KR101791088B1 - 탈모 예방, 발모 촉진 또는 성기능 개선능이 있는 락토바실러스 퍼멘텀 균주 및 이를 포함하는 조성물 - Google Patents
탈모 예방, 발모 촉진 또는 성기능 개선능이 있는 락토바실러스 퍼멘텀 균주 및 이를 포함하는 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 탈모 예방, 발모 촉진 또는 성기능 개선능이 있는 신규한 균주 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 탈모 예방, 발모 촉진 또는 성기능 개선능이 있는 신규한 균주 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
현대 사회로 가면서 탈모 환자가 급격히 증가하고 있으며, 모발 관리 대상자 60%가 20-30대로 탈모의 연령대는 점점 낮아지고 있고, 탈모증으로 고통 받고 있는 환자의 숫자는 거의 천만 명에 이를 것으로 추산되고 있어 이에 따른 사회 경제적 문제가 심각하게 대두되고 있다.
탈모가 심할수록 심리적으로 우울이나 불안 증상을 호소하며, 스트레스 지각도가 높아지고, 인간관계나 이성 관계에서 적응의 어려움을 겪으며, 가정 내 적응이 원만하지 못한 것으로 보고되고 있어 보건학적인 관심사가 되고 있다.
탈모의 원인은 아직까지 잘 알려져 있지 않으나 이에 대한 가능성 있는 원인으로 유전적 요인, 호르몬적 이상, 그리고 면역학적 이상에 의한 원인 등에 대한 보고가 있다.
현재 탈모 치료제로는 미국 Food and Drug Administration(FDA)의 승인을 받은 경피도포용 미녹시딜(Minoxidil)과 경구투여용 Finasteride가 많이 사용되고 있으나 수반되는 부작용인 심혈관계 장애, 피부 자극, 성기능 감소 및 심각한 기형유발 등의 이유로 한계점을 드러내고 있다.
한편 선행 연구들에서 생약제제들을 이용한 탈모증 개선 효과에 대해 보고되어 왔으나, 그 결과는 미비한 수준이며 최근에 식물추출물질과 하수오 등 한방재료를 열수 추출하여 Lactobacillus 속 유산균으로 발효하여 이를 이용한 발모 촉진 연구와 특허가 일부 보고되고 있으나 대부분 실험쥐에 적용한 연구결과들이며 실제 탈모이거나 탈모가 진행 중인 사람에 적용한 연구는 전무한 실정이다.
없음
이에, 본 발명은 탈모 예방, 발모 촉진 또는 성기능 개선에 효과적인 신규한 유산균 균주를 제공하고자 한다.
나아가, 본 발명은 부작용 없이 안전하게 사용할 수 있는 탈모 예방, 발모 촉진용 또는 성기능 개선용 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 일 양태는, 신규한 락토바실러스 퍼멘텀 (Lactobacillus fermentum) KCCM11910P 균주를 제공한다. 상기 균주의 형태학적 특징은 그람 양성균이며, 서열번호 1의 염기 서열을 가지며, 16s rRNA partial sequencing에 의한 분석 결과 락토바실러스 퍼멘텀과 99% 상동성을 갖는다. 이에 본 발명자들은 신규 분리한 락토바실러스 퍼멘텀 KCCM11910P을 2016년 10월 7일 한국 미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganisms, 서울시 서대문구 홍제-2가-길 120-861)에 기탁번호 KCCM11910P로 기탁하였다. 상기 균주는 한국의 전통식품인 청국장으로부터 분리된 것이다. 상기 균주는 탈모 예방, 발모 촉진, 성기능 개선, 콜레스테롤 저하, 및/또는 지방 분해에 효과적이다.
본 발명의 다른 양태로서 락토바실러스 퍼멘텀 KCCM11910P의 배양물, 그의 농축물, 또는 그의 건조물에 관한 것이다.
본 발명의 신규 분리한 균주는 통상적인 바실러스 또는 락토바실러스 속 균의 배양방법을 통해 배양할 수 있다. 배지로는 천연배지 또는 합성배지를 사용할 수 있다. 배지의 탄소원으로는 예를 들어, 글루코오스, 수크로오스, 덱스트린, 글리세롤, 녹말 등이 사용될 수 있고, 질소원으로는 펩톤, 육류 추출물, 효모 추출물, 건조된 효모, 대두, 암모늄염, 나이트레이트 및 기타 유기 또는 무기 질소 함유 화합물이 사용될 수 있으나, 이러한 성분에 한정되는 것은 아니다. 배지에 포함되는 무기염으로는 마그네슘. 망간, 칼슘. 철, 칼륨 등이 사용될 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 상기 탄소원, 질소원 및 무기염의 성분 이외에 아미노산, 비타민, 핵산 및 그와 관련된 화합물들이 배지에 첨가될 수 있다. 본원의 신규 분리한 균주의 배양온도 조건은 20~40℃의 온도 범위에서 12시간 내지 4일간 배양할 수 있다. 일 예에서, 배양 배지에 서리태, 백하수오, 숙지황, 감초, 천궁, 두충, 계피, 당귀, 석창포, 적하수오, 측백엽, 생강, 백자인, 천초, 승마, 만형자 등의 생약 제제, 이의 추출물, 또는 이의 혼합물을 첨가하여 배양하고, 이 배양물을 사용함으로써 본 균주의 탈모방지, 발모 촉진, 성기능 개선의 효과를 보다 개선할 수 있다. 특히, 배양 배지에 서리태 및/또는 백하수오를 첨가하는 것이 좋으며, 첨가되는 이의 양은, 각각 배지 중량을 기준으로 0.01 중량% 내지 10 중량%, 구체적으로는 0.01 중량% 내지 5 중량% 정도가 좋다.
신규 분리한 균주의 배양물은 균체를 포함한 배양 원액일 수 있으며, 또한 배양 상등액을 제거하거나 농축한 균체일 수 있다. 상기 배양물의 조성은 통상의 바실러스나 락토바실러스 균주 배양에 필요한 성분뿐 아니라, 바실러스나 락토바실러스 균주의 생장에 상승적으로 작용하는 성분을 추가적으로 포함할 수 있으며, 이에 따른 조성은 당 업계의 통상의 기술을 가진 자에 의하여 용이하게 선택될 수 있다.
또한 균주의 상태는 액상상태 또는 건조상태일 수 있으며, 건조방법은 통풍건조, 자연건조, 분무건조 및 동결건조가 가능하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
다른 양태로서 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 균주, 이의 배양물, 이의 농축물, 또는 이의 건조물을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 상기 락토바실러스 퍼멘텀 균주는 구체적으로 락토바실러스 퍼멘텀 KCCM11910P일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 조성물은 탈모방지, 발모 촉진, 또는 성기능 개선용 식품 조성물 또는 의약 조성물일 수 있으며, 추가로, 지방 분해 효과 및/또는 콜레스테롤 저하 효과가 있다. 식품 조성물의 일 양태로는 식품, 건강식품, 건강보조식품, 또는 건강기능성 식품 조성물일 수 있다. 의약 조성물의 일 양태로는 의약외품 또는 의약적 제제일 수 있다.
일 예에서, 상기 조성물은 서리태, 백하수오, 숙지황, 감초, 천궁, 두충, 계피, 당귀, 석창포, 적하수오, 측백엽, 가시오가피, 송엽, 송화, 교맥, 지모, 생강, 백자인, 천초, 승마, 만형자 등의 생약 제제, 이의 추출물, 또는 이의 혼합물 등과 같이 탈모 방지 또는 발모 촉진에 효과적인 생약 성분; 또는 미녹시딜이나 finasteride 같은 의약 성분을 추가로 포함할 수 있다.
다른 예에서, 상기 조성물은, Brevibacillus 속, Lactobacillus 속, Lactococcus 속, Propionibacterium 속, Enterocuccus 속, Bifidobacterium 속 등의 균주를 추가로 포함할 수 있다. 구체적으로, Brevibacillus reuszeri (예: KCCM11911P), Enterococcus faecium(예: KCCM11909P), 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)(예: KCCM11827P), 류코노스톡 홀잡펠리(예: KCCM11830P), 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei)(예: KCCM11841P), 또는 이의 배양물, 또는 이의 혼합물을 추가로 포함할 수 있다. 보다 구체적으로는, Brevibacillus reuszeri (예: KCCM11911P), Enterococcus faecium(예: KCCM11909P), 류코노스톡 홀잡펠리 Ceb-kc-003 (KCCM11830P), 류코노스톡 메센테로이데스 KCCM11827P, 락토바실러스 사케이 KCCM11841P, 또는 이의 배양물, 또는 이의 혼합물을 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 조성물은 콜라겐을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 5 x 104 CFU/ml 내지 5 x 1010 CFU/ml의 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P) 균주를 포함하며, 바람직하게는 5 x 104 CFU/ml 내지 5 x 108 CFU/ml 의 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P)을 포함한다. 상기 조성물은 상기의 농도로 회당 30ml 내지 100ml, 1일 1회 내지 4회 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물은 약학적으로 혹은 식품학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있으며, 담체와 함께 제제화되어 식품 혹은 의약품으로 제공될 수 있다.
본 발명에서 용어, "약학적으로 혹은 식품학적으로 허용 가능한 담체"란 생물체를 자극하지 않고 투여 균주의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 말한다.
상기 조성물은 경구 또는 비경구의 여러가지 제형으로 제제화될 수 있으나, 바람직하게는 액상 경구 용액으로 제형화될 수 있다.
액상 용액으로 제제화되는 경우, 허용되는 약제학적 혹은 식품학적 허용 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 완충식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 액상 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화 할 수 있다. 또한 조성물의 품질 저하를 방지하기 위하여 결착제, 유화제, 보존제 등을 추가로 첨가할 수 있고, 또는, 아미노산제, 비타민제, 효소제, 향미제, 비단백질태 질소화합물, 규산염제, 완충제, 추출제, 올리고당 등을 추가로 포함할 수 있다. 액상 형태로 투여하는 경우의 투여량은 5 x 104 내지 5 x 108 CFU/ml의 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P) 균주, 바람직하게는 1 x 106 내지 1 x 108 CFU/ml의 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P)의 양으로 회당 30ml 내지 100ml를 1일 1회 내지 4회 투여할 수 있다. 일 예에서, 1 x 106 내지 1 x 108 CFU/ml의 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P)의 양으로 회당 50ml를 1일 2회 내지 4회 투여할 수 있다. 보다 구체적으로는 1 x 106 내지 1 x 108 CFU/ml의 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P)의 양을 회당 50ml 내지 100ml를 1일 1회 내지 2회 투여할 수 있다. 보다 더욱 구체적으로는 1 x 106 내지 1 x 108 CFU/ml의 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P)를 아침 식전 30분에 50ml 내지 100ml 1회 투여하고, 저녁 식전 30분 또는 취침 전에 50ml 내지 100ml 1회 투여할 수 있다.
본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P)을 포함하는 경구 투여용 제형으로는, 예를 들어 정제, 트로키제, 로렌지, 수용성 또는 유성현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제를 들 수 있다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제화 하기 위해, 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 마니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제, 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제, 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕해제, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활제를 포함할 수 있으며, 캡슐 제형의 경우 상기 언급한 물질 외에도 지방유와 같은 액체 담체를 더 함유할 수 있다.
상기 조성물 또는 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P)의 1일 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 치료, 예방, 또는 개선하고자 하는 주요 증상, 투여시간, 투여 방법, 중증도에 따라 달라질 수 있으나, 약 0.0001mg/kg 내지 약 10g/kg, 구체적으로는 약 0.01 mg/kg 내지 약 500mg/kg일 수 있으며, 하루 1회 내지 6회, 예컨데, 하루 1회 내지 4회 투여 혹은 적용할 수 있다.
상기 조성물 내 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P)은 액상 또는 건조상태일 수 있으며, 바람직하게는 액상 형태이다. 건조방법은 통풍건조, 자연건조, 분무건조 및 동결건조가 가능하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P)은 분말형태로 조성물 중량의 0.05 내지 80 중량%, 예를 들어, 0.1 내지 70 중량%, 0.1 내지 50 중량%, 또는 1 내지 30 중량%의 양으로 혼합될 수 있다.
본 발명의 일 양태는, 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P) 균주 또는 이의 배양물, 이의 농축액 또는 이의 건조물을 포함하는, 탈모 방지 혹은 발모 촉진용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 다른 양태는, 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCC11910P ) 균주 또는 이의 배양물, 이의 농축액 또는 이의 건조물의 치료적 또는 예방적 유효량을 탈모 방지 또는 발모 촉진을 위해 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 탈모 방지 방법 혹은 탈모 치료 방법에 관한 것이다. 상기 치료적 또는 예방적 유효량은 전술한 바와 같이, 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 치료, 예방, 또는 개선하고자 하는 주요 증상, 투여시간, 투여 방법, 중증도에 따라 달라질 수 있으나, 1일 약 0.0001mg/kg 내지 약 10g/kg, 구체적으로는 약 0.01 mg/kg 내지 약 500mg/kg일 수 있으며, 하루 1회 내지 6회, 예컨데, 하루 1회 내지 4회 투여 혹은 적용하는 것일 수 있다. 또는, 5 x 104 내지 5 x 108 CFU/ml의 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P) 균주, 바람직하게는 1 x 106 내지 1 x 108 CFU/ml의 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P)의 양으로 회당 30ml 내지 100ml를 1일 1회 내지 4회 투여할 수 있다. 일 예에서, 1 x 106 내지 1 x 108 CFU/ml의 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P)의 양으로 회당 50ml를 1일 2회 내지 4회 투여할 수 있다. 보다 구체적으로는 1 x 106 내지 1 x 108 CFU/ml의 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P)의 양을 회당 50ml 내지 100ml를 1일 1회 내지 2회 투여할 수 있다. 보다 더욱 구체적으로는 1 x 106 내지 1 x 108 CFU/ml의 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P)를 아침 식전 30분에 50ml 내지 100ml 1회 투여하고, 저녁 식전 30분 또는 취침 전에 50ml 내지 100ml 1회 투여할 수 있다.
본 발명의 일 양태는, 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P) 균주 또는 이의 배양물, 이의 농축액 또는 이의 건조물을 포함하는, 성기능 장애 개선용 조성물에 관한 것이다. 상기 성기능 장애 개선은, 예컨데, 발기 부전의 개선일 수 있다. 또는 본 발명의 다른 양태는, 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P) 균주 또는 이의 배양물, 이의 농축액 또는 이의 건조물의 치료적 또는 예방적 유효량을 성기능 장애 예방 혹은 치료를 위해 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 성기능 장애의 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다. 상기 치료적 또는 예방적 유효량은 상술한 것과 동일하다.
본 발명의 일 양태는, 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P) 균주 또는 이의 배양물, 이의 농축액 또는 이의 건조물을 포함하는, 콜레스테롤 저하용 조성물에 관한 것이다. 또는 본 발명의 다른 양태는, 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM00000) 균주 또는 이의 배양물, 이의 농축액 또는 이의 건조물의 치료적 또는 예방적 유효량을 콜레스테롤 저하를 위해 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 고콜레스테롤혈증의 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다. 상기 치료적 또는 예방적 유효량은 상술한 것과 동일하다.
본 발명의 일 양태는, 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P) 균주 또는 이의 배양물, 이의 농축액 또는 이의 건조물을 포함하는, 지방 분해용 조성물에 관한 것이다. 또는 본 발명의 다른 양태는, 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P) 균주 또는 이의 배양물, 이의 농축액 또는 이의 건조물의 치료적 또는 예방적 유효량을 고지방증 예방 혹은 치료를 위해 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 고지방증 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다. 상기 치료적 또는 예방적 유효량은 상술한 것과 동일하다.
본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P) 균주 또는 이를 포함하는 조성물은 탈모 예방, 발모 촉진 또는 성기능 개선에 효과적이다.
락토바실러스 퍼멘텀 (예: KCCM11910P) 또는 이를 포함하는 조성물은, 부작용 없이 안전하게 탈모 예방, 발모 촉진, 콜레스테롤 저하 또는 성기능 개선에 사용될 수 있다.
도 1은 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주를 복용하기 전과 후(약 2개월)의 모발 비교 사진이다.
도 2는 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주를 복용하기 전과 후(약 2개월)의 모발 비교 사진이다.
도 3은 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주를 복용하기 전과 후(약 45일)의 모발 비교 사진이다.
도 4는 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P)와 브레비바실러스 루제리 Ceb-ch-003 (KCCM11911P)를 복용하기 전과 후(약 45일 후)의 모발 비교 사진이다.
도 5는 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P)와 브레비바실러스 루제리 Ceb-ch-003 (KCCM11911P)를 복용하기 전과 후(약 45일 후)의 모발 비교 사진이다.
도 6는 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P)와 브레비바실러스 루제리 Ceb-ch-003 (KCCM11911P)를 복용하기 전과 후(약 75일 후)의 모발 비교 사진이다.
도 7는 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P)와 김치 추출균인 류코노스톡 홀잡펠리 Ceb-kc-003 (Leuconostoc holzapfelii Ceb-kc-003 (KCCM11830P)을 복용하기 전과 후(100일 후)의 모발 비교 사진이다.
도 8은, 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주와 다른 유산균주인 Lactobacillus plantarum 대비 콜레스테롤 저하 효과를 보여주는 그래프이다.
도 9은, 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주와 다른 유산균주인 Lactobacillus plantarum 대비 NO 생성 농도를 보여주는 그래프이다.
도 2는 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주를 복용하기 전과 후(약 2개월)의 모발 비교 사진이다.
도 3은 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주를 복용하기 전과 후(약 45일)의 모발 비교 사진이다.
도 4는 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P)와 브레비바실러스 루제리 Ceb-ch-003 (KCCM11911P)를 복용하기 전과 후(약 45일 후)의 모발 비교 사진이다.
도 5는 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P)와 브레비바실러스 루제리 Ceb-ch-003 (KCCM11911P)를 복용하기 전과 후(약 45일 후)의 모발 비교 사진이다.
도 6는 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P)와 브레비바실러스 루제리 Ceb-ch-003 (KCCM11911P)를 복용하기 전과 후(약 75일 후)의 모발 비교 사진이다.
도 7는 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P)와 김치 추출균인 류코노스톡 홀잡펠리 Ceb-kc-003 (Leuconostoc holzapfelii Ceb-kc-003 (KCCM11830P)을 복용하기 전과 후(100일 후)의 모발 비교 사진이다.
도 8은, 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주와 다른 유산균주인 Lactobacillus plantarum 대비 콜레스테롤 저하 효과를 보여주는 그래프이다.
도 9은, 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주와 다른 유산균주인 Lactobacillus plantarum 대비 NO 생성 농도를 보여주는 그래프이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.
실시예
1:
락토바실러스
퍼멘텀
Ceb
-ch-002 (
KCCM11910P
) 균주의 분리 및 동정
(1) 시료 확보 및 균주 분리
한국의 전통식품인 청국장을 채취하고, 확보된 시료를 단계 희석하여 3% 염화나트륨이 첨가된 BHI 고체배지(Difco, USA)에 도말 후 37℃ 조건으로 24 시간 동안 배양하였다. 상기 시료에서 우점한 균주를 분리하였다. 선별된 콜로니는 3차에 걸쳐 새로운 배지에 옮겨 배양하는 방법으로 순수 분리하였으며, 순수 배양된 균을 20% 글리세롤이 첨가된 배지에 담아 영하 70℃ 이하에서 보존하였다.
(2) 형태학적, 분류학적 특성 조사
상기 분리된 균주의 동정을 위하여, 일차적으로 형태학적, 생화학적 조사를 수행하였다. 형태적인 특징으로는 그람 염색결과 그람 양성이었다. 분류학적 특성을 분석하기 위하여 16s rRNA partial sequencing에 의해 분석을 실시하였으며, 그 결과 서열번호 1의 염기서열을 가지며, 당해 분리 균주는 락토바실러스 퍼멘텀과 99%의 상동성을 갖는 것으로 확인되었다.
이에 본 발명자들은 신규 분리한 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002를 2016년 10월 7일 한국 미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganisms, 서울시 서대문구 홍제-2가-길 120-861)에 기탁번호 KCCM11910P 로 기탁하였다.
상기 균주를 동결건조하여 균주 분말을 제조하였다.
(3) 균주의 배양액의 제조
락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002의 배양액을 다음과 같은 방법으로 제조하였다:
정제수 100 리터에 Dextrose 2kg, 전지분유 1.5kg, 효모 추출액 0.05kg을 각각 첨가 후 121°C에서 15~30분간 고온·고압 멸균하고 35°C 내외로 식힌 후 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002를 무균 상태에서 0.2~0.4 리터 접종한 다음 35°C 내외로 2~3일간 배양하여 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002의 배양액을 수득하였다.
실시예
2:
락토바실러스
퍼멘텀
Ceb
-ch-002 (
KCCM11910P
) 균주의 탈모 방지 효과
실시예 1에서 수득된 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주 배양액을 탈모 증상이 있는 48세, 54세 및 55세의 총 3명의 남성에게 1개월 내지 2개월 동안 1 x 106 내지 1 x 108 CFU/ml의 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P)의 양을 회당 50ml 내지 100ml를 아침 및 저녁으로 1일 2회 매일 경구 투여하였다.
상기 균주의 투여 전과 복용의 10일, 20일 및 30일 후에 있어서 10일 간격으로 1회 머리 세정 후 빠지는 머리카락의 개수를 세었다.
상기 실험 결과는 아래 표 1과 같다:
|
실험대상
복용 일자 |
48세 남성 | 54세 남성 | 55세 남성 |
| 복용 전 | 55개 탈모 | 44개 탈모 | 38개 탈모 |
| 복용 10일 후 | 36개 탈모 | 33개 탈모 | 26개 탈모 |
| 복용 20일 후 | 21개 탈모 | 19개 탈모 | 20개 탈모 |
| 복용 30일 후 | 12개 탈모 | 5개 탈모 | 8개 탈모 |
또한, 상기 남성들에 있어서 본 발명의 균주의 투여 전과 투여 후의 특정 시점에 있어서, 모발의 굵기, 양, 윤기 등을 비교하고자 사진으로 촬영하였으며, 그 일부의 결과가 도 1 내지 도 3에 도시되어 있다.
상기 결과로부터, 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주가 탈모 방지에 효과적이며, 또한, 모발 굵기와 양, 윤기를 현저히 개선하여 탈모 치료에 효과적임을 알 수 있다.
실시예
3:
락토바실러스
퍼멘텀
Ceb
-ch-002 (
KCCM11910P
) 균주와
브레비바실러스 루제리
Ceb
-ch-003 (
KCCM11911P
) 균주 배합의 탈모 방지 효과
실시예 1에서 수득된 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주의 배양액과, 청국장에서 분리되었으며 2016년 10월 7일 한국 미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganisms, 서울시 서대문구 홍제-2가-길 120-861)에 기탁번호 KCCM11911P로 기탁된 브레비바실러스 루제리(Brevibacillus reuszeri) Ceb-ch-003 (KCCM11911P) 균주의 배양액을 탈모 증상이 있는 55세, 53세 및 48세의 총 3명의 남성에게 1개월 내지 2개월 동안 투여하였다. 구체적인 투여 방법은 1 x 106 내지 1 x 108 CFU/ml의 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P)를 회당 25ml 내지 50ml, 1 x 106 내지 1 x 108 CFU/ml의 브레비바실러스 루제리(Brevibacillus reuszeri) Ceb-ch-003 (KCCM11911P) 를 회당 25ml 내지 50ml 1일 2회 매일 경구 투여하였다.
상기 균주들의 투여 전과 복용의 10일, 20일 및 30일 후에 있어서 10일 간격으로 1회 머리 세정 후 빠지는 머리카락의 개수를 세었다.
상기 실험 결과는 아래 표 2과 같다:
|
실험대상
복용 일자 |
55세 남성 | 53세 남성 | 48세 남성 |
| 복용 전 | 60개 탈모 | 55개 탈모 | 57개 탈모 |
| 복용 10일 후 | 45개 탈모 | 43개 탈모 | 45개 탈모 |
| 복용 20일 후 | 23개 탈모 | 27개 탈모 | 36개 탈모 |
| 복용 30일 후 | 10개 탈모 | 7개 탈모 | 13개 탈모 |
또한, 상기 남성들에 있어서 본 발명의 균주의 투여 전과 투여 후의 특정 시점에 있어서, 모발의 굵기, 양, 윤기 등을 비교하고자 사진으로 촬영하였으며, 그 일부의 결과가 도 4 내지 도 6에 도시되어 있다.
상기 결과로부터, 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주를 다른 균주, 브레비바실러스 루제리(Brevibacillus reuszeri) Ceb-ch-003 (KCCM11911P) 균주와 병용시 탈모 방지에 더욱 효과적임을 알 수 있다.
실시예
4:
락토바실러스
퍼멘텀
Ceb
-ch-002 (
KCCM11910P
) 균주와 류코노스톡
홀잡펠리
Ceb
-
kc
-
003 (KCCM11830P
)
균주 배합의 탈모 방지 효과
실시예 1에서 수득된 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주의 배양액과, 김치에서 분리된 류코노스톡 홀잡펠리 Ceb-kc-003 (KCCM11830P) 균주의 배양액을 탈모 증상이 있는 66세의 한 남성에게 4개월 동안 투여하였다. 구체적인 투여 방법은 1 x 106 내지 1 x 108 CFU/ml의 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P)를 회당 25ml 내지 50ml, 1 x 106 내지 1 x 108 CFU/ml의 류코노스톡 홀잡펠리 Ceb-kc-003 (KCCM11830P) 를 회당 25ml 내지 50ml 1일 2회 매일 경구 투여하였다.
상기 균주들의 투여 전과 복용의 10일, 20일 및 30일 후에 있어서 10일 간격으로 1회 머리 세정 후 빠지는 머리카락의 개수를 세었다.
상기 실험 결과는 아래 표 3과 같다:
|
실험대상
복용 일자 |
66세 남성 |
| 복용 전 | 45개 탈모 |
| 복용 10일 후 | 41개 탈모 |
| 복용 20일 후 | 20개 탈모 |
| 복용 30일 후 | 15개 탈모 |
실시예
5:
락토바실러스
퍼멘텀
Ceb
-ch-002 (
KCCM11910P
) 균주와
엔테로콕커스
파에시움
KCCM11909P
균주 배합의 탈모 방지 효과
실시예 1에서 수득된 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주의 배양액과, 엔테로콕커스 파에시움 KCCM11909P 균주의 배양액을 탈모 증상이 있는 60세의 한 남성에게 3개월 동안 투여하였다. 구체적인 투여 방법은 1 x 106 내지 1 x 108 CFU/ml의 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P)를 회당 25ml 내지 50ml, 1 x 106 내지 1 x 108 CFU/ml의 엔테로콕커스 파에시움 KCCM11909P 균주를 회당 25ml 내지 50ml 1일 2회 매일 경구 투여하였다.
상기 균주들의 투여 전과 복용의 10일, 20일 및 30일 후에 있어서 10일 간격으로 1회 머리 세정 후 빠지는 머리카락의 개수를 세었다.
상기 실험 결과는 아래 표 4과 같다:
|
실험대상
복용 일자 |
60세 남성 |
| 복용 전 | 45개 탈모 |
| 복용 10일 후 | 42개 탈모 |
| 복용 20일 후 | 27개 탈모 |
| 복용 30일 후 | 23개 탈모 |
실시예
6:
락토바실러스
퍼멘텀
Ceb
-ch-002 (
KCCM11910P
) 균주의 콜레스테롤 저하 효과
락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주 분말의 콜레스테롤 저하 효과를 검토하기 위해, 각각 1mg/ml 내지 5mg/ml의 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P)의 동결건조 분말액, 및 대조군으로 각각 1mg/ml 내지 5mg/ml의 Lactobacillus plantarum 분말액을 사용하였다.
＜콜레스테롤(cholesterol) 제거능＞
본 발명에서 규정하는 콜레스테롤(cholesterol) 제거능은 구체적으로는 이하의 방법에 따라 측정할 수 있다:
MRS 배양지 30 ml를 50 ml용 팔콘(falcon) 튜브(tube)에 넣어 피검균 (글리세롤(glycerol) 스톡(stock))을 접종(1X107개／ml)해, 30℃으로 24시간 배양한다. 얻어진 배양액 300μl를 콜레스테롤(cholesterol) 배양지(350 mg／L 콜레스테롤(cholesterol)(Wako Pure Chemical), 0.2％ 담즙산(w／ｖ)을 포함한 MRS 배양지 30 ml에 첨가한다. 37℃에서 24시간 배양한 후, 4℃, 8,000 rpm에서 10분 원심분리(centrifugal separation)를 실시해, 상등액 중의 콜레스테롤 농도(cholesterol level)를 Determiner FC (Kyowa Medex Co., Ltd.)를 이용해 측정한다. 초기 콜레스테롤(cholesterol) 배양기 속에 함유되는 콜레스테롤 양(cholesterol)에 대한 배양지로부터 제거된 콜레스테롤 양(cholesterol)의 비율(％)을 산출한다.
그 결과는 도 8 및 표 5에 도시되어 있으며, 이는 3회 반복 처리 후 평균값으로 나타낸 것이다.
| 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) | Lactobacillus plantarum | |
| 1mg/ml | 21% | 11% |
| 2mg/ml | 27% | 16% |
| 3mg/ml | 39% | 22% |
| 4mg/ml | 51% | 31% |
| 5mg/ml | 62% | 35% |
상기 결과로부터 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주 분말이 농도에 비례해서 콜레스테롤 저하에 효과적이며, 이는 다른 유산균인 Lactobacillus plantarum에 비해서 유의적으로 개선 효과가 높음을 알 수 있다.
실시예
7:
락토바실러스
퍼멘텀
Ceb
-ch-002 (
KCCM11910P
)
균주의 성기능 개선
및 예방
효과
성기능 이상 증상이 있거나 없는 흡연 또는 비흡연자인 50세 내지 70세의 총 5명의 남성에게 총 3개월 동안 1 x 106 내지 1 x 108 CFU/ml의 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P)을 회당 50ml 내지 100ml의 양으로 1일 1회 내지 2회 매일 경구 투여하였다. 상기 균주의 투여 전과 후에 있어서 한달 간격으로 새벽 발기 회수, 발기력, 발기 지속력 등을 자가 평가하게 하였다.
이중 복용 1개월 내지 3개월 동안 설문에 응한 사람은 총 3명이었으며, 그 결과는 아래 표 6와 같다:
|
실험대상
복용 지속일 |
51세 남성
(비흡연자) |
54세 남성
(비흡연자) |
65세 남성
(흡연자) |
| 복용 전 | 발기력 양호 | 발기력 낮음 | 발기 어려움 |
| 복용 1개월 후 | 발기 지속력 증가 | 새벽 발기 | 새벽 발기 |
| 복용 2개월 후 | 발기 회수 증가 | 새벽 발기 회수 증가 | 발기 지속력 증가 |
| 복용 3개월 후 | 발기 회수 및 발기 지속력 증가 | 발기 지속력 증가 | 발기 회수 증가 |
상기 결과로부터 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) 균주 분말을 지속적으로 복용시 성기능 이상의 예방 효과가 있으며, 나아가, 성기능 장애에 치료 효과가 있음을 확인할 수 있다.
또한, 혈류 증가와 모세혈관 이완작용으로 발기력 향상에 도움을 주는 NO의 24시간 동안의 생성 농도(Hacat 세포로부터 발생) 정도를 추가 평가하였다. 본 발명의 신균주 Ceb-ch-002 (KCCM11910P)와 Lactobacillus plantarum과 비교 테스트(3회 반복 후 평균값)한 결과는 도 9 및 표 7에 도시되어 있다.
| 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P) | Lactobacillus plantarum | |
| 1μg/ml | 3.7(μM) | 2.5(μM) |
| 10μg/ml | 4.0(μM) | 2.9(μM) |
| 20μg/ml | 4.6(μM) | 3.1(μM) |
| 30μg/ml | 5.2(μM) | 3.3(μM) |
| 40μg/ml | 6.4(μM) | 3.5(μM) |
| 50μg/ml | 7.1(μM) | 3.5(μM) |
<110> COENBIO CO., Ltd.
<120> Lactobacillus fermentum stain for preventing depilation,
improving hair growth or improving sexual disfunction, and
composition comprising the same
<130> P16-1231
<160> 2
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 861
<212> DNA
<213> DNA sequence of Lactobacillus fermentum KCCM11910P
<400> 1
gctcaggatg aacgccggcc ggtgtgccta atacatgcaa gtcgaacgcg ttggccccaa 60
ttgattgatg gtgcttgcac ctgattgatt ttggtcgcca acgagtggcg gacgggtgag 120
taacacgtag gtaacctgcc cagaagcggg ggacaacatt tggaaacaga tgctaatacc 180
gcataacaac gttgttcgca tgaacaacgc ttaaaagatg gcttctcgct atcacttctg 240
gatggacctg cggtgcatta gcttgttggt ggggtaatgg cctaccaagg cgatgatgca 300
tagccgagtt gagagactga tcggccacaa tgggactgag acacggccca tactcctacg 360
ggaggcagca gtagggaatc ttccacaatg ggcgcaagcc tgatggagca acaccgcgtg 420
agtgaagaag ggtttcggct cgtaaagctc tgttgttaaa gaagaacacg tatgagagta 480
actgttcata cgttgacggt atttaaccag aaagtcacgg ctaactacgt gccagcagcc 540
gcggtaatac gtaggtggca agcgttatcc ggatttattg ggcgtaaaga gagtgcaggc 600
ggttttctaa gtctgatgtg aaagccttcg gcttaaccgg agaagtgcat cggaaactgg 660
ataacttgag tgcagaagag ggtagtggaa ctccatgtgt agcggtggaa tgcgtagata 720
tatggaagaa caccagtggc gaaggcggct acctggtctg caactgacgc tgagactcga 780
aagcatgggt agcgaacagg attagatacc ctggtagtcc atgccgtaaa cgatgagtgc 840
taggtgttgg agggtttccg c 861
<210> 2
<211> 868
<212> DNA
<213> DNA sequence of Enterococcus faecium KCCM11909P
<400> 2
gctcaggacg aacgctggcg gcgtgcctaa tacatgcaag tcgtacgctt ctttttccac 60
cggagcttgc tccaccggaa aaagaggagt ggcgaacggg tgagtaacac gtgggtaacc 120
tgcccatcag aaggggataa cacttggaaa caggtgctaa taccgtataa caatcgaaac 180
cgcatggttt tgatttgaaa ggcgctttcg ggtgtcgctg atggatggac ccgcggtgca 240
ttagctagtt ggtgaggtaa cggctcacca aggccacgat gcatagccga cctgagaggg 300
tgatcggcca cattgggact gagacacggc ccaaactcct acgggaggca gcagtaggga 360
atcttcggca atggacgaaa gtctgaccga gcaacgccgc gtgagtgaag aaggttttcg 420
gatcgtaaaa ctctgttgtt agagaagaac aaggatgaga gtaactgttc atcccttgac 480
ggtatctaac cagaaagcca cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg 540
gcaagcgttg tccggattta ttgggcgtaa agcgagcgca ggcggtttct taagtctgat 600
gtgaaagccc ccggctcaac cggggagggt cattggaaac tgggagactt gagtgcagaa 660
gaggagagtg gaattccatg tgtagcggtg aaatgcgtag atatatggag gaacaccagt 720
ggcgaaggcg gctctctggt ctgtaactga cgctgaggct cgaaagcgtg gggagcaaac 780
aggattagat accctggtag tccacgccgt aaacgatgag tgctaagtgt tggagggttt 840
ccgcccttca gtgctgcagc taacgcat 868
Claims (17)
- 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (Lactobacillus fermentum Ceb-ch-002 (KCCM11910P)) 균주.
- 제1항에 있어서, 상기 균주는, 탈모 예방, 발모 촉진, 발기 부전 개선 또는 콜레스테롤 저하에 사용되기 위한, 균주.
- 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (KCCM11910P)의 배양액, 이의 농축물, 또는 이의 건조물.
- 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (Lactobacillus fermentum Ceb-ch-002 (KCCM11910P)), 이의 배양액, 이의 농축물, 또는 이의 건조물을 포함하는, 탈모 예방 또는 발모 촉진용 식품 조성물.
- 삭제
- 제4항에 있어서, 상기 식품 조성물이 추가로 콜레스테롤 저하능을 갖는, 식품 조성물.
- 삭제
- 제4항 또는 제6항에 있어서, 상기 식품 조성물이, 경구 형태로 투여되는, 식품 조성물.
- 제4항 또는 제6항에 있어서, 상기 락토바실러스 퍼멘텀 균주가 1일 0.0001mg/kg 내지 10g/kg의 양으로 투여되는 식품 조성물.
- 제4항 또는 제6항에 있어서, 상기 락토바실러스 퍼멘텀 균주가 5 x 104 내지 5 x 108 CFU/ml의 농도로 회당 30ml 내지 100ml, 1일 1회 내지 4회 투여되는, 식품 조성물.
- 제4항 또는 제6항에 있어서, 상기 식품 조성물이 식품학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함하는, 식품 조성물.
- 삭제
- 제4항 또는 제6항에 있어서, 상기 식품 조성물이, Leuconostoc 속, Brevibacillus 속 또는 Enterocuccus 속, 이의 배양물, 이의 농축물, 이의 건조물 또는 이의 혼합물을 추가로 포함하는, 식품 조성물.
- 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (Lactobacillus fermentum Ceb-ch-002 (KCCM11910P)), 이의 배양액, 이의 농축물, 또는 이의 건조물을 포함하는, 탈모 예방 또는 발모 촉진용 의약 조성물.
- 삭제
- 제14항에 있어서, 상기 락토바실러스 퍼멘텀 균주는 의약 조성물 중량의 0.05 내지 80 중량%로 포함된, 의약 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 락토바실러스 퍼멘텀 Ceb-ch-002 (Lactobacillus fermentum Ceb-ch-002: KCCM11910P)이 서열번호 1의 염기서열을 갖는, 균주.
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