CN110325197A - 用于防止脱发或促进毛发生长的包括展示脂肪分解作用的菌株的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种展示防止脱发、促进毛发生长或改善性功能作用的组合物，以及制备所述组合物的方法。

Description

用于防止脱发或促进毛发生长的包括展示脂肪分解作用的菌 株的组合物
技术领域
本发明涉及一种用于防止脱发或促进毛发生长的组合物，其包含具有脂肪分解能力的菌株。
背景技术
随着现代社会的发展，秃头症患者的数量迅速增加。具体来说，秃头症患者的年龄逐渐下降。需要护发服务的人中的60％为二十多岁和三十多岁。估算患有秃头症的患者的数量达到将近1千万，造成严重的社会经济问题。
据报道，严重脱发的人更有可能出现心理抑郁和焦虑，感受到高度压力，在与他人和异性的关系中面临困难，并无法保持良好的家庭关系。因此，脱发已成为健康科学关注的问题。
虽然脱发的确切原因显然是未知的，但是据报道，脱发可能由基因、内分泌和免疫异常引起。
目前广泛使用由美国食品和药物管理局(Food and Drug Administration，FDA)审批通过的经皮应用的米诺地尔(Minoxidil)和口服给药的非那雄安(Finasteride)作为秃头症的治疗剂。然而，由于这些治疗剂附带的副作用，例如心血管病症、皮肤刺激、性功能下降以及严重的致畸作用，这些治疗剂的使用受到限制。
以前的研究报道盖仑制剂可改善秃头症，但结果仍不能令人满意。近年来，一些研究和专利报道，使用利用属于乳杆菌属(Lactobacillus)的乳酸菌的植物提取物和经热水提取的草药材料(例如何首乌)的发酵产物可促进毛发生长。然而，结果大多数是从实验大鼠获得的，且尚未对已罹患或正罹患脱发的人进行研究。
发明内容
技术挑战
本发明旨在提供一种有效防止脱发或促进毛发生长的组合物，或一种从泡菜中分离出且有效地分解脂肪的新颖菌株。
本发明旨在提供一种用于防止脱发或促进毛发生长的组合物，其可安全地使用而不引起副作用。
技术解决方案
本发明的一个实施例提供一种用于防止脱发或促进毛发生长的组合物，其包含具有脂肪分解能力的菌株。
具有脂肪分解能力的菌株可以是从泡菜中分离出的乳酸菌菌株。具体地说，菌株可以是属于明串珠菌(Leuconostoc)属和乳杆菌(Lactobacillus)属的菌株。更具体地说，菌株可以是扎菲尔明串珠菌(Leuconostoc holzapfelii)、肠膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)或沙克乳杆菌(Lactobacillus sakei)。甚至更具体地说，菌株可以是扎菲尔明串珠菌Ceb-kc-003(Leuconostoc holzapfelii Ceb-kc-003：KCCM11830P)、肠膜明串珠菌(KCCM11827P)或沙克乳杆菌(KCCM11841P)。
扎菲尔明串珠菌Ceb-kc-003于2016年4月11日存放于韩国微生物培养中心(Korean Culture Center of Microorganisms)(韩国120-861首尔市西大门区弘济内2街)，且分配有保藏编号KCCM11830P。菌株有效地防止脱发、促进毛发生长、改善性功能、降低胆固醇水平和/或分解脂肪。
肠膜明串珠菌(KCCM11827P)于2016年4月6日存放于韩国微生物培养中心(KoreanCulture Center of Microorganisms)(韩国120-861首尔市西大门区弘济内2街)，且分配有保藏编号KCCM11827P。菌株有效地防止脱发、促进毛发生长、改善性功能、降低胆固醇水平和/或分解脂肪。
沙克乳杆菌(KCCM11841P)于2016年6月1日存放于韩国微生物培养中心(KoreanCulture Center of Microorganisms)(韩国120-861首尔市西大门区弘济内2街)，且分配有保藏编号KCCM11841P。菌株有效地防止脱发、促进毛发生长、改善性功能、降低胆固醇水平和/或分解脂肪。
具有脂肪分解能力的菌株可以本身或以其培养物、浓缩物或干燥产物的形式使用。因此，组合物可包含具有脂肪分解能力的菌株或其培养物、浓缩物或干燥产物。
可用所属领域中已知的任何合适方法培养具有脂肪分解能力的菌株。可使用天然的培养基或合成的培养基来培养菌株。培养基的碳源的实例包含(但不限于)葡萄糖、蔗糖、糊精、甘油以及淀粉。培养基的氮源的实例包含(但不限于)蛋白胨、肉类提取物、酵母提取物、干酵母、大豆、铵盐、硝酸盐以及其它有机和无机含氮化合物。可向培养基中添加一种或多种无机盐。这类无机盐的实例包含(但不限于)镁盐、锰盐、钙盐、铁盐以及钾盐。培养基可进一步包含由氨基酸、维生素、核酸以及与其相关的化合物中选出的一种或多种化合物。可在20℃到40℃的温度下培养菌株12小时到4天。举例来说，可将一种或多种盖仑制剂、其提取物或其混合物添加到培养基中并在培养基中培养。盖仑制剂的实例包含绿仁黑豆、隔山消根、熟地黄、甘草根、川芎根、杜仲、中国肉桂皮、中国当归根、白菖蒲、何首乌、侧柏叶、姜、柏实、花椒子、升麻以及牡荆子。培养物的使用进一步改善菌株防止脱发或促进毛发生长的作用。特别优选的是将绿仁黑豆和/或隔山消根添加根培养基。绿仁黑豆和/或隔山消根可以0.01重量％到10重量％、具体地说0.01重量％到5重量％的量添加。
具有脂肪分解能力的菌株的培养物可以是含有细菌细胞的培养液。培养物也可通过从培养液或培养液的浓缩物中去除上清液来获得。培养物的组合物可进一步不仅包含具有脂肪分解能力的菌株的培养物所必需的一种或多种典型成分，并且还包含对菌株的生长施加协同作用的一种或多种成分。可由所属领域的技术人员轻易地确定培养物的组合物。
菌株可呈液体状态或干燥状态。可用所属领域中已知的任何合适技术来干燥菌株。这类干燥技术的实例包含(但不限于)空气干燥、自然干燥、喷雾干燥以及冷冻干燥。
组合物有效地防止脱发或促进毛发生长。组合物也有效地改善性功能或分解脂肪。组合物可用作医药组合物。或者，组合物可用作食品、保健食品、保健补充食品或保健功能性食品组合物。医药组合物的一个实施例可以是医药部外品或医药制剂。
举例来说，组合物可进一步包含有效地防止脱发或促进毛发生长的一种或多种盖仑成分或一种或多种医药成分。盖仑成分的实例包含盖仑制剂，例如绿仁黑豆、隔山消根、熟地黄、甘草根、川芎根、杜仲、中国肉桂皮、中国当归根、白菖蒲、红何首乌、侧柏叶、刺五加、松叶和松花、荞麦、知母、姜、柏实、花椒子、升麻以及牡荆子、其提取物以及其混合物。医药成分的实例包含米诺地尔或非那雄安。
本发明的另一实施例涉及一种用于防止脱发或促进毛发生长的组合物，其包含具有脂肪分解能力的菌株和能够降低胆固醇水平的菌株。能够降低胆固醇水平的菌株可来源于清麴酱。具体地说，能够降低胆固醇水平的菌株可以是例如属于短芽孢杆菌(Brevibacillus)属、乳杆菌(Lactobacillus)属、乳球菌(Lactococcus)属、丙酸杆菌(Propionibacterium)属、肠球菌(Enterocuccus)属或双歧杆菌(Bifidobacterium)属的菌株。更具体地说，能够降低胆固醇水平的菌株可以是例如发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)、茹氏短芽孢杆菌(Brevibacillus reuszeri)或屎肠球菌(Enterocuccusfaecium)。在一个实施例中，茹氏短芽孢杆菌Ceb-ch-003(KCCM11911P)、屎肠球菌Ceb-ch-001(KCCM11909P)和/或发酵乳杆菌Ceb-ch-002(KCCM11910P)可与本文所描述的具有脂肪分解能力的菌株组合使用。
茹氏短芽孢杆菌Ceb-ch-003从清麴酱中分离出，且于2016年10月7日存放于韩国微生物培养中心(Korean Culture Center of Microorganisms)(韩国120-861首尔市西大门区弘济内2街)且分配有保藏编号KCCM11911P。菌株有效地改善性功能或降低胆固醇水平。
屎肠球菌Ceb-ch-001从清麴酱中分离出，且于2016年10月7日存放于韩国微生物培养中心(Korean Culture Center of Microorganisms)(韩国120-861首尔市西大门区弘济内2街)且分配有保藏编号KCCM11909P。菌株有效地改善性功能或降低胆固醇水平。
发酵乳杆菌Ceb-ch-002从清麴酱中分离出，且于2016年10月7日存放于韩国微生物培养中心(Korean Culture Center of Microorganisms)(韩国120-861首尔市西大门区弘济内2街)且分配有保藏编号KCCM11910P。菌株有效地改善性功能或降低胆固醇水平。
组合物进一步包含浓度为2.5×104菌落形成单位/毫升(CFU/ml)到2.5×1010菌落形成单位/毫升、优选为5×105菌落形成单位/毫升到5×108菌落形成单位/毫升的能够降低胆固醇水平的菌株。能够降低胆固醇水平的菌株可按组合物的重量计以0.05重量％到50重量％的量存在。
组合物可进一步包含胶原蛋白。
组合物包括浓度为5×104菌落形成单位/毫升到5×1010菌落形成单位/毫升、优选为1×106菌落形成单位/毫升到1×109菌落形成单位/毫升的具有脂肪分解能力的菌株。
本发明的组合物可进一步包含药学上或营养学上可接受的载体。在这种情况下，可用载体配制组合物以提供食品或医药药物。
如本文中所使用，术语“药学上或营养学上可接受的载体”是指不对目标生物体造成刺激且并不降低生物活性和菌株特性的载体或稀释剂。
组合物可配制成用于口服或肠胃外给药的各种制剂。优选地，组合物配制成液体口服溶液。
当配制成液体溶液时，所述药学上或营养学上可接受的载体可由以下各项中选出：生理盐水溶液、无菌水、缓冲生理盐水、白蛋白注射溶液、葡萄糖溶液、麦芽糊精溶液、甘油以及其无菌且生物相容的混合物。必要时，可将例如抗氧化剂、缓冲溶液以及抑菌剂的一种或多种通用添加剂添加到组合物中。本发明的组合物可配制成液体制剂(如水溶液、悬浮液或乳液)、丸剂、胶囊、粒剂以及片剂。在这种情况下，本发明的组合物可进一步包含由以下各项中选出的一种或多种添加剂：稀释剂、分散剂、表面活性剂、粘合剂以及润滑剂。可将结合剂、乳化剂或防腐剂进一步添加到组合物中以防止组合物的质量劣化。本发明的组合物可进一步包含由以下各项中选出的一种或多种添加剂：氨基酸、维生素、酶、增味剂、非蛋白氮化合物、硅酸盐、缓冲剂、提取剂以及低聚糖。具有脂肪分解能力的菌株可以液体形式给药。在这种情况下，浓度为5×104菌落形成单位/毫升到5×108菌落形成单位/毫升、优选为1×106菌落形成单位/毫升到1×108菌落形成单位/毫升的具有脂肪分解能力的菌株可每日给药1次到4次(每次30毫升到100毫升)。举例来说，浓度为1×106菌落形成单位/毫升到1×108菌落形成单位/毫升的具有脂肪分解能力的菌株可每日给药2次到4次(每次50毫升)。更具体地说，浓度为1×106菌落形成单位/毫升到1×108菌落形成单位/毫升的具有脂肪分解能力的菌株可每日给药一次或两次(每次50毫升到100毫升)。甚至更具体地说，浓度为1×106菌落形成单位/毫升到1×108菌落形成单位/毫升的具有脂肪分解能力的菌株可在早餐之前以50毫升到100毫升的量给药一次(30分钟)，且在晚餐之前或睡前以50毫升到100毫升的量给药一次(30分钟)。浓度为2.5×104菌落形成单位/毫升到2.5×108菌落形成单位/毫升、优选为5×105菌落形成单位/毫升到5×107菌落形成单位/毫升的能够降低胆固醇水平的菌株可每日给药1次到4次(每次15毫升到50毫升)。举例来说，浓度为5×105菌落形成单位/毫升到5×107菌落形成单位/毫升的能够降低胆固醇水平的菌株可每日给药2次到4次(每次25毫升到50毫升)。更具体地说，浓度为5×105菌落形成单位/毫升到5×107菌落形成单位/毫升的能够降低胆固醇水平的菌株可每日给药一次或两次(每次25毫升到100毫升)。甚至更具体地说，浓度为5×105菌落形成单位/毫升到5×107菌落形成单位/毫升的能够降低胆固醇水平的菌株可在早餐之前以20毫升到100毫升的量给药一次(30分钟)，且在晚餐之前或睡前以20毫升到100毫升的量给药一次(30分钟。)能够降低胆固醇水平的菌株可与具有脂肪分解能力的菌株同时给药。或者，可相继给药两种菌株。能够降低胆固醇水平的菌株的给药周期和剂量可不同于具有脂肪分解能力的菌株的给药周期和剂量。
包含具有脂肪分解能力的菌株的口服制剂的实例包含片剂、锭剂、口含片、水溶性或油性悬浮液、粉剂、粒剂、乳液、硬胶囊或软胶囊、糖浆以及酏剂。本发明的组合物可配制成例如片剂和胶囊的所需制剂。在这种情况下，组合物可包含：粘合剂，例如乳糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、支链淀粉、纤维素或明胶；赋形剂，例如磷酸二钙；崩解剂，例如玉米淀粉或甘薯淀粉；或润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酰反丁烯二酸钠或聚乙二醇蜡。针对胶囊制剂，组合物可进一步包含例如脂肪油的液体载体。
对于组合物的日剂量，具有脂肪分解能力的菌株或能够降低胆固醇水平的菌株可取决于体重、年龄、性别、健康状况、待治疗的主要症状、预防或改善、给药的时间和模式以及疾病的严重度而变化，且可介于约0.0001毫克/千克到约10克/千克、具体地说约0.01毫克/千克到约500毫克/千克的范围内。对于组合物，具有脂肪分解能力的菌株或能够降低胆固醇水平的菌株一天可给药或应用1次到6次，例如1次到4次。
具有脂肪分解能力的菌株可在组合物中以液体状态或干燥状态存在，优选为液体状态。可用所属领域中已知的任何合适技术来干燥菌株。这类干燥技术的实例包含(但不限于)空气干燥、自然干燥、喷雾干燥以及冷冻干燥。具有脂肪分解能力的菌株可以粉末形式使用。在这种情况下，菌株可按组合物的重量计以0.05重量％到80重量％，例如0.1重量％到70重量％、0.1重量％到50重量％或1重量％到30重量％的量添加。具有降低胆固醇能力的菌株可以粉末形式按组合物的重量计以0.05重量％到50重量％，例如0.1重量％到50重量％、0.1重量％到40重量％或1重量％到30重量％的量添加。
本发明的另一实施例涉及一种用于防止脱发或促进毛发生长的方法，所述方法包含向个体给药包含具有脂肪分解能力的菌株的组合物。包含具有脂肪分解能力的菌株的组合物与先前实施例中所描述的组合物相同，且因此省略其详细描述以避免重复。
本发明的另一实施例涉及肠膜明串珠菌菌株(KCCM11827P)或沙克乳杆菌菌株(KCCM11841P)、其培养物、其浓缩物或其干燥产物。菌株为从泡菜中分离出的乳酸菌菌株且具有分解脂肪的能力。菌株有效地防止脱发、促进毛发生长或分解脂肪。
本发明的另一实施例涉及一种制备用于防止脱发或促进毛发生长的组合物的方法，包含：制备具有脂肪分解能力的菌株、其培养物、其浓缩物或其干燥产物；以及将药学上或营养学上可接受的载体应用到菌株或其培养物、浓缩物或干燥产物。具有脂肪分解能力的菌株和其培养物、浓缩物或干燥产物与先前实施例中所描述的那些相同，且因此省略其详细描述以避免重复。
本发明的一个实施例涉及一种用于改善性功能障碍的组合物，其包含具有脂肪分解能力的菌株、其培养物、其浓缩物或其干燥产物。性功能障碍可以是勃起功能障碍。本发明的另一实施例涉及一种防止或治疗性功能障碍的方法，所述方法包含向需要这类预防或治疗的个体给药治疗或预防有效量的具有脂肪分解能力的菌株或其培养物、浓缩物或干燥产物。治疗或预防有效量与上文所描述的治疗或预防有效量相同。
有利效应
具有脂肪分解能力的菌株和包含所述菌株的组合物有效地防止脱发、促进毛发生长或改善性功能。
另外，具有脂肪分解能力的菌株和包含所述菌株的组合物可安全地使用而不引起副作用，从而防止脱发、促进毛发生长、降低胆固醇水平或改善性功能。
附图说明
图1为将扎菲尔明串珠菌Ceb-kc-003(KCCM11830P)与另一乳酸菌菌株对脂肪分解的作用进行比较的直方图。
图2为将扎菲尔明串珠菌Ceb-kc-003(KCCM11830P)与另一乳酸菌菌株对NO产生的作用进行比较的直方图。
图3为将沙克乳杆菌(KCCM11841P)与另一乳酸菌菌株对脂肪分解的作用进行比较的直方图。
图4为将肠膜明串珠菌KCCM11827P与另一乳酸菌菌株对脂肪分解的作用进行比较的直方图。
图5示出将采用扎菲尔明串珠菌Ceb-kc-003(KCCM11830P)之前与采用其约3.5个月之后的头发进行比较的照片。
图6示出将采用扎菲尔明串珠菌Ceb-kc-003(KCCM11830P)之前与采用其约2.5个月和约3.5个月之后的头发进行比较的照片。
图7示出将采用扎菲尔明串珠菌Ceb-kc-003(KCCM11830P)之前与采用其约1.7个月之后的头发进行比较的照片。
图8示出将采用扎菲尔明串珠菌Ceb-kc-003(KCCM11830P)之前与采用其约3个月之后的头发进行比较的照片。
图9示出展示采用肠膜明串珠菌(KCCM11827P)约3个月之后头发的光泽度和厚度的变化以及新刘海的生长的照片。
图10示出将采用肠膜明串珠菌(KCCM11827P)之前与采用其约45天之后的头发进行比较的照片。
图11示出将采用肠膜明串珠菌(KCCM11827P)之前与采用其约1个月之后的头发厚度、强度以及颜色进行比较的照片。
图12示出将采用沙克乳杆菌(KCCM11841P)之前与采用其约27天之后的头发进行比较的照片。
图13示出将采用沙克乳杆菌(KCCM11841P)之前与采用其约2个月之后的头发进行比较的照片。
图14示出将采用沙克乳杆菌(KCCM11841P)之前与采用其约1.5个月之后的头发进行比较的照片。
图15示出将采用肠膜明串珠菌(KCCM11827P)和发酵乳杆菌Ceb-ch-002(KCCM11910P)的组合之前与采用所述组合约2个月之后的头发进行比较的照片。
图16示出将采用肠膜明串珠菌(KCCM11827P)和发酵乳杆菌Ceb-ch-002(KCCM11910P)的组合之前与采用所述组合约1.5个月之后的头发进行比较的照片。
图17示出将采用沙克乳杆菌(KCCM11841P)和发酵乳杆菌Ceb-ch-002(KCCM11910P)的组合之前与采用所述组合约1.5个月之后的头发进行比较的照片。
图18示出将采用沙克乳杆菌(KCCM11841P)和发酵乳杆菌Ceb-ch-002(KCCM11910P)的组合之前与采用所述组合约3个月之后的头发进行比较的照片。
图19为将从清麴酱(韩国经发酵大豆)中分离出的发酵乳杆菌(KCCM11910P)降低胆固醇的能力与另一乳酸菌菌株的降低胆固醇的能力进行比较的直方图。
具体实施方式
将参考以下实例更详细地描述本发明。然而，这些实例仅出于说明性目的提供且本发明不限于此。
实例1到实例3：从泡菜中分离出扎菲尔明串珠菌菌株Ceb-kc-003(KCCM11830P)、肠膜明串珠菌菌株(KCCM11827P)以及沙克乳杆菌菌株(KCCM11841P)并识别所述菌株(1)采样和菌株分离
样本取自泡菜(韩国传统经发酵食品)，逐步地经稀释，接种在补充有3％氯化钠的BHI固体培养基(美国蒂夫科(Difco,USA))上，并在37℃下培养24小时。从所述样本中分离出主要菌株。菌落经选择并在新鲜培养基中传代三次。纯培养的细菌菌株放置在补充有20％甘油的培养基中并在≤-70℃下存储。
(2)形态学和分类学特性的研究
识别所分离的菌株。为这个目的，首先在形态上和生物化学上研究菌株。通过革兰氏染色(Gram staining)发现菌株在形态上呈革兰氏阳性。通过16s rRNA部分测序分析菌株的分类学特性。因此，发现所分离的菌株与扎菲尔明串珠菌的同源性为99％。
新的所分离的菌株扎菲尔明串珠菌Ceb-kc-003于2016年4月11日存放于韩国微生物培养中心(Korean Culture Center of Microorganisms)(韩国120-861首尔市西大门区弘济内2街)，且分配有保藏编号KCCM11830P。
在上文所描述的条件下培养之后从另一泡菜样本中分离出主要菌株。作为形态学和生物化学研究的结果，发现菌株与肠膜明串珠菌的同源性为99％。
新的所分离的菌株肠膜明串珠菌于2016年4月6日存放于韩国微生物培养中心(Korean Culture Center of Microorganisms)(韩国120-861首尔市西大门区弘济内2街)，且分配有保藏编号KCCM11827P。
在上文所描述的条件下培养之后从另一泡菜样本中分离出主要菌株。作为形态学和生物化学研究的结果，发现菌株与沙克乳杆菌的同源性为99％。
新的所分离的菌株沙克乳杆菌于2016年6月1日存放于韩国微生物培养中心(Korean Culture Center of Microorganisms)(韩国120-861首尔市西大门区弘济内2街)，且分配有保藏编号KCCM11841P。
菌株经冻干且呈粉末状。
(3)菌株的培养液的制备
通过以下过程来制备扎菲尔明串珠菌Ceb-kc-003的培养液(实例1)：
将2千克的葡萄糖、1.5千克的全脂奶粉以及0.05千克的酵母提取物添加到100公升的纯化水中。混合物于高压釜中在121℃下灭菌15分钟到30分钟，并冷却到约35℃。此后，用0.2公升到0.4公升的扎菲尔明串珠菌Ceb-kc-003接种无菌混合物，随后在约35℃下培养2天到3天。
以与上文所描述的扎菲尔明串珠菌Ceb-kc-003的培养液相同的方式来制备肠膜明串珠菌(KCCM11827P)和沙克乳杆菌(KCCM11841P)的培养液(分别为实例2到实例3)。
实例4：扎菲尔明串珠菌菌株Ceb-kc-003(KCCM11830P)对脂肪分解的作用
在这个实例中，检测扎菲尔明串珠菌菌株Ceb-kc-003(KCCM11830P)对脂肪分解的作用。为这个目的，用20毫升到100毫升的菌株的培养物液处理1000立方厘米的猪脂肪，随后在37℃下振荡24小时。针对植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)重复这一过程作为对照。
结果示出于图1中。
根据这些结果，可作出结论：相比于另一乳酸菌物种植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)，扎菲尔明串珠菌菌株Ceb-kc-003(KCCM11830P)的粉剂对于脂肪分解与菌株浓度成比例地显著有效。
实例5：扎菲尔明串珠菌菌株Ceb-kc-003(KCCM11830P)对改善性功能和防止性功能障碍的作用
将浓度为1×106菌落形成单位/毫升到1×108菌落形成单位/毫升的扎菲尔明串珠菌菌株Ceb-kc-003(KCCM11830P)的粉剂口服给药给总计10名患有性功能障碍或未患有性功能障碍的男性吸烟者或非吸烟者，年龄为45岁到70岁，每日一次或两次(每次50毫升到100毫升)，历经总计3个月。在给药菌株之前以及在给药菌株之后每间隔1个月对清晨勃起频率、勃起能力以及勃起持续时间进行自我评估。
10名男性中有4人在服用之后的1个月到3个月回答了调查表。结果示出于表1中。
[表1]
关于菌株对改善性功能的作用的数据
上述结果指示持续采用扎菲尔明串珠菌菌株Ceb-kc-003的粉剂有效地防止并治疗性功能障碍。
另外，评估24小时内从Hacat细胞中释放出的NO的浓度。由于NO能够增强血液循环且扩张毛细血管，因此NO有助于改善勃起能力。将采用本发明的新颖菌株之后产生的NO的浓度与采用植物乳杆菌之后的NO的浓度进行比较。这一实验重复进行三次，并对数据求平均值。结果示出于图2中。
实例6：沙克乳杆菌菌株(KCCM11841P)对脂肪分解的作用
在这个实例中，检测沙克乳杆菌菌株(KCCM11841P)对脂肪分解的作用。为这个目的，用20毫升到100毫升的菌株的培养液处理1000立方厘米的猪脂肪，随后在37℃下振荡24小时。针对植物乳杆菌重复这一过程作为对照。
结果示出于表2和图3中。
[表2]
沙克乳杆菌(KCCM11841P) 植物乳杆菌
20毫升 7％ 3％
40毫升 13％ 7％
60毫升 25％ 11％
80毫升 32％ 15％
100毫升 41％ 18％
根据这些结果，可作出结论：相比于另一乳酸菌物种植物乳杆菌，沙克乳杆菌菌株(KCCM11841P)的粉剂对于脂肪分解与菌株浓度成比例地显著有效。
实例7：肠膜明串珠菌菌株(KCCM11827P)对脂肪分解的作用
在这个实例中，检测肠膜明串珠菌菌株(KCCM11827P)对脂肪分解的作用。为这个目的，用20毫升到100毫升的菌株的培养液处理1000立方厘米的猪脂肪，随后在37℃下振荡24小时。针对植物乳杆菌重复这一过程作为对照。
结果示出于表3和图4中。
[表3]
肠膜明串珠菌(KCCM11827P) 植物乳杆菌
20毫升 8％ 3％
40毫升 13％ 5％
60毫升 27％ 9％
80毫升 31％ 11％
100毫升 37％ 15％
根据这些结果，可作出结论：相比于另一乳酸菌物种植物乳杆菌，肠膜明串珠菌菌株(KCCM11827P)的粉剂对于脂肪分解与菌株浓度成比例地显著有效。
实例8：扎菲尔明串珠菌菌株Ceb-kc-003(KCCM11830P)对脱发的防止性作用
将浓度为1×106菌落形成单位/毫升到1×108菌落形成单位/毫升的实例1中制备的扎菲尔明串珠菌菌株Ceb-kc-003(KCCM11830P)的培养液口服给药给罹患秃头症的总计5名年龄为40岁到85岁的男性以及一名女性，每日两次(每次50毫升到100毫升)，历经1个月到4个月。
在采用菌株之前以及采用菌株之后的10天、20天以及30天统计头发丢失的数量。指示患者在头发计数之前清洗其头发。
实验结果示出于表4中。
[表4]
采用之前和采用之后的头发丢失的数量
在给药菌株之前以及在给药菌株之后的预定时间点对男性患者的头发拍照，以测量其厚度、数量以及光泽度。结果中的一些示出于图5到图8中。
这些结果指示扎菲尔明串珠菌菌株Ceb-kc-003(KCCM11830P)有效地防止脱发以及明显改善头发的厚度、数量以及光泽度。因此，可作出结论：扎菲尔明串珠菌菌株Ceb-kc-003(KCCM11830P)有效地治疗脱发。
实例9：肠膜明串珠菌菌株(KCCM11827P)对脱发的防止性作用
将浓度为1×106菌落形成单位/毫升到1×108菌落形成单位/毫升的实例2中制备的肠膜明串珠菌菌株(KCCM11827P)的培养液口服给药给罹患秃头症的年龄为43岁的女性、年龄为60岁的男性以及年龄为49岁的女性，每日两次(每次50毫升到100毫升)，历经1个月到3个月。
在采用菌株之前以及采用菌株之后的10天、20天以及30天统计头发丢失的数量。指示患者在头发计数之前清洗其头发。
实验结果示出于表5中。
[表5]
采用之前和采用之后的头发丢失的数量
在给药菌株之前以及在给药菌株之后的预定时间点对患者的头发拍照，以测量其厚度、数量以及光泽度。结果中的一些示出于图9到图11中。
这些结果指示肠膜明串珠菌菌株(KCCM11827P)有效地防止脱发以及明显改善头发的厚度、数量以及光泽度。因此，可作出结论：扎菲尔明串珠菌菌株Ceb-kc-003(KCCM11830P)有效地治疗脱发。
实例10：沙克乳杆菌菌株(KCCM11841P)对脱发的防止性作用
将浓度为1×106菌落形成单位/毫升到1×108菌落形成单位/毫升的实例3中制备的沙克乳杆菌菌株(KCCM11841P)的培养液口服给药给罹患秃头症的年龄为52岁的男性、年龄为42岁的女性以及年龄为60岁的男性，每日两次(每次50毫升到100毫升)，历经0.8个月到3个月。
在采用菌株之前以及采用菌株之后的10天、20天以及27天统计头发丢失的数量。指示患者在头发计数之前清洗其头发。
实验结果示出于表6中。
[表6]
采用之前和采用之后的头发丢失的数量
在给药菌株之前以及在给药菌株之后的预定时间点对患者的头发拍照，以确定病患的头皮是否改善并测量头发厚度、数量以及光泽度。结果中的一些示出于图12到图14中。
这些结果指示沙克乳杆菌菌株(KCCM11841P)有效地防止脱发、改善头皮条件以及明显改善头发的厚度、数量以及光泽度。因此，可作出结论：沙克乳杆菌菌株(KCCM11841P)有效地治疗脱发。
实例11：发酵乳杆菌菌株Ceb-ch-002(KCCM11910P)的分离和识别
(1)采样和菌株分离
样本取自清麴酱(韩国经发酵大豆)，逐步地经稀释，接种在补充有3％氯化钠的BHI固体培养基(美国蒂夫科)上，并在37℃下培养24小时。从所述样本中分离出主要菌株。菌落经选择并在新鲜培养基中传代三次。纯培养的细菌菌株放置在补充有20％甘油的培养基中并在≤-70℃下存储。
(2)形态学和分类学特性的研究
识别所分离的菌株。为这个目的，首先在形态上和生物化学上研究菌株。通过革兰氏染色发现菌株在形态上呈革兰氏阳性。通过16s rRNA部分测序分析菌株的分类学特性。因此，发现所分离的菌株与发酵乳杆菌的同源性为99％。
新的所分离的菌株发酵乳杆菌Ceb-ch-002于2016年10月7日存放于韩国微生物培养中心(Korean Culture Center of Microorganisms)(韩国120-861首尔市西大门区弘济内2街)且分配有保藏编号KCCM11910P。
菌株经冻干且呈粉末状。
(3)菌株的培养液的制备
通过以下过程来制备发酵乳杆菌(KCCM11910P)的培养液：
将2千克的葡萄糖、1.5千克的全脂奶粉以及0.05千克的酶提取物添加到100公升的纯化水中。混合物于高压釜中在121℃下灭菌15分钟到30分钟，并冷却到约35℃。此后，用0.2公升到0.4公升的发酵乳杆菌Ceb-ch-002接种无菌混合物，随后在约35℃下培养2天到3天。
实例12：发酵乳杆菌菌株Ceb-ch-002(KCCM11910P)对降低胆固醇水平的作用
检测发酵乳杆菌菌株Ceb-ch-002(KCCM11910P)的粉剂对降低胆固醇水平的作用。为这个目的，使用发酵乳杆菌菌株Ceb-ch-002(KCCM11910P)(1毫克/毫升到5毫克/毫升)的冻干粉剂的溶液以及作为对照的植物乳杆菌(1毫克/毫升到5毫克/毫升)的粉剂的溶液。
<降低胆固醇(cholesterol)的能力>
通过以下过程来具体地量测菌株降低胆固醇(cholesterol)的能力。
将30毫升的MRS培养基添加到50毫升的法尔康(Falcon)试管(tube)中，用密度为1×107计数/毫升(counts/ml)的测试菌株(甘油(glycerol)贮存(stock))接种，并在30℃下培养24小时。将300微升的培养液添加到30毫升的含有350毫克/公升胆固醇(cholesterol)(和光纯药工业(Wako Pure Chemical))和0.2％胆汁酸(w/v)的MRS培养基中。在37℃下培养24小时之后，培养液在8,000转/分钟(rpm)和4℃下经受10分钟离心分离(centrifugalseparation)。使用确定器FC(Determiner FC)(协和医药株式会社(Kyowa Medex Co.,Ltd.))来测量上清液的胆固醇水平(cholesterol level)。通过从胆固醇培养基的初始胆固醇(cholesterol)含量减去剩余胆固醇含量来计算从培养基中降低的胆固醇(cholesterol)的含量(％)。
结果示出于图19和表7中。这一实验重复进行三次，并对数据求平均值。
[表7]
实例13：肠膜明串珠菌菌株(KCCM11827P)和发酵乳杆菌菌株Ceb-ch-002(KCCM11910P)的组合对脱发的作用
将浓度为0.5×106菌落形成单位/毫升到0.5×108菌落形成单位/毫升的实例2中制备的肠膜明串珠菌菌株(KCCM11827P)的培养液与浓度为0.5×106菌落形成单位/毫升到0.5×108菌落形成单位/毫升的实例11中制备的发酵乳杆菌菌株(KCCM11910P)的培养液组合。将两种菌株培养溶液的组合口服给药给罹患秃头症的56岁男性和55岁男性，每日两次(每次50毫升到100毫升)，历经1个月到3个月。
在采用菌株之前以及采用菌株之后的10天、20天以及40天统计头发丢失的数量。指示患者在头发计数之前清洗其头发。
实验结果示出于表8中。
[表8]
采用之前和采用之后的头发丢失的数量
在给药菌株之前以及在给药菌株之后的预定时间点对患者的头发拍照，以测量其厚度、数量以及光泽度。结果中的一些示出于图15到图16中。
这些结果指示肠膜明串珠菌菌株(KCCM11827P)和发酵乳杆菌菌株(KCCM11910P)的组合特别有效地防止脱发以及明显改善头发的厚度、数量以及光泽度。因此，可作出结论：相比于肠膜明串珠菌菌株(KCCM11827P)的单一给药，两种菌株的组合给药有效地治疗脱发。
实例14：沙克乳杆菌菌株(KCCM11841P)和发酵乳杆菌菌株Ceb-ch-002(KCCM11910P)的组合对脱发的防止性作用
将浓度为0.5×106菌落形成单位/毫升到0.5×108菌落形成单位/毫升的实例3中制备的沙克乳杆菌菌株(KCCM11841P)的培养液与浓度为0.5×106菌落形成单位/毫升到0.5×108菌落形成单位/毫升的实例9中制备的发酵乳杆菌菌株(KCCM11910P)的培养液组合。将两种菌株培养溶液的组合口服给药给罹患秃头症的28岁男性和54岁男性，每日两次(每次50毫升到100毫升)，历经1个月到3个月。
在采用菌株之前以及采用菌株之后的10天、20天以及40天统计头发丢失的数量。指示患者在头发计数之前清洗其头发。
实验结果示出于表9中。
[表9]
采用之前和采用之后的头发丢失的数量
在给药菌株之前以及在给药菌株之后的预定时间点对患者的头发拍照，以测量其厚度、数量以及光泽度。结果中的一些示出于图17到图18中。
PCT/RO/134表

Claims (21)

1.一种组合物，用于防止脱发或促进毛发生长，包括具有脂肪分解能力的菌株。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述具有脂肪分解能力的菌株为从泡菜中分离出的乳酸菌菌株。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述从泡菜中分离出的乳酸菌菌株为扎菲尔明串珠菌(Leuconostoc holzapfelii)、肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)或沙克乳杆菌(Lactobacillus sakei)。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述从泡菜中分离出的乳酸菌菌株为扎菲尔明串珠菌Ceb-kc-003(KCCM11830P)、肠膜明串珠菌(KCCM11827P)或沙克乳杆菌(KCCM11841P)。
5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述具有脂肪分解能力的菌株以每日约0.0001毫克/千克到约10克/千克的量给药。
6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物为医药组合物或食品组合物。
7.根据权利要求1到6中任一项所述的组合物，其中所述组合物为口服或肠胃外给药。
8.根据权利要求1到6中任一项所述的组合物，其中每日给药浓度为5×104菌落形成单位/毫升到5×108菌落形成单位/毫升的所述具有脂肪分解能力的菌株1次到4次，每次30毫升到100毫升。
9.根据权利要求1到6中任一项所述的组合物，其中所述组合物有效地改善性功能。
10.根据权利要求1到6中任一项所述的组合物，进一步包括能够降低胆固醇水平的菌株。
11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述能够降低胆固醇水平的菌株来源于清麴酱。
12.根据权利要求11所述的组合物，其中来源于清麴酱的所述菌株为属于短芽孢杆菌(Brevibacillus)属、乳杆菌(Lactobacillus)属、乳球菌(Lactococcus)属、丙酸杆菌(Propionibacterium)属、肠球菌(Enterocuccus)属或双歧杆菌(Bifidobacterium)属的菌株。
13.根据权利要求12所述的组合物，其中来源于清麴酱的所述菌株为茹氏短芽孢杆菌(Brevibacillus reuszeri)Ceb-ch-003(KCCM11911P)、屎肠球菌(Enterocuccus faecium)Ceb-ch-001(KCCM11909P)或发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)Ceb-ch-002(KCCM11910P)。
14.根据权利要求10所述的组合物，进一步包括药学上或营养学上可接受的载体。
15.根据权利要求1到6中任一项所述的组合物，其中所述具有脂肪分解能力的菌株按所述组合物的重量计以0.05重量％到80重量％的量存在。
16.根据权利要求10所述的组合物，其中所述组合物包括0.05重量％到50重量％的所述能够降低胆固醇水平的菌株。
17.根据权利要求10所述的组合物，其中所述组合物有效地降低胆固醇水平和/或改善性功能。
18.一种肠膜明串珠菌菌株(KCCM11827P)、其培养物、其浓缩物或其干燥产物。
19.一种沙克乳杆菌菌株(KCCM11841P)、其培养物、其浓缩物或其干燥产物。
20.根据权利要求18或19所述的菌株或其培养物、浓缩物或干燥产物，其中所述菌株有效地防止脱发、促进毛发生长、改善性功能或分解脂肪。
21.一种制备用于防止脱发或促进毛发生长的组合物的方法，包括：制备具有脂肪分解能力的菌株、其培养物、其浓缩物或其干燥产物；以及将药学上或营养学上可接受的载体应用到所述菌株或其所述培养物、所述浓缩物或所述干燥产物。
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