KR102500894B1 - 유산균 및 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

[과제] 본 발명은 신규의 유산균 또는 이의 처리물의 제공을 과제로 한다. 또한, 본 발명은 상기 유산균 또는 이의 처리물의 증식방법 또는 이의 용도의 제공을 과제로 한다. [해결 수단] 본 발명은 유산균 엔테로코커스 듀란스균(E. durans) HS-08주의 균체 또는 이의 처리물을 제공한다. 또한, 본 발명은 IgA 생산 촉진 작용, 면역부활, 항알레르기 작용, 유해균 및/또는 병원균 증식 억제 작용, 점막보호 작용, 단쇄 지방산 생산의 증강 작용, 유기산 생산의 증강 작용, 및 GPR43의 유전자 발현 상승 작용, 식물의 생장 조절 작용, 식물의 쓰러짐 방지 작용, 식물의 감칠맛 조정 작용, 동물의 성장 촉진 작용, 또는 동물의 자가면역 향상을 달성할 수 있다.

Description

유산균 및 이의 용도
본 발명은 신규의 유산균 또는 이의 처리물, 상기 유산균 또는 이의 처리물의 증식방법, 및 이의 용도에 관한 것이다.
유산균은 요구르트나 절임식품 등의 발효식품에 널리 사용되며, 매우 친근하고 안심할 수 있는 것이다. 최근, 몇 가지의 유산균이 프로바이오틱스, 즉 인간의 건강에 좋은 영향을 주는 미생물로서 주목을 받고 있으며, 이러한 유산균의 다양한 효능에 대하여 매일 연구가 진행되고 있다.
예를 들면, 유산균이 갖는 기능의 하나로서, IgA 생산 유도 작용을 갖는 유산균이 보고되어 있다(특허문헌 1, 2). 또한, 유산균체 또는 이의 처리물이 IgA 생산 유도 작용을 갖고 있는 것, 유산균체 또는 이의 처리물에 감염증 예방, 종양 억제, 알레르기 억제 및 정장(整腸) 작용 등의 효과가 기대되고, 유산균체 또는 이의 처리물이 면역부활제나 정장제 등에 이용할 수 있는 것도 알려져 있다(특허문헌 3). 그러나 한편으로, 유산균체 또는 이의 처리물이 초래하는 효과는 동일한 균종이어도 균주가 상이한 경우에는 크게 상이한 경우가 있는 것도 알려져 있다. 이 때문에, 균주의 선정은 매우 중요하며, 보다 기능이 높은 유산균주를 단리하고자 하는 시도가 매일 행해지고 있다.
특허문헌 1: 일본특허공개 제2004-305128호 공보 특허문헌 2: 일본특허공개 제2010-130954호 공보 특허문헌 3: 일본특허공개 제2008-201708호 공보
본 발명은 신규하고 또한 우수한 유산균 또는 이의 처리물의 제공을 과제로 한다. 또한, 본 발명은 상기 유산균 또는 이의 처리물의 제조방법 또는 이의 용도의 제공을 과제로 한다.
본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위하여 예의 연구를 거듭한 결과, 유산균 엔테로코커스 듀란스(이하, 「E. durans」라고도 지칭한다.) HS-08주 (수탁번호 NITE BP-02675)의 채취에 성공하였고, 이것이 다양한 우수한 유용성을 갖는다는 것을 발견하여, 이 지견에 기초하여 더욱 연구를 진척시켜 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
즉, 본 발명은 상기 과제를 해결하기 위하여 이하의 각 발명을 포함한다.
[1] 엔테로코커스 듀란스 HS-08(수탁번호 NITE BP-02675)의 균체 또는 이의 처리물.
[2] [1]에 기재된 균체 또는 이의 처리물을 함유하는, IgA 생산 유도용 또는 면역부활용 조성물.
[3] [1]에 기재된 균체 또는 이의 처리물을 함유하는, 항알레르기용 조성물.
[4] [1]에 기재된 균체 또는 이의 처리물을 함유하는, 유해균 및/또는 병원균의 증식 억제용 조성물.
[5] [1]에 기재된 균체 또는 이의 처리물을 함유하는, 점막 보호용 조성물.
[6] [1]에 기재된 균체 또는 이의 처리물을 함유하는, 단쇄 지방산 생산의 증강, 유기산 생산의 증강, 및 GPR43의 유전자 발현 상승용으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 용도에 사용되는 것을 특징으로 하는 조성물.
[7] [1]에 기재된 균체 또는 이의 처리물을 함유하는, 식물의 생장 조절용, 식물의 쓰러짐(倒伏) 방지용, 및 식물의 감칠맛(umami) 조정용으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 용도에 사용되는 것을 특징으로 하는 조성물.
[8] [1]에 기재된 균체 또는 이의 처리물을 함유하는, 동물의 성장 촉진용 및/또는 동물의 자가면역 향상용의 용도에 사용되는 것을 특징으로 하는 조성물.
[9] [1]에 기재된 균체 또는 이의 처리물 또는 [7]에 기재된 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 식물용 비료.
[10] [1]에 기재된 균체 또는 이의 처리물 또는 [8]에 기재된 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 동물용 사료.
[11] [1]에 기재된 균체 또는 이의 처리물 또는 [2]∼[8] 중 어느 하나에 기재된 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 음식품(飮食品), 화장품 또는 의약품.
[12] [1]에 기재된 균체 또는 이의 처리물 또는 [2]∼[8] 중 어느 하나에 기재된 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 콘크리트 부재.
[13] [1]에 기재된 균체 또는 이의 처리물, 및 다른 유산균, 비피더스균, 또는 효모균을 포함한 유용균, 및 곰팡이로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종 또는 이들의 처리물을 함유하는 조성물.
[14] 엔테로코커스 듀란스 HS-08(수탁번호 NITE BP-02675)의 균체를 배양하는 것을 특징으로 하는, 엔테로코커스 듀란스 HS-08의 균체의 증식방법.
본 발명은 유산균 엔테로코커스 듀란스(Enterococcus durans; 이하, 「E. durans」라고도 지칭한다.) HS-08주 (수탁번호 NITE BP-02675) (이하, 「본 발명의 유산균」이라고도 지칭한다.) 또는 이의 처리물을 제공한다.
본 발명의 유산균은 면역항체에 일종인 IgA의 현저한 생산 유도 작용 및 이것에 의한 생체에 있어서의 면역부활 작용을 촉진한다.
또한, 본 발명의 유산균은 항알레르기 작용, 더욱이 놀랍게도, 유해균 및/또는 병원균의 증식 억제 작용, 점막보호 작용, 단쇄 지방산 생산의 증강 작용, 유기산 생산의 증강 작용, GPR43의 유전자 발현 상승 작용, 식물의 생장 조절, 쓰러짐(倒伏) 방지, 또는 감칠맛 조정 작용 또는 동물의 성장 촉진, 또는 자가면역 향상 작용을 나타낸다.
도 1은 마우스의 변 중의 IgA 양(μg/day)을 나타내는 그래프이다.
도 2는 마우스의 혈액 중의 IgA 농도(μg/mL)를 나타내는 그래프이다.
도 3은 마우스의 체중(g)을 나타내는 그래프이다.
도 4는 마우스의 혈액 중의 CRE 농도(μg/mL)를 나타내는 그래프이다.
도 5는 마우스의 혈액 중의 ALT 농도(iU/L)를 나타내는 그래프이다.
도 6은 마우스의 혈액 중의 AST 농도(iU/L)를 나타내는 그래프이다.
도 7은 IgA 생산에 관여하는 각종 유전자의 발현양을 나타내는 그래프이다.
도 8은 마우스의 변 중의 유기산 및 단쇄 지방산 농도(μmol/g)를 나타내는 그래프이다.
도 9는 마우스의 변 중의 pH를 나타내는 그래프이다.
도 10은 GPR43의 유전자 발현양을 나타내는 그래프이다.
E. durans HS-08주 (수탁번호 NITE BP-02675)는 독립행정법인 제품평가기술기반기구 바이오테크놀로지센터 특허미생물기탁센터(NPMD)(주소: 우편번호 292-0818 일본국 치바켄 키사라즈시 카즈사카마타리 2-5-8)에 2018년 4월 10일에 부다페스트 조약에 근거한 국제기탁을 위해서 수령되었다.
상기 균은 상기 기탁센터에 신청함으로써 입수될 수 있으나, 예를 들면, 형태적 특징(예를 들면, 콜로니의 형상, 세포의 형 등), 생리, 생화학 성상(예를 들면, 당의 자화성(資化性), 생육 온도, 적정 pH 등), 화학분류학적 성상(균체 지방산 조성 등) 등의 성상을 E. durans HS-08주 (수탁번호 NITE BP-02675)와 비교하여, 그 성상의 비교 결과에 기초하여 동정한 균이어도 좋고, 16S rRNA 유전자의 염기서열 해석에 기초하여 동정한 균이어도 좋다.
E. durans HS-08주는 예를 들면 이하의 방법에 의해 배양되는 것이 바람직하다.
(i) 배양액(배지): MRS(de Man, Rogosa and Sharpe) 배지, MRS 한천 배지, LBS 배지, 변법(modified) LBS 한천 배지, Rogosa 배지, 기타 공지의 유산균용 배지 또는 배양액 등을 포함한다. (ii) pH는 4∼9 정도, 바람직하게는 5∼8 정도, 더욱 바람직하게는 5.5∼7.5 정도이다. (iii) 배양방법은 정치배양이어도 좋지만, 교반배양이어도 좋다. 교반배양의 경우 교반회수는 1분간 당 100∼250회 정도이어도 좋고, 바람직하게는 1분간 당 120∼180회 정도, 더욱 바람직하게는 1분간 당 140∼160회 정도이다. (iv) 배양시간은 통상 1∼72시간 정도, 바람직하게는 3∼48시간 정도, 더욱 바람직하게는 6∼24시간 정도이다. (v) 배양온도는 통상 20∼40℃ 정도, 바람직하게는 25∼39℃ 정도, 더욱 바람직하게는 30∼38℃ 정도이다. (vi) 기타, MRS 배지, MRS 한천 배지, LBS 배지, 변법 LBS 한천 배지, Rogosa 배지, 기타 공지의 유산균용 배지 또는 배양액은 다른 첨가제를 포함해도 좋다.
이러한 배지에 포함되는 성분 또는 첨가제로는, 이들에 한정되는 것은 아니나, 예를 들면, 효모 유래 성분, 대두 유래 성분, 옥수수 유래 성분, 동식물 단백질 또는 이의 엑기스 및 분해물, 질산 암모늄, 황산 암모늄, 염화 암모늄, 초산 암모늄 등의 암모늄염, 암모니아, 질산 나트륨, 질산 칼륨, 글루탐산 나트륨, 요소, 아미노산, 글루텐, 카제인, 펩톤 등으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 질소원, 글루코오스, 이노시톨, 말토오스, 자일로오스, 만노오스, 프락토오스, 전분, 락토오스, 글리세롤, 아라비노오스, 리보오스, 갈락토오스, 프럭토오스, 이노시톨, 만니톨, 소르비톨, 글루코사민, 셀로비오스, 수크로오스, 트레할로오스, 자일리톨, 알코올, 물엿, 전분, 당밀, 글리세린, 유기산, 유기산염, 및 탄화수소로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 탄소원을 들 수 있다. 또한, 비타민 A, B, C, D, E, K 등의 비타민류 또는 이들의 유도체, 혹은 이들의 염류, 아연, 철, 마그네슘, 칼륨, 칼슘, 인 등의 미네랄, pH 완충제, 계면활성제, 항생물질, 안정화제 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 기타의 성분 또는 첨가제로는, 수크로오스, 탄산염, 탄산수소염, HEPES, 알부민, 인슐린, 아미노산, 사이토카인, 성장인자, 호르몬 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 첨가제는 1종을 단독으로 또는 2종 이상을 조합하여 사용할 수 있다. 한편, 배양시의 혐기성 또는 호기성 조건에 대하여는 본 기술분야에서 공지된 방법을 따라도 좋다.
본 발명의 유산균은 동결건조, 저온건조, 분무건조, 또는 L-건조 등이나 이들을 조합하여 분말상으로 하여 사용해도 좋고, 또한 상기 방법에 의해 얻어지는 그대로(페이스트상, 액체상) 등으로 하여 사용해도 좋다. 유산균을 분말상으로 하여 사용하는 경우, 생균수는 107∼108 cfu/g가 바람직하고, 109∼1012 cfu/g가 더욱 바람직하지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 유산균을 액체상으로 하여 사용하는 경우, 생균수는 107∼108 cfu/mL이 바람직하고, 109∼1012 cfu/mL이 더욱 바람직하지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 생균수의 측정은 균체에 의해 다르지만, 예를 들면, 일본약국방외의약품규격에 기재된 각각의 균체의 정량방법에 의해 용이하게 측정할 수 있다.
본 발명의 유산균 「처리물」또는 다른 유산균의 「처리물」이라 함은 바람직하게는 해당 유산균을 가공한 것 또는 해당 유산균의 배양물이지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 또한, 균은 생균이어도 좋고, 사균체이어도 좋다. 본 발명에 있어서는, 이러한 처리물을 그대로 사용해도 좋고, 동결건조, 저온건조, 분무건조, 또는 L-건조 등이나 이들을 조합하여 분말상으로 하여 사용해도 좋다. 또한, 이들 처리물(배양물)은 적절한 용매(물, 알코올, 유기용제 등)로 희석하여 사용해도 좋고, 적절한 첨가제를 첨가하여, 겔이나 고형제로 하여 사용해도 좋다.
본 발명의 유산균 또는 이의 처리물은, 이것 이외의 유용균(예를 들면, 락토바실러스 속, 류코노스톡 속, 스트렙토코커스 속에 속하는 유산균; 비피더스균; 효모균; 혹은 곰팡이 등) 또는 이의 처리물과 병용해도 좋다. 기타의 유산균으로는, 예를 들면, 락토바실러스 애시도필러스(lactobacillus acidophillus), 락토바실러스 델브루엑키이(L. delbrueckii), 락토바실러스 카제이(L. casei), 락토바실러스 레이크만니(L. leichmannii), 락토바실러스 프럭티보란스(L. fructivorans), 락토바실러스 헬베티쿠스(L. helveticus), 락토바실러스 힐가르디(L. hilgardii), 락토바실러스 케피리(L. kefiri), 락토바실러스 케피라노파시엔스(L. kefiranofaciens), 락토바실러스 케피르그라눔(L. kefirgranum), 락토바실러스 파라케피르(L. parakefir), 락토바실러스 펜토아세티쿠스(L. pentoaceticus), 락토바실러스 카레트(L. caret), 락토바실러스 불가리쿠스(L. bulgaricus), 락토바실러스 락티스(L. lactis), 락토바실러스 플란타룸(L. plantarum), 락토바실러스 파라카제이(L. paracasei), 락토바실러스 셀로비오수스(L. cellobiosus), 락토바실러스 콘푸수스(L. confusus), 락토바실러스 코프로필루스(L. coprophilus), 락토바실러스 페르멘툼(L. fermentum), 락토바실러스 샌프란시스코(L. sanfrancisco), 락토바실러스 써모필러스(L. thermophilus), 락토바실러스 바바리커스(L. bavaricus), 락토바실러스 브레비스(L. brevis), 락토바실러스 부흐네리(L. buchneri), 락토바실러스 코리니포르미스(L. coryniformis), 락토바실러스 커바터스(L. curvatus), 락토바실러스 사케(L. sake) 등의 락토바실러스 속, 류코노스톡 크레모리스(Leuconostoc cremoris), 류코노스톡 메센테로이데스(Leuc. mesenteroides) 등의 류코노스톡 속, 스트렙토코커스 락티스(Streptococcus lactis), 스트렙토코커스 살리바리우스(S. salivarius), 스트렙토코커스 써모필리스(S. thermophilis) 등의 스트렙토코커스 속 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 이들 유용균은 종래 공지의 방법에 의해 배양될 수 있고, 또한 예를 들면 ATCC(등록상표) 또는 IFO 등의 기관이나 재단법인 일본비피더스균센터, 독립행정법인 제품평가기술기반기구 특허미생물기탁센터 등으로부터 용이하게 입수할 수 있다. 또한, 시판되고 있는 것을 적절히 사용할 수도 있다.
본 발명의 유산균 또는 이의 처리물과 병용가능한 비피더스균의 예는, 예를 들면, 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 안굴라텀(B. angulatum), 비피도박테리움 아돌레센티스(B. adolescentis), 비피도박테리움 브레베(B. breve), 비피도박테리움 카테눌라텀(B. catenulatum), 비피도박테리움 덴티움(B. dentium), 비피도박테리움 갈리컴(B. gallicum), 비피도박테리움 서브틸레(B. subtile), 비피도박테리움 아스테로이데스(B. asteroides), 비피도박테리움 보움(B. boum), 비피도박테리움 코에리넘(B. choerinum), 비피도박테리움 코리네포르메(B. coryneforme), 비피도박테리움 쿠니쿨리(B. cuniculi), 비피도박테리움 갈리나럼(B. gallinarum), 비피도박테리움 인디컴(B. indicum), 비피도박테리움 매그넘(B. magnum), 비피도박테리움 메리시컴(B. merycicum), 비피도박테리움 미니멈(B. minimum), 비피도박테리움 사이크라에로필럼(B. psychraerophilum), 비피도박테리움 풀로럼(B. pullorum), 비피도박테리움 루미난티움(B. ruminantium), 비피도박테리움 스카르도비이(B. scardovii), 비피도박테리움 써모필럼(B. thermophilum), 비피도박테리움 인판티스(B. infantis), 비피도박테리움 몬골리엔세(B. mongoliense), 비피도박테리움 슈도카테눌라텀(B. pseudocatenulatum), 비피도박테리움 써마시도필럼 아종 포르시넘(B. thermacidophilum subsp. porcinum), 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스(B. animalis subsp. lactis), 비피도박테리움 아니말리스 아종 아니말리스(B. animalis subsp. animalis), 비피도박테리움 롱검 아종 롱검(B. longum subsp. longum), 비피도박테리움 아종 슈도롱검(B. pseudolongum subsp. pseudolongum), 비피도박테리움 아종 글로보섬(B. pseudolongum subsp. globosum) 등의 비피도박테리움 속 또는 이의 아종 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 이들 비피더스균은 종래 공지의 방법에 의해 배양될 수 있고, 또한, 예를 들면 상기 유산균과 마찬가지로 각종 기관이나 센터 등으로부터 용이하게 입수할 수 있다. 또한, 시판되고 있는 것을 적절히 사용할 수도 있다.
본 발명의 유산균 또는 이의 처리물과 병용가능한 효모균의 예는, 사카로마이세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae (출아 효모, 상면발효효모로서도 알려져 있다)), 사카로마이세스 케피르(S. kefir), 사카로마이세스 락티스(S. lactis), 사카로마이세스 칼스버겐시스(S. carlsbergensis (하면발효효모로서도 알려져 있다)), 사카로마이세스 유니스포러스(S. unisporus), 사카로마이세스 파스트리아누스(S. pastrianus), 사카로마이세스 바야누스(S. bayanus), 사카로마이세스 칼스버겐시스(S. carlsbergensis), 사카로마이세스 델브루엑키이(S. delbrueckii), 사카로마이세스 다이렌시스(S. dairensis), 사카로마이세스 다이아타티쿠스(S. diataticus), 사카로마이세스 엑시구스(S. exiguus), 사카로마이세스 클루이베리(S. kluyveri), 사카로마이세스 록시이(S. rouxii), 사카로마이세스 우바럼(S. uvarum), 사카로마이세스 로세이(S. rosei) 등의 사카로마이세스 속, 시조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe (분열효모로서도 알려져 있다)), 시조사카로마이세스 록시이(Schizosaccharomyces rouxii) 등의 시조사카로마이세스 속, 칸디다 유틸리스(Candida utilis (토룰라 효모로서도 알려져 있다)), 칸디다 트로피칼리스(C. tropicalis), 칸디다 밀레리(C. milleri), 칸디다 크루세이(C. krusei), 칸디다 루시타니에(C. lusitaniae), 칸디다 아아세리(C. aaseri), 칸디다 길리에르몬디이(C. guilliermondii), 칸디다 후미콜라(C. humicola), 칸디다 글라브라타(C. glabrata), 칸디다 람비카(C. lambica), 칸디다 리폴리티카(C. lipolytica), 칸디다 파라프실로시스(C. parapsilosis), 칸디다 트로피칼리스(C. tropicalis), 칸디다 파라트로피칼리스(C. paratropicalis), 칸디다 슈도트로피칼리스(C. pseudotropicalis), 칸디다 루고사(C. rugosa), 칸디다 스텔라토이데아(C. stellatoidea), 칸디다 제일라노이데스(C. zeylanoides) 등의 칸디다 속, 토룰라스포라 델브루엑키이(Torulaspora delbrueckii) 등의 토룰라스포라 속, 토룰롭시스 셀루쿨로사(Torulopsis celluculosa), 토룰롭시스 칸디다(Torulopsis candida) 등의 토룰롭시스 속, 토룰라 케피르(Torula kefir) 등의 토룰라 속, 클루이베로마이세스 불가리쿠스(Kluyveromyces bulgaricus), 클루이베로마이세스 플라길리스(K. fragilis), 클루이베로마이세스 써모톨레란스(K. thermotolerans), 클루이베로마이세스 락티스(K. lactis), 클루이베로마이세스 막시아누스(K. marxianus), 클루이베로마이세스 플라길리스(K. fragilis) 등의 클루이베로마이세스 속, 피키아 멤브라내파시엔스(P. membranaefaciens), 피키아 스티피티스(P. stipitis), 피키아 아노말라(P. anomala), 피키아 사이토이(P. saitoi) 등의 피키아 속, 한세눌라 아노말라(Hansenula anomala) 등의 한세눌라(Hansenula) 속, 데바리오마이세스 한세니(Debariomyces hansenii) 등의 데바리오마이세스 속 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 이들 효모균은 종래 공지의 방법에 의해 배양될 수 있고, 또한, 예를 들면, 상기 유산균과 마찬가지로 각종 기관이나 센터 등으로부터 용이하게 입수할 수 있다. 또한, 시판되고 있는 것을 적절히 사용할 수도 있다.
본 발명의 유산균 또는 이의 처리물과 병용가능한 기타의 유용균의 예는, 아세토박터 아세티(Acetobacter aceti), 아세토박터 오리엔탈리스(Acetobacter orientalis), 아세토박터 파스테리아누스(Acetobacter pasteurianus), 아세토박터 크실리넘(Acetobacter xylinum) 등의 아세트박터 속을 포함한 초산균, 클로스트리디움 부티리컴(Clostridium butyricum) 등을 포함한 낙산균(酪酸菌), 페디오코커스 담노수스(Pediococcus damnosus), 페디오코커스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus), 페디오코커스 할로필루스(Pediococcus halophilus) 등의 페디오코커스 속, 사상균(국균), 낫또균(Bacillus subtilis natto) 등의 고초균(Bacillus subtilis), 방선균, 광합성 세균, 아미노산 생성균, 셀룰로오스 분해균(예를 들면, 클로스트리디움 균, 트리코더마 균 등), 근립균(根粒菌), 균근균(菌根菌), VA균, 초화균(硝化菌) 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 이들 효모균은 종래 공지의 방법에 의해 배양될 수 있고, 또한, 예를 들면, 상기 유산균과 마찬가지로 각종 기관이나 센터 등으로부터 용이하게 입수할 수 있다. 또한, 시판되고 있는 것을 적절히 사용할 수도 있다.
본 발명의 유산균 또는 이의 처리물과 병용가능한 곰팡이의 예는, 아스퍼길루스 오리제(Aspergillus oryzae), 아스퍼길루스 소재(Aspergillus sojae), 아스퍼길루스 무코르(Aspergillus Mucor), 아스퍼길루스 니거(Aspergillus niger), 아스퍼길루스 플라부스(Aspergillus flavus), 아스퍼길루스 니둘란스(Aspergillus nidulans) 등의 아스퍼길루스 속, 페니실리움 로크포르티(Penicillium roqueforti), 페니실리움 리조푸스(Penicilliun Rhizopus) 등의 페니실리움 속 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 이들 곰팡이는 종래 공지의 방법에 의해 배양될 수 있고, 또한, 예를 들면, 상기 유산균과 마찬가지로 각종 기관이나 센터 등으로부터 용이하게 입수할 수 있다. 또한, 시판되고 있는 것을 적절히 사용할 수도 있다.
본 발명의 유산균 또는 이의 처리물 또는 이를 포함하는 조성물은 식물(잎, 줄기, 과실 등)에 직접 산포(散布) 또는 토양에 산포(투여)되어도 좋다. 혹은, 식물의 비료에 혼합되어도 좋고, 밭농사, 벼농사의 경우는 취수구 등에 설치하거나, 취수구의 콘크리트 원료나 콘크리트 구조물의 재료로서 혼입시켜도 좋다. 또한, 본 발명의 유산균 또는 이의 처리물 또는 이를 포함하는 조성물이 축산 분야에 적용되는 경우, 동물의 사료 또는 음료수에 혼합하여 주어도 좋고, 외양간이나 닭장 등에 있어서의 벽이나 바닥 등의 콘크리트 원료나 콘크리트 구조물의 재료로서 혼입시켜도 좋다.
본 발명은 본 발명의 유산균을 함유하는 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물에는 본 기술분야에서 통상 사용되는 공지의 첨가제를 사용할 수 있으며, 예를 들면, 물, 용제, pH 조정제, 보습제, 착향제, 감미제, 증점제, 교미제, 겔화제, 용해제, 착색제, 방부제, 계면활성제, 현탁화제, 유화제 및 안정화제 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
예를 들면, 본 발명에서 사용될 수 있는 pH 조정제로는 본 발명의 조성물의 pH를 원하는 값으로 조정하는 것이라면 좋고, pH 약 2.5∼10.0, 더욱 바람직하게는, pH 약 5.0∼8.5의 범위로 조정하기 위하여 사용할 수 있다. 바람직한 pH 조정제로는 알칼리 금속 수산화물, 알칼리 토금속 수산화물, 알칼리 토금속 산화물, 알칼리 금속 산화물, 탄산염, 붕산염, 규산염, 인산염, 유기산, 및 유기염기 등을 들 수 있다. 구체적으로는, 인산 또는 이의 염, 안식향산 또는 이의 염, 살리실산 또는 이의 염, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 탄산마그네슘 등의 알칼리 금속 탄산염, 수산화마그네슘, 수산화칼슘 등의 알칼리 토금속 탄산염, 탄산수소칼륨, 탄산수소나트륨 등의 알칼리 금속 중탄산염, 탄산수소마그네슘, 탄산수소칼슘 등의 알칼리 토금속 중탄산염, 붕산, 구연산, 푸마르산염, 사과산, 주석산, 호박산, 말레인산 또는 이의 염, 젖산, 이미다졸, 트리에탄올아민, 디에탄올아민, 트로메타몰, 메글루민, 리도카인, 및 이들의 염 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용될 수 있는 바람직한 보습제로는, 예를 들면, 소르비톨, 자일리톨, 글리세린, 부틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜 및 프로필렌글리콜과 같은 다가 알코올을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용될 수 있는 착향제로는, 예를 들면, 페퍼민트유, 스피어민트유, 박하유, 멘톨, 아네톨, 세이지(Sage), 레몬유, 오렌지유, 시나몬, 바닐린, 티몰 및 리나롤 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용될 수 있는 감미제로는, 예를 들면, 수크로오스, 글루코오스, 사카린, 글리시리진산, 덱스트로오스, 과당, 락토오스, 만니톨, 소르비톨, 프럭토오스, 말토오스, 자일리톨, 벌꿀, 물엿, 사카린, 아스파탐, D-트립토판, 아세설팜, 시클라민산 및 이들의 염 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용될 수 있는 교미제로는, 예를 들면, 아스코르빈산, 구연산, 글리시리진산, 글루타민산, 호박산, 주석산, 푸마르산, 사과산, 타우린, 사르코신, 글리시리진산 또는 이의 염, 혹은 에리스리톨, 락티톨, 환원 팔라티노오스, 염화나트륨, 염화마그네슘, 오렌지유, 사프란유, 산초유, 시소유, 바질유, 박하유, 레몬유, 레몬그라스유, 로즈유, 로즈마리유, 카카오, 카라멜, 감초, 캠퍼, 계피유, 사프란, 살리실산 메틸, 작약 엑기스, 생강, 신남 알데히드, 스테비아 엑기스, 당약(swertia herb), 소르비톨, 시클로덱스트린, 대두유, 대추 엑기스, 타우린, 탄닌산, 정향유, 가문비나무 엑기스, 소태나무 엑기스, 매육(梅肉) 엑기스, 벌꿀, 박하수, 박하유, 멘톨, 포비돈, 보르네올, 유칼리유, 레몬유, 로즈유 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용될 수 있는 계면활성제는, 비이온성, 양성 이온성, 음이온성, 또는 양이온성이어도 좋다. 비이온 계면활성제로서는 임의의 것을 사용할 수 있으며, 예를 들면, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 80 등의 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에스테르; 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 10, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 40, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 50, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 60 등의 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유; 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌글리콜; 모노라우린산 폴리에틸렌글리콜, 모노스테아린산 에틸렌글리콜, 스테아린산 폴리옥실 40 등의 모노스테아린산 폴리에틸렌글리콜, 모노올레인산 폴리에틸렌글리콜, 모노스테아린산 에틸렌글리콜 등의 폴리에틸렌글리콜 지방산 에스테르 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 음이온성 계면활성제로는, 예를 들면, 알킬벤젠술폰산 나트륨, 도데실벤젠술폰산 암모늄 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 양성 이온성 계면활성제로는, 예를 들면, 카르복시, 술포네이트, 설페이트를 함유하는 제２급 또는 제3급 아민의 지방족 유도체, 또는 복소환식 제２급 또는 제3급 아민의 지방족 유도체 등이나, 예를 들면, (C8-20 알킬)베타인 및 (C8-20 알킬)아미도(C6-8 알킬)베타인, 및 이들의 혼합물 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 양이온성 계면활성제로는, 제4급 암모늄염, 아민염, 또는 아민 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
기타, 본 발명에서 사용될 수 있는 유화제 및 현탁화제로는, 상기한 계면활성제를 바람직하게 사용할 수 있으며, 기타, 대두 레시틴, 난황 레시틴, 수소첨가 레시틴, 효소분해 레시틴 등의 레시틴류나 세타놀, 라우릴 알코올, 스테아릴 알코올, 라놀린 알코올 등의 고급 알코올 등도 사용가능하나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용될 수 있는 안정화제로는, 폴리아크릴산나트륨, 아디핀산, 아스코르빈산, 아황산나트륨, 아황산수소나트륨, 디부틸히드록시톨루엔, 부틸히드록시아니솔, 에데트산나트륨, 염화나트륨, 구연산, 시클로덱스트린, 시스테인 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 유산균 또는 이의 처리물 또는 이를 포함하는 조성물은 인간을 포함한 동물에게 투여되어도 좋다. 본 발명의 유산균 또는 이의 처리물 또는 이를 포함하는 조성물은 사료(농업자재), 의약, 식품 등 그 자체로서, 또는 이의 원료로서 혼합하여 투여되어도 좋고, 의약, 화장품 등 그 자체로서, 또는 이의 원료로서 도포되어도 좋다.
또한, 본 발명의 조성물이 투여되는 동물은, 특별히 한정되는 것은 아니나, 예를 들면, 인간, 또는 인간 이외의 동물 등이어도 좋다. 인간 이외의 동물로는, 특별히 한정되는 것은 아니나, 예를 들면, 소, 말, 돼지, 양 등의 가축류, 개, 고양이, 토끼, 햄스터, 다람쥐, 모르모트, 쥐 등의 애완동물 또는 실험동물, 정어리, 참치, 상어, 개복치, 가오리, 전갱이, 이또우, 방어, 은어, 잉어, 도미, 고등어, 광어, 가자미, 장어, 곰치, 아귀, 복어, 쥐치, 열대어 등의 어류, 새우, 게, 오징어, 가리비, 굴, 소라 등의 어개류, 닭, 메추리, 칠면조, 오리, 거위, 잉꼬, 앵무새 등의 조류, 장수풍뎅이, 사슴벌레, 배추흰나비, 호랑나비, 사마귀, 메뚜기, 방울벌레, 공벌레(Armadillidium vulgare) 등의 충류, 도마뱀붙이, 카멜레온, 이구아나, 도마뱀 등의 파충류, 영원, 개구리, 도롱뇽 등의 양서류 등을 들 수 있다. 이 중, 인간, 소, 돼지, 닭, 어류, 새우로의 투여가 특히 바람직하다.
또한, 본 발명의 투여 형태는 특별히 한정되는 것은 아니나, 경구투여, 비경구투여(정맥내 투여, 경피 투여 등) 등을 들 수 있다. 본 발명의 투여제형으로는, 경구제의 경우, 정제, 캡슐제, 과립제, 산제 등을 들 수 있고, 비경구제로는, 주사제, 연고, 삽입제 등을 들 수 있다.
또한, 본 발명의 제형이 예를 들면 정제, 캡슐제, 과립제, 산제 등의 경우, 특별히 한정되는 것은 아니나, 예를 들면, 만니톨, 인산칼슘, 전분, 자당, 젖당, 포도당 등의 부형제; 카르복시메틸셀룰로오스, 전분, 알파화 전분, 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 크로스카르멜로오스 나트륨, 크로스포비돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오스 등의 붕해제; 히드록시프로필셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 아라비아 고무, 전분, 부분 알파화 전분, 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐알코올 등의 결합제; 스테아린산 마그네슘, 스테아린산 칼슘, 탈크, 함수 이산화규소, 경화유 등의 활택제; 폴리비닐피롤리돈, 당, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스 등의 코팅제 등을 필요에 따라 적절히 선택하여 사용하여, 제제화할 수 있다.
본 발명의 제제가 정맥내 투여되는 경우, 예를 들면, 제형이 주사제인 경우, 이들에 한정되는 것은 아니나, 예를 들면, 염화나트륨 등의 등장화제; 인산나트륨 등의 완충제; 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트 등의 계면활성제; 메틸셀룰로오스 등의 증점제 등을 필요에 따라 적절히 선택하여 사용하여, 제제화할 수 있다.
본 발명의 제제가 안(眼) 국소투여되는 경우, 예를 들면, 제형이 점안제 등인 경우, 이들에 한정되는 것은 아니나, 예를 들면, 염화나트륨, 농글리세린 등의 등장화제; 인산나트륨, 초산나트륨 등의 완충화제; 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트, 스테아린산 폴리옥실 40, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 등의 계면활성제; 구연산나트륨, 에데트산 나트륨 등의 안정화제; 염화벤잘코늄, 파라벤 등의 방부제 등을 필요에 따라 적절히 선택하여 사용하여, 제제화할 수 있다. pH는 안과용 제제에 허용되는 범위내라면 특별히 문제는 없지만, pH 조정제는, 예를 들면, 이하에서 서술하는 것과 같은 것을 사용할 수 있다.
본 발명의 제제가 연고, 경피제, 첩부제 등인 경우, 예를 들면, 바셀린, 스쿠알란, 파라핀, 유동 파라핀, 라우린산, 미리스틴산, 스테아린산, 이소스테아린산, 올레인산 등의 고급 지방산, 밀랍, 라놀린 등의 왁스류 등의 유지류 등의 범용 기제를 사용하여 제제화할 수 있다.
본 발명의 제제가 삽입제인 경우, 예를 들면, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 카르복시비닐 폴리머, 폴리아크릴산 등의 생체분해성 폴리머를 사용하여 제제화할 수 있고, 필요에 따라, 상기한 안정화제, pH 조정제 등을 적절히 선택하여 사용할 수 있다.
본 발명의 투여량은 제형, 환자의 증상, 연령, 체중 등에 따라서 적절히 선택할 수 있으나, 특별히 한정되는 것은 아니다. 예를 들면, 경구투여의 경우, 체중 1 kg당 1일당 0.05∼5000 mg, 바람직하게는 0.1∼2000 mg, 특히 바람직하게는 1∼1000 mg을 1일 1회∼수회에 나누어 투여할 수 있다. 주사제의 경우, 체중 1 kg당 1일당 0.0001∼2000 mg, 바람직하게는 0.001∼1500 mg, 특히 바람직하게는 0.01 내지 500 mg의 것을 1일당 1회∼수회에 나누어 투여할 수 있다.
[음식품(飮食品), 식품 첨가물]
본 발명은 본 발명의 유산균 또는 이의 처리물 또는 이를 포함하는 조성물을 함유하는 식품을 제공한다. 식품에는 건강식품, 기능성 표시 식품, 특정 보건용 식품, 병자용 식품이 포함된다. 식품의 형태는 특별히 한정되지 않는다. 구체예에는, 이들에 한정되는 것은 아니나, 예를 들면, 소위 영양보조식품 또는 서플리먼트로서의 정제, 과립제, 산제, 드링크제 등을 들 수 있다. 이외에는, 예를 들면, 청량음료, 영양음료, 탄산음료, 과실음료, 유산음료, 차음료 등의 음료, 소바, 우동, 중화면, 즉석면 등의 면류, 초콜릿, 스넥 과자, 캔디, 껌, 비스킷, 젤리, 잼, 크림 등의 과자류, 빵류, 소세지, 어묵, 햄 등의 수산가공식품, 가공유, 발효유(요구르트를 포함한다) 등의 유제품, 마가린, 마요네즈, 쇼트닝, 휘핑 크림, 드레싱, 샐러드유, 튀김유 등의 유지 또는 유지 가공식품, 간장, 소스 등의 조미료, 카레, 덮밥, 죽, 잡탕죽, 스튜 등의 레토르트파우치 식품, 아이스크림, 샤베트 등의 빙과 등을 들 수 있다. 식품 중의 E. durans HS-08주의 비율은 식품 전체의 질량에 대하여 바람직하게는 0.1∼10 %이며, 더욱 바람직하게는 1∼10 %이다.
본 발명은 본 발명의 유산균 또는 이의 처리물 또는 이를 포함하는 조성물을 함유하는 식품 첨가물을 제공한다. 식품 첨가물의 용도로는, 이들에 한정되는 것은 아니나, 예를 들면, pH 조정제, 보존료, 살균료, 산화방지제, 곰팡이방지제, 착색료, 발색제, 표백제, 광택제, 향료, 향신료 추출물, 연화제, 영양강화제, 감미료, 산미료, 조미료, 고미료, 유화제, 증점제, 안정제, 겔화제, 호료(糊料), 팽창제(膨脹劑), 제조용제, 효소, 껌 베이스, 이스트 푸드 및 이들의 제제 등을 들 수 있다. 한편, 상기에서 예시한 첨가제 등도 마찬가지로 사용할 수 있다. 식품 첨가물 중의 E. durans HS-08주의 비율은 식품 첨가물 전체의 질량에 대하여 바람직하게는 0.1∼10 %이며, 더욱 바람직하게는 1∼10 %이다.
[화장품]
본 발명은 본 발명의 유산균 또는 이의 처리물 또는 이를 포함하는 조성물을 함유하는 화장품을 제공한다. 화장품에는 소위 약용화장품(의약부외품)이 포함된다. 화장품으로는, 이들에 한정되는 것은 아니나, 예를 들면, 세정제, 샴푸, 린스, 헤어 토닉, 헤어 로션, 애프터 셰이브 로션, 바디로션, 화장 로션, 클렌징 크림, 마사지 크림, 에몰리엔트 크림, 에어로졸 제품, 소취제, 방향제, 탈취제 또는 입욕제 등을 들 수 있다. 본 발명의 화장품은 본 발명의 레시틴 이외에 화장품으로서 일반적으로 사용되는 성분, 예를 들면, 계면활성제, 보습제, 동식물유래 유지, 미생물유래 유지, 실리콘류, 고급 알코올, 저급 알코올, 동식물유래 추출 엑기스, 미생물유래 추출 엑기스, 자외선 흡수제, 소염제, 금속봉쇄제, 비타민류, 산화방지제, 증점제, 방부제, 살균제, pH 조정제, 착색제, 각종 향료 등을 목적에 따라 적절히 배합할 수 있다. 이들에 대해서는, 상기에서 예시한 것을 마찬가지로 사용할 수 있다. 화장품 중의 E. durans HS-08주의 비율은 화장품 전체의 질량에 대하여 바람직하게는 0.1∼10 %이며, 더욱 바람직하게는 1∼10 %이다.
[의약품]
본 발명은 본 발명의 유산균 또는 이의 처리물 또는 이를 포함하는 조성물을 함유하는 의약품을 제공한다. 의약품은 본 발명의 유산균 이외에 유효성분을 포함하고, 추가로 약학적으로 허용되는 담체, 첨가제를 필요에 따라 적절히 배합하여 제제화할 수 있다. 의약품은, 이들에 한정되는 것은 아니나, 구체적으로는 정제, 피복 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 액제, 현탁제, 유제, 주사제, 수액, 좌제, 연고, 스프레이제, 연고제, 크림제, 겔제, 패치제 등으로 할 수 있다. 담체 또는 첨가제의 배합 비율에 대하여는 의약품 분야에 있어서 통상 채용되는 범위에 근거하여 적절히 설정하면 좋다. 배합할 수 있는 담체 또는 첨가제는, 특별히 제한되지 않지만, 예를 들면, 물, 생리식염수, 기타의 수성용매, 수성 또는 유성 기제 등의 각종 담체, 부형제, 결합제, pH 조정제, 붕해제, 흡수촉진제, 활택제, 착색제, 교미제, 향료 등의 각종 첨가제를 들 수 있다. 이들 이외에, 상기에서 예시한 것을 바람직하게 사용할 수도 있다. 의약품 중의 E. durans HS-08주의 비율은 의약품 전체에 대하여 바람직하게는 0.1∼10 %이며, 더욱 바람직하게는 1∼10 %이다.
[동물용 사료]
본 발명은 본 발명의 유산균 또는 이의 처리물 또는 이를 포함하는 조성물을 함유하는 동물용 사료를 제공한다. 사료로는, 예를 들면, 소, 말, 돼지, 양 등의 가축류용 사료, 개, 고양이, 토끼, 햄스터, 다람쥐, 모르모트, 쥐 등의 애완동물 또는 실험동물류용 사료, 정어리, 참치, 상어, 개복치, 가오리, 전갱이, 이또우, 방어, 은어, 잉어, 도미, 고등어, 광어, 가자미, 장어, 곰치, 아귀, 복어, 쥐치, 열대어 등의 어류용 사료, 새우, 게, 오징어, 가리비, 굴, 소라 등의 어개류용 사료, 닭, 메추리, 칠면조, 오리, 거위, 잉꼬, 앵무새 등의 조류용 사료, 장수풍뎅이, 사슴벌레, 배추흰나비, 호랑나비, 사마귀, 메뚜기, 방울벌레, 공벌레 등의 충류용 사료, 도마뱀붙이, 카멜레온, 이구아나, 도마뱀 등의 파충류용 사료, 영원, 개구리, 도롱뇽 등의 양서류용 사료 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 사료는 사료 중에 본 발명의 유산균을 첨가하는 이외에, 일반적인 사료의 제조방법을 이용하여 제조할 수 있다. 사료 중의 E. durans HS-08주의 비율은 사료 전체에 대하여 바람직하게는 0.1∼10 질량%이며, 더욱 바람직하게는 1∼10 질량%이다. 상기 동물용 사료는 동물의 성장 촉진 또는 자가면역 향상이나, 사료를 준 동물(특히 가축 또는 가금)의 사육기간 단축, 또는 조기 출하로 연결된다.
[식물용 비료]
본 발명은 본 발명의 유산균 또는 이의 처리물 또는 이를 포함하는 조성물을 함유하는 식물용 비료를 제공한다. 여기에서, 비료로는, 예를 들면, 야채, 꽃, 화목(花木) 또는 과일 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 또한, 예를 들면, 야채 또는 과일로는, 무, 우엉, 인삼, 순무, 연근 등의 근채류, 감자, 고구마, 참마, 타로토란, 토란, 곤약감자, 마 등의 덩이줄기 채소류, 풋콩, 잠두콩, 완두콩, 강낭콩, 렌틸, 팥, 참깨 등의 콩류, 양배추, 양상추, 배추, 시금치, 노자와나, 수채(水菜), 파드득나물, 소송채(小松菜), 쑥갓 등의 잎 채소, 귤, 여름밀감, 분탄, 폰칸, 이요칸, 팔삭(八朔), 레몬, 라임, 그레이프후르츠 등의 감귤류, 양파, 대파, 흰파 등의 파류, 오이, 팽나무, 새송이버섯, 목이버섯, 만가닥버섯, 나도팽나무버섯, 송이버섯, 표고버섯, 잎새버섯 등의 버섯류, 브로콜리, 꽃양배추, 유채(菜花), 아티초크 등의 화채류, 오이, 수박, 호박, 주키니, 호리병박, 수세미, 동과, 분출오이, 박, 여주, 고야, 멜론 등의 박류, 수도(水稻), 라이맥, 율무, 기장, 조, 피, 수수 등의 벼류, 밀, 보리 등의 맥류, 고사리, 고비 등의 산채, 기타, 소철, 은행나무, 소나무, 대나무, 복숭아, 밤, 감, 딸기, 사과, 배, 포도, 머스캣, 토마토, 가지, 고추냉이, 샐러리, 죽순, 마늘 등을 들 수 있다. 또한, 꽃 또는 화목으로는, 엉겅퀴, 붓꽃, 안개꽃, 괭이밥, 민들레, 완두, 봉선화, 카네이션, 카모마일, 앵초, 백합, 샐비어, 모란, 유채, 국화, 미나리아재비, 석산, 팬지, 제비꽃, 해바라기, 히아신스, 튤립, 수선, 부용, 스위트피, 메리골드, 은방울꽃, 패랭이꽃, 거베라(gerbera), 제라늄, 백일초, 도라지, 코스모스, 다알리아, 나팔꽃, 메꽃, 크로커스, 맨드라미, 수국 등의 꽃, 장미, 매화나무, 벚나무, 복숭아, 명자나무, 자두, 살구 등의 장미과, 금목서, 재스민, 호랑가시나무, 라일락, 개나리, 영춘화 등의 물푸레나무과, 미국산딸나무 등의 층층나무과, 팥꽃나무과, 등나무, 싸리 등의 콩과, 동백나무, 산다화 등의 동백나무과, 영산홍, 진달래, 석남화, 마취목, 블루베리 등의 진달래과, 기타, 아욱과, 단풍나무과, 팥꽃나무과, 때죽나무과, 칠엽수과, 옻나무과, 인동덩굴과 등의 화목을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 비료는 비료 중에 본 발명의 유산균을 첨가하는 이외에, 일반적인 비료의 제조방법을 이용하여 제조할 수 있다. 비료 중의 E. durans HS-08주의 비율은 비료 전체에 대하여 바람직하게는 0.1∼10 질량%이며, 더욱 바람직하게는 1∼10 질량%이다. 또한, 상기 식물용 비료는 식물의 생장 조절, 식물의 쓰러짐(倒伏) 방지, 또는 식물의 감칠맛(umami) 조정 등의 작용을 가질 수 있다. 상기 식물용 비료는, 예를 들면, 식물의 뿌리, 줄기, 가지, 잎, 과실, 또는 꽃의 생장을 촉진할 수 있다. 또한, 상기 식물용 비료는 예를 들면, 식물의 뿌리, 줄기, 가지, 잎, 과실, 또는 꽃의 감칠맛을 증강할 수 있다.
[공업제품]
본 발명은 본 발명의 유산균 또는 이의 처리물 또는 이를 포함하는 조성물을 함유하는 공업제품(예를 들면, 콘크리트 부재 등)을 제공한다. 콘크리트 부재 이외의 공업제품으로는, 이들에 한정되는 것은 아니나, 예를 들면, 석유제품, 수지제품, 자기제품(磁氣製品), 피혁제품, 직물 등을 들 수 있다. 공업제품 중의 E. durans HS-08주의 비율은 공업 제품에 대하여 바람직하게는 0.1∼10 질량%이며, 더욱 바람직하게는 1∼10 질량%이다.
상기 공업제품은 동물의 성장 촉진, 동물의 자가면역 향상, 식물의 생장 조절, 식물의 쓰러짐 방지, 또는 식물의 감칠맛 조정 등의 작용을 가질 수 있는 본 발명의 유산균 또는 이의 처리물 또는 이를 포함하는 조성물을 함유하기 때문에, 동물의 사육에 사용되는 공업제품(예를 들면, 모이상자, 울타리(柵) 등), 식물의 생육에 사용되는 공업제품(예를 들면, 화분, 물뿌리개, 양동이, 호스, 취수구의 콘크리트 등)인 경우, 동물의 성장 촉진, 동물의 자가면역 향상, 식물의 생장 조절, 식물의 쓰러짐 방지, 또는 식물의 감칠맛 조정 등에 도움이 된다.
[키트]
본 발명에서는, 본 발명의 유산균 또는 이의 처리물 또는 이를 포함하는 조성물을 함유하는 키트를 제공한다. 키트는 예를 들면 분할식 보틀 또는 호일 패킷과 같이 조성물을 별도로 포함시킬 수 있는 용기로 이루어지는 것이 바람직하지만, 조성물을 단일의 용기에 포함시킬 수도 있다. 바람직한 키트의 예로는, 정제, 캡슐 등의 패키징에 사용할 수 있는 블리스터 팩이나, 약제액을 충진한 주사통 및 용기 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 한편, 키트는 방사선, 오토클레이브 등 공지의 멸균 처리를 행해도 좋다.
[면역부활작용]
본 발명의 유산균은 바람직하게는 면역부활작용을 갖는다. 면역부활작용에 관하여, 예를 들면, 본 발명의 유산균 또는 유산균 함유 조성물의 투여군이, 비투여군에 비하여, 대변 중 또는 혈액 중 IgA 농도가 유의한 차이 또는 유의한 경향을 나타내어 높은 경우, 면역부활작용을 갖는다고 판단할 수 있다. 또한, 예를 들면, 본 발명의 조성물이 사료에 혼합되어 동물에게 투여된 경우, 면역성 질환(예를 들면, 유방염, 대장균증, 설사 등)의 증상을 완화할 수 있다. 이것에 의해, 항생물질의 사용량을 저감할 수도 있다.
병원균이나 바이러스의 감염은, 이들이 상피세포 표면에 접착하는 것에 의해 일어나지만, 파이어스 패취(Peyer's patch)에서 생산되는 IgA는 이러한 접착을 저지하고, 면역계에 있어서 중요한 역할을 한다. 파이어스 패취는 장관내에 있으며, T 세포, B 세포 및 IgA 를 생산하는 형질세포 등으로 구성되어 있다.
또한, 점막조직의 면역부활작용에 관하여, 초산은 레티논산을 유도함으로써 IgA를 유도하는 것이 알려져 있으며, 또한 파이어스 패취의 수지상 세포가 분비하는 IL-6이나, RALDH2, APRIL, BAFF 등도 IgA 생산을 유도하는 것이 알려져 있다. 이 때문에, 예를 들면, 이들이 본 발명의 유산균 또는 유산균 함유 조성물의 투여군이, 비투여군에 비하여, 초산 농도나 RALDH2, IL-6, APRIL, BAFF의 유전자 발현양이 유의한 차이 또는 유의한 경향을 나타내어 높은 경우, 점막조직의 면역을 부활하고, 감염증을 예방하는 효과를 갖는다고 판단할 수 있다. 여기에서, 바람직하게는, 점막조직은 예를 들면, 소화기관, 호흡기관, 비뇨기 등이며, 더욱 바람직하게는, 장관의 점막조직의 면역계가 부활되는 것이 바람직하다.
[점막보호효과]
본 발명의 유산균은 바람직하게는 점막보호작용을 갖는다. 장내세균이 생산하는 젖산이나 초산 등의 유기산은 인간을 포함한 동물의 다양한 생체반응에 기여하지만, 이러한 유기산은 점막조직으로부터 흡수되어 점막상피세포의 에너지원이 되고, 상피세포를 수복(修復)하여, 점막을 보호하는 작용을 갖는 것도 알려져 있다. 이 때문에, 예를 들면 본 발명의 유산균 또는 유산균 함유 조성물의 투여군이, 비투여군에 비하여, 점막조직 중의 젖산이나 초산량이 유의한 차이 또는 유의한 경향을 나타내어 높은 경우, 점막보호효과를 갖는다고 판단할 수 있다.
[항알레르기 작용]
본 발명의 유산균은 바람직하게는 항알레르기 작용을 갖는다. 예를 들면, 본 발명의 유산균 함유 조성물의 투여군이, 비투여군에 비하여, 혈액 중 또는 변 중의 IgA 농도가 유의한 차이 또는 유의한 경향을 나타내어 높은 경우, 항알레르기 작용을 갖는다고 판단할 수 있다. 또한, 예를 들면 본 발명의 조성물이 인간에게 투여된 경우, 꽃가루 알레르기 등의 증상을 완화할 수 있다.
[단쇄 지방산 및 유기산의 생산 증강 효과]
본 발명의 유산균은 바람직하게는 단쇄 지방산 또는 유기산의 생산 증강 작용을 갖는다. IgA의 생산에는 유산균 등의 장내세균이 생산하는 단쇄 지방산 또는 유기산이 기여하는 것이 알려져 있으므로, 예를 들면 본 발명의 유산균 또는 유산균 함유 조성물의 투여군이, 비투여군에 비하여, 단쇄 지방산 또는 유기산의 농도가 유의한 차이 또는 유의한 경향을 나타내어 높은 경우, 단쇄 지방산 또는 유기산의 생산 증강 작용을 갖는다고 판단할 수 있다.
본 발명의 유산균이 생산 증강하는 단쇄 지방산 또는 유기산으로는, 젖산, 초산 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 단쇄 지방산은 IgA에 의한 면역부활작용이나 항알레르기 작용을 초래하는 것이 알려져 있어, 사람이나 동물의 생체에 다양한 좋은 영향을 주는 것으로 생각된다.
[GPR43의 유전자 발현 상승에 따른 효과]
본 발명의 유산균은 바람직하게는 초산 수용체 GPR43의 유전자 발현 상승 작용을 갖는다. GPR43은 단쇄 지방산, 특히 초산에 대한 친화성이 높은 수용체이며, 장내의 단쇄 지방산량의 증가에 수반하여, GPR43도 증가하는 것이 알려져 있다. 즉, GPR43의 유전자 발현양이 증가하면, 장관내의 단쇄 지방산(초산 등)이 증가하는 것으로 생각된다.
또한, GPR43의 유전자 발현 상승은 인슐린 시그널의 조절을 통한 당뇨병 예방 효과, 항상성 유지에 관여하는 제어성 T 세포의 유도에 의한 대장염 억제 효과 등, 다양한 유용한 작용을 갖는 것이 알려져 있다(Nature Communications volume 4, Article number: 1829 (2013)). 이 때문에, 예를 들면 본 발명의 유산균 또는 유산균 함유 조성물의 투여군이, 비투여군에 비하여, GPR43 유전자 발현양이 유의한 차이 또는 유의한 경향을 나타내어 높은 경우, 당뇨병 예방 효과나 대장염 억제 효과를 갖는다고 판단할 수 있다.
[유해균 및/또는 병원균의 증식 억제 효과]
본 발명의 유산균은 바람직하게는 유해균 및/또는 병원균의 증식 억제 작용을 갖는다. 인간이나 마우스 등의 동물에 대한 유해균이나 병원균은 산성환경에서 증식이 억제되는 것이 알려져 있으므로, 젖산이나 초산 등의 유기산이 증가하면, 장내 환경이 산성화되어 pH가 저하되고, 장내의 유해균이나 병원균의 증식이 억제되는 것으로 생각된다. 예를 들면, 본 발명의 유산균 또는 유산균 함유 조성물의 투여군이, 비투여군에 비하여, 장내의 pH가 유의한 차이 또는 유의한 경향을 나타내어 낮은 경우, 유해균 및/또는 병원균 증식 억제 작용을 갖는다고 판단할 수 있다.
한편, 본 발명에서 증식을 억제할 수 있는 유해균이나 병원균으로는 웰치균, 대장균 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
[식물의 생장 조절 작용, 식물의 쓰러짐 방지 작용 및 식물의 감칠맛 조정 작용]
본 발명의 유산균은 바람직하게는 식물의 생장 조절 작용을 갖는다. 예를 들면, 본 발명의 유산균 또는 유산균 함유 조성물의 투여군이, 비투여군에 비하여, 뿌리, 잎, 가지, 과실 또는 꽃의 크기에 있어서 생장(生長)이 현저한 경우, 예를 들면, 이들의 크기가 바람직하게는 10∼100 % 정도, 더욱 바람직하게는 30∼50 % 정도 생장한 경우에, 생장 조절 작용을 갖는다고 판단할 수 있다. 이것에 의해, 식물생장을 위한 비료 사용량을 저감할 수도 있다.
본 발명의 유산균은 바람직하게는 식물의 쓰러짐 방지 작용을 갖는다. 쓰러짐의 정도는 예를 들면 쓰러진 식물체의 경사 크기로 무(0)로부터 현저(5)의 6단계로 나타낼 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 유산균 또는 유산균 함유 조성물의 투여 군이, 비투여군의 쓰러짐율에 대하여, 바람직하게는 1∼5 단계, 더욱 바람직하게는 2∼4 단계 쓰러짐이 방지되는 것이 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 식물은 예를 들면 상기에서 예시한 것을 들 수 있고, 특히, 쌀 또는 수도(水稻)가 바람직하지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 또한, 조성물은 또한 칼슘, 아연, 철, 마그네슘, 칼륨, 인 등의 미네랄을 함유해도 좋다. 미네랄을 병용하는 것으로, 식물의 쓰러짐 방지 효과를 더욱 향상시킬 수 있다. 이는 식물의 자가면역 향상 작용에 의한 것으로 생각되며, 이것에 의해 비료의 사용량을 저감할 수도 있다.
본 발명의 유산균은 바람직하게는 식물의 감칠맛(당도) 조정 작용을 갖는다. 예를 들면, 원래의 당도에 대하여 바람직하게는 1% ∼ 70% 정도, 더욱 바람직하게는 20% ∼ 50% 정도 당도가 증가하는 것이 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 식물은 예를 들면 상기한 것을 들 수 있고, 특히 쌀, 멜론, 귤, 레몬, 토마토, 배추 등이 바람직하지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
[동물의 성장 촉진 작용 및 동물의 자가면역 향상 작용]
본 발명의 유산균은 바람직하게는 동물의 성장 촉진 작용을 갖는다. 예를 들면, 본 발명의 유산균 또는 유산균 함유 조성물의 투여군이, 비투여군의 체중에 대하여, 바람직하게는 10∼200 질량% 정도, 더욱 바람직하게는 30∼100 질량% 정도 체중이 증가하는 것이나, 비투여군의 체장에 대하여, 바람직하게는 10∼200 % 정도, 더욱 바람직하게는 30∼100 % 정도 체장이 증가하는 것이 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 이것에 의해, 사료의 사용량을 저감할 수도 있다. 본 개시에 있어서, 동물이라 함은 예를 들면 상기한 것을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 유산균은, 바람직하게는, 동물의 자가면역 향상 작용을 갖는다. 예를 들면, 본 발명의 유산균 또는 유산균 함유 조성물의 투여군이, 비투여군에 비하여, 대변 중 또는 혈액 중 IgA 농도가 유의한 차이 또는 유의한 경향을 나타내어 높은 경우, 자가면역 향상 작용을 갖는다고 판단할 수 있다. 또한, 예를 들면 본 발명의 조성물이 사료에 혼합되어 동물에게 투여된 경우, 자가면역성 질환(예를 들면, 꽃가루 알레르기, 알레르기 등)의 증상을 완화할 수 있다. 본 개시에 있어서, 동물이라 함은 예를 들면 상기한 것을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
실시예
이하, 실시예에 의해 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들에 한정되지 않는다.
[실시예 1] E. durans HS-08주의 IgA 생산 유도 활성
(1) 공시(供試) 마우스는 BALB/cA로 하여, 입하시의 주령은 6주령, 성별은 수컷이다. 한편, 입하 직후의 마우스는 환경의 변화에 의한 스트레스가 원인이 되어, 시험 결과에 영향을 줄 가능성이 있기 때문에, 정제 사료(AIN-76A, Research Diets, New Brunswick, NJ)만을 섭취시키는 순화 기간을 17일 마련하고, 그 후는 이하에서 기술하는 사료를 투여하는 기간 및 관찰 기간으로 하였다(약 60일간).
(2) 순화를 마친 마우스를 체중 및 변 중 IgA양이 될 수 있는 한 동등이 되도록 4 그룹으로 나누고, E. durans HS-08주 없음의 구분(이하, 컨트롤 그룹), 사료 중의 E. durans HS-08주의 비율이 0.38%의 구분(이하, 0.38% 그룹)의 2구분으로 하였으며, 공시수(供試數)는 각 구분 모두 5마리로 하였다(표 1).
구분 공시수 사료 중의 E. durans의 비율
컨트롤 그룹 5 마리 0 %
0.38% 그룹 5 마리 0.38 %
(3) 마우스에 섭취시킨 사료에 배합하기 위한 유산균 분말은 MRS 배지(Difco Laboratories, Detroit, MI, USA)에서 E. durans HS-08주를 배양하였다. 구체적으로는, 최초에 E. durans HS-08주의 콜로니를 5 mL의 MRS 배양액에 식균하고, 밀폐 상태로 37도에서 24시간 정치배양하여, 배양액을 얻었다. 그 후, 해당 배양액을 2000 mL의 MRS 배양액에 넣어, 밀폐 상태로 37도에서 24시간 정치배양하였다. 그 후, 원심분리로 집균(集菌)하고, 부형제로서 균체의 2배량의 10% 수크로오스 수용액을 가하고, 그 후 동결건조를 행하여, 본원발명의 유산균 분말이 얻어졌다. 한편, 유산균 분말의 생균수는 1.1×1012 cfu/g이었다.
(4) 각 구분의 사료 배합은 표 2에 따라 하였다.
구성 컨트롤 그룹 0.38% 그룹
정제사료(%, W/W) 100.00 99.300
유산균 분말(%, W/W)
[()는 사료 중의 E. durans의 비율]		 0.00 0.70 (0.38)
(5) 유산균 분말을 섭취시킨 후부터 0일째, 14일째, 28일째, 42일째 및 60일째에 마우스의 1일분의 변을 채취하였다. 이 변을 프로테아제 저해제를 넣은 인산생리식염수와 혼합하고, 빙상(氷上)에 30분간 방치한 후, 그 혼합액을 원심분리하고, 그의 상청액의 IgA 농도를 mouse IgA ELISA 키트를 사용하여 측정하였다.
(6) 유산균 분말을 섭취시킨 후부터 60일째에 혈액을 채취하였다. 그 혈액을 헤파린 나트륨과 혼합하고, 원심분리를 행하고, 그의 상청액(이하, 「실시예 1에서 얻은 혈장」이라고도 지칭한다)의 IgA 농도를 mouse IgA ELISA 키트를 사용하여 측정하였다.
도 1에 나타낸 바와 같이, IgA 양의 경시변화에 대하여, 0.38% 그룹은 컨트롤 그룹에 비하여 28일째의 시점에서 IgA 양이 증가하는 경향이 있으며, 42일째에서 IgA 양이 유의하게 많아졌다. 60일째에서는, 42일째보다도 IgA 양이 감소했지만, 컨트롤 그룹보다도 많은 경향이 있었다. 한편, 변 중의 IgA 양의 데이터는 2원배치반복측정분산법으로 분석한 후, 다중비교검정에 의해 통계분석을 행하였다. 기타의 데이터는 다중비교검정에 의해 통계분석을 행하였다.
또한, 표 3 및 도 2에 나타낸 바와 같이, 0.38% 그룹은 컨트롤 그룹에 비하여 혈액 중의 IgA 농도가 유의하게 높았다.
구분 혈액 중의 IgA 농도 (μg/ml)
컨트롤 그룹 417.1 ± 28.6
0.38% 그룹 561.2 ± 20.2*
평균치±표준오차 (n=5)
* P<0.05 vs 컨트롤 그룹
유산균 분말을 섭취시킨 그룹(0.38% 그룹)은 변 중의 IgA 양이 컨트롤 그룹보다도 높은 것을 확인할 수 있었다. 이것으로부터, E. durans HS-08주는 장의 면역계를 부활할 수 있는 것이 확인되었다.
또한, 유산균 분말을 섭취시킨 그룹(0.38% 그룹)은 혈액 중의 IgA 농도가 컨트롤 그룹보다도 높았다. 혈액 중의 IgA 농도의 향상은 전신의 면역력 향상이라고 말할 수 있기 때문에, E. durans HS-08주는 전신의 면역계를 부활할 수 있는 것이 확인되었다.
[실시예 2] E. durans HS-08주의 안전성시험
(1) 순화기간 경과후, 유산균 분말을 섭취시킨 후부터 0일째, 7일째, 14일째, 21일째, 28일째, 35일째, 42일째, 49일째, 56일째 및 60일째에 체중을 측정하였다.
(2) 상기 실시예 1에서 얻은 혈장을, 랩어세이 크레아티닌(LabAssay Creatinine)을 사용하여 크레아티닌(이하, CRE) 농도를 측정하였다. 혈액 중의 크레아티닌(CRE) 농도는 신장에 이상이 있으면 증가한다. 본 시험의 목적은 컨트롤 그룹과 유산균 분말을 섭취시킨 그룹의 CRE 농도를 비교하여, 마우스의 신장기능에 대한 안전성을 확인하는 것이다.
(3) 또한, 상기 실시예 1에서 얻은 혈장을, 트랜스아미나아제CII 키트를 사용하여 알라닌 아미노기 전이효소(ALT) 농도, 및 아스파라긴산 아미노기 전이효소(AST) 농도를 측정하였다. 간장에 이상이 있으면, 혈액 중의 ALT 및 AST가 증가한다. 본 시험의 목적은 컨트롤 그룹과 유산균 분말을 섭취시킨 그룹의 ALT 농도 및 AST 농도를 비교하여, 마우스의 간기능에 대한 안전성을 확인하는 것이다.
(4) 또한, 상기 실시예 1에서 얻은 혈장의 IgE 농도를 mouse IgE ELISA 키트를 사용하여 측정하였다. 본 시험의 목적은 컨트롤 그룹과 유산균 분말을 섭취시킨 그룹의 IgE 농도를 비교하여, 유산균이 마우스에 대하여 알레르기성을 갖지 않는 것을 확인하는 것이다.
체중에 관하여, 컨트롤 그룹과 유산균 분말을 섭취시킨 그룹을 비교한 결과, 유의한 차이는 없었다(도 3). 또한, CRE 농도에 관하여, 컨트롤 그룹과 유산균 분말을 섭취시킨 그룹을 비교한 결과, 유의한 차이는 없었다(표 4 및 도 4). 또한, ALT 농도 및 AST 농도에 관하여, 컨트롤 그룹과 유산균 분말을 섭취시킨 그룹을 비교한 결과, 유의한 차이는 없었다(표 5 및 도 5∼6). 또한, IgE에 관하여는, 컨트롤 그룹과 유산균 분말을 섭취시킨 그룹의 어느 쪽에 있어서도 검출되지 않았다.
구분 CRE 농도 (μg/mL)
컨트롤 그룹 1.3 ± 0.3
0.38% 그룹 2.0 ± 0.3
평균치±표준오차 (n=5)
구분 ALT 농도(iU/l) AST 농도(iU/l)
컨트롤 그룹 18.3 ± 4.6 56.3 ± 9.6
0.38% 그룹 28.9 ± 6.2 76.0 ± 9.5
평균치±표준오차 (n=5)
유산균 분말을 섭취시킨 그룹은 컨트롤 그룹에 비하여 체중, CRE 농도, ALT 농도 및 AST 농도에 유의한 차이는 없었다. 이것으로부터, E. durans HS-08주를 사용하더라도, 마우스의 체중, 신장기능 및 간기능에 악영향을 미치는 일은 없는 것으로 생각된다.
또한, 컨트롤 그룹, 유산균 분말을 섭취시킨 그룹의 양쪽 구분 모두 IgE는 검출되지 않았다. 이것으로부터, E. durans HS-08주는 마우스에 대하여 알레르기성을 갖지 않는, 즉 알러젠이 아닌 것으로 생각된다.
또한, 약제내성시험이나 리물루스(Limulus) 시험 등도 행하였으나, 모두 본 발명의 유산균의 안전성을 확인할 수 있었다. 상기의 결과를 정리하면, 하기 표 6 과 같다.
컨트롤 그룹 유산균체 0.38% 그룹
사료섭취량(gd-1) 4.2 ± 0.3 4.4 ± 0.2
최초의 체중(g) 28.0 ± 0.2 28.4 ± 0.7
최후의 체중(g) 37.5 ± 0.8 35.8 ± 0.6
체중 증가량(g) 9.5 ± 0.7 7.4 ± 0.4
혈액화학적 성상
AST (iU l-1) 56.3 ± 9.6 76.0 ± 9.5
ALT (iU l-1) 18.3 ± 4.6 28.9 ± 6.2
CRE (μg mL-1) 1.3 ± 0.3 2.0 ± 0.3
IgA (μg mL-1) 417.1 ± 28.6 561.2 ± 20.2
평균치±표준오차 (n=5)
[실시예 3] 파이어스 패취 세포의 유전자 해석
실시예 1의 (1)∼(4)에서 얻은 마우스를 유산균 분말을 섭취시킨 후부터 60일째에, 경추탈구로 안락사시켜, 마우스의 파이어스 패취 세포를 채취하고, RNA를 illustra RNAspin Mini RNA Icolation 키트(GE Healthcare, Piscataway, NJ, USA)를 사용하여 추출하였다. 그 RNA를 0.15μg 측정하여 취하고, 올리고 프라이머(Invitrogen, Carlsbad, CA), Super Script III 역전사효소(Invitrogen)를 사용하여 역전사하였다. 그 후, PCR Purification 키트(Qiagen, Cambrige, MA, USA)를 사용하여 역전사한 샘플로부터 cDNA를 정제하고, SYBR Green (Life Technologies)에 의한 실시간 PCR법에 의해 장내에 있어서의 면역유도인자의 유전자 발현 해석을 행하였다.
도 7에 나타낸 바와 같이, 유산균 분말을 섭취시킨 그룹의 RALDH2, APRIL, BAFF, IL-6의 유전자 발현양은 컨트롤 그룹보다도 유의하게 높거나 혹은 높은 경향이 있었다. 자극을 받은 수지상 세포에 의해 분비되는 IL-6, BAFF, APRIL은 B세포로부터의 IgA 생산을 촉진하고, 수지상 세포의 RALDH2에 의해 생산되는 레티논산은 IgA 생산 B세포의 점막으로의 귀소(歸巢)를 촉진한다. 이 때문에, 도 7의 결과로부터, 본 발명의 유산균이 장관의 점막에 있어서의 IgA를 증강하는 것이 유전자 발현 수준에서도 나타난 것이 명확하다.
한편, 상기에서 해석한 유전자는 레티날 데히드로게나아제 2(RALDH2), acronym for a proliferation inducing ligand(APRIL), B-cell activating factor(BAFF), 인터류킨-6(IL-6)이며, 본 실시예에서 사용한 내재성 컨트롤 유전자는 β-액틴이다. 또한, 유전자 해석용 프라이머는 하기 표 7에 기재된 것을 사용하였다.
정방향 역방향
RALDH2 5'-gacttgtagcagctgtcttcact-3'
(서열번호 1)		 5'-tcacccatttctctcccatttcc-3'
(서열번호 2)
APRIL 5'-tcacaatgggtcaggtggtatc-3'
(서열번호 3)		 5'-tgtaaatgaaagacacctgcactgt-3'
(서열번호 4)
BAFF 5'-tgctatgggtcatgtcatcca-3'
(서열번호 5)		 5'-ggcagtgttttgggcatattc-3'
(서열번호 6)
IL-6 5'-aatagtccttcctaccccaatttc-3'
(서열번호 7)		 5'-atttcaagatgaattggatggtct-3'
(서열번호 8)
β-액틴
(컨트롤)		 5'-catccgtaaagacctctatgccaac-3'
(서열번호 9)		 5'-atggagccaccgatccaca-3'
(서열번호 10)
[실시예 4] 단쇄 지방산 또는 유기산 및 pH 측정
실시예 1의 (1)∼(4)에서 얻은 마우스를 유산균 분말을 섭취시킨 후부터 60일째의 마우스로부터 1일분의 변을 채취한 후, 그 변을 동결건조하고, 초순수(初純水)에서 현탁하였다. 그 후, 4℃에 1시간 동안 방치한 후 원심분리하고, 그의 상청액을 여과하였다. 여과한 상청액을 단쇄 지방산 분석용 라벨화 시약(YMC CO, Kyoto, Japan)으로 처리한 후, HPLC에서 유기산양(젖산, 초산, 프로피온산, 부티르산)을 측정하였다. 또한, 여과한 상청액의 pH도 측정하였다.
도 8에 나타낸 바와 같이, 마우스의 변 중에 있어서 젖산 및 초산의 양은 유산균 분말을 섭취시킨 그룹에 있어서는, 컨트롤 그룹과 비교하여 유의하게 증가하였다(젖산: P<0.01, 초산: P<0.05).
또한, 도 9에 나타낸 바와 같이, 마우스의 변 중에 있어서 유산균 분말을 섭취시킨 그룹의 pH는 컨트롤 그룹과 비교하여 유의하게 저하되었다(P <0.05).
[실시예 5] GPR43의 유전자 발현 해석
실시예 1의 (1)∼(4)에서 얻은 마우스를 유산균 분말을 섭취시킨 후부터 60일째에, 마우스를 경추탈구로 안락사시켜, 마우스의 파이어스 패취 세포를 채취하고, RNA를 illustra RNAspin Mini RNA Icolation 키트(GE Healthcare, Piscataway, NJ, USA)를 사용하여 추출하였다. 그 RNA를 0.15μg 측정하여 취하고, 올리고 프라이머(Invitrogen, Carlsbad, CA), Super Script III 역전사효소(Invitrogen)를 사용하여 역전사하였다. 그 후, PCR Purification 키트(Qiagen, Cambrige, MA, USA)를 사용하여 역전사한 샘플로부터 cDNA를 정제하고, SYBR Green(Life Technologies)에 의한 실시간 PCR법으로 장관내에 있어서의 GPR43의 유전자 발현 해석을 행하였다. 본 실시예에서 사용한 내재성 컨트롤 유전자는 실시예 4와 마찬가지로 β-액틴이다. 또한, 유전자 해석용 프라이머는 하기의 것을 사용하였다.
정방향 역방향
GPR43 5'-ggcttctacagcagcatcta-3'
(서열번호 11)		 5'-aagcacaccaggaaattaag-3'
(서열번호 12)
도 10에 나타낸 바와 같이, GPR43의 유전자 발현양은, 컨트롤 그룹에 비하여, 유산균 분말을 섭취시킨 그룹에 있어서 높은 경향이 있었다(P=0.42). 통계분석은 엑셀 통계(SSRI, Tokyo, Japan)를 사용하여 행하였다. 또한, 데이터는 다중비교검정(Dunnett’s test)에 의해 통계분석을 행하였다.
[실시예 6]
본원발명의 유산균 또는 이의 처리물을, 설사를 하고 있는 소(젖소, 육우), 돼지, 닭(브로일러, 레이어) 등의 동물에게 주었을 때, 설사가 멈추고, 액상이었던 대변이 고형화 등을 하였다. 또한, 통상 사육의 과정에서 필요한 의약품의 사료 첨가량이 억제되어, 젖소나 닭의 경우에 면역계 질환(예를 들면, 유방염, 대장균증 등)의 발생이 억제되었다. 또, 브로일러에 있어서는, 사망율의 저감이 보여졌다. 즉, 본 발명의 유산균의 면역부활작용이 확인되었다.
[실시예 7]
본원발명의 유산균 또는 이의 처리물을 꽃가루 알레르기가 있는 건강한 성인의 인간에게 주었을 때, 꽃가루 알레르기의 증상이 억제되었다. 즉, 본 발명의 유산균의 항알레르기 작용이 확인되었다.
[실시예 8]
본원발명의 유산균 또는 이의 처리물을 쌀, 멜론, 토마토, 또는 배추에 주었을 때, 쌀, 멜론, 토마토의 과실부분, 및 배춧잎이 커지고, 이들 식물에 활력이 부여되었다. 즉, 본원발명의 유산균의 식물의 생장 조절 작용이 확인되었다.
[실시예 9]
본원발명의 유산균 또는 이의 처리물을 소(육우), 돼지, 닭(브로일러)의 동물의 사료에 혼합하여 주었을 때, 이들을 포함하지 않는 사료를 준 경우에 대하여, 사료 요구율이 감소하고, 체형이 확실해지는 등의 변화가 인정되었다. 즉, 본원발명의 유산균의 동물의 성장 촉진 작용이 확인되었다.
[실시예 10]
본원발명의 유산균 또는 이의 처리물을 수도(水稻)의 비료에 혼합하였을 때, 이것을 포함하지 않는 비료를 준 경우에 대하여, 식물의 자가면역작용이 발휘되어, 전체가 쓰러지기 어렵게 되었다. 이것으로부터, 본원발명의 유산균은 식물의 쓰러짐 방지 작용을 갖는 것으로 생각된다.
[실시예 11]
본원발명의 유산균 또는 이의 처리물을 쌀의 비료에 혼합하였을 때, 이것을 포함하지 않는 비료를 준 경우에 대하여, 쌀의 감칠맛이 증가하였다. 이것으로부터, 본원발명의 유산균은 식물의 감칠맛 조정 작용을 갖는 것으로 생각된다.
[실시예 12]
공지의 방법에 따라, 본원발명의 엔테로코커스 듀란스균(E. durans HS-08주)의 염기서열을 결정하였을 때, 하기와 같다(서열번호 13).
Figure 112020126150416-pct00001
이상의 결과로부터, 본 발명의 유산균은 예를 들면 동물에게 투여되었을 경우나 사료에 혼합된 경우에는, (1) 동물(가축)의 정장작용을 촉진하고, 전염병 등을 예방하기 때문에, 항생물질 등의 사용량의 경감이나 사망율의 저하로 연결된다. 또한, (2) 동물(가축)의 기호성(嗜好性)이 높아지고, 성장촉진율이 양호해져, 출하 일수의 단축이 가능해 진다. 또한, (3) 변에 의한 악취가 감소함으로써, 축사환경에 의한 스트레스가 경감되고, 육질이 향상되는 효과를 갖기 때문에, 유용하다.
또한, 본 발명의 유산균이 예를 들면 식물에 산포된 경우나 비료에 혼합된 경우에는, (1) 식물에 활력이 부여되기 때문에, 식물의 생장을 조절할 수 있는 효과를 갖는다. 또한, (2) 식물의 자가면역작용이 발휘되기 때문에, 식물의 쓰러짐 방지 효과를 갖는다. 또한, (3) 식물의 감칠맛이 증가하는 효과를 갖기 때문에, 유용하다.
본 발명은 유산균 엔테로코커스 듀란스균(E. durans HS-08주)의 신규의 균주 또는 이의 처리물 및 이의 증식방법을 제공하기 때문에, 산업상 이용가능성을 갖는다.
NITE Patent Microorganisms Depositary NITEBP-02675 20180410
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Claims (32)

  1. 초산의 생산을 증강하는 엔테로코커스 듀란스 HS-08(수탁번호 NITE BP-02675)의 균체.
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  14. 초산의 생산을 증강하는 엔테로코커스 듀란스 HS-08(수탁번호 NITE BP-02675)의 균체를 배양하는 것을 특징으로 하는, 엔테로코커스 듀란스 HS-08의 균체의 증식방법.
  15. 제1항에 있어서, 균체가 젖산의 생산을 추가로 증강하는 것을 특징으로 하는 균체.
  16. 제1항에 있어서, 균체가 IgA 생산 유도 활성, 면역 부활 활성, 항알레르기 활성, 또는 유해균 및/또는 병원균의 증식 억제 활성을 추가로 갖는 균체.
  17. 제14항에 있어서, 균체가 젖산의 생산을 추가로 증강하는 것을 특징으로 하는 균체의 증식방법.
  18. 초산의 생산을 증강하는 것을 특징으로 하는 엔테로코커스 듀란스 HS-08(수탁번호 NITE BP-02675)의 균체의 처리물.
  19. 제14항에 있어서, 균체가 IgA 생산 유도 활성, 면역 부활 활성, 항알레르기 활성, 또는 유해균 및/또는 병원균의 증식 억제 활성을 추가로 갖는 균체의 증식방법.
  20. 제18항에 있어서, 균체의 처리물이 젖산의 생산을 추가로 증강하는 것을 특징으로 하는 균체의 처리물.
  21. 제1항에 따른 균체 또는 제18항에 따른 균체의 처리물을 함유하는, IgA 생산 유도용 또는 면역부활용 조성물.
  22. 제1항에 따른 균체 또는 제18항에 따른 균체의 처리물을 함유하는, 항알레르기용 조성물.
  23. 제1항에 따른 균체 또는 제18항에 따른 균체의 처리물을 함유하는, 유해균 및/또는 병원균의 증식 억제용 조성물.
  24. 제1항에 따른 균체 또는 제18항에 따른 균체의 처리물을 함유하는, 점막 보호용 조성물.
  25. 제1항에 따른 균체 또는 제18항에 따른 균체의 처리물을 함유하는, GPR43의 유전자 발현 상승용의 용도에 사용되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  26. 제1항에 따른 균체 또는 제18항에 따른 균체의 처리물을 함유하는, 식물의 생장 조절용, 식물의 쓰러짐 방지용, 및 식물의 감칠맛 조정용으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 용도에 사용되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  27. 제1항에 따른 균체 또는 제18항에 따른 균체의 처리물을 함유하는, 동물의 성장 촉진용 및/또는 동물의 자가면역 향상용의 용도에 사용되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  28. 제1항에 따른 균체 또는 제18항에 따른 균체의 처리물을 함유하는 것을 특징으로 하는 식물용 비료.
  29. 제1항에 따른 균체 또는 제18항에 따른 균체의 처리물을 함유하는 것을 특징으로 하는 동물용 사료.
  30. 제1항에 따른 균체 또는 제18항에 따른 균체의 처리물을 함유하는 것을 특징으로 하는 음식품, 화장품 또는 의약품.
  31. 제1항에 따른 균체 또는 제18항에 따른 균체의 처리물을 함유하는 것을 특징으로 하는 콘크리트 부재.
  32. 제1항에 따른 균체 또는 제18항에 따른 균체의 처리물, 및 다른 유산균, 비피더스균, 또는 효모균을 포함한 유용균, 및 곰팡이로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종 또는 이들의 처리물을 함유하는 조성물.
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