CN117586050B - 一种鱼蛋白发酵液及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种鱼蛋白发酵液及其制备方法和应用，涉及微生物发酵技术领域。该方法包括：将鱼干燥粉碎，得到鱼粉，将鱼粉与水以质量比为1：（5‑10）混合，搅拌均匀后以1%‑10%的接种量加入耐久肠球菌（Enterococcus durans）CICC 20373种子液，混合均匀进行发酵，pH值为6.5‑7.5，温度为25℃‑40℃，转速为150‑200 rpm的条件下发酵0.5‑1 h，获得鱼蛋白发酵液。该鱼蛋白发酵液中含有丰富的氨基酸和氮磷钾元素，且使用时能够起到促进植物生长、提高植物产量，尤其是能够起到防止番茄早疫病的作用。
Description
技术领域
本申请涉及微生物发酵技术领域，尤其涉及一种鱼蛋白发酵液及其制备方和应用。
背景技术
我国是一个渔业大国，水产品品种丰富，产量据世界首位。鱼类在农业应用方面也已初露锋芒。人们最初把变质的和食用价值小的鱼类堆置发酵或者沤制成浆液直接施与农作物。该方法虽然操作简单但利用率低，并且易引起作物病害。目前常采用低值鱼或鱼肉废弃物与秸秆混合堆放发酵，该方法制备的鱼蛋白肥料富含多种氨基酸和微量元素，能够广泛适用于多种植物中。但仍存在加工周期过长和加工成本过高的问题。
目前，鱼蛋白肥料生产的队伍越发强大，鱼蛋白肥未来可与海藻肥、甲壳素肥一样成为海洋生物资源利用的大单品，逐步占领传统肥料市场，未来前景巨大。
发明内容
本发明的目的是提供一种生产步骤简单、加工周期短、加工成本低的鱼蛋白发酵液。
一方面，本申请提供了一种鱼蛋白发酵液的制备方法，所述方法包括：将鱼干燥粉碎，得到鱼粉，将所述鱼粉与水以质量比为1：（5-10）混合，搅拌均匀后以1%-10%的接种量加入耐久肠球菌（Enterococcus durans）CICC 20373种子液，混合均匀进行发酵，pH值为6.5-7.5，温度为25℃-40℃，转速为150-200 rpm的条件下发酵0.5-1 h，获得鱼蛋白发酵液。
优选的，所述方法还包括清洗鱼表面盐分的步骤。
优选的，所述鱼粉目数为80目。
优选的，所述鱼粉与水的质量比为1：8。
优选的，所述接种量为5%。
优选的，所述发酵条件为：pH值为7，温度为37℃，转速为180 rpm，发酵0.5 h。
优选的，所述干燥为高温干燥。本领域技术人员可以理解的是，干燥的目的为去除鱼中水分，因此此处对干燥的具体方式不进行过多限定，只要能够实现去除鱼中水分即可。
进一步地，所述鱼选自鲫鱼、鲱鱼、草鱼中的一种或多种。
进一步地，所述鱼为鲫鱼。
在一种优选的实施方式中，所述鱼为鲫鱼的下脚料。
采用鲫鱼下脚料作为本申请发酵底物生产鱼蛋白发酵液，能够大大降低鱼蛋白发酵液的生产成本，并提高鲫鱼下脚料的利用率。
进一步地，耐久肠球菌（Enterococcus durans）CICC 20373种子液的制备方法包括：取耐久肠球菌CICC 20373菌种，接种于培养基中，温度为25℃-40℃，转速为150-200rpm条件下培养12-24 h。
优选的，耐久肠球菌CICC 20373种子液的制备方法包括：取耐久肠球菌CICC20373菌种，接种于培养基中，37℃、180 rpm摇床培养12 h（OD600约为3.5，至本菌株最大生长率，可认为该时期种子液中的菌活性最好），即得耐久肠球菌CICC 20373的种子液。
OD600指的是种子液在600 nm波长处的吸光值。
在一种优选的实施方式中，提供了一种鱼蛋白发酵液的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、将鲫鱼清洗除盐，干燥粉碎，得到鱼粉；
步骤二、所述鱼粉与水以质量比为1：（5-10）混合，搅拌均匀后以1%-10%的接种量加入耐久肠球菌Enterococcus duransCICC 20373种子液，混合均匀进行发酵，pH值为6.5-7.5，温度为25℃-40℃，转速为150-200 rpm的条件下发酵0.5-1 h，获得鱼蛋白发酵液。
耐久肠球菌Enterococcus duransCICC 20373种子液的制备方法包括：从耐久肠球菌Enterococcus duransCICC 20373的固体培养基平板上挑取1-2环菌种，接种于培养基中，25℃-40℃、150-200 rpm培养12-24 h，即得耐久肠球菌Enterococcus duransCICC20373的种子液。
培养基为乳酸菌培养基I(Lactic Bacteria Medium I)。
另一方面，本申请还提供了所述方法制备的鱼蛋白发酵液。
另一方面，本申请还提供了一种包含所述鱼蛋白发酵液的产品。
另一方面，本申请还提供了所述的鱼蛋白发酵液或所述的产品在促进植物生长和/或提高植物产量中的应用，所述植物为番茄。
在一种优选的实施方式中，所述番茄的品种为中蔬4号。
另一方面，本申请还提供了所述的鱼蛋白发酵液或所述的产品在提高植物抗病害能力中的应用，所述植物为番茄。
进一步地，所述病害包括番茄早疫病。
优选的，所述番茄早疫病的病原菌为茄链格孢（Alternariasolani （EllisetMartin）JonesetGrout）。
另一方面，本申请还提供了所述的鱼蛋白发酵液或所述的产品在拮抗茄链格孢（Alternariasolani （EllisetMartin）JonesetGrout）中的应用。
本发明具有如下有益效果：
1、本申请中首次采用耐久肠球菌（Enterococcus durans）发酵鱼获得鱼蛋白发酵液，为鱼蛋白发酵液提供了一种新的工程菌。
2、本申请提供了一种鱼蛋白发酵液的制备方法，该方法采用耐久肠球菌CICC20373发酵鲫鱼制备鱼蛋白发酵液，并在特定发酵条件下能够实现鱼蛋白发酵液的快速发酵生产，且该方法适用于多种鱼类及其下脚料，大大降低了鱼蛋白发酵液生产成本过高和生产周期过长的问题。
3、本发明方法制备的鱼蛋白发酵液中含有丰富的氨基酸和氮磷钾元素，且使用时能够起到促进植物生长、提高植物产量，尤其是能够起到防止番茄早疫病的作用，为鱼蛋白肥料提供了一种新的功能性原材料。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本申请的进一步理解，构成本申请的一部分，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。在附图中：
图1为番茄生长情况示意图。
具体实施方式
为了更清楚的阐释本申请的整体构思，下面结合说明书附图以实施例的方式进行详细说明。在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本发明更为彻底的理解。然而，对于本领域技术人员来说显而易见的是，本发明可以无需一个或多个这些细节而得以实施。在其他的例子中，为了避免与本发明发生混淆，对于本领域公知的一些技术特征未进行描述。
实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。
其中，耐久肠球菌（Enterococcus durans）CICC 20373、耐久肠 球菌（Enterococcus durans）CICC 21068、植物乳植物杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）CICC 24986、购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；乳酸菌培养基I(Lactic BacteriaMedium I)，MD163，购自山东拓普生物工程有限公司；市售鱼蛋白发酵液为易高沃鱼蛋白水溶肥；市售化肥为复合肥料25-15-15。
如未特殊说明，在以下实施方式中，所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
另外，本发明中所述“水”包含去离子水、蒸馏水、离子交换水、双蒸水、高纯水、纯净水等化妆品领域能够使用的任何可行的水。
实施例1发酵菌种和鱼种类筛选实验
本实施例中采用不同益生菌发酵不同鱼类下脚料（鱼类下脚料是指在鱼加工过程中产生的废弃物和其他附属物，如鱼头、鱼骨、鱼皮、鱼鳞）制备鱼蛋白发酵液并对鱼蛋白发酵液中的氮磷钾和氨基酸含量进行检测，具体包括如下步骤。
具体包括：将不同种类的鱼下脚料清洗除去表面盐分干燥至质量不再发生变化，粉碎至80目得到鱼粉；将鱼粉与水以质量比为1：8混合，搅拌均匀后以3%的接种量加入不同菌株种子液，混合均匀进行发酵，pH值为7，温度为37℃，转速为200 rpm的条件下发酵，获得鱼蛋白发酵液。
耐久肠球菌（Enterococcus durans）CICC 20373种子液的制备方法包括：从耐久肠球菌CICC 20373的乳酸菌培养基I固体平板上挑取1环菌种，接种于50 mL乳酸菌培养基I液体培养基中，37℃、180 rpm摇床培养12 h，即得耐久肠球菌CICC 20373的种子液。
耐久肠球菌（Enterococcus durans）CICC 21068种子液的制备方法包括：从耐久肠球菌CICC 21068的乳酸菌培养基I固体平板上挑取1环菌种，接种于50 mL乳酸菌培养基I液体培养基中，37℃、180 rpm摇床培养12 h，即得耐久肠球菌CICC 21068的种子液。
植物乳植物杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）CICC 24986种子液的制备方法包括：从植物乳植物杆菌CICC 24986的MRS培养基固体平板上挑取1环菌种，接种于50 mLMRS培养基液体培养基中，37℃、180 rpm摇床培养12 h，即得植物乳植物杆菌CICC 24986的种子液。
参照我国农业行业标准《水溶肥料总氮、磷、钾含量的测定》( NY/T 1977—2010)方法检测鱼蛋白发酵液中的氮、磷（五氧化二磷）、钾（氧化钾）含量，参照我国农业行业标准《水溶肥料 游离氨基酸含量的测定》(NY/T 1975—2010）测定氨基酸含量，当发酵液中的有效物质基本不再升高视为完成发酵即得发酵时间，上述检测过程均重复三次，检测结果取平均值，具体检测结果如表1所示。
表1
由表1可见，耐久肠球菌CICC 20373能够实现快速发酵鲫鱼，并获得氮磷钾和氨基酸含量较高，且氮磷钾含量均衡的鱼蛋白发酵液。现有技术中鱼蛋白肥料相关产品氮磷钾含量一般为5％-18％均低于本申请中氮磷钾含量，且本申请中发现采用耐久肠球菌CICC20373发酵鲫鱼能够大大缩短发酵过程所需时间，快速制备鱼蛋白发酵液。
实施例2菌种发酵条件筛选
本申请中发现采用耐久肠球菌CICC 20373发酵鲫鱼能够在较短时间内完成鱼蛋白发酵液的发酵。本实施例中针对该发酵过程的具体条件进行了进一步的优化和筛选。
具体包括：将鲫鱼下脚料清洗除去表面盐分，干燥至质量不再发生变化，粉碎得到鱼粉（约80目）；将鱼粉与水以质量比为1：8混合，搅拌均匀后以不同接种量加入耐久肠球菌CICC 20373种子液，混合均匀进行发酵，获得鱼蛋白发酵液。其余发酵条件如表2所示。
耐久肠球菌CICC 20373种子液的制备方法包括：从耐久肠球菌CICC 20373的乳酸菌培养基I固体平板上挑取1环菌种，接种于50 mL乳酸菌培养基I液体培养基中，37℃、180rpm摇床培养12 h，即得耐久肠球菌CICC 20373的种子液。
检测方法同实施例1中记载，鱼蛋白发酵液氮磷钾及氨基酸含量如表2所示。
表2
由表2结果可见，使用耐久肠球菌CICC 20373发酵鲫鱼的发酵条件优选为接种量为5％、pH为7、温度为37℃、转速为180 rpm。在该优选条件下，鱼蛋白发酵液中氮磷钾及氨基酸含量高且均衡，并且完成发酵时间仅有0.5小时，能够满足工业快速生产的需求。
实施例3功效测试
试验例1
本试验例中提供了一种鱼蛋白发酵液的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、将鲫鱼下脚料清洗除去表面盐分，干燥至质量不再发生变化，粉碎得到鱼粉（约80目）；
步骤二、所述鱼粉与水以质量比为1：8混合，搅拌均匀后以5%的接种量加入耐久肠球菌CICC 20373种子液，混合均匀进行发酵，pH值为7，温度为37℃，转速为180 rpm的条件下发酵0.5 h，获得鱼蛋白发酵液。
耐久肠球菌CICC 20373种子液的制备方法包括：从耐久肠球菌CICC 20373的固体培养基平板上挑取1环菌种，接种于50 mL液体培养基中，37℃、180 rpm摇床培养12 h（OD600约为3.5，至本菌株最大生长率，可认为该时期种子液中的菌活性最好），即得耐久肠球菌CICC 20373的种子液。
培养基为乳酸菌培养基I。
试验例2
本试验例与试验例1的区别仅在于不去除鲫鱼表面盐分。
本试验例中提供了一种鱼蛋白发酵液的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、将鲫鱼下脚料干燥至质量不再发生变化，粉碎得到鱼粉（约80目）；
步骤二、所述鱼粉与水以质量比为1：8混合，搅拌均匀后以5%的接种量加入耐久肠球菌CICC 20373种子液，混合均匀进行发酵，pH值为7，温度为37℃，转速为180 rpm的条件下发酵0.5 h，获得鱼蛋白发酵液。
耐久肠球菌CICC 20373种子液的制备方法包括：从耐久肠球菌CICC 20373的固体培养基平板上挑取1环菌种，接种于50 mL液体培养基中，37℃、180 rpm摇床培养12 h（OD600约为3.5，至本菌株最大生长率，可认为该时期种子液中的菌活性最好），即得耐久肠球菌CICC 20373的种子液。
培养基为乳酸菌培养基I。
试验例3
本试验例与试验例1的区别仅在于不进行干燥。
本试验例中提供了一种鱼蛋白发酵液的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、将鲫鱼下脚料清洗除去表面盐分，粉碎得到鱼泥；
步骤二、所述鱼泥与水以质量比为1：8混合，搅拌均匀后以5%的接种量加入耐久肠球菌CICC 20373种子液，混合均匀进行发酵，pH值为7，温度为37℃，转速为180 rpm的条件下发酵0.5 h，获得鱼蛋白发酵液。
耐久肠球菌CICC 20373种子液的制备方法包括：从耐久肠球菌CICC 20373的固体培养基平板上挑取1环菌种，接种于50 mL液体培养基中，37℃、180 rpm摇床培养12 h（OD600约为3.5，至本菌株最大生长率，可认为该时期种子液中的菌活性最好），即得耐久肠球菌CICC 20373的种子液。
培养基为乳酸菌培养基I。
试验例4
本试验例与试验例1的区别仅在于鱼粉与水以体积比为1：4。
本试验例中提供了一种鱼蛋白发酵液的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、将鲫鱼下脚料清洗除去表面盐分，干燥至质量不再发生变化，粉碎得到鱼粉（约80目）；
步骤二、所述鱼粉与水以质量比为1：4混合，搅拌均匀后以5%的接种量加入耐久肠球菌CICC 20373种子液，混合均匀进行发酵，pH值为7，温度为37℃，转速为180 rpm的条件下发酵0.5 h，获得鱼蛋白发酵液。
耐久肠球菌CICC 20373种子液的制备方法包括：从耐久肠球菌CICC 20373的固体培养基平板上挑取1环菌种，接种于50 mL液体培养基中，37℃、180 rpm摇床培养12 h（OD600约为3.5，至本菌株最大生长率，可认为该时期种子液中的菌活性最好），即得耐久肠球菌CICC 20373的种子液。
培养基为乳酸菌培养基I。
试验例5
本试验例与试验例1的区别仅在于鱼粉与水以体积比为1：11。
本试验例中提供了一种鱼蛋白发酵液的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、将鲫鱼下脚料清洗除去表面盐分，干燥至质量不再发生变化，粉碎得到鱼粉（约80目）；
步骤二、所述鱼粉与水以质量比为1：11混合，搅拌均匀后以5%的接种量加入耐久肠球菌CICC 20373种子液，混合均匀进行发酵，pH值为7，温度为37℃，转速为180 rpm的条件下发酵0.5 h，获得鱼蛋白发酵液。
耐久肠球菌CICC 20373种子液的制备方法包括：从耐久肠球菌CICC 20373的固体培养基平板上挑取1环菌种，接种于50 mL液体培养基中，37℃、180 rpm摇床培养12 h（OD600约为3.5，至本菌株最大生长率，可认为该时期种子液中的菌活性最好），即得耐久肠球菌CICC 20373的种子液。
培养基为乳酸菌培养基I。
对比例1
市售鱼蛋白发酵液。
对比例2
市售化肥。
稳定性测试
本实施例中采用上述试验例1-5鱼蛋白发酵液及对比例1-2进行高低温循环环境下稳定性试验，以模拟实际使用时昼夜温差较大的环境，具体为分别将鱼蛋白发酵液置于高低温交替环境（4℃放置12 h后转45℃放置12 h依次循环）中6个月，观测鱼蛋白发酵液的状态，观测结果如表3所示。
表3
由表3结果可见，试验例1方法制备的鱼蛋白发酵液稳定性较好，能够在高低温循环环境下仍保持稳定体系。
并且本实施例中发现，菌株耐久肠球菌CICC 20373能够耐高温至45℃，即在实际使用过程中，耐久肠球菌CICC 20373可与鱼蛋白发酵液中的有效成分共同作用于田间和植物，继续发酵环境中的有效成分以促进植物的生长。
田间试验
将中蔬4号番茄种子播种于育苗穴盘中，待幼苗发芽后移栽至14×12 cm的花盆中，在番茄移栽一周后，采用叶面喷施法将样品或对照组使用于番茄上，用量均为5 mL/盆，生长周期为30天，定期观察记录番茄的生长，每组三个重复，结果取平均值，30天时番茄生长情况具体结果如表4所示，图1为代表性植株生长情况示意图。
表4
由图1和表4结果可见，本申请试验例1方法制备的鱼蛋白发酵液中的有效成分和益生菌能够起到协同作用，有效促进番茄生长。
防治实验
采用番茄（中蔬4号）作为鱼蛋白发酵液相关功效测试实验样品植株。
具体的，将中蔬4号番茄种子采用75%的酒精消毒30 s后，2%次氯酸钠消毒60 s，无菌水漂洗3次后播种于育苗穴盘中，待幼苗发芽后移栽至14×12 cm的花盆中，以灭菌土与基质按体积比1:1混合作为番茄培养基质，待番茄长至4片真叶时，将鱼蛋白发酵液样品等量且均匀的喷洒在番茄叶片上，空白组喷施清水，24 h后采用悬滴法接种番茄早疫病病原菌（茄链格孢）孢子，每叶接种10滴，每滴25 μL，25℃保湿培养7 d，每组三个重复，结果取平均值，参照表5计算病情指数和防治效果，防治效果如表6所示，病情指数和防治效果计算方法如下式。
其中，对比例3：耐久肠球菌CICC 20373种子液。耐久肠球菌CICC 20373种子液的制备方法包括：从耐久肠球菌CICC 20373的固体培养基平板上挑取1环菌种，接种于50 mL液体培养基中，37℃、180 rpm摇床培养12 h，即得耐久肠球菌CICC 20373的种子液。
表5
表6
由表6结果可见，试验例1方法制备的鱼蛋白发酵液针对番茄早疫病具有较好的防治作用。本实施例中还发现耐久肠球菌CICC 20373种子液也对番茄早疫病有一定的防治作用，但直接使用种子液对番茄生长的促进效果不明显，使用种子液组的番茄株高和叶片大小均小于其他处理组。
综上所述，利用耐久肠球菌CICC 20373发酵鲫鱼获得的鱼蛋白发酵液能够兼具促进植物生长和防治茄链格孢引起的早疫病的功能。
以上所述仅为本申请的实施例而已，并不用于限制本申请。对于本领域技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原理之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的权利要求范围之内。
Claims (2)
1.一种鱼蛋白发酵液在促进植物生长和提高植物抗病害能力中的应用，其特征在于，所述鱼蛋白发酵液的制备方法为：将鲫鱼下脚料清洗除去表面盐分，干燥至质量不再发生变化，得到鱼粉，将所述鱼粉与水以质量比为1：8混合，搅拌均匀后以5%的接种量加入耐久肠球菌（Enterococcus durans）CICC 20373种子液，混合均匀进行发酵，pH值为7，温度为37℃，转速为180 rpm的条件下发酵0.5 h，获得鱼蛋白发酵液；所述植物为番茄；所述病害为番茄早疫病。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，耐久肠球菌CICC 20373种子液的制备方法为：取耐久肠球菌CICC 20373菌种，接种于培养基中，温度为25℃-40℃，转速为150-200rpm条件下培养12-24 h。
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Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007105017A (ja) * | 2005-10-17 | 2007-04-26 | Yasuo Kawai | 乳酸菌発酵乳及びその製造方法 |
| CN108218576A (zh) * | 2018-02-06 | 2018-06-29 | 鞠永成 | 一种生态肥料原料的生产和使用方法 |
| CN108249979A (zh) * | 2018-03-20 | 2018-07-06 | 刘洪武 | 一种生态肥料原料 |
| CN108658679A (zh) * | 2018-07-23 | 2018-10-16 | 湖南泰谷生态工程有限公司 | 一种用于防治番茄早疫病的有机肥及其制备方法 |
| CN109694285A (zh) * | 2019-03-07 | 2019-04-30 | 北京世纪阿姆斯生物工程有限公司 | 番茄抗病生物肥料及其制备方法 |
| WO2019230183A1 (ja) * | 2018-05-31 | 2019-12-05 | 株式会社ホクコン | 乳酸菌及びその用途 |
| CN115160071A (zh) * | 2022-09-07 | 2022-10-11 | 山东嘉禾海洋生物科技有限公司 | 一种鱼蛋白液体肥料及其制备方法 |
| CN116553975A (zh) * | 2023-07-07 | 2023-08-08 | 山东嘉禾海洋生物科技有限公司 | 一种鱼蛋白发酵液和应用 |
-
2024
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Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007105017A (ja) * | 2005-10-17 | 2007-04-26 | Yasuo Kawai | 乳酸菌発酵乳及びその製造方法 |
| CN108218576A (zh) * | 2018-02-06 | 2018-06-29 | 鞠永成 | 一种生态肥料原料的生产和使用方法 |
| CN108249979A (zh) * | 2018-03-20 | 2018-07-06 | 刘洪武 | 一种生态肥料原料 |
| WO2019230183A1 (ja) * | 2018-05-31 | 2019-12-05 | 株式会社ホクコン | 乳酸菌及びその用途 |
| CN108658679A (zh) * | 2018-07-23 | 2018-10-16 | 湖南泰谷生态工程有限公司 | 一种用于防治番茄早疫病的有机肥及其制备方法 |
| CN109694285A (zh) * | 2019-03-07 | 2019-04-30 | 北京世纪阿姆斯生物工程有限公司 | 番茄抗病生物肥料及其制备方法 |
| CN115160071A (zh) * | 2022-09-07 | 2022-10-11 | 山东嘉禾海洋生物科技有限公司 | 一种鱼蛋白液体肥料及其制备方法 |
| CN116553975A (zh) * | 2023-07-07 | 2023-08-08 | 山东嘉禾海洋生物科技有限公司 | 一种鱼蛋白发酵液和应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 徐小明主编，.《镇江林业病虫害防控手册》.江苏大学出版社,2020,第162页. * |
| 杨军玉主编，.《蔬菜病虫害防治彩色图鉴》.金盾出版社,2016,第35页. * |
| 红树林微生物抗菌活性成分研究进展;徐志勇;冯昭;徐静;;中国抗生素杂志(第04期);7-20 * |
| 耐久肠球菌产α-L-鼠李糖苷酶的液体发酵培养基优化研究;王艳君;曹涛;刘同军;;中国酿造;20110415(第04期);69-72 * |
Also Published As
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