CN110305082A - 采用蔓荆子提取蔓荆呋喃的方法 - Google Patents

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王亮
张付先
冉波
阎志鹏
颜洪荣
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Chengdu Gelipu Biological Technology Co Ltd
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/38—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D307/40—Radicals substituted by oxygen atoms
    • C07D307/42—Singly bound oxygen atoms

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Abstract

本发明公开了一种采用蔓荆子提取蔓荆呋喃的方法，包括原料提取、萃取、硅胶柱层析、制备型HPLC纯化、硅胶柱层析及其重结晶五个步骤，本发明采用乙酸乙酯萃取代替常规工艺中的浓缩，不仅提高了目标物浓度，而且乙酸乙酯易于浓缩，极大的节约了时间及能耗，降低了污染；采用正相硅胶及其反相C18键合硅胶交替分离，较常规单一正相硅胶和反相硅胶分离提高了收率，大大节约了时间成本，适用于大规模生产；利用制备型HPLC对蔓荆呋喃进行了分离纯化，大大提高了分离度，进一步提高了产品的质量，并且采用紫外检测在线监控，避免了常规分离的浪费，提高产品收率和附加产物的收集；通过结晶手段，改变了化合物的物理性质，使其更加方便运输保存，不易降解。

Description

采用蔓荆子提取蔓荆呋喃的方法
技术领域
本发明属于中药药物提取技术领域，具体涉及一种采用蔓荆子提取蔓荆呋喃的方法。
背景技术
蔓荆子为马鞭草科植物单叶蔓荆Vitex trifolia L.var.simplicifolia Cham.或蔓荆Vitex trifolia L.的干燥成熟果实。秋季果实成熟时采收，除去杂质，晒干。羌活味辛、苦，性微寒。归肺、膀胱、肝经。轻浮升散。疏散风热，清利头目，除湿处关节。主治外感头痛，偏正头风，昏晕目暗，赤眼多泪，目睛内痛，齿龈肿痛，湿痹拘挛。蔓荆子中主要活性成分为黄酮类成分蔓荆子黄素和萜类成分穗花牡荆苷、蔓荆呋喃等，其中蔓荆子黄素与穗花牡荆苷在市面上均有对照品销售，而蔓荆呋喃研究较少，其根本原因在于蔓荆呋喃受分离工艺的局限，其制备量小、耗时较长，无法为后续药理研究提供大量标准品。
发明内容
本发明的目的在于提供一种采用蔓荆子提取蔓荆呋喃的方法，通过萃取和正反相硅胶结合制备蔓荆呋喃，耗时较短，制备量大，适用于工业化生产，以解决现有技术中蔓荆呋喃因受制于分离工艺而制备量小、耗时较长的技术问题。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
采用蔓荆子提取蔓荆呋喃的方法，包括如下步骤：
(1)原料提取：将蔓荆子果实粉碎成粗粉，加入醇溶液，回流提取至少2次，每次2-3小时，合并提取液浓缩至无醇味备用；
(2)萃取：取步骤(1)浓缩后的提取液，加水分散，再加入等体积乙酸乙酯萃取至少3次，合并乙酸乙酯层，浓缩备用；
(3)硅胶柱层析：将步骤(2)所得浓缩液硅胶拌样，依次用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集含有目标物的洗脱液，浓缩备用；
(4)制备型HPLC纯化：将步骤(3)得到的浓缩液浸膏，用80％甲醇溶解，微孔滤膜过滤，取微孔滤膜过滤滤液进样，紫外在线监测，波长选210nm，色谱柱填料选用ODS-2C18填料，流动相选用体积比75:25的乙腈-水溶液，收集含目标化合物的流动相，回收乙腈，水溶液用乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层浓缩备用；
(5)硅胶柱层析及其重结晶：取步骤(4)得到的浓缩液，硅胶拌样，用体积比3:1的石油醚/二氯甲烷洗脱，收集目标化合物流份，浓缩干，甲醇溶解重结晶2-3次得白色颗粒状结晶。
本发明制备得到的白色颗粒状结晶即为蔓荆呋喃，英文名称：Rotundifuran，分子式为C22H34O4，分子量为362.51，其结构式如下：
作为优选地，步骤(1)中，蔓荆子果实粗粉的直径为1mm-5mm。
作为优选地，步骤(1)中，醇溶液的加入量为蔓荆子果实粗粉质量的6-8倍。
作为优选地，步骤(1)中，所述醇溶液为70％-90％的甲醇或乙醇溶液。
作为优选地，步骤(3)中，所述硅胶拌样采用60-80目的硅胶，柱层析装柱料采用200-300目的硅胶。
作为优选地，步骤(5)中，所述硅胶拌样采用60-80目的硅胶，柱层析装柱料采用200-300目的硅胶。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1、本发明采用乙酸乙酯萃取代替常规工艺中的浓缩，不仅提高了目标物浓度，而且乙酸乙酯易于浓缩，极大的节约了时间及能耗，降低了污染；
2、本发明采用正相硅胶(硅胶柱层析)及其反相C18键合硅胶(制备型HPLC纯化)交替分离，较常规单一正相硅胶和反相硅胶分离提高了收率，大大节约了时间成本，适用于大规模生产；
3、本发明利用制备型HPLC对蔓荆呋喃进行了分离纯化，大大提高了分离度，进一步提高了产品的质量，并且采用紫外检测在线监控，避免了常规分离的浪费，提高产品收率和附加产物的收集；
4、本发明通过结晶手段，改变了化合物的物理性质，使其更加方便运输保存，不易降解。
附图说明
附图1本发明实施例1所得目标物蔓荆呋喃HPLC液相检测谱图；
附图2本发明实施例1所得目标物蔓荆呋喃ESI-MS m/z：747[2M+Na+]，质谱图；
附图3本发明实施例1所得目标物蔓荆呋喃1H-NMR(400MHz，CD3OD)核磁谱图；
附图4本发明实施例1所得目标物蔓荆呋喃13C-NMR(400MHz，CD3OD)核磁谱图。
具体实施方式
下面结合各实施例对本发明作进一步说明，本发明的方式包括但不仅限于以下实施例。
实施例1
本实施例提供一种采用蔓荆子提取蔓荆呋喃的方法，包括如下步骤：
1)提取：将蔓荆子果实100kg粉碎成1mm-5mm直径粗粉，加入10倍量的80％甲醇溶液，回流提取3次，每次2小时，合并提取液浓缩至无醇味，得提取液150L；
2)萃取：取步骤1)中浓缩后的提取液，加2倍水分散，加入等体积乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，浓缩至少量25L；
本步骤采用乙酸乙酯萃取浓缩代替常规工艺中的直接浓缩，乙酸乙酯萃取浓缩与常规工艺中的直接浓缩时间对比结果如表1：
表1乙酸乙酯浓缩与常规工艺浓缩时间对比表
由上表可知，在相同浓缩条件下，采用乙酸乙酯萃取后浓缩极大的提高了浓缩效率，节约了能耗。
3)硅胶柱层析：将步骤2)中所得浓缩液60-80目硅胶10kg拌样，装柱硅胶200-300目10kg依次用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集含有目标物的洗脱液，浓缩回收溶剂；
4)制备型HPLC纯化：将步骤3)中浸膏200g，用80％甲醇溶解，微孔滤膜过滤，备用；
色谱柱填料：ODS-2C18填料
流动相：乙腈-水溶液V/V＝75:25
取上述微孔滤膜过滤滤液进样，每次进样20g，紫外在线监测，波长：210nm，500ml每瓶收集目标化合物的流动相，回收乙腈，水溶液用乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层浓缩至少量。
5)硅胶柱层析及其重结晶：取步骤4)中浓缩液，60-80目硅胶拌样30g，装柱硅胶200-300目180g用石油醚：二氯甲烷V/V＝3:1洗脱，收集目标化合物流份，浓缩干，甲醇溶解重结晶3次得白色颗粒状结晶2.8g，HPLC检测纯度98.10％(附图1)，其MS图谱如图2，其氢谱如图3，其碳谱如图4，证明本实施例确实得到了98.10％的蔓荆呋喃。
上述实施例仅为本发明的优选实施方案之一，不应当用于限制本发明的保护范围，但凡在本发明的主题设计思想和精神上做出毫无意义的改动或润色，其所解决的技术问题仍然与本发明一致的，均应当包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.采用蔓荆子提取蔓荆呋喃的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)原料提取：将蔓荆子果实粉碎成粗粉，加入醇溶液，回流提取至少2次，每次2-3小时，合并提取液浓缩至无醇味备用；
(2)萃取：取步骤(1)浓缩后的提取液，加水分散，再加入等体积乙酸乙酯萃取至少3次，合并乙酸乙酯层，浓缩备用；
(3)硅胶柱层析：将步骤(2)所得浓缩液硅胶拌样，依次用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集含有目标物的洗脱液，浓缩备用；
(4)制备型HPLC纯化：将步骤(3)得到的浓缩液浸膏，用80％甲醇溶解，微孔滤膜过滤，取微孔滤膜过滤滤液进样，紫外在线监测，波长选210nm，色谱柱填料选用ODS-2C18填料，流动相选用体积比75:25的乙腈-水溶液，收集含目标化合物的流动相，回收乙腈，水溶液用乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层浓缩备用；
(5)硅胶柱层析及其重结晶：取步骤(4)得到的浓缩液，硅胶拌样，用体积比3:1的石油醚/二氯甲烷洗脱，收集目标化合物流份，浓缩干，甲醇溶解重结晶2-3次得白色颗粒状结晶。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，蔓荆子果实粗粉的直径为1mm-5mm。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，醇溶液的加入量为蔓荆子果实粗粉质量的6-8倍。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述醇溶液为70％-90％的甲醇或乙醇溶液。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述硅胶拌样采用60-80目的硅胶，柱层析装柱料采用200-300目的硅胶。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)中，所述硅胶拌样采用60-80目的硅胶，柱层析装柱料采用200-300目的硅胶。
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