酸钠60mg/L。
(3)发酵培养：
发酵培养基成分组成为：可发酵还原糖400g/L，硫酸铜0.05g/L，硫酸锰0.04g/L，硫酸亚铁0.45g/L，硫酸镁7g/L，硫酸锌3.5g/L，氯化钙5.5g/L，硫酸铵7g/L，氯化钠11g/L，谷氨酸11g/L，L-半胱氨酸为13g/L，其余部分用蒸馏水补足至1L。
将种子培养液按体积百分含量12％的接种量接种至含有发酵培养基的50L发酵罐中(装液量为50％)，28℃，溶氧控制70％，pH维持6.0，发酵12h至对数生长期，在发酵产物中补加终浓度为180mg/L的亚硒酸钠，继续发酵培养24h，收集发酵产物。
(4)富硒酵母水解物的获得
收集经过上述步骤制得的酵母发酵液，离心机离心，洗涤，加入按质量比1:1混合的破壁酶、木瓜蛋白酶的混合酶制剂，酶法水解24h，得到富含有机硒和氨基酸的酵母水解物。水解产物采用160℃喷粉干燥，得到淡黄色固体粉末状制品，水分含量小于8％。
(5)盐肤木提取液制备
取盐肤木叶子、嫩枝和果皮中的一种或多种，干燥后粉碎，过800目筛，得到盐肤木细粉；将过筛后的盐肤木细粉按1g:30ml的料液比加入至提取液(98％乙醇溶液)中浸泡10小时，加热搅拌提取。加热搅拌的搅拌速度50rpm，提取时间为2小时，提取次数为2次；提取出来的初步提取液经过滤后，收集滤液，4000rpm，离心30min，上清液即为盐肤木提取液。
(6)微量元素溶液制备
将硼酸、一水硫酸锌、七水硫酸亚铁、一水硫酸锰四种原料按照重量比3:4:2:5的比例混合，溶于一千倍质量的自来水中，搅拌混匀，即制得微量元素溶液。
(7)富硒天然多功能叶面肥制作
将富硒酵母水解物与盐肤木提取液、微量元素液三者按照重量比3:30:2的比例复配，其余部分用水补足，混合后加热至70℃，50rpm搅拌2h，至充分溶解后，再加入凹凸棒土(200目，1g/L)，50rpm继续搅拌2h，充分溶解后，分装入瓶。
将本实施例在某农田中进行试验，分为三个组别：处理一、处理二和对照组，每组的面积为200m2。
处理一：施用普通叶面肥，分别于西红柿盛花前期及幼果膨大期施用，每次每亩1kg，稀释100倍后，喷施于西红柿叶片背面表面。
处理二：施用本实施例制备的富硒天然多功能叶面肥，分别于西红柿盛花前期及幼果膨大期施用，每次每亩1kg，稀释100倍，喷施于叶片背面表面。
对照组：不施用任何肥料。
试验方法：西红柿收获后，统计各处理西红柿产量，同时随机选取部分西红柿，检测西红柿内番茄红素含量，维生素C，氨基酸含量，氨基酸，硒等营养物质含量。
表3 实施例3中不同处理番茄的营养品质比较分析
试验结果：与对照组(不施用任何肥料)相比，处理一(普通叶面肥)和处理二(富硒天然多功能叶面肥)均能大幅提高西红柿产量和品质，且处理二提高幅度更大。其中，处理二中西红柿产量提高了26.56％，番茄红素含量提高43.64％，维生素C含量提高了32.94％，可溶性糖含量提高了54.71％。而处理一中西红柿产量仅提高了24.87％，番茄红素含量提高34.55％，维生素C含量提高了25.65％，可溶性糖含量提高了42.42％。同时，处理二中西红柿中，硒的含量达到0.015mg·Kg-1，营养价值大大提高。富硒天然多功能叶面肥对西红柿产量和品质的提升效果优于普通叶面肥。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种富硒天然多功能叶面肥的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)富硒菌株选育
将产朊假丝酵母Candida utilis进行氮离子注入诱变，经过多次诱变筛选，获得耐受高浓度亚硒酸钠的酵母突变菌株C.utilis cas3；
(2)种子培养液制备
将上述产朊假丝酵母突变菌株C.utiliscas3接种在斜面培养基，得到斜面菌株，再将斜面菌株接种于种子培养基中，得到种子培养液；
(3)发酵培养
将种子培养液按体积百分含量8～12％的接种量接种至含有发酵培养基中发酵10～12h至对数生长期，在发酵产物中补加终浓度为150～180mg/L的亚硒酸钠，继续发酵培养20～24h，收集发酵产物；
(4)富硒酵母水解物的获得
将酵母发酵液，离心洗涤后加入混合酶制剂，酶法水解后得到富含有机硒和氨基酸的酵母水解物，水解产物干燥后得到淡黄色固体粉末状制品，水分含量小于10％；
(5)盐肤木提取液制备
取盐肤木叶子、嫩枝和果皮中的一种或多种，干燥后粉碎得到盐肤木细粉；将盐肤木细粉按1g：10～30ml的料液比加入至提取液进行提取，得到盐肤木提取液；
(6)微量元素溶液制备
将硼酸、一水硫酸锌、七水硫酸亚铁、一水硫酸锰按照重量比1～3：2～4：1～2：3～5的比例混合，溶于一千倍质量的水中，搅拌混匀，即制得微量元素溶液；
(7)富硒天然多功能叶面肥制作
将富硒酵母水解物、盐肤木提取液、微量元素液按照重量比1～3：20～30：1～2的比例复配，混合后加热至60～70℃，搅拌至充分溶解后，再加入凹凸棒土继续搅拌至充分溶解后即可。
2.根据权利要求1所述的一种富硒天然多功能叶面肥的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，包括以下步骤：
(11)产朊假丝酵母Candida utilis采用YEPD培养平板上培养24～30h，挑取单菌落至含YEPD液体培养基的培养瓶中，160～180rpm，震荡培养24～30h，菌液离心洗涤，制成单细胞悬液，使细胞浓度在108～109个/mL；
(12)将菌悬液均匀涂布到无菌培养皿中，风干制成菌膜；
(13)在N+注入机中进行离子注入，能量14～18KeV；
(14)每个菌株做6个梯度剂量，每个剂量两个平板，N+注入剂量分别为2.5×1014、4.5×1014、6.5×1014、8.5×1014、1.5×1015、1.8×1015ion/cm2，并做真空对照平板；
(15)诱变完成后，加入无菌水洗涤菌体制成菌悬液；
(16)将菌悬液稀释104～108倍涂布于含亚硒酸钠的筛选培养基，经过多次诱变筛选，获得耐受高浓度亚硒酸钠的酵母突变菌株，而且其发酵生物量在同等条件下比出发菌株提高了2倍以上，命名为C.utilis cas3。
3.根据权利要求1所述的一种富硒天然多功能叶面肥的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，斜面培养基包括以下组分：葡萄糖15～20g/L，蛋白胨15～20g/L，酵母膏5～10g/L，亚硒酸钠20～30mg/L，琼脂12～18g/L。
4.根据权利要求1所述的一种富硒天然多功能叶面肥的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，种子培养基包括以下组分：麦芽抽提物10～20g/L，蛋白胨10～15g/L，酵母膏5～10g/L，亚硒酸钠30～60mg/L。
5.根据权利要求1所述的一种富硒天然多功能叶面肥的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，发酵培养基包括以下组分：可发酵还原糖300～400g/L，硫酸铜0.035～0.05g/L，硫酸锰0.03～0.04g/L，硫酸亚铁0.35～0.45g/L，硫酸镁5.5～7.0g/L，硫酸锌2.5～3.5g/L，氯化钙3.5～5.5g/L，硫酸铵5～7g/L，氯化钠8.5～11g/L，谷氨酸7～11g/L，L-半胱氨酸为11～13g/L，其余部分用蒸馏水补足至1L。
6.根据权利要求1所述的一种富硒天然多功能叶面肥的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，将种子培养液按体积百分含量8～12％的接种量接种至含有发酵培养基的50L发酵罐中，装液量为40～50％，25～30℃，溶氧控制50～70％，pH 5.5～6.0，发酵10～12h至对数生长期，在发酵产物中补加终浓度为150～180mg/L的亚硒酸钠，继续发酵培养20-24h，收集发酵产物。
7.根据权利要求1所述的一种富硒天然多功能叶面肥的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中，取盐肤木叶子、嫩枝和果皮中的一种或多种，干燥后粉碎，过600～800筛，得到盐肤木细粉；将过筛后的盐肤木细粉按1g：10～30ml的料液比加入至50～98％乙醇溶液中浸泡6～10小时，加热搅拌提取，搅拌速度10～50rpm，提取时间为1～2小时，提取次数至少为2次，提取出来的初步提取液经过滤后，收集滤液，3000～4000rpm离心20～30min，上清液即为盐肤木提取液。
8.根据权利要求1所述的一种富硒天然多功能叶面肥的制备方法，其特征在于，所述步骤(7)中，将富硒酵母水解物与盐肤木提取液、微量元素液按照重量比1～3:20～30:1～2的比例复配，混合后加热至60～70℃，10～50rpm搅拌1～2h，至充分溶解后，再加入凹凸棒土，所述凹凸棒土为100～200目，加入量为0.4～1g/L，10～50rpm继续搅拌1～2h，充分溶解后，分装入瓶。
9.一种使用如权利要求1～8任一项所述的富硒天然多功能叶面肥的制备方法制得的叶面肥。
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