CN110291073A - 乙酰肝素酶抑制剂及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及官能化的喹唑啉化合物，包含这类化合物的药物组合物，以及这类化合物作为乙酰肝素酶抑制剂在治疗与乙酰肝素酶活性相关的疾病或疾病状况中的用途。

Description

乙酰肝素酶抑制剂及其用途
相关申请
本申请要求2016年12月13日提交的题为“乙酰肝素酶抑制剂及其用途”的美国临时专利申请号62/433,652以及2017年6月20日提交的题为“治疗眼部病症的方法”的澳大利亚临时专利申请号2017902346的优先权，其全部内容交叉引用加入本文。
技术领域
本发明广泛涉及官能化的喹唑啉化合物，包含这类化合物的药物组合物，以及这类化合物作为乙酰肝素酶抑制剂在治疗与乙酰肝素酶活性相关的疾病或疾病状况中的用途。本发明进一步涉及制备化合物的方法。
背景技术
乙酰肝素酶是一种内-β-葡糖醛酸糖苷酶，其涉及各种炎性和增殖性疾病，包括1型糖尿病、2型糖尿病、糖尿病肾病、肾炎、肾小球肾炎、以及其他细胞介导的自身免疫性炎症适应症、癌症、变态反应、皮炎/银屑病、黄斑变性、视网膜色素变性、胰腺炎等。因此，抑制乙酰肝素酶的药物可以用于治疗那些疾病。
乙酰肝素酶介导的疾病的一个实例是1型糖尿病。1型糖尿病是一种自身免疫性疾病，其中胰腺中胰岛的生成胰岛素的β细胞被身体的免疫细胞破坏，特别是T-细胞。其主要影响是缺少激素胰岛素生成，导致血液中异常高的糖水平(高血糖)。虽然胰岛素疗法保护1型糖尿病患者免于糖尿病昏迷死亡，但是即使有，也很少实现血糖水平的精确和持续控制。随时间进行，其造成的血糖水平的波动导致严重的继发性血管并发症和病症，这可以导致肾病、心脏病、失明、神经损伤(神经病)、坏疽和脑卒中。
1型糖尿病影响10-15％患有糖尿病的人，并且1型糖尿病的发病率还在上升。在1999-2005年期间，0-14岁新发病例升高25％(18.1升至22.6每100,000人)。糖尿病的总体水平对医疗成本有重大影响，有直接医疗支出。目前没有治疗可以预防或改善1型糖尿病的进展。鉴于疾病的严重性，迫切需要缓解导致1型糖尿病的疾病过程的治疗药物。
最近的研究已证实生成胰岛素的胰岛β细胞为了它们的存活无条件地需要糖胺聚糖多糖硫酸乙酰肝素(HS)。HS存在于胞外基质中。通过修饰例如脱乙酰和硫酸化成熟的HS链可以与各种分泌和跨膜蛋白相互作用，允许细胞之间的信号传导。
发明人已发现胰岛β细胞的正常HS含量在1型糖尿病发生/进展期间以及分离胰岛用于移植(这是1型糖尿病的已知治疗)期间严重受损并最终消除。在小鼠1型糖尿病的进展中，分解HS的糖苷水解酶HS降解酶，乙酰肝素酶(HPSE)在胰岛细胞的自身免疫性破坏中起到以前未意识到的作用。HPSE主要由胰岛内存在或浸润的炎性细胞产生。
通过HPSE降解HS还激活信号级联，信号级联增加细胞生长、移动性和血管发生。(Ishai-Michaeli,et al.Heparanase activity expressed by platelets,neutrophils,and lymphoma cells releases active fibroblast growth factor fromextracellular matrix.Cell Regul.1,833-42(1990).Elkin,M.et al.Heparanase asmediator of angiogenesis:mode of action.FASEB J.15,1661–3(2001)。炎性和免疫细胞也需要HPSE以跨越血管细胞壁的基底膜(Parish CR,The role of heparan sulfate ininflammation.Nat.Rev.Immunol..6,633-43(2006))。因此HPSE在肿瘤和癌细胞中上调，其过量表达与转移和死亡率增加密切相关。(Ilan,N.,et al.Regulation,function andclinical significance of heparanase in cancer metastasis andangiogenesis.Int.J.Biochem.Cell Biol.38,2018–39(2006))。现在已在多种癌症中建立乙酰肝素酶表达和肿瘤发生过程之间的明确联系，包括膀胱、大脑、乳腺、结肠、胃、口腔、食道、胰腺、前列腺、甲状腺和急性髓性白血病。(McKenzie,E.A..Br J Pharmacol.2007 May；151(1):1–14)。还已显示HPSE的抑制具有显著的抗肿瘤和抗转移作用，并且HPSE是肿瘤学中良好表征的药物靶标。(Dredge,K.et al.PG545,a dual heparanase and angiogenesisinhibitor,induces potent anti-tumour and anti-metastatic efficacy inpreclinical models.Br.J.Cancer 104,635–42(2011).Liu,M.et al.Evaluation of theAntitumor Efficacy of RNAi-Mediated Inhibition of CDC20 and Heparanase in anOrthotopic Liver Tumor Model.Cancer Biother.Radiopharm.30,233-9(2015))。
在临床试验中已评价3种HPSE抑制药物。其中的2种，PI-88和ST0001已显示在1型糖尿病、糖尿病肾病和肾炎的临床前模型中具有显著效力。但是，目前在开发中的全部3种HPSE抑制剂均存在潜在的安全问题，这不利地影响它们用作有效治疗剂的能力。例如，乙酰肝素酶的不可切割的竞争性抑制剂PI-88(Muparfostat,Progen Pharmaceuticals)由于一些因素作为治疗剂效果不佳，所述因素包括抗凝活性，其可以导致不受控制的出血。此外，PI-88半衰期短，约30分钟，并且还结合其他蛋白，包括血小板因子4，血小板因子4可以产生肝素诱导的血小板减少。
患病率和发病率增加的另一炎性疾病状况是年龄相关性黄斑变性(AMD)。抗VEGF剂目前用于视网膜病症的管理，特别是其中以新生血管为主要病理学的视网膜病症，包括湿性或渗出性AMD。几种研究性抗VEGF药物已获得FDA批准用于治疗人的AMD和相关眼部疾病状况，包括培加他尼钠(Macugen,Pfizer Inc.,New York,NY,USA)、雷珠单抗(Lucentis,Genentech,San Francisco,CA,USA)、阿柏西普(Eylea,Regeneron Pharmaceuticals,Tarrytown,NY,USA)和贝伐珠单抗(Avastin,Roche)。抗VEGF玻璃体内注射剂显著改变AMD的预后并提高患者保留可用视力的机会。虽然VEGF抑制剂在AMD的后期和晚期有效，但是目前对早期AMD没有已知治疗。
仍然需要替代疗法，优选小分子药物，用于治疗炎性疾病和疾病状况。
在整个说明书中，除非上下文另有要求，单词包含“(comprise)”或者变化形式例如“包含(comprises)”或“包含(comprising)”会理解为简单地包括所述元素、整数或步骤，或者元素、整数或步骤的组，但是不排除任何其他元素、整数或步骤，或者元素、整数或步骤的组。术语“由…组成”表示“仅由…组成”，即包括并限于所述元素、整数或步骤，并且排除任何其他元素、整数或步骤。术语“基本上由…组成”表示包括所述元素、整数或步骤，但是还可以包括不实质上改变或有助于本发明实施的其他元素、整数或步骤。
本说明书中已包括的文件、条例、材料、装置、文章等的任何讨论仅为了提供本发明的上下文的目的。不应视作承认任何或所有这些事项因为其在本说明书各项权利要求的优先权日之前已存在而构成了现有技术基础的一部分或是与本发明相关的领域中的一般常识。
发明内容
本发明人已鉴定适合用于治疗与乙酰肝素酶活性相关的各种疾病状况的小分子乙酰肝素酶抑制剂。
本发明的第一方面涉及通式(I)的化合物
或者其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，
其中：
R1选自H、羟基、卤代、C1-6烷基、C1-4烷氧基、O-CH2苯基、O-苯基；
R2选自H、羟基、卤代、C1-6烷基、C1-4烷氧基、O-CH2苯基、O-苯基；
R3选自H、羟基、卤代、C1-6烷基、C1-4烷氧基、O-CH2苯基、O-苯基；
R4选自H、羟基、卤代、C1-6烷基、C1-4烷氧基、O-CH2苯基、O-苯基；
或者R1和R2、或者R2和R3、或者R3和R4一起形成C1-3亚烷基二氧基；
L1选自C6-10芳基、NH、NHC1-4烷基、NHC1-4烷基-NHC(O)-、NHC1-4烷基-NHSO2-、氮杂环丁烷基-NHC(O)-、氮杂环丁烷基-NHSO2-、N(C1-4烷基)2，其中每个烷基相同或不同，并且任选地被卤代或羟基取代，或者L1不存在；
R5选自H、卤代、羟基、C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6炔基、C3-6环烷基、任选地被1或2个RX基团取代的C6-10芳基、任选地被1或2个RX基团取代的C2-9杂芳基、任选地被1或2个RX基团取代的杂环烷基、任选地被1或2个RX基团取代的烷基杂环烷基、任选地被1或2个RX基团取代的C(O)-杂环烷基、NHC(NH)NR'R"(其中R'和R”独立地选自H和C1-3烷基)、NHC(O)NR'R"(其中R'和R”独立地选自H和C1-3烷基)，或者R5不存在；
L2选自C1-4烷基、氮杂环丁烷基-C(O)-、C1-4烷基-NHC(O)-、C1-4烷基-NHSO2-、-C(O)-、-SO2-；或者L2不存在；
R6选自H、C1-6烷基、胍基、NHC(NH)NH(C1-3烷基)、脲基、NHC(O)NH(C1-3烷基)、任选地被1或2个RX基团取代的C6-10芳基、任选地被1或2个RX基团取代的C1-9杂芳基、任选地被1或2个RX基团取代的C2-5杂环烷基、任选地被1或2个RX基团取代的C3-6环烷基；
R7为H或C1-6烷基；
或者当L2不存在时，R6和R7与它们连接的氮一起形成任选地被1或2个RX基团取代的杂环烷基环；
每个RX独立地选自羟基、卤代、硝基、NR'R"(其中R'和R”独立地选自H和C1-3烷基)、C1-4烷基、C3-6环烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、C(O)C1-3烷基、C(O)OC1-4烷基、C(O)NHRY、任选地被1或2个RY基团取代的C6-10芳基、任选地被1或2个RY基团取代的C2-9杂芳基、C1-4烷基-(C2-9杂芳基)、任选地被1或2个C1-4烷基取代的C2-5杂环烷基、任选地被1或2个C1-4烷基取代的C1-4烷基-(C2-5杂环烷基)、任选地被1或2个C1-4烷基取代的C(O)-C2-9杂芳基；任选地被1或2个C1-4烷基取代的SO2-C2-9杂芳基、或者卤代C1-4烷基；或者2个相邻的RX基团一起形成C1-3亚烷基二氧基；
RY选自H、羟基、卤代、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基。
在优选实施方案中，每个杂芳基和每个杂环烷基具有至少一个氮杂原子。
在第二方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含式(I)的化合物，或其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，以及一种或多种药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明的通式(I)的化合物是乙酰肝素酶抑制剂，并且本发明还涉及治疗与乙酰肝素酶活性相关的疾病或疾病状况。因此，本发明的另一方面涉及一种治疗个体中与乙酰肝素酶活性相关的疾病或疾病状况的方法，方法包括向个体给药有效量的本发明的第一方面的式(I)的化合物或者其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，或者本发明的第二方面的药物组合物。
在另一方面，本发明涉及本发明的第一方面的式(I)的化合物或者其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体或者本发明的第二方面的药物组合物在制备用于治疗与乙酰肝素酶活性相关的疾病或疾病状况的药物中的用途。
在另一方面，本发明涉及本发明的第一方面的式(I)的化合物或者其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体或者本发明的第二方面的药物组合物在治疗个体中与乙酰肝素酶活性相关的疾病或疾病状况中的用途。
在一优选实施方案中，通过式(I)的化合物治疗疾病至少包括乙酰肝素酶抑制。
在优选实施方案中，与乙酰肝素酶活性相关的疾病或疾病状况选自1型糖尿病、2型糖尿病、肾炎、肾小球肾炎、细胞介导的自身免疫性炎症、糖尿病肾病、妊娠期糖尿病、糖尿病酮症酸中毒、高血糖、高渗状态、低血糖、糖尿病昏迷、糖尿病心肌病、糖尿病神经病、糖尿病足、糖尿病视网膜病变、糖尿病性肌坏死、糖尿病脑病以及眼部炎性病症。在其他优选实施方案中，疾病或疾病状况选自1型糖尿病、2型糖尿病、糖尿病肾病、肾炎、肾小球肾炎以及与乙酰肝素酶相关的细胞介导的自身免疫性炎症适应症。在特别优选的实施方案中，疾病或疾病状况选自1型糖尿病和2型糖尿病。在其他优选实施方案中，疾病或疾病状况选自1型糖尿病、2型糖尿病、糖尿病肾病、肾炎、肾小球肾炎以及与乙酰肝素酶相关的细胞介导的自身免疫性炎症适应症。在其他优选实施方案中，疾病或疾病状况是眼部炎性病症。在特别优选的实施方案中，疾病或疾病状况选自1型糖尿病和2型糖尿病。
在其他实施方案中，与乙酰肝素酶活性相关的疾病或疾病状况选自癌症、变态反应、皮炎、银屑病、黄斑变性、视网膜色素变性和胰腺炎。
本发明的其他方面和实施方案涉及制备如本文公开的本发明的化合物的方法。
具体实施方式
一般术语和定义
以下是可以有助于理解本发明的说明书的本领域中使用的术语的一些定义。这些是一般定义，并且不应当限制本发明的范围至仅那些术语，而是为了更好地理解以下说明而提出。
除非上下文另有要求或特别相反说明，本文中作为单数的整数、步骤或元素列举的本发明的整数、步骤或元素明确涵盖列举的整数、步骤或元素的单数和复数形式。
本领域技术人员会理解本文所述的发明易受本文具体描述以外的变化和修饰的影响。应当理解本发明包括所有这类变化和修饰。本发明还包括本说明书单独或共同提到或指示的所有步骤、特征、组合物和化合物，以及任何两个或更多个所述步骤、特征、组合物和化合物的任何和所有组合。
在本说明书的上下文中，术语“烷基”在其含义内包括具有1-6个碳原子的单价("烷基")和二价("亚烷基")直链或支链饱和脂肪族基团，表示为C1-6烷基。烷基可以是C1-4烷基。烷基可以是C1-3烷基。烷基可以是C1-2烷基。因此，例如，术语烷基包括但不限于甲基、乙基、1-丙基、异丙基、1-丁基、2-丁基、异丁基、叔丁基、戊基(amyl)、1,2-二甲基丙基、1,1-二甲基丙基、戊基(pentyl)、异戊基、己基、4-甲基戊基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、1,2,2-三甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基等。
在本说明书的上下文中，术语“烯基”在其含义内包括具有2-6个碳原子以及在链中任何地方的至少一个双键的单价("烯基")和二价("亚烯基")直链或支链不饱和脂肪族烃基团，表示为C2-6烯基。烯基可以是C2-4烯基。烯基可以是C2-3烯基。除非另有说明，关于每个双键的立体化学在适当时可以独立地是顺式或反式，或者E或Z。烯基的实例包括但不限于乙烯基(ethenyl)、乙烯基(vinyl)、烯丙基、1-甲基乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1,3-丁二烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1,3-戊二烯基、2,4-戊二烯基、1,4-戊二烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1,3-己二烯基、1,4-己二烯基、2-甲基戊烯基等。
在本说明书的上下文中，术语“炔基”在其含义内包括具有2-6个碳原子并具有至少一个三键的单价("炔基")和二价("亚炔基(alkynylene)")直链或支链不饱和脂肪族烃基团，表示为C2-6炔基。炔基可以是C2-4炔基。烷基可以是C2-3炔基。炔基的实例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-甲基-2-丁炔基、3-甲基-1-丁炔基、1-戊炔基、1-己炔基、甲基戊炔基等。
在本说明书的上下文中，术语“烷氧基”是指直链或支化的烷氧基(O-烷基)基团，其中烷基如上文所定义。实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。
在本说明书的上下文中，术语“芳基”作为基团或基团的部分表示(i)任选取代的单环或稠合多环的芳香碳环(环结构中具有的环原子全部是碳)，其可以具有6-10个原子/环，表示为C6-10芳基。芳基的实例包括苯基、萘基、菲基等；(ii)任选取代的部分饱和的双环芳香碳环部分，其中苯基以及C5-7环烷基或C5-7环烯基稠合在一起形成环结构，例如四氢萘基、茚基或茚满基。该基团可以是末端基团或桥接基团。
在本说明书的上下文中，除非另有说明，术语“环烷基”是指饱和或部分饱和的，单环、稠合或螺环多环的碳环，其可以包含3-9个碳原子/环，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、螺[3.3]庚烷等。其包括单环系统例如环丙基和环己基、双环系统例如十氢萘以及多环系统例如金刚烷。该基团可以是末端基团或桥接基团。
在本说明书的上下文中，术语“环烯基”表示包含至少一个碳-碳双键的非芳香单环或多环系统，其可以具有5-10个碳原子/环，表示为C5-10环烯基。示例性的单环的环烯基环包括环戊烯基、环己烯基或环庚烯基。环烯基可以被一个或多个取代基取代。该基团可以是末端基团或桥接基团。
如本文所用的术语“C1-3亚烷基二氧基”是指-O(CH2)1-3O-基团，其中亚烷基二氧基的氧原子连接至母体分子部分的两个相邻碳原子，形成5-、6-或7-元环。示例性亚烷基二氧基是亚甲基二氧基和1,2-亚乙基二氧基。
在本说明书的上下文中，术语“卤素”或“卤代”是同义的，是指氟、氯、溴或碘。
在本说明书的上下文中，术语“杂环烷基”在其含义内包含单价("杂环烷基")和二价("杂环亚烷基")的，具有3-8个环原子的饱和、单环、双环、稠合或螺环多环的烃基，其中1-5个或1-3个，通常1或2个环原子是独立地选自O、N、NH或S的杂原子。杂环烷基可以是C3-6杂环烷基。杂环烷基可以是C3-5杂环烷基。杂环烷基的代表性实例包括氮杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、奎宁环基、吗啉基、二氮杂螺[3.3]庚烷(例如，2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷)、四氢噻吩基、四氢呋喃基、四氢吡喃基等。在一个或多个实施方案中，杂环烷基是具有一个或多个氮杂原子的N-杂环烷基，例如，1、2、3或4个氮杂原子，取决于特定结构。N-杂环烷基还可以具有除氮以外的杂原子，但是其特征在于具有至少一个氮杂原子。示例性N-杂环烷基包括氮杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷等。杂环烷基可以是末端基团或桥接基团，并且可以通过杂原子或任何碳环原子连接。
在本说明书的上下文中，术语“杂芳基”单独或作为基团的部分表示单环杂芳基，其具有5-或6-元芳环，在芳环中具有一个或多个杂原子作为环原子，剩余的环原子是碳原子，或者8-10元双环杂芳基，其由稠合至苯基的单环杂芳基、或稠合至环烷基的单环杂芳基、或稠合至环烯基的单环杂芳基、或稠合至单环杂芳基的单环杂芳基组成。单环杂芳基和双环杂芳基可以通过单环杂芳基和双环杂芳基内包含的任何碳原子或任何氮原子连接至母体分子部分。单环杂芳基的代表性实例包括但不限于呋喃基、咪唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、噁唑基(例如，1,3-噁唑基、1,2-噁唑基)、吡啶基(例如，2-,3-,4-吡啶基)、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、吡咯基、四唑基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基(例如，1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基)以及三嗪基。双环杂芳基的代表性实例包括但不限于苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁二唑基(例如，2,1,3-苯并噁二唑基)、噌啉基、二氢喹啉基、二氢异喹啉基、呋喃并吡啶基(furopyridinyl)、吲唑基、吲哚基(例如，2-或3-吲哚基)、异喹啉基(例如，1-,3-,4-,或5-异喹啉基)、二氮杂萘基(例如，1,5-二氮杂萘基、1,7-二氮杂萘基、1,8-二氮杂萘基等)、吡咯并吡啶基(例如，吡咯并[2,3-b]吡啶基)、喹啉基(例如，2-,3-,4-,5-,或8-喹啉基)、喹喔啉基、四氢喹啉基以及噻吩并吡啶基。在一个或多个实施方案中，杂芳基是具有一个或多个氮杂原子的N-杂芳基，例如，1、2、3或4个氮杂原子，取决于特定结构。N-杂芳基还可以具有除氮以外的杂原子，但是N-杂芳基的特征在于具有至少一个氮杂原子。示例性N-杂芳基包括咪唑基、吲哚基(例如，2-或3-吲哚基)、二氮杂萘基、吡嗪基、吡啶基(例如，2-,3-或4-吡啶基)、吡咯基、嘧啶基、喹啉基(例如，2-,3-,4-,5-,或8-喹啉基)、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、三嗪基等。杂芳基可以是末端基团或桥接基团，并且可以通过杂原子或任何碳环原子连接。
如本文所用的术语“杂原子”或变体例如“杂”是指O、N、NH和S。
如本文所用的术语“抑制剂”是指减少、抑制或损害靶分子的至少一种功能或生物活性的物质。如本文所用，术语“乙酰肝素酶抑制剂”是指减少、抑制或损害乙酰肝素酶的至少一种功能或生物活性的物质。乙酰肝素酶抑制剂可以减少、抑制或损害乙酰肝素酶催化活性、乙酰肝素酶蛋白结合、乙酰肝素酶介导的基因转录调节、乙酰肝素酶介导的细胞信号传导和/或血管发生的起始。在特定实施方案中，乙酰肝素酶抑制剂减少、抑制或损害乙酰肝素酶的一种或多种生物活性，包括乙酰肝素酶催化活性。在特定实施方案中，乙酰肝素酶抑制剂是1型乙酰肝素酶亚型的抑制剂。乙酰肝素酶抑制剂还可以抑制补体结合、巨噬细胞激活、氧化损伤和/或生长因子活性。在优选实施方案中，乙酰肝素酶抑制剂抑制一种或两种巨噬细胞，优选小胶质细胞，抑制激活、补体结合。本发明的乙酰肝素酶抑制剂可以是选择性或非选择性抑制剂。在各种实施方案中，本发明的乙酰肝素酶抑制剂是选择性乙酰肝素酶抑制剂。
如整个说明书中使用的术语“任选取代的”表示基团可以或可以不用一个或多个非氢取代基进一步取代或稠合(以形成多环系统)。对本领域技术人员来说，特定官能团的合适的化学上可接受的可选取代基是显而易见的。典型的可选取代基包括C1-4烷基、C2-4烯基、OH、卤素、O(C1-4烷基)、CN、NO2、NR'R"(其中R'和R"独立地选自H和C1-C3烷基)；CONR'R"(其中R'和R"独立地选自H和C1-C3烷基)、SH、S(C1-3烷基)、SO2(C1-3烷基)、CH2-(C1-3烷氧基)、C1-3亚烷基二氧基、C6-10芳基、-CH2-苯基、O-CH2-苯基、羟基(C1-3烷基)、卤代(C1-3烷基)、CO2H、CO2(C1-4烷基)等。目前优选的可选取代基包括卤素，OH，NH2，C1-3烷基，C1-3烷氧基，-CH2-(C1-3烷氧基)，CH2OH，卤代-(C1-3)烷基，例如，CF3，卤代-(C1-3)烷氧基，例如，OCF3，苯基以及-CH2-苯基。
公开的实施方案的某些化合物可以作为单一立体异构体、外消旋体、和/或对映体和/或非对映体的混合物存在。所有这类单一立体异构体、外消旋体、对映体、非对映体和它们的混合物均在本发明的主题的范围内。
此外，当适用时，通式(I)意图涵盖化合物的溶解以及非溶解形式。因此，每个式包括具有所示结构的化合物，包括水合或溶解形式，以及非水合和非溶解形式。术语“溶剂合物”在本文中用来描述分子复合物，分子复合物包含本发明的化合物以及一种或多种药学可接受的溶剂分子例如乙醇。当溶剂是水时采用术语“水合物”。
术语“药学可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内，适合用于与人和动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、变应性反应等，并且与合理的益处/风险比相称的那些盐。药学可接受的盐是本领域公知的。S.M.Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences,1977,66:1-19中详细描述了药学可接受的盐。关于合适盐的综述，参见Handbook ofPharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use by Stahl and Wermuth(Wiley-VCH,2002)。制备本发明的化合物的药学可接受的盐的方法是本领域技术人员已知的。盐可以在本发明的化合物的最后分离和纯化期间原位制备，或者通过使游离碱官能与合适的有机酸反应单独制备。本发明的化合物的合适的药学可接受的酸加成盐可以制备自无机酸或有机酸。这类无机酸的实例是盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、碳酸、硫酸和磷酸。适当的有机酸可以选自脂肪族、脂环族、芳香族、杂环羧酸和磺酸类别的有机酸，其实例是甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、葡萄糖酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、葡萄糖醛酸、富马酸、马来酸、丙酮酸、烷基磺酸、芳基磺酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯甲酸、邻氨基苯甲酸、甲磺酸(mesylic)、甲磺酸(methanesulfonic)、水杨酸、对羟基苯甲酸、苯乙酸、扁桃酸、阿波酮酸、双羟萘酸、泛酸、对氨基苯磺酸、环己基氨基磺酸、硬脂酸、海藻酸、β-羟基丁酸、半乳糖二酸以及半乳糖醛酸。本发明的化合物的合适的药学可接受的碱加成盐包括制备自锂、钠、钾、镁、钙、铝和锌的金属盐，以及制备自有机碱例如胆碱、二乙醇胺、吗啉的有机盐。或者，本发明的化合物的合适的药学可接受的碱加成盐包括制备自N,N'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)、普鲁卡因的有机盐，铵盐，季盐例如四甲基铵盐，氨基酸加成盐例如具有甘氨酸和精氨酸的盐。在化合物为固体的情况下，本领域技术人员会理解本发明的化合物、物质和盐可以以不同晶体或多晶型形式存在，所有这些均在本发明和具体的式的范围内。
如本文所用的术语“立体异构体”是指任何两种或更多种异构体，异构体具有相同分子组成，且不同之处仅在于它们的原子群在空间中的三维排列。立体异构体可以是非对映异构体或对映异构体。应该认识到本文所述化合物可以具有不对称中心，因此能够以一种以上立体异构体形式存在。因此本发明还涉及在一个或多个不对称中心基本上纯的异构体形式的化合物，例如，大于约90％ee，例如约95％或97％ee或者大于99％ee，及其混合物，包括外消旋混合物。这类异构体可以是天然存在的，或者可以是通过不对称合成制备的，例如利用手性中间体，或者通过手性拆分。
术语“治疗(treating)”、“治疗(treatment)”和“疗法(therapy)”在本文中用来指治疗性疗法、预防性疗法(prophylactic therapy)、姑息疗法和预防性疗法(preventativetherapy)。因此，在本公开的上下文中，术语“治疗”涵盖治愈、改善或缓和医学上的状况或者一种或多种其相关症状的严重程度。
术语“治疗有效量”或“药理学有效量”或“有效量”是指在治疗的个体中足以产生期望的治疗或药理学效果的物质的量。术语是同义的，并且旨在定量每种物质的量，所述的量使每种物质本身治疗之后达到疾病严重程度和/或发病频率的改善目标，同时优选避免或最小化有害副作用，包括通常与其他疗法相关的副作用。本领域技术人员可以利用本领域已知的信息和常规方法确定有效剂量。
“药物载体、稀释剂或赋形剂”包括但不限于任何生理缓冲(即，约pH7.0-7.4)介质，生理缓冲介质包含合适的水溶性有机载体、常规溶剂、分散介质、填充剂、固体载体、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等张和吸收延迟剂。合适的水溶性有机载体包括但不限于盐水、右旋糖、玉米油、二甲基亚砜和明胶胶囊。其他常规添加剂包括乳糖，甘露醇，玉米淀粉，马铃薯淀粉，粘合剂例如微晶纤维素，纤维素衍生物例如羟丙基甲基纤维素，阿拉伯胶，明胶，崩解剂例如羧甲基纤维素钠，以及润滑剂例如滑石或硬脂酸镁。
“个体”包括任何人或非人哺乳动物。因此，除了可用于人类治疗，本发明的化合物还可以用于哺乳动物的兽医治疗，包括陪伴动物和农场动物，例如但不限于狗、猫、马、牛、羊和猪。在优选实施方案中，个体是人。
在本说明书的上下文中，术语“给药(administering)”以及该术语的变化“给药(administer)”和“给药(administration)”包括通过任何适当方式使个体接触、向个体施用、递送或提供本发明的化合物或组合物。
附图说明
图1.野生型(WT)RIP-OVAhi小鼠在转移了(WT)激活的OT-II和幼稚OT-I tg T细胞之后2周之内变成糖尿病。相比之下，将乙酰肝素酶缺陷的(Hpse KO)OT-II和OT-1 tg T细胞转移至乙酰肝素酶缺陷的RIP-OVAhi小鼠中证实1型糖尿病诱导是乙酰肝素酶依赖性的。
图2.从过继转移OVA特异性OT-I和激活的OT-II tg T细胞时开始，用小分子乙酰肝素酶抑制剂("BT-2012")(10mg/kg QD，在盐水/50％DMSO中IP)治疗RIP-OVAhi小鼠。(A)用小分子乙酰肝素酶抑制剂治疗之后糖尿病(血液葡萄糖>12mmol)的发病率显著降低(50％)。与治疗组(C&D)相比，个体对照(盐水/50％DMSO处理的)小鼠(B)的每日血液葡萄糖水平在所有对照中显著较高，在治疗组(C&D)中，当用小分子乙酰肝素酶抑制剂化合物("BT-2012"或"BT-1056"(作为比较物))处理时，在14天测定期中在50％个体治疗小鼠中血液葡萄糖保持正常或未达到与未处理相同的高水平。
图3.从过继转移OVA特异性OT-I和激活的OT-II tg T细胞时开始，用对照乙酰肝素酶抑制剂("BT-1055")(10mg/kg QD，在盐水/20％DMSO中IP)治疗RIP-OVAhi小鼠。(A)用乙酰肝素酶抑制剂化合物("BT-1055")治疗之后糖尿病(血液葡萄糖>12mmol)的发病率显著降低(75％)。与用比较物乙酰肝素酶抑制剂处理的小鼠(C)相比，个体对照(盐水/20％DMSO处理的)小鼠(B)的每日血液葡萄糖水平在所有对照中显著较高，在用比较物乙酰肝素酶抑制剂处理的小鼠(C)中，在14天测定期中在75％个体处理的小鼠中血液葡萄糖保持正常或未达到与未处理相同的高水平。
图4.用小分子乙酰肝素酶抑制剂("BT-2012")治疗NOD/Lt小鼠。将所有小鼠以10mg/kg的每日剂量给药，从80-180日龄在盐水/50％DMSO中IP。通过用Multistix试剂条每周两次测量尿葡萄糖确定临床糖尿病的发生，并且通过利用MediSense血糖仪测量尾静脉血中非空腹血液葡萄糖水平证实，高血糖定义为2个16mmol/l或更大的连续血液葡萄糖读数。
图5.2型糖尿病模型db/db小鼠中胰腺切片中的胰岛素含量。从4周龄将小鼠用50mg/kg PI-88 IP每天处理。通过用Multistix试剂条每周两次测量尿葡萄糖确定临床糖尿病的发生，并且通过利用MediSense血糖仪测量尾静脉血中非空腹血液葡萄糖水平证实，高血糖定义为2个16mmol/l或更大的连续血液葡萄糖读数。通过抗胰岛素抗体染色检测胰岛素。
图6.处理的db/db小鼠中胰腺切片中的胰岛内HS含量。从4周龄将小鼠用50mg/kgPI-88 IP每天处理。通过用Multistix试剂条每周两次测量尿葡萄糖确定临床糖尿病的发生，并且通过利用MediSense血糖仪测量尾静脉血中非空腹血液葡萄糖水平证实，高血糖定义为2个16mmol/l或更大的连续血液葡萄糖读数。通过阿利新蓝染色检测胰岛HS。
图7.化合物BT2057的X-射线晶体结构。各向异性位移椭球显示30％概率水平。氢原子画作小半径的圆。晶体不对称单元由一分子的BT2057和一分子的二氯甲烷组成。数据收集：CrysAlis PRO,Agilent Technologies,版本1.171.37.33d(发布23-04-2014CrysAlis171.NET)(编制Apr 23,2014,17:37:27)；晶胞精修：CrysAlis PRO；数据还原：CrysAlis PRO；用来解析结构的程序：SIR92(Altomare et al(1994)J.Appl.Cryst.27,435)；用来精修结构的程序：CRYSTALS(Betteridge el al(2003).J.Appl.Cryst.36,1487)；分子图形学：PLATON(Spek,A.L.(2008).PLATON,A MultipurposeCrystallographic Tool,Utrecht University,Utrecht,The Netherlands)；用来准备出版材料的软件：CRYSTALS(Betteridge et al.,2003)。
图8.示出由光-氧化损伤诱导的年龄相关性黄斑变性的小鼠体内模型中乙酰肝素酶抑制剂的效力。图8A示出诱导光-氧化损伤然后用乙酰肝素酶抑制剂BT-2172处理之后5天通过在不同闪光强度下a-波和b-波振幅的ERG分析的视网膜功能维持。图8B示出光-氧化损伤之后5天，与补体因子C3敲除小鼠眼(C3KO)以及正常小鼠眼中未处理的对照(PBS)相比，用乙酰肝素酶抑制剂BT-2172处理之后在最高闪光强度(1.9cd.s/m2)下的a-波和b-波振幅。利用单向或双向方差分析(ANOVA)确定通过星号(*)表示的统计显著性(p<0.05)，确定数据点的显著趋势。
图9.化合物BT2229的X-射线晶体结构，标记所选原子。各向异性位移椭球显示50％概率水平。氢原子画作小半径的圆。
发明详述
本发明涉及如本文定义的通式(I)的官能化的喹唑啉基化合物，以及这类化合物在治疗与乙酰肝素酶活性相关的疾病或疾病状况中的用途。在优选实施方案中，通式(I)的化合物是乙酰肝素酶抑制剂。
在一方面，本发明涉及通式(I)的化合物：
或者其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，
其中：
R1选自H、羟基、卤代、C1-6烷基、C1-4烷氧基、O-CH2苯基、O-苯基；
R2选自H、羟基、卤代、C1-6烷基、C1-4烷氧基、O-CH2苯基、O-苯基；
R3选自H、羟基、卤代、C1-6烷基、C1-4烷氧基、O-CH2苯基、O-苯基；
R4选自H、羟基、卤代、C1-6烷基、C1-4烷氧基、O-CH2苯基、O-苯基；
或者R1和R2、或者R2和R3、或者R3和R4一起形成C1-3亚烷基二氧基；
L1选自C6-10芳基、NH、NHC1-4烷基、NHC1-4烷基-NHC(O)-、NHC1-4烷基-NHSO2-、氮杂环丁烷基-NHC(O)-、氮杂环丁烷基-NHSO2-、N(C1-4烷基)2，其中每个烷基相同或不同，并且任选地被卤代或羟基取代，或者L1不存在；
R5选自H、卤代、羟基、C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6炔基、C3-6环烷基、任选地被1或2个RX基团取代的C6-10芳基、任选地被1或2个RX基团取代的C2-9杂芳基、任选地被1或2个RX基团取代的杂环烷基、任选地被1或2个RX基团取代的烷基杂环烷基、任选地被1或2个RX基团取代的C(O)-杂环烷基、NHC(NH)NR'R"(其中R'和R”独立地选自H和C1-3烷基)、NHC(O)NR'R"(其中R'和R”独立地选自H和C1-3烷基)，或者R5不存在；
L2选自C1-4烷基、氮杂环丁烷基-C(O)-、C1-4烷基-NHC(O)-、C1-4烷基-NHSO2-、-C(O)-、-SO2-；或者L2不存在；
R6选自H、C1-6烷基、胍基、NHC(NH)NH(C1-3烷基)、脲基、NHC(O)NH(C1-3烷基)、任选地被1或2个RX基团取代的C6-10芳基、任选地被1或2个RX基团取代的C1-9杂芳基、任选地被1或2个RX基团取代的C2-5杂环烷基、任选地被1或2个RX基团取代的C3-6环烷基；
R7为H或C1-6烷基；
或者当L2不存在时，R6和R7与它们连接的氮一起形成任选地被1或2个RX基团取代的杂环烷基环；
每个RX独立地选自羟基、卤代、硝基、NR'R"(其中R'和R”独立地选自H和C1-3烷基)、C1-4烷基、C3-6环烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、C(O)C1-3烷基、C(O)OC1-4烷基、C(O)NHRY、任选地被1或2个RY基团取代的C6-10芳基、任选地被1或2个RY基团取代的C2-9杂芳基、C1-4烷基-(C2-9杂芳基)、任选地被1或2个C1-4烷基取代的C2-5杂环烷基、任选地被1或2个C1-4烷基取代的C1-4烷基-(C2-5杂环烷基)、任选地被1或2个C1-4烷基取代的C(O)-C2-9杂芳基；任选地被1或2个C1-4烷基取代的SO2-C2-9杂芳基、或者卤代C1-4烷基；或者2个相邻的RX基团一起形成C1-3亚烷基二氧基；
RY选自H、羟基、卤代、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基。
在优选实施方案中，每个杂芳基和每个杂环烷基具有至少一个氮杂原子。
在优选实施方案中，盐是药学可接受的盐。
在一个或多个实施方案中，每个杂芳基独立地选自吲哚基(例如，N-吲哚基、2-吲哚基、3-吲哚基、5-吲哚基)、吡啶基(例如，2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基)、三唑基、噁唑基(例如，1,3-噁唑基、1,2-噁唑基)、噁二唑基、喹啉基、异喹啉基、吡咯基或吡唑基，每个可以任选地被1或2个RX基团取代。
在一个或多个实施方案中，每个杂环烷基独立地选自氮杂环丙烷基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基，每个可以任选地被1或2个RX基团取代。
在一个或多个实施方案中，R1和R4为H。在一个或多个实施方案中，R2和R3独立地为H、卤代、C1-3烷氧基。在一个或多个实施方案中，R2和R3不同时为H。在一个或多个实施方案中，R2和R3均为C1-3烷氧基，例如，甲氧基、乙氧基。在一个或多个实施方案中，R2和R3一起为亚甲基二氧基。在一个或多个实施方案中，R1和R4为H，并且R2和R3为C1-3烷氧基，优选甲氧基。在其他实施方案中，R2为C1-3烷氧基，并且R1、R3和R4为H。
在一个或多个实施方案中，L1为NH或NHC1-2烷基。在一个或多个实施方案中，L1为苯基。在一个或多个实施方案中，L1为NHC1-2烷基-NHC(O)-、氮杂环丁烷基-NHC(O)-、NHC1-4烷基-NHSO2-或氮杂环丁烷基-NHSO2-。在一个或多个实施方案中，L1不存在。
在一个或多个实施方案中，R5为卤代，胍基，脲基或选自C3-6环烷基、苯基、萘基、吲哚基(例如，2-吲哚基或3-吲哚基)、吡啶基(例如，2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基)、喹啉基、异喹啉基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、三唑基(例如，4-三唑基)、吡唑基(例如，N(1)-吡唑基、3-吡唑基)；噁唑基(例如，1,3-噁唑基、1,2-噁唑基)、噁二唑基、苯并二唑基(benzodiazolyl)、吡咯并吡啶基(例如，吡咯并[2,3-b]吡啶基)，其中每个基团任选地被1或2个RX基团取代。
在一个或多个实施方案中，L1不存在，并且R5选自C1-6烷基、C1-6烯基和C1-6炔基。在一个或多个实施方案中，L1不存在，并且R5是C6-10芳基(例如，苯基、萘基)，所述C6-10芳基任选地被1或2个RX基团(例如，CF3、甲氧基、亚甲基二氧基、1,2-亚乙基二氧基、吗啉基、CH2-吗啉基)取代。在一个或多个实施方案中，L1不存在，并且R5是任选地被1或2个C1-3烷基取代的C(O)哌嗪基(例如，C(O)(N(1)-哌嗪基)。在一个或多个实施方案中，L1不存在，并且R5是任选地被1或2个RX基团取代的C2-9杂芳基(例如，吲哚基、喹啉基)。
在一个或多个实施方案中，L1是苯基，并且R5是任选地被1或2个C1-3烷基取代的C(O)哌嗪基(例如，C(O)(N(1)-哌嗪基)。
在一个或多个实施方案中，L1是NHC1-2烷基，并且R5是任选地被1或2个RX基团取代的胍基、脲基或C2-9杂芳基(例如，吲哚基、喹啉基)。
在一个或多个实施方案中，L1是NHC1-2烷基-NHC(O)-、氮杂环丁烷基-NHC(O)-或氮杂环丁烷基-NHSO2-，并且R5是C2-9杂芳基，所述C2-9杂芳基任选地被1或2个选自以下的基团取代：C6-10芳基(例如，苯基)或C2-9杂芳基(例如，吲哚基)，例如R5是1,3-噁唑基、1,2-噁唑基、噁二唑基。
在一个或多个实施方案中，L1不存在，并且R5是任选地被选自C1-3烷基，C1-4烷氧基，或者一起形成亚甲基二氧基或1,2-亚乙基二氧基的两个相邻基团的1或2个基团取代的C6-10芳基(例如，苯基、萘基)。在一个或多个实施方案中，L1不存在，并且R5是C2-9杂芳基(例如，吲哚基、喹啉基、吡啶基)，所述C2-9杂芳基任选地被1或2个选自C1-3烷基或C1-3烷氧基的基团取代。
在一个或多个实施方案中，R5是哌嗪基，所述哌嗪基任选地被以下的1或2个基团取代：选自C1-3烷基、任选地被1或2个C1-4烷基或卤代C1-4烷基取代的C2-9杂芳基(例如吲哚基、吡啶基)、或者任选地被1或2个C1-4烷基或卤代C1-4烷基取代的SO2-C2-9杂芳基(例如，吲哚基、吡啶基)，例如R5是N(1)-哌嗪基。
在一个或多个实施方案中，L1不存在；L2不存在；R5是N-哌嗪基，所述N-哌嗪基任选地被选自C1-3烷基、任选地被以下的1或2个基团取代：任选地被1或2个C1-4烷基或卤代C1-4烷基取代的C2-9杂芳基(例如吲哚基、吡啶基)、或者任选地被1或2个C1-4烷基或卤代C1-4烷基取代的SO2-C2-9杂芳基(例如，吲哚基、吡啶基)；R6为H并且R7为H。
在一个或多个实施方案中，L2为C1-2烷基、C1-2烷基-NHC(O)-、C1-2烷基-NHSO2或氮杂环丁烷基-NHC(O)-。
在一个或多个实施方案中，R7为H、甲基或乙基。
在一个或多个实施方案中，L2是C1-2烷基，并且R6是任选地被1或2个RX基团取代的吲哚基(例如，2-吲哚基或3-吲哚基)。
在一个或多个实施方案中，R7为H，L2为C(O)，并且R6为C1-4烷基或C3-6环烷基。
在一个或多个实施方案中，L2是氮杂环丁烷基-C(O)-，并且R6是任选地被1或2个RX基团取代的吲哚基(例如，2-吲哚基或3-吲哚基)。
在一个或多个实施方案中，L2不存在；并且R6和R7与它们连接的氮一起形成任选地被1或2个RX基团取代的哌嗪基环。
在一个或多个实施方案中，L2不存在，R6为H，并且R7为H。
在一个或多个实施方案中，L1不存在，R6是任选地被1或2个RX基团取代的C6-10芳基(例如，苯基)，L2不存在，R6为H，并且R7为H。
在一个或多个实施方案中，L1不存在，R5是任选地被1或2个RX基团取代的喹啉基，L2为C1-2烷基，R6为C2-9杂芳基(例如，吡啶基、吲哚基)或C6-10芳基(例如，苯基)，并且R7为H。
在一个或多个实施方案中，每个RX独立地选自羟基、卤代、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、C1-3烷氧基、C(O)C1-3烷基、C(O)OC1-3烷基、NR'R"(其中R'和R”独立地选自H和C1-3烷基)、任选地被1或2个RY基团取代的苯基、任选地被1或2个RY基团取代的吗啉基、任选地被1或2个RY基团取代的哌嗪基、任选地被1或2个RY基团取代的C(O)哌嗪基、任选地被1或2个RY基团取代的C(O)吗啉基、任选地被1或2个RY基团取代的吡啶基(例如，2-,3-或4-吡啶基)、任选地被1或2个RY基团取代的吲哚基(例如，2-,3-或5-吲哚基)或者任选地被1或2个RY基团取代的SO2-吲哚基(例如，2-,3-或5-吲哚基)，或者两个相邻的RX基团一起形成亚甲基二氧基。
在一个或多个实施方案中，RY选自羟基、卤代、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、C1-3烷氧基。
在一个或多个实施方案中，本发明涉及对应于通式的化合物，所述通式独立地选自式(IA)、式(IB)、式(IC)或式(ID)，或者所述化合物的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体：
其中R2、R3、R6、RX和L2独立地如式(I)所定义，包括每个优选实施方案。
在另一实施方案中，本发明涉及通式(IE)的化合物或者其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体：
其中R2、R3、R5、L1和RX独立地如式(I)所定义，包括每个优选实施方案。
在一个或多个实施方案中，R2为H或C1-3烷氧基；R3为H或C1-3烷氧基；或者R2和R3一起形成亚甲基二氧基。
本领域技术人员会显而易见通式(IA)-(IE)的化合物是通式(I)的子集。为了避免疑义，在整个说明书中，除非另有明确说明，对“本发明的化合物”的一般性引用是指通式(I)、(IA)、(IB)、(IC)、(ID)和(IE)的化合物及其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体。相似地，除非另有明确说明，对“式(I)的化合物”或“通式(I)的化合物”的引用包括通式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)和(IE)的化合物及其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体。
通式(I)的化合物或者其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体可以利用本领域技术人员已知的方法、本文公开的说明性反应方案和一般方法、实施例部分中描述的具体方法或者通过其常规修改制备。除了其中使用的任何新中间体，本发明还涵盖用于制备式(I)的化合物的这些方法中的任一种或多种。
用于进行反应的合适的试剂和反应条件是技术人员已知的，并且在文献和教科书中描述，包括例如March,J.Advanced Organic Chemistry,4th Ed(John Wiley&Sons,NewYork,1992)和Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry,5th Ed(John Wiley&Sons,New York,1989)。
下文示出的反应方案是可以用来制备本发明的化合物的一般方法的说明。包括本文公开的方法的常规修改在内的可选方法对于本领域技术人员是显而易见的。
在方案1中说明了制备式(I)的化合物的一般合成。
方案1
方案1中示出的合成从2,4-二氯喹唑啉化合物(4)与胺化合物的缩合开始，所述胺化合物以任选取代的色胺化合物(5)表示。得到胺取代的喹唑啉化合物(6)。随后是与任选取代的芳基硼酸酯的Suzuki–Miyaura交叉偶联反应，得到以结构7表示的通式(I)的化合物。方案1中说明的反应在下文一般方法B和一般方法C中更详细地描述。
通常，在方案1中示出的第一反应中，将任选取代的胺(5)(以色胺为代表)溶解或悬浮于合适的溶剂中，例如THF，然后用2,4-二氯喹唑啉化合物(4)处理，随后加入(通常逐滴加入)碱(例如，三乙胺)，之后将反应搅拌足够反应基本上进行完成的时间。例如，精确时间取决于反应规模和特定反应条件，但是本领域技术人员能够容易地确定合适的时间和温度条件，并且能够利用标准技术监测反应的过程，例如薄层层析(TLC)、1H NMR等，以便确定反应充分或基本上完成的时间。在典型反应中，将试剂在15℃-40℃的温度下，通常在室温下搅拌约4-24小时的时间，例如，约12小时，或约18小时。可以利用本领域技术人员已知的标准技术分离和纯化产物，例如，溶剂萃取(例如，利用有机溶剂例如乙酸乙酯、氯仿等，并且用水和/或水性溶液(例如，碳酸钠、碳酸氢钠、盐水)洗涤，然后柱层析和/或重结晶。
第二步是Suzuki–Miyaura交叉偶联反应，其包括使化合物(6)与芳基硼酸酯化合物反应以产生化合物(7)。在典型反应中，将苯基硼酸、化合物(6)和碱(例如，碳酸钾)的混合物用脱气的溶剂混合物(例如，二甲氧基乙烷、水、乙醇的混合物)处理。然后加入双(三苯基膦)二氯化钯(II)催化剂并将所得混合物密封，然后在氮气下在一定温度和时间用微波辐射辐照直至判断反应基本上完成(通常120℃/0.33h，斜坡时间1分钟，最大功率200W)。本领域技术人员知道怎样利用标准技术例如TLC、1H NMR等监测反应的过程。可以利用本领域技术人员已知的标准技术分离和纯化产物，例如溶剂萃取，例如，利用有机溶剂例如乙酸乙酯、氯仿等，并且用水和/或水性溶液(例如，碳酸钠、碳酸氢钠、盐水)洗涤，以及其他公知的常规技术例如柱层析和/或重结晶。
方案2中说明可选合成顺序，其中将吲哚取代的喹唑啉化合物(6)与胺化合物(8)缩合，得到以结构(9)表示的通式(I)的化合物。
方案2
方案2中说明的反应在下文一般方法B和一般方法D中更详细地描述。
方案2中示出的胺缩合反应通常在惰性气体气氛(例如，氮气、氩气)下进行，并且包括使胺(8)与化合物(6)在非亲核碱(例如，N,N-二异丙基乙胺、2,6-二甲基吡啶、DABCO、N-甲基吗啉、三乙胺等)的存在下，在合适的质子溶剂(例如，醇例如丙醇、丁醇，例如，正丁醇)中于密封容器中反应，然后使其接受足够反应基本上完成的微波辐照。本领域技术人员知道怎样利用标准技术例如TLC、1H NMR等监测反应的过程。(示例性微波辐照是160℃/0.5h，斜坡时间2分钟，最大功率200W)。可以利用本领域技术人员已知的标准技术分离和纯化产物，包括例如溶剂萃取、柱层析、重结晶等。
方案3中说明制备通式(I)的化合物的可选方法，其是基于Seijas J.A et al.(Tetrahedron Lett.2000,41,2215–2217)描述的反应顺序。
方案3
方案3中示出的反应包括使2-氨基苄腈化合物(10)与任选取代的芳基腈(例如苄腈)在强碱(例如，叔丁醇钾)的存在下在惰性(例如，氮气或氩气)气氛下反应。使反应混合物接受微波辐照以产生以结构(11)表示的通式(I)的化合物。(示例性微波辐照条件是180℃/1min.，斜坡时间1min，最大功率200W)。可以利用本领域技术人员已知的标准技术分离和纯化产物，例如，溶剂萃取、柱层析、重结晶等。
当适当或必要时，可以在式(I)的化合物的合成中的任何阶段采用保护基团。相似地，本领域技术人员还会理解本发明的化合物制备时还可以具有有利于纯化或储存的某些保护基团，保护基团可以在给药至患者之前去除。因此，本发明还涵盖包含保护基团的本发明的化合物。合适的保护基团和它们的用途是本领域技术人员公知的，并且包括例如PeterG.M.Wuts,Theodora W.Greene,"Greene's Protective Groups in Organic Synthesis",4th Edition.(John Wiley&Sons,Inc.,2007)中描述的保护基团。官能团的保护和脱保护的描述还见于"Protective Groups in Organic Chemistry",edited by J.W.F.McOmie,Plenum Press(1973)。
本领域技术人员会认识到上述方案中说明的反应的多面性，其可以提供广泛的取代的通式(I)的喹唑啉化合物。上述方法仅是代表性的，并且本领域技术人员显而易见的常规修改和变化在本文公开的发明的广泛范围和界限内。
可以利用本领域技术人员已知的标准技术分离或纯化本发明的化合物。这类技术包括沉淀、结晶、重结晶、柱层析(包括快速柱层析)、HPLC、盐的形成、冻干法等。用于这些技术的合适的溶剂是已知的，或者可以由本领域技术人员利用常规实践容易地确定。
式(I)的化合物的盐，包括药学可接受的盐，可以通过本领域技术人员已知的方法制备，包括例如：
(i)通过使式(I)的化合物与期望的酸或碱反应；
(ii)通过从式I的化合物的合适前体去除酸或碱不稳定的保护基团或者利用期望的酸或碱使合适的环前体，例如，内酯或内酰胺开环；或者
(iii)通过与适当的酸或碱反应或者通过合适的离子交换柱将式(I)的化合物的一种盐转化为另一种盐。
上述反应通常在溶液中进行。合适的溶剂系统(包括混合溶剂系统)是本领域技术人员公知的，并且本领域技术人员考虑到式(I)的化合物的性质、形成的特定盐和式(I)的化合物的量，可以利用常规方法容易地选择或确定合适的溶剂系统。示例性溶剂系统包括甲醇、乙醇、水、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、戊烷、己烷、二乙醚、乙酸乙酯以及两种或更多种这类溶剂的任何混合物。所得的盐可以沉淀出来并通过过滤收集，或者可以通过溶剂蒸发来回收。所得的盐中的电离程度可以是完全电离至几乎不电离。
体外筛选测定
本公开还包括用于评价受试化合物的乙酰肝素酶抑制剂活性的体外筛选测定。
用于确定乙酰肝素酶抑制活性的合适测定是本领域已知的，参见，例如，Rivaraet al.(2016)Future Med Chem,8(6):647-680中描述的体外测定。例如，方法可以包括使包含乙酰肝素酶和乙酰肝素酶底物(例如硫酸乙酰肝素或磺达肝素)的制品与受试化合物接触并检测完整底物的量，与受试化合物不存在下完整底物的参照水平比较，或者检测完整乙酰肝素酶底物的下游靶标活性的调节。检测完整底物的量或调节可以利用以下技术完成，所述技术包括但不限于ELISA、基于细胞的ELISA、抑制ELISA、蛋白印迹、RIA、免疫沉淀、免疫染色、固相标记的底物测定例如固相放射性或荧光标记或者生物素化的底物、超滤测定、接近测定例如HTRF和闪烁接近测定、利用例如荧光底物-乙酰肝素酶底物缀合物例如荧光素或罗丹明的荧光测定、比色测定以及荧光免疫测定，全部是本领域技术人员公知的。
在一些实施方案中，可以利用可商购的测定筛选受试化合物，其说明性实例包括Cisbio乙酰肝素酶测定工具箱(生物素-硫酸乙酰肝素-Eu穴状化合物；目录号61BHSKAA；Cisbio Bioassays,Codolet France)、Amsbio乙酰肝素酶测定试剂盒(目录号Ra001-BE-K；AMS Biotechnology Ltd,Abington UK)和InSight乙酰肝素酶活性试剂盒(目录号INS-26-4-0000-10；InSight Biopharmaceuticals,Rehovot,Israel)。
本发明的乙酰肝素酶抑制剂化合物可以通过一种或多种作用模式引发它们的乙酰肝素酶抑制活性。例如，乙酰肝素酶抑制剂化合物可以减少、抑制或损害乙酰肝素酶催化活性、乙酰肝素酶蛋白结合、乙酰肝素酶介导的基因转录调节、乙酰肝素酶介导的细胞信号传导和/或血管发生的起始中的任一种或多种。
药物用途
本发明的通式(I)的化合物是乙酰肝素酶抑制剂，并且本发明还涉及一种治疗与乙酰肝素酶活性相关的疾病状况或疾病的方法。因此，本发明的一实施方案涉及一种治疗个体中与乙酰肝素酶活性相关的疾病或疾病状况的方法，方法包括向个体给药有效量的式(I)的化合物或其药物组合物。
本发明的另一实施方案涉及式(I)的化合物或者其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体或者其药物组合物在制造用于治疗与乙酰肝素酶活性相关的疾病或疾病状况的药物中的用途。
在另一方面，本发明涉及式(I)的化合物或者其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体或者其药物组合物在治疗个体中与乙酰肝素酶活性相关的疾病或疾病状况中的用途。
表达“与乙酰肝素酶活性相关的疾病或疾病状况”表示乙酰肝素酶在所述疾病或疾病状况中起作用。但是，其他酶、途径和机制也可能与所述疾病或疾病状况相关。本发明的化合物可以是乙酰肝素酶的一种或多种活性的抑制剂，包括但不限于乙酰肝素酶催化活性。此外，本发明的化合物可以部分或基本上抑制任一种或多种乙酰肝素酶活性。
在优选实施方案中，个体是人。
在各种实施方案中，疾病或疾病状况选自1型糖尿病、2型糖尿病、肾炎、肾小球肾炎、细胞介导的自身免疫性炎症、糖尿病肾病、妊娠期糖尿病、糖尿病酮症酸中毒、高血糖、高渗状态、低血糖、糖尿病昏迷、糖尿病心肌病、糖尿病神经病变、糖尿病足、糖尿病视网膜病变、糖尿病性肌坏死以及糖尿病脑病。在其他实施方案中，与乙酰肝素酶活性相关的疾病或疾病状况选自癌症、变态反应、皮炎、银屑病、眼部炎性病症例如黄斑变性、视网膜色素变性以及胰腺炎。
在优选实施方案中，疾病或疾病状况选自1型糖尿病、2型糖尿病、糖尿病肾病、肾炎、肾小球肾炎以及与乙酰肝素酶相关的细胞介导的自身免疫性炎症适应症。在特别优选的实施方案中，疾病是1型糖尿病或2型糖尿病。
已知药物多沙唑嗪是目前用来治疗高血压和尿潴留的取代的喹唑啉基化合物。发明人令人惊讶地发现多沙唑嗪还抑制乙酰肝素酶。因此，本发明的另一实施方案涉及一种治疗个体中与乙酰肝素酶活性相关的疾病或疾病状况的方法，方法包括向个体给药有效量的多沙唑嗪，其中疾病或疾病状况选自1型糖尿病、2型糖尿病、肾炎、肾小球肾炎、细胞介导的自身免疫性炎症、糖尿病肾病、妊娠期糖尿病、糖尿病酮症酸中毒、高血糖、高渗状态、低血糖、糖尿病昏迷、糖尿病心肌病、糖尿病神经病变、糖尿病足、糖尿病视网膜病变、糖尿病性肌坏死以及糖尿病脑病。
在另一方面，本发明涉及一种控制个体中的血液葡萄糖水平的方法，方法包括向个体给药有效量的通式(I)的化合物或多沙唑嗪或其药物组合物。
在另一方面，本发明涉及一种治疗或预防个体中胰岛移植的排斥反应的方法，方法包括向个体给药有效量的通式(I)的化合物或多沙唑嗪或其药物组合物。
在另一方面，本发明涉及一种保留个体中的β-细胞功能的方法，方法包括向个体给药有效量的通式(I)的化合物或多沙唑嗪或其药物组合物。
眼部炎性病症例如糖尿病视网膜病变、年龄相关性黄斑变性(AMD)、视网膜色素变性、葡萄膜炎和病毒性角膜炎症完全或部分由于眼中的进行性炎症而发生。在患病的眼中，特定组织中的过量巨噬细胞激活和积累，例如退行性病症中视网膜下空间中小胶质细胞的激活和积累，可以破坏眼的免疫赦免(Li et al.(2015)Experimental Eye Research,136:116-130)。已显示乙酰肝素酶对于与角膜的病毒感染相关的眼部炎症(Agelidis et al(2017)Cell,20:439-450)以及巨噬细胞的激活(Gutter-Kapon et al.(2016)PNAS,113(48):E7808-E781)很重要。激活的巨噬细胞，包括视网膜小胶质细胞，产生不同种类的产物，包括补体蛋白、促炎细胞因子、反应活性氧、生长因子和其他产物，其可以导致慢性局部炎症，并且通常可以导致进一步损伤(Li et al.(2015)Experimental Eye Research,136:116-130)。例如，在AMD的发病机理中，细胞死亡激活的小胶质细胞迁移至受损区域以吞噬细胞碎片，但是还分泌分子，所述分子杀死原发性变性区域周围的相邻光受体(Li et al.(2015)Experimental Eye Research,136:116-130)。因此眼部巨噬细胞激活，包括小胶质细胞激活是治疗和预防眼部炎性病症的重要靶标。因此，靶向乙酰肝素酶的物质，包括抑制乙酰肝素酶的至少一种功能或生物活性的物质，可以预防或减少巨噬细胞激活，并且可以用于治疗眼部炎性病症，例如糖尿病视网膜病变和AMD等。
因此，在另一方面，本发明涉及一种治疗或抑制个体中眼部炎性病症的进展或发展的方法，方法包括向个体给药通式(I)的化合物或其药物组合物。眼部炎性病症可以是具有炎性构成的任何眼部病症。示例性眼部炎性病症包括但不限于年龄相关性黄斑变性(AMD)，包括渗出性或“湿性”AMD、干性AMD，糖尿病视网膜病变，视网膜色素变性，视网膜静脉阻塞，视网膜母细胞瘤，葡萄膜炎，黄斑水肿，干眼症，病毒感染和/或圆锥角膜；特别是AMD、糖尿病视网膜病变和视网膜色素变性。在优选实施方案中，眼部炎性病症是AMD或糖尿病视网膜病变，优选AMD。在优选实施方案中，眼部炎性病症是干性AMD。在其他优选实施方案中，眼部炎性病症是湿性AMD。虽然本发明考虑急性眼部炎性病症，在特别优选的实施方案中，眼部炎性病症是慢性病症。
药物制剂
本文所述本发明的化合物可以作为制剂给药，制剂包含药学有效量的化合物，以及一种或多种药学可接受的赋形剂，包括载体、媒介物和稀释剂。本文中的术语“赋形剂”表示任何物质，其本身不是治疗剂，用作递送治疗剂至个体的稀释剂、佐剂或媒介物，或者添加至药物组合物以改善其操作或储存特性或者允许或促进固体剂型例如片剂、胶囊剂的形成，或者适合口服、肠胃外、皮内、皮下或体表施用的溶液剂或混悬剂。通过说明而不是限制的方式，赋形剂可以包括稀释剂、崩解剂、粘合剂、胶粘剂、湿润剂、聚合物、润滑剂、助流剂、稳定剂、以及添加以掩盖或抵消令人不快的味道或气味的物质、香料、染料、芳香剂、以及添加以改善组合物的外观的物质。可接受的赋形剂包括(但不限于)硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠和钙盐、碳酸镁、滑石、明胶、阿拉伯胶、藻酸钠、果胶、糊精、甘露醇、山梨醇、乳糖、蔗糖、淀粉、明胶、纤维素材料例如烷酸的纤维素酯和纤维素烷基酯、低熔点蜡、可可脂或粉、聚合物例如聚乙烯-吡咯烷酮、聚乙烯醇和聚乙二醇以及其他药学可接受的材料。Remington's Pharmaceutical Sciences,20th Edition(Lippincott Williams&Wilkins,2000)中描述了赋形剂的实例和它们的用途。赋形剂的选择在很大程度上取决于因素例如特定的给药模式、赋形剂对溶解度和稳定性的影响以及剂型的性质。
本发明的化合物和药物组合物可以配制用于口服、可注射、直肠、肠胃外、皮下、静脉内、体表、玻璃体内或肌肉内递送。特定制剂类型的非限制性实例包括片剂、胶囊剂、囊片、散剂、颗粒剂、注射剂、安瓿、小瓶、即用溶液剂或混悬剂、冻干材料、乳膏剂、洗剂、软膏剂、滴剂、栓剂和植入物。固体制剂例如片剂或胶囊剂可以包含任何数量的上述合适的药学可接受的赋形剂或载体。本发明的化合物还可以配制用于持续递送。
用于口服给药的片剂和胶囊剂可以为单位剂量呈递形式，并且可以包含常规赋形剂例如粘合剂，例如，阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂，例如乳糖、糖、玉米-淀粉、磷酸钙、山梨醇或甘氨酸；压片润滑剂，例如，硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇或二氧化硅；崩解剂，例如，马铃薯淀粉；或者可接受的湿润剂例如十二烷基硫酸钠。片剂可以根据正常药学实践中公知的方法包衣。
口服液体制品可以是例如水性或油性混悬剂、溶液剂、乳剂、糖浆剂或酏剂的形式，或者可以作为干产物存在用于在使用之前与水或其他合适的媒介物重建。这类液体制品可以包含常规添加剂，例如悬浮剂，例如，山梨醇、甲基纤维素、葡萄糖糖浆、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如，卵磷脂、脱水山梨醇单油酸酯或阿拉伯胶；非水性媒介物(其可以包括食用油)，例如，杏仁油、油性酯例如甘油、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如，对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或者山梨酸；以及，如果期望，常规调味剂或着色剂。
对于肠胃外给药，包括静脉内、肌肉内、皮下、玻璃体内或腹腔内给药，流体单位剂型可以通过合并化合物和无菌媒介物来制备，无菌媒介物通常是无菌水性溶液，优选与接受者的血液等张。根据使用的媒介物和浓度，化合物可以悬浮或溶解于媒介物或其他合适的溶剂中。在制备溶液时，可以将化合物溶于注射用水，过滤法除菌然后装入合适的小瓶或安瓿并密封。有利地，可以将物质例如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂溶于媒介物中。为了增强稳定性，可以在装入小瓶之后将化合物冷冻，并在真空下去除水。然后可以将干燥的冻干粉密封在小瓶中，并且可以提供伴随小瓶的注射用水或其他合适的液体以在使用之前重建液体。以基本上相同的方式制备肠胃外混悬剂，除了将化合物悬浮于媒介物中而不是溶解，并且除菌不可以通过过滤完成。化合物可以通过暴露于环氧乙烷来灭菌，然后悬浮于无菌媒介物。组合物中可以包括表面活性剂或湿润剂以促进化合物的均匀分布。
在一个或多个优选实施方案中，本发明的化合物配制为可注射溶液剂、混悬剂或乳剂。在优选实施方案中，本发明的化合物配制用于玻璃体内注射至个体的眼中。这类制剂可以特别优选用于治疗眼部炎性病症，例如年龄相关性黄斑变性(AMD)，包括AMD的渗出性或“湿性”以及干性形式，糖尿病视网膜病变，视网膜色素变性，视网膜静脉阻塞，视网膜母细胞瘤，葡萄膜炎，黄斑水肿，干眼症，病毒感染和/或圆锥角膜；特别是AMD、糖尿病视网膜病变和视网膜色素变性。
在优选实施方案中，眼用制剂，包括玻璃体内制剂和其他眼用制剂，例如滴眼液，通常可以包含一种或多种助溶剂，例如一种或多种有机助溶剂；一种或多种张度剂；包含一种或多种缓冲剂的缓冲系统；稳定剂；pH约为3-8。在优选实施方案中，有机助溶剂可以是聚山梨酯，例如，聚山梨酯20或聚山梨酯80，聚乙二醇(PEG)，例如，PEG 3350，或者丙二醇，或者它们的组合；张度剂可以是例如氯化钠或氯化钾；稳定剂可以是蔗糖、山梨醇、甘油、海藻糖或甘露醇；并且缓冲剂可以是例如磷酸盐缓冲液，例如磷酸钠缓冲液。
玻璃体内制剂优选是无菌、等张的，并且优选pH在3–8范围内，优选pH 5-7或pH 3-5。这类制剂可以包含一种或多种缓冲液作为缓冲系统的部分，但是，缓冲液的浓度优选尽可能低。可以进行缓冲液压力研究以选择安全地保持期望的pH范围所需要的最小缓冲液量。Shikari H,Samant PM.Intravitreal injections:A review of pharmacologicalagents and techniques.J Clin Ophthalmol Res 2016；4:51-9中描述了示例性玻璃体内制剂。
在优选实施方案中，眼科可接受的制剂可以是冻干的。可冻干的制剂可以重建为溶液、悬浮液、乳液或者用于给药或使用的任何其他合适形式。可冻干的制剂通常首先制备为液体，然后冷冻和冻干。冻干之前的总液体体积可以少于、等于或多于冻干制剂的最终重建体积。冻干过程是本领域技术人员公知的，并且通常包括在受控条件下从冷冻制剂升华水。冻干制剂通常可以储存在广泛温度下。例如，冻干制剂可以储存在低于25℃下，例如，在2-8℃下冷藏，或者在室温下(例如，约25℃)。优选地，冻干制剂储存在低于约25℃下，更优选地，在约4-20℃下；低于约4℃；或者低于约0℃。
冻干制剂优选用主要由水组成的溶液(例如，USP WFI或注射用水)或抑菌水(例如，具有0.9％苄醇的USP WFI)重建。或者，可以使用包含缓冲液和/或赋形剂和/或一种或多种药学可接受的载体的溶液。接受冷冻-干燥(freeze-drying)或冻干(lyophilization)的液体优选包含最终重建的液体制剂中期望的所有组分。
可以利用各种途径将本发明的药物组合物局部给药至眼，包括但不限于体表、通过眼部植入物或直接注射至眼中。在特定实施方案中，利用玻璃体内注射、结膜下注射、眼球筋膜下注射、球后注射、脉络膜上注射、巩膜内注射、角膜内注射、视网膜下注射或前房内注射，特别是玻璃体内，将本发明的药物组合物局部给药至眼。在一些实施方案中，利用微针例如通过巩膜内或角膜内注射给药所述组合物。
在一些实施方案中，利用眼部植入物给药所述组合物，例如，生物可降解植入物例如制备自以下：例如聚乳酸(PLA)、聚羟基乙酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)、交联明胶衍生物、羟丙甲纤维素、聚酯和/或聚己内酯；或者不可生物降解的植入物例如制备以下：自例如聚乙烯醇、乙烯乙酸乙烯酯、硅和/或聚砜毛细纤维。
在一些实施方案中，将本发明的组合物配制于缓释制剂或储库中。示例性缓释制剂或储库包括微球；基质；乳剂；基于脂质的；基于聚合物的；纳米胶束；胶束；纳米囊泡例如脂质体、noisome、传递体、discome、药质体、乳脂体或spanlastic，特别是脂质体；微粒；纳米颗粒例如由脂质、蛋白、天然或合成聚合物例如白蛋白、藻酸钠、壳聚糖、PLGA、PLA和/或聚己内酯组成的纳米胶囊或纳米球；或者原位凝胶例如原位水凝胶药物递送系统。
在一些实施方案中，本发明的组合物配制用于局部给药至眼。因此，组合物可以是滴眼液、凝胶或软膏剂的形式；特别是滴眼液。组合物可以是单一单位剂量或多单位剂量形式。
给药的治疗有效化合物的量以及用本发明的化合物和/或药物组合物治疗疾病状况的剂量方案取决于各种因素，包括个体的年龄、体重、性别和医疗状况，疾病的严重程度，给药的途径和频率，采用的特定化合物，治疗的个体的药物动力学特性(例如，吸收、分布、代谢、排泄)，因此可以广泛变化。这类治疗可以按需要的频率给予，并按治疗医生判断给予需要的时间。本领域技术人员会理解待给药的化合物的剂量方案或治疗有效量可能需要针对每个个体优化。药物组合物可以包含约0.1mg-2000mg的活性成分，典型地约0.5mg-500mg，并且更典型地约1mg-200mg。约0.01mg/kg-100mg/kg体重，通常约0.1mg/kg和约50mg/kg体重的每日剂量可能是适当的，取决于给药途径和频率。每日剂量通常以一个或多个，例如，2、3或4个剂量/天给药。
本发明的化合物可以与如上文所述的药物载体、稀释剂或赋形剂一起给药。可选地或额外地，化合物可以与其他物质联合给药，例如，其他抗糖尿病治疗剂或VEGF抑制药物。
定义本发明的化合物以及一种或多种其他药剂的用途时，术语“联合疗法”或“辅助疗法”意图涵盖在提供药物组合的有益效果的方案中以顺序方式给药每种物质，并且还意图涵盖以基本上同时的方式联合给药这些物质，例如在具有固定比例的这些活性剂的单一制剂中，或者在每种物质的多个、单独制剂中。
按照本发明的各种实施方案，式(I)的一种或多种化合物可以与一种或多种其他治疗剂联合配制或给药。因此，按照本发明的各种实施方案，式(I)的一种或多种化合物可以与手术和/或其他已知治疗或治疗剂，和/或佐剂或预防剂包括在联合治疗方案中。
可以选择来自商业用途、临床评价和临床前开发的一些物质，作为联合药物疗法的部分，用于治疗1型糖尿病、2型糖尿病、糖尿病肾病、肾炎、肾小球肾炎、和其他细胞介导的自身免疫性炎症适应症、癌症、银屑病、皮炎、变态反应、黄斑变性、视网膜色素变性和胰腺炎。本领域技术人员会认识到可以用于联合疗法的合适的物质。合适的物质见于例如，Merck Index,An Encyclopaedia of Chemicals,Drugs and Biologicals,12th Ed.,1996和后续版本，其全部内容援引加入本文。
例如，当用于治疗1型糖尿病或2型糖尿病时，本发明的化合物可以与额外的抗糖尿病剂或它们的组合一起给药，例如：双胍(例如，二甲双胍)、胰岛素促分泌剂(例如，磺酰脲和格列奈类(glinides))、格列酮、非格列酮PPARy激动剂、PPARp激动剂、DPPIV抑制剂、PDE5抑制剂、GSK-3抑制剂、胰高血糖素拮抗剂、f-1,615BPase(Metabasis/Sankyo)抑制剂、GLP-1/类似物(AC 2993，也称作exendin-4)、胰岛素和胰岛素模拟物(Merck天然产物)。其他实例包括PKC-p抑制剂、AGE破碎剂、SGLT2抑制剂、T细胞抑制剂(包括抗CD3单克隆抗体)、B细胞抑制剂(包括抗CD20单克隆抗体例如利妥昔单抗)、CTLA-4–Ig(阿巴西普/Bristol-Myers Squibb)和炎性细胞因子抑制剂等，炎性细胞因子抑制剂包括阻断性单克隆抗体等。
在其他实施方案中，当用于治疗眼部炎性病症时，例如，年龄相关性黄斑变性(AMD)，式(I)的化合物可以与生长因子抑制剂联合给药。合适的生长因子抑制剂包括但不限于血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂，例如雷珠单抗、阿柏西普、贝伐珠单抗、培加尼布(pegaptanib)、康伯西普、abicipar pegol(MP0112)和MP0250；血小板衍生生长因子(PDGF)抑制剂，例如E10030(PEG化的抗PDGF适体)、曲匹地尔和pegpleranib；以及它们的药学可接受的盐和组合。在一些实施方案中，一种或多种药物活性剂是VEGF抑制剂，选自雷珠单抗、阿柏西普、贝伐珠单抗、培加尼布、康伯西普以及它们的药学可接受的盐和组合。
组合方案可以包括一起、顺序或在每种情况下适当间隔给药的活性剂。包括本发明的化合物的活性剂的组合可以是协同作用的。
式(I)的化合物的联合给药可以通过使式(I)的化合物与另一活性剂存在于相同的单位剂量中来实现，或者式(I)的化合物以及一种或多种其他活性剂可以存在于单独和分离的单位剂量中，根据剂量给药方案或计划，同时、在相似时间或在不同时间给药。顺序给药可以是需要的任何顺序，并且可以要求当给药第二或后来的化合物时第一或初始化合物的持续生理效果存在，特别是当期望累积或协同效应时。
现在参考具体实施例更详细地讨论本发明的实施方案，提供具体实施例仅为了示例，并且不应当认为其以任何方式限制本发明的范围。
实施例
缩写
BOC是指叔丁氧羰基。
DCM是指二氯甲烷。
THF是指四氢呋喃。
DMF是指N,N-二甲基甲酰胺。
DMSO是指二甲基亚砜。
EtOAc是指乙酸乙酯。
rt是指室温。
一般方法
除非另有说明，质子(1H)和碳(13C)NMR谱在室温下于碱过滤的CDCl3中用Bruker波谱仪记录，对于质子在400MHz下操作，而对于碳核在100MHz下操作。对于1H NMR谱，以产生自残留的质子形式的溶剂的信号为内标。1H NMR波谱数据记录如下：化学位移(δ)[多重性，耦合常数J(Hz)，相对积分]，其中多重性定义为：s＝单峰；d＝双重峰；t＝三重峰；q＝四重峰；m＝多重峰；br＝宽峰或它们的组合。在δH＝7.26ppm出现的由于残留CHCl3的信号以及在δC＝77.0或77.16ppm出现的CDCl3“三重峰”的中心共振分别在1H和13C NMR谱中用于参考。在δH＝2.50ppm出现的由于残留DMSO-d5的五重峰以及在δC＝39.52ppm出现的DMSO-d6“多重峰”的中心共振分别在1H和13C NMR谱中用于参考。用Perkin–Elmer 1800系列FTIR光谱仪或Perkin–Elmer UATR Spectrum Two FTIR光谱仪记录红外光谱(IR:max)。样品作为KBr片上的薄膜进行分析或者在金刚石窗口上压扁。用单四极液相色谱–质谱仪记录低分辨率ESI质谱，同时在飞行时间仪器上进行高分辨率测量。用扇形磁场仪器记录低分辨率和高分辨率EI质谱。用Optimelt自动熔点系统测量熔点并且未校正。在0.2mm厚的硅胶60F254铝箔板上进行分析薄层层析(TLC)。用254nm UV灯和/或通过适当浸泡然后加热处理使洗脱板可视化。这些浸泡包括磷钼酸/硫酸铈/浓硫酸/水(37.5g:7.5g:37.5g:720mL)或高锰酸钾/碳酸钾/5％氢氧化钠水溶液/水(3g:20g:5mL:300mL)。根据Still etal.J.Org.Chem.1978,43,2923定义的方案用硅胶60(40–63μm)作为固定相并用说明的AR-或HPLC-级溶剂进行快速层析分离。
用CEM Explorer微波反应器进行微波反应。将微波容器用卡合盖密封并在指定温度下辐照指定时间，通常用1分钟的斜坡时间至指定温度，并且最大功率为200W。
起始材料和试剂一般可获得自Sigma–Aldrich、Merck、TCI、Strem、AK Scientific或Lancaster化学公司并直接使用。干燥试剂和其他无机盐购自AJAX、BDH或Unilab化学公司。利用基于最初由Grubbs et al.Organometallics 1996,15,1518描述的技术的GlassContour溶剂纯化系统干燥四氢呋喃(THF)、二乙醚、甲醇和二氯甲烷(DCM)。当必需或可取时，在氮气下进行反应。
I.合成实施例
一般实验方法
以下一般实验方法是说明性合成方法，其可以用于包括可选起始材料或试剂的等同反应以产生相应的可选反应产物。
一般方法A
2,4-二氯喹唑啉的制备
利用与Zhong et al.(Heterocycles 2012,85,1417–1426)报道的相似的方法，将0℃下，磁力搅拌下，用三乙胺(400μL)处理三苯氧膦(170mg,0.6mmol)在氯苯(5mL)中的溶液。然后将溶液用三光气(630mg,2.1mmol)在氯苯(6mL)中的溶液逐滴处理，并在rt下继续搅拌0.5h。然后一次性向混合物加入2-氨基苄腈(354mg,3mmol)处理，并在120℃下加热5hr。将混合物冷却并在rt下搅拌18h，然后加入水并将混合物用EtOAc(3x 15mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)并减压浓缩，得到黄色固体，将其进行快速柱层析[硅胶，1:10 v/vEtOAc/石油醚洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色固体状的标题化合物(268mg,45％)。波谱数据与Zhong等人(2012)报道的一致。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.27(d,J＝8.4Hz,1H),8.04–7.97(m,2H),7.79–7.71(m,1H)；νmax 1670,1668,1616,1434,1404,1290,1140,753,683cm-1.
一般方法B
胺对2,4-二氯喹唑啉的加成
在磁力搅拌下，将色胺(2.47g,15.4mmol)在THF(100mL)中的悬浮液用2,4-二氯-6,7-二甲氧基喹唑啉(2.00g,7.72mmol)处理，随后逐滴加入三乙胺(1.08mL,7.72mmol)。将混合物在18℃下搅拌18h，减压浓缩，将残余物用DCM(80mL)稀释并用碳酸氢钠的饱和溶液(20mL)和盐水(20mL)洗涤，然后干燥(Na2SO4)并减压浓缩，得到N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(1.65g；56％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ10.84(s,1H),8.53(t,J＝5.6Hz,1H),7.71(d,J＝7.8Hz,1H),7.61(s,1H),7.35(d,J＝8.1Hz,1H),7.20(d,J＝2.1Hz,1H),7.10–7.05(m,1H),7.09(s,1H),6.99(t,J＝7.8Hz,1H),3.89(s,3H),3.87(s,3H)3.80–3.71(m,2H),3.09–3.04(m,2H)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ160.0,155.3,154.4,148.4,147.2,136.3,127.3,122.7,121.0,118.5,118.3,111.7,111.4,107.0,106.5,102.3,56.1,55.8,41.8,24.6；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)383(100)；(+)-HRESIMS C20H20ClN4O2[M+H]+计算值383.1269,测得383.1271.νmax 3408,1587,1499,1425,1336,1249,1220,1148,850,743,499cm-1.
一般方法C
Suzuki–Miyaura交叉偶联方法
一般方法的说明，关于化合物BT1060的合成：
在配有磁力搅拌棒的10mL卡合盖微波容器中加入苯基硼酸(9.4mg,77.2μmol)、N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(20.0mg,52.3μmol)和碳酸钾(38.0mg,274μmol)的混合物，然后用二甲氧基乙烷、水和乙醇的脱气混合物(7:3:2,1mL)处理。加入双(三苯基膦)二氯化钯(II)(1.8mg,5mol％)并将混合物用氮气鼓泡0.05hr，密封然后进行微波辐照(120℃/0.33h，斜坡时间1分钟，最大功率200W)。将混合物用水(1mL)处理并用EtOAc(3x 2mL)萃取，将合并的有机层用盐水洗涤并在温和的氮气流下浓缩。将所得残余物进行快速柱层析[硅胶，1:1 v/v EtOAc/石油醚洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色固体状的化合物BT1060(14.4mg,65％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.58–8.54(m,2H),8.15(s,1H),7.73(d,J＝7.9Hz,1H),7.52–7.43(m,3H),7.41(d,J＝7.9Hz,1H),7.30(s,1H),7.23(表观t,J＝7.5Hz,1H),7.14(表观t,J＝7.5Hz,1H),7.10(d,J＝2.0Hz,1H),6.60(s,1H),5.54(s,1H),4.15–4.09(m,2H,模糊的EtOAc),4.00(s,3H),3.81(s,3H),3.27(表观t,J＝6.6Hz,2H)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ159.5,158.4,154.2,148.5,147.3,139.1,136.4,129.7,128.2(2C),128.1(2C),127.7,122.2,119.7,118.8,115.3,113.5,111.4,108.0,107.3,99.5,56.2,56.1,42.2,24.9；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)425(100)[M+H]+,447(8)[M+Na]+；(+)-HRESIMS C26H25N4O2[M+H]+计算值425.1972,测得425.1978；νmax 3347,1624,1594,1524,1501,1458,1422,1368,1254,1214,1128,1027,854cm-1.
一般方法D
胺对2-氯喹唑啉的加成
一般方法的说明，关于化合物BT2029的合成：
在10mL卡合盖微波容器中加入胡椒基胺(103mg,0.68mmol)、N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(65mg,0.17mmol)、N,N-二异丙基乙胺(89μL,0.51mmol)和正丁醇(1.5mL)的混合物，密封然后进行微波辐照(160℃/0.5h，斜坡时间2分钟，最大功率200W)。将混合物冷却并减压浓缩，将所得残余物进行快速柱层析[硅胶，1:10v/v氨甲醇/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色固体状的化合物(67mg,79％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ10.81(s,1H),7.76–7.69(m,1H),7.57(d,J＝7.9Hz,1H),7.40(s,1H),7.34(d,J＝8.1Hz,1H),7.16(d,J＝2.3Hz,1H),7.06(t,J＝7.5Hz,1H),6.96(t,J＝7.4Hz,1H),6.92(s,1H),6.81(dd,J＝8.0,0.9Hz,1H),6.78(d,J＝8.0Hz,1H),6.68(s,1H),6.68–6.65(m,1H),5.93(s,2H),4.46(d,J＝6.3Hz,2H),3.81(s,3H),3.79(s,3H),3.76–3.69(m,2H),3.03(表观t,J＝7.6Hz,2H)；(+)-LRESIMSm/z(相对丰度)498(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C28H28N5O4[M+H]+计算值498.2136,测得498.2143；νmax 1626,1498,1488,1456,1435,1359,1231,1209,1035,740cm-1.
一般方法E
酰胺制备
一般方法的说明，关于化合物BT2161的合成：
在10mL卡合盖微波容器中加入N2-(2-氨基乙基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-2,4-二胺(121.2mg,0.46mmol)、根据Watterson et al.(J.Med.Chem.2016,59,2820)的方法制备的5-苯基异噁唑-3-羧酸乙酯(50.0mg,0.23mmol)和乙醇(1mL)。将管密封并在80℃下辐照1h，然后在18℃下搅拌48h。将溶剂蒸发并将所得残余物进行柱层析[硅胶，10:90 v/v甲醇/二氯甲烷洗脱]以在浓缩适当级分(Rf＝0.24)之后提供白色固体状的化合物BT2161(75.0mg,75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.46(brs,1H),7.88(m,2H),7.53(m,3H),7.45(s,1H),7.34(s,1H),7.15(brs,2H),6.91(s,1H),6.50(brs,1H),3.88(s,3H),3.79(s,3H),3.51(brs,4H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ170.3,161.2,159.7,159.2,158.5,154.1,148.0,144.8,130.8,129.3(2C),126.3,125.7(2C),105.0,104.0,103.3,99.9,55.9,55.4,41.1,40.2；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)435(100)[M+H]+；HRMS(ESI,+ve)测得:(M+H)+435.1766,C22H23N6O4应为435.1781；νmax 3345,3226,2938,1653,1610,1575,1504,1475,1444,1386,1334,1212,1180,1109,1003,853,765cm–1.
一般方法F
在二氯甲烷中用三氟乙酸脱Boc保护
磁力搅拌下，保持在0℃下，将Boc保护的化合物(1.80mmol)在DCM(4mL)中的悬浮液用三氟乙酸(1mL)处理并磁力搅拌2h。去除冷浴，然后将混合物在rt下再搅拌1h。通过TLC分析检查反应完成，然后用温和的氮气流去除溶剂并将剩余硅胶用二乙醚(3x 10mL)研磨，然后置于高真空下1h，得到胺的三氟乙酸盐，粉末状，不进一步纯化而直接使用。
实验方法和产物表征
制备(i).2,4-二氯-6-甲氧基喹唑啉
根据一般方法A由2-氨基-5-甲氧基苄腈(444mg,3.00mmol)与三光气(630mg,2.10mmol)反应制备，得到白色粉末状的2,4-二氯-6-甲氧基喹唑啉(406mg,59％)，不进一步纯化而使用。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ7.91(d,J＝9.2Hz,1H),7.62(dd,J＝9.2,2.7Hz,1H),7.42(d,J＝2.8Hz,1H),4.00(s,3H)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ161.7,159.6,152.7,148.5,129.4,129.1,123.4,102.8,56.0；νmax 1619,1541,1489,1418,1390,1291,1221,1109,1019,854,837cm-1.
制备(ii).2,4-二氯-7-溴喹唑啉
根据一般方法A由2-氨基-4-溴苄腈(591mg,3.00mmol)与三光气(630mg,2.1mmol)反应制备，得到米色粉末状的2,4-二氯-7-溴喹唑啉(527mg,64％)，不进一步纯化而使用。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.19(d,J＝1.3Hz,2H),8.12(d,J＝8.8Hz,2H),7.83(dd,J＝8.8,1.3Hz,1H)；LRMS(EI,70eV)m/z(相对丰度)278(100,M+·),276(63,M+·),243(75),241(58),178(50)；HREIMS C8H3 79BrCl2N2[M+·]计算值275.8851,测得275.8860；νmax 3291,3033,2839,1730,1676,1609,1592,1424,1282,1015,858cm-1.
制备(iii).N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯喹唑啉-4-胺
根据一般方法B由2,4-二氯喹唑啉(153mg,0.77mmol)、色胺(308mg,1.54mmol)与三乙胺(200μL,1.44mmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:20 v/v MeOH/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后提供白色固体状的N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯喹唑啉-4-胺(217mg,88％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ7.74(d,J＝8.0Hz,1H),7.73–7.63(m,2H),7.44–7.36(m,2H),7.39–7.30(m,2H),7.23(d,J＝8.0Hz,1H),7.15(t,J＝7.5Hz,1H),7.13–7.07(m,1H),6.10–6.01(m,1H),4.01(表观q,J＝6.2Hz,2H),3.19(t,J＝6.6Hz,2H)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ160.8,157.8,150.7,136.5,133.3,127.7,127.3,126.0,122.5,122.2,120.7,119.7,118.7,113.3,112.6,111.4,41.8,24.7；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)323(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C18H16ClN4[M+H]+计算值323.1058,测得323.1065；νmax3407,1606,1574,1532,1426,1334,1275,1191,945,738cm-1.
制备(iv).N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-7-溴-2-氯喹唑啉-4-胺
根据一般方法B由7-溴-2,4-二氯喹唑啉(100mg,0.36mmol)、色胺(115mg,0.72mmol)与三乙胺(200μL,1.44mmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:20 v/v EtOAc/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后提供淡黄色粉末状的N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-7-溴-2-氯喹唑啉-4-胺(115mg,80％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.12(s,1H),7.91(d,J＝2.0Hz,1H),7.67(d,J＝7.9Hz,1H),7.46–7.36(m,2H),7.26–7.09(m,4H),5.96(s,1H),4.00(表观q,J＝6.2Hz,2H),3.20(t,J＝6.2Hz,2H)；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)401(100),403(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C18H15 79BrClN4[M+H]+计算值401.0163,测得401.0179；νmax 3407,1606,1574,1532,1426,1334,1275,1191,945,738cm-1.
制备(v).N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6-甲氧基喹唑啉-4-胺
根据一般方法B由2,4-二氯-6-甲氧基喹唑啉(200mg,0.87mmol)、色胺(280mg,1.75mmol)与三乙胺(200μL)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:20v/v MeOH/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色粉末状的N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6-甲氧基喹唑啉-4-胺(211mg,69％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.13(s,1H),7.71(d,J＝8.1Hz,1H),7.68(d,J＝9.2Hz,1H),7.42(d,J＝8.1Hz,1H),7.33(dd,J＝9.2,2.7Hz,1H),7.23(dd,J＝8.0,0.8Hz,1H),7.21–7.12(m,1H),7.12(d,J＝2.3Hz,1H),6.52(d,J＝2.7Hz,1H),5.82–5.72(m,1H),4.00(表观q,J＝6.2Hz,2H),3.72(s,3H),3.21(表观t,J＝6.2Hz,2H)；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ10.85(s,1H),8.74(t,J＝5.5Hz,1H),7.73(d,J＝7.8Hz,1H),7.67(d,J＝2.8Hz,1H),7.57(d,J＝9.0Hz,1H),7.41(dd,J＝9.0,2.8Hz,1H),7.37(d,J＝7.8Hz,1H),7.22(d,J＝2.0Hz,1H),7.09(t,J＝7.2Hz,1H),7.00(t,J＝7.2Hz,1H),3.87(s,3H),3.85–3.75(m,2H),3.15–3.04(m,2H)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ160.4,157.1,155.0,145.4,136.3,128.1,127.3,124.2,122.8,121.0,118.5,118.3,114.2,111.6,111.4,102.8,55.9,41.9,24.4；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)353(100)[M+H]+,[M+H]+；(+)-HRESIMS C19H18ClN4O[M+H]+计算值353.1164,测得353.1171.νmax 3476,1629,1587,1568,1535,1514,1450,1331,1254,1240,1169,1041,940,904,824,745,578cm-1.
制备(vi).N2-(2-氨基乙基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-2,4-二胺
将2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(2.00g,8.34mmol)和乙二胺(5.57mL,83.45mmol)在水(25mL)中的溶液在回流下加热16h。然后将反应混合物冷却并在高真空下蒸发溶剂以去除尽可能多的过量乙二胺。将所得残余物进行快速柱层析[硅胶，5:15:80 v/v 35％氨水/甲醇/氯仿洗脱]以在浓缩适当级分(Rf＝0.19)之后得到浅黄色固体状的N2-(2-氨基乙基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-2,4-二胺(1.80g,82％)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.27(s,1H),6.79(s,1H),3.88(s,3H),3.84(s,3H),3.45(t,J＝6.2Hz,2H),2.83(t,J＝6.2Hz,2H)；13C NMR(100MHz,甲醇-d4)δ163.3,160.8,156.3,149.8,146.8,105.1,104.6,104.4,56.6,56.2,44.6,42.5；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)264(100)[M+H]+；νmax 3168,2934,1671,1603,1576,1503,1480,1454,1435,1380,1312,1232,1209,1111,1031,1004,841,829,784cm–1.
制备(vii).2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺
在10mL卡合盖微波容器中加入2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(100.0mg,0.42mmol)、氮杂环丁烷-3-基氨基甲酸叔丁酯盐酸盐(130.6mg,0.63mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.18mL,1.04mmol)和正丁醇(2mL)的混合物。将管密封，然后进行微波辐照(120℃/1h，斜坡时间5分钟，最大功率250W)。将混合物冷却，减压浓缩并将所得残余物进行快速柱层析[硅胶，5:95-20:80 v/v甲醇/乙酸乙酯洗脱]，浓缩适当级分之后得到(1-(4-氨基-6,7-二甲氧基喹唑啉-2-基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(Rf＝0.40，20:80v/v甲醇/乙酸乙酯洗脱)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.26(s,1H),6.79(s,1H),4.45(brs,1H),4.33(t,J＝7.9Hz,2H),3.92(dd,J＝8.5和5.6Hz,2H),3.89(s,3H),3.86(s,3H),1.45(s,9H)；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)376(100)[M+H]+；νmax 3329,3215,2974,1685,1640,1574,1497,1465,1454,1441,1383,1345,1241,1210,1158,1103,1000,842,783cm–1.在0℃下，将以上获得的(1-(4-氨基-6,7-二甲氧基喹唑啉-2-基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯在DCM(2mL)中的溶液用三氟乙酸(0.5mL)逐滴处理。将所得混合物在20℃下搅拌直至完成转化(通过TLC观察)。然后将溶剂蒸发以获得2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺的TFA盐。然后将产物溶于吡啶(2mL)中，将溶液搅拌15min，然后蒸发，经过短的硅胶层，得到标题化合物(Rf＝0.24，10:90 v/v甲醇饱和氨/二氯甲烷洗脱)(100.0mg,87％)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.11(brs,1H),7.39(s,1H),6.87(s,1H),6.72(s,2H),4.80(m,1H),4.37(t,J＝8.3Hz,2H),4.05(dd,J＝9.0和5.4Hz,2H),3.89(s,3H)；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)276(100)[M+H]+；νmax 3343,3195,2957,1640,1606,1558,1492,1438,1411,1376,1345,1277,1237,1210,1128,1097,1031,997,839,785cm–1.
制备(viii).2-氯-6,7-二甲氧基-N-(2-(吡啶-2-基)乙基)喹唑啉-4-胺
根据一般方法B，将2,4-二氯-6,7-二甲氧基喹唑啉(400.0mg,1.54mmol)、2-吡啶基乙胺(370μL,3.08mmol)、三乙胺(215μL,1.54mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液在18℃下搅拌18h。获得白色固体状的2-氯-6,7-二甲氧基-N-(2-(吡啶-2-基)乙基)喹唑啉-4-胺(510.0mg,96％)(Rf＝0.14,97.5:2.5 v/v甲醇/二氯甲烷)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.52(d,J＝4.7Hz,1H),8.03(brs,NH),7.65(t,J＝7.6Hz,1H),7.24(d,J＝7.8Hz,1H),7.22–7.14(m,1H),7.07(s,1H),7.00(s,1H),4.00(s,3H),3.97(m,重叠,2H),3.93(s,3H),3.15(t,J＝6.0Hz,2H)；13C NMR(101MHz,氯仿-d)δ160.3,159.9,156.4,154.8,148.9,148.8,147.7,137.3,124.0,122.1,107.2,107.2,100.3,56.3,56.1,40.8,35.7；MS(ESI,+ve)m/z367和369[(M+Na),33和100％]；νmax 3266,2935,1619,1587,1522,1499,1474,1432,1405,1355,1253,1219,1174,1144,1042,1000,854,801,788,772,757,638cm–1.
合成实施例1–BT2001
根据一般方法C由(4-(三氟甲基)苯基)硼酸(15mg,79μmol)与N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(20mg,52.3μmol)反应制备并纯化，得到白色粉末状的化合物BT2001(20mg,78％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.66(d,J＝8.1Hz,2H),8.14(s,1H),7.73(d,J＝8.1Hz,2H),7.72(d,J＝6.9Hz,1H),7.41(d,J＝8.1Hz,1H),7.30(s,1H),7.26–7.22(m,1H),7.15(ddd,J＝7.9,7.1,0.8Hz,1H),7.11(d,J＝2.4Hz,1H),6.59(s,1H),5.58(s,1H),4.14–4.09(m,2H),4.02(s,3H),3.81(s,3H),3.27(t,J＝6.6Hz,2H)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ158.5,158.1,154.3,148.9,147.2,136.4,131.2(q,JC-F＝32.2Hz),128.3,127.7,125.10(q,JC-F＝3.6Hz),124.4(q,JC-F＝272.2Hz),122.3,122.2,119.7,118.7,113.4,111.4,108.1,107.6,99.5,56.2,56.1,42.3,24.9；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)493(100)[M+H]+,515(15)[M+Na]+；(+)-HRESIMS C27H24N4O2[M+H]+计算值493.1846,测得493.1851；νmax 3434,1618,1592,1575,1524,1499,1428,1321,1255,1212,1111,1065,1001,858cm-1.
合成实施例2–BT2002
根据一般方法C由[4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基]硼酸频哪醇酯(26mg,79μmol)与N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(20mg,52.3μmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:10 v/v MeOH/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色粉末状的化合物BT2002(18mg,63％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.57(d,J＝7.7Hz,2H),8.36(s,1H),7.69(d,J＝7.8Hz,1H),7.50(d,J＝7.7Hz,2H),7.39(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(s,1H),7.21(t,J＝7.5Hz,1H),7.11(t,J＝7.5Hz,1H),7.05(s,1H),6.65(s,1H),5.77(s,1H),4.10–4.04(m,2H),4.00(s,3H),3.91–3.76(m,2H),3.81(s,3H),3.49(s br,2H),3.23(t,J＝6.2Hz,2H),2.52(s br,2H),2.41–2.31(s br,2H),2.34(s,3H)；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)573(100)[M+Na]+,551(80)[M+H]+；(+)-HRESIMS C32H35N6O3[M+H]+计算值551.2765,测得551.2771；νmax 2925,1619,1584,1526,1501,1425,1362,1213,1000,854,734cm-1.
合成实施例3–BT2005
根据一般方法C由吲哚-5-硼酸频哪醇酯(19mg,79μmol)与N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(20mg,52.3μmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:10 v/v MeOH/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色粉末状的化合物BT2005(6mg,26％)。1H NMR未观察到N-H(CD3OD,400MHz)δ8.51(s,1H),8.01(d,J＝8.6Hz,1H),7.63(d,J＝7.7Hz,1H),7.44(d,J＝8.6Hz,1H),7.35–7.30(m,3H),7.13(s,1H),7.10–7.05(m,2H),6.96(表观t,J＝7.7Hz,1H),6.57–6.56(m,1H),4.00(表观t,J＝7.7Hz,2H),3.92(s,3H),3.87(s,3H),3.18(t,J＝7.5Hz,2H)；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)464(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C28H26N5O2[M+H]+计算值464.2081,测得464.2087；νmax 1628,1564,1515,1506,1456,1425,1370,1345,1277,1235,1213,1129,854cm-1.
合成实施例4–BT2007
根据一般方法C由异喹啉-4-硼酸频哪醇酯(20mg,79μmol)与N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(20mg,52.3μmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:10 v/v MeOH/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色粉末状的化合物BT2007(16mg,64％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ9.27(s,1H),9.20(s,1H),8.94(d,J＝8.6Hz,1H),8.47(s,1H),8.01(d,J＝8.2Hz,1H),7.75–7.71(m,1H),7.64–7.60(m,2H),7.35(d,J＝8.2Hz,1H),7.34(s,1H),7.21–7.12(m,1H),7.05(s,1H),7.03(t,J＝7.3Hz,1H)6.75(s,1H),6.03(s,NH),4.06–4.02(m,2H),4.00(s,3H),3.82(s,3H),3.21(表观t,J＝6.6Hz,2H)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ159.3,158.5,154.4,153.2,149.1,146.5,144.7,136.4,134.1,130.9,130.5,128.7,127.9,127.6,127.1,125.8,122.3,122.1,119.5,118.6,113.1,111.4,107.6,107.1,99.7,56.2,56.2,42.4,24.9；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)476(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C29H26N5O2[M+H]+计算值476.2081,测得476.2087；νmax1622,1584,1525,1500,1424,1359,797,742cm-1.
合成实施例5–BT2009
利用与Seijas J.A et al.(Tetrahedron Lett.2000,41,2215–2217)报道的类似的方法，在10mL卡合盖微波容器中加入2-氨基-4,5-二甲氧基苄腈(151mg,0.85mmol)、苄腈(87mg,0.84mmol)和叔丁醇钾(10mg,0.089mmol)的混合物，用氮气吹扫并进行微波辐照1分钟(180℃/1min.，斜坡时间1min.，最大功率200W)。将混合物冷却至rt并将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:1 v/v Et2O/石油醚洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色固体状的化合物BT2009(57mg,24％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.47–8.43(m,2H),7.51–7.43(m,2H),7.36–7.24(m,1H),7.33(s,1H),6.93(s,1H),5.41(s,2H),4.05(s,3H),4.02(s,3H)；(+)-LRESIMSm/z(相对丰度)282(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C16H16N3O2[M+H]+计算值282.1237,测得282.1244；νmax 3485,3379,1626,1578,1551,1467,1482,1365,1231,1210,851,774,702cm-1.
合成实施例6–BT2016
根据一般方法C由3,4-亚甲基二氧基苯基硼酸频哪醇酯(32mg,0.13mmol)与N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6-甲氧基喹唑啉-4-胺(30mg,85μmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:1 v/v EtOAc/石油醚洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色粉末状的化合物BT2016(21mg,56％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ10.86(s,1H),8.31(t,J＝5.6Hz,1H),8.11(dd,J＝8.2,1.6Hz,1H),7.99(d,J＝1.2Hz,1H),7.69–7.66(m,3H),7.42–7.34(m,2H),7.24(d,J＝2.3Hz,1H),7.11–7.06(m,1H),7.04–6.99(m,2H),6.10(s,2H),3.98–3.89(m,2H),3.89(s,3H),3.17(表观t,J＝7.6Hz,2H)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)一个信号受遮挡或重叠δ158.9,157.0,156.6,148.7,147.4,145.1,136.3,133.4,129.2,127.3,123.5,122.7,122.1,121.0,118.3,114.1,112.0,111.4,107.9,107.5,102.4,101.3,55.8,41.7,24.8；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)439(100)[M+H]+；(+)-HRESIMSC26H23N4O3[M+H]+计算值439.1765,测得439.1779；νmax 3433,3249,1627,1572,1557,1525,1441,1422,1337,1225,1104,1029,837cm-1.
合成实施例7–BT2030
根据一般方法C由苯基硼酸(16mg,0.13mmol)与N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6-甲氧基喹唑啉-4-胺(30mg,85μmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:1 v/v EtOAc/石油醚洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色粉末状的化合物BT2030(15mg,45％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ10.85(s,1H),8.49(dd,J＝7.7,2.0Hz,2H),8.38(sbr,1H),7.73(d,J＝9.1Hz,1H),7.72–7.64(m,2H),7.54–7.44(m,3H),7.42(dd,J＝9.1,2.7Hz,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.25(d,J＝2.7Hz,1H),7.09(t,J＝7.6Hz,1H),7.00(t,J＝7.4Hz,1H),4.01–3.94(m,2H),3.90(s,3H),3.18(t,J＝7.6Hz,2H)；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)395(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C25H23N4O[M+H]+计算值395.1866,测得395.1869；νmax 3432,1560,1533,1368,1240,1033,831,740,710cm-1.
合成实施例8–BT2031
根据一般方法C由[4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基]硼酸频哪醇酯(42mg,0.13mmol)与N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6-甲氧基喹唑啉-4-胺(30mg,85μmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:10 v/v MeOH/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色粉末状的化合物BT2031(29mg,65％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ10.85(s,1H),8.52(d,J＝8.3Hz,1H),8.38(t,J＝5.6Hz,1H),7.73(d,J＝9.0Hz,1H),7.70(d,J＝2.7Hz,1H),7.66(d,J＝7.8Hz,1H),7.48(d,J＝8.3Hz,2H),7.43(dd,J＝9.1,2.7Hz,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.25(d,J＝1.8Hz,2H),7.09(t,J＝7.3Hz,1H),6.99(t,J＝7.4Hz,1H),4.02–3.92(m,2H),3.90(s,3H),3.73–3.54(m,2H),3.45–3.27(m,2H),3.18(表观t,J＝7.6Hz,2H),2.42–2.26(m,4H),2.21(s,3H)；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)521(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C31H33N6O2[M+H]+计算值521.2660,测得521.2668；νmax 3298,2933,1611,1580,1533,1437,1361,1269,1238,1026,999,831,740cm-1.
合成实施例9–BT2036
将2,4-二氯-6,7-二甲氧基喹唑啉(100mg,0.39mmol)和1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌嗪(89mg,0.41mmol)在THF(4mL)中的溶液用三乙胺(54μL,0.77mmol)处理并搅拌72h。将混合物减压浓缩，得到残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:20 v/v MeOH/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色粉末状的2-氯-6,7-二甲氧基-4-(4-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)喹唑啉(170mg,97％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.45(s,1H),7.85(dd,J＝9.1,2.6Hz,1H),7.25(s,1H),7.19(s,1H),6.95(d,J＝9.1Hz,1H),3.93(s,3H),3.92(s,3H),3.92–3.86(m,8H)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ163.6,159.9,154.8,153.7,150.0,147.9,145.3(q,JC-F＝4.0Hz),134.6(q,JC-F＝2.9Hz),124.9(d,JC-F＝270.3Hz),113.4(q,JC-F＝32.3Hz),108.3,106.6,106.1,104.2,56.0,55.7,48.1(2C),43.5(2C)；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)454(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C20H20ClF3N5O2[M+H]+计算值454.1252,测得454.1246；νmax 1609,1581,1503,1420,1316,1237,1213,1078,854cm-1.然后根据一般方法C将一部分上述材料(33mg,73μmol)与苯基硼酸(13mg,0.11mmol)反应，反应完成之后获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:20 v/v氨甲醇/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色粉末状的化合物BT2036(15mg,42％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.56–8.50(m,2H),8.45(s,1H),7.69(dd,J＝9.0,2.5Hz,1H),7.53–7.42(m,3H),7.37(s,1H),7.19(s,1H),6.73(d,J＝9.0Hz,1H),4.07(s,3H),4.02(s,3H),3.96–3.86(m,8H)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ163.9,160.4,158.6,154.6,150.1,148.5,145.7(1,JC-F＝4.3Hz),138.6,134.6(q,JC-F＝3.1Hz),129.9,128.4(2C),128.0(2C),124.5(q,JC-F＝270.6Hz),115.7(q,JC-F＝33.0Hz),110.1,108.0,105.7,102.9,56.3,56.1,49.3(2C),44.5(2C).(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)496(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C26H25F3N5O2[M+H]+计算值496.1955,测得496.1960；νmax 2963,1612,1505,1413,1259,1246,1097,1083,1019,998,952,846,794,702cm-1.
合成实施例10–BT2048
根据一般方法C由2-甲氧基-5-吡啶硼酸(39mg,0.25mmol)与N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(65mg,0.17mmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:20 v/v MeOH/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色粉末状的化合物BT2048(29mg,65％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ10.85(s,1H),9.22(d,J＝2.3Hz,1H),8.64(dd,J＝8.7,2.3Hz,1H),8.19(t,J＝5.7Hz,1H),7.63(d,J＝7.6Hz,1H),7.63(s,1H),7.36(d,J＝8.1Hz,1H),7.24(d,J＝2.0Hz,1H),7.16(s,1H),7.08(t,J＝7.6Hz,1H),6.99(t,J＝7.4Hz,1H),6.91(d,J＝8.7Hz,1H),3.96–3.92(m,2H),3.93(m,6H),3.90(s,3H),3.15(表观t,J＝7.6Hz,2H)；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)456(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C26H26N5O3[M+H]+计算值456.2030,测得456.2024；νmax 3438,1621,1605,1578,1520,1494,1427,1369,1336,1251,1237,1212,1131,1002,742cm-1.
合成实施例11–BT2051
根据一般方法C由3-吡啶基硼酸频哪醇酯(52mg,0.25mmol)与N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(65mg,0.17mmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:20 v/v MeOH/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色粉末状的化合物BT2051(35mg,48％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ10.85(s,1H),9.61(s,1H),8.73–8.69(m,1H),8.66–8.63(m,1H),8.26(t,J＝5.7Hz,1H),7.69–7.62(m,2H),7.51(dd,J＝8.1,4.9Hz,1H),7.36(d,J＝8.1Hz,1H),7.25–7.20(m,2H),7.08(t,J＝7.5Hz,1H),6.99(t,J＝7.5Hz,1H),3.98–3.92(m,2H),3.94(s,3H),3.91(s,3H),3.21–3.12(m,2H)；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)426(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C25H24N5O2[M+H]+计算值426.1925,测得426.1921；νmax 1623,1591,1575,1527,1501,1432,1418,1216,1014,826,747cm-1.
合成实施例12–BT2052
根据一般方法D由(1S,2S)-伪麻黄碱盐酸盐(137mg,0.68mmol)与三乙胺(267μL,1.53mmol)和N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(65mg,0.17mmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:20 v/v氨甲醇/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色粉末状的化合物BT2052(56mg,64％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)1H未观察到或重叠δ8.10(s,1H),7.68(dd,J＝7.9,1.0Hz,1H),7.46–7.37(m,3H),7.36–7.27(m,2H),7.27–7.18(m,2H),7.14(ddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),7.08(d,J＝2.4Hz,1H),6.90(s,1H),6.44(s,1H),5.36(t,J＝5.0Hz,1H),4.76(d,J＝7.5Hz,1H),4.61(s br,1H),3.97(s,3H),4.02–3.89(m,2H),3.75(s,3H),3.20(t,J＝6.6Hz,2H),3.06(s,3H),1.23(d,J＝7.1Hz,3H)；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)512(100)[M+H]+；(+)-HRESIMSC30H34N5O3[M+H]+计算值512.2656,测得512.2676；νmax 1627,1580,1495,1420,1241,1213,1023,741cm-1.
合成实施例13–BT2053
根据一般方法D由1-乙基哌嗪(86μL,0.68mmol)与N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(65mg,0.17mmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:10 v/v氨甲醇/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到无色玻璃状的化合物BT2053(63mg,81％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ10.83(s,1H),7.82(t,J＝5.6Hz,1H),7.58(d,J＝7.8Hz,1H),7.42(s,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.18(s,1H),7.09–7.05(m,1H),7.00–6.96(m,1H),6.74(s,1H),3.86–3.70(m,6H),3.83(s,3H),3.80(s,3H),3.06(t,J＝7.7Hz,2H),2.43–2.38(m,4H),2.35(q,J＝7.2Hz,2H),1.03(t,J＝7.2Hz,3H)；(+)-LRESIMSm/z(相对丰度)461(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C26H33N6O2[M+H]+计算值461.2660,测得461.2657；νmax1627,1576,1489,1436,1420,1239,1209,1006,845,739cm-1.
合成实施例14–BT2056
根据一般方法C由4-甲氧基-苯基硼酸频哪醇酯(60mg,0.25mmol)与N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(65mg,0.17mmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:20 v/v MeOH/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色粉末状的化合物BT2056(63mg,82％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ10.86(s,1H),8.47–8.43(m,2H),8.10(t,J＝5.0Hz,1H),7.67(d,J＝7.8Hz,1H),7.62(s,1H),7.38(d,J＝8.1Hz,1H),7.25(s,1H),7.16(d,J＝1.3Hz,1H),7.10(t,J＝7.5Hz,1H),7.09–6.97(m,3H),3.99–3.92(m,2H),3.93(s,3H),3.90(s,3H),3.84(s,3H),3.17(t,J＝7.7Hz,2H)；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)455(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C27H27N4O3[M+H]+计算值455.2078,测得455.2083；νmax 3404,1622,1606,1588,1575,1523,1498,1427,1413,1362,1247,1212,1163,1030,843,742cm-1.
合成实施例15–BT2057
根据一般方法C由2-萘硼酸(44mg,0.25mmol)与N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(65mg,0.17mmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:5 v/v MeOH/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到无色针状的化合物BT2057(60mg,74％)。将化合物BT2057用二氯甲烷/甲醇重结晶，X-射线晶体结构在图7中示出。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ10.89(s,1H),9.05(s,1H),8.66(dd,J＝8.6,1.4Hz,1H),8.22(t,J＝5.5Hz,1H),8.05–7.96(m,3H),7.74(d,J＝7.8Hz,1H),7.66(s,1H),7.59–7.53(m,2H),7.38(d,J＝8.1Hz,1H),7.30(d,J＝2.0Hz,1H),7.26(s,1H),7.11(表观t,J＝7.4Hz,1H),7.01(表观t,J＝7.4Hz,1H),4.06–3.98(m,2H),3.96(s,3H),3.92(s,3H),3.22(表观t,J＝7.8Hz,2H)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)一个峰重叠δ158.6,157.9,153.9,148.3,146.8,136.7,136.3,133.7,132.8,128.7,127.6,127.5,127.4,127.0,126.6,126.2,125.3,122.8,121.0,118.4,118.3,112.1,111.5,107.5,102.2,56.0,55.7,41.8,25.1；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)475(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C30H27N4O2[M+H]+计算值475.2129,测得475.2134；νmax 3448,1620,1583,1524,1495,1422,1368,1215,856,787,743,725cm-1.
合成实施例16–BT2059
根据一般方法D由环丙基胺(47μL,0.68mmol)与N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(65mg,0.17mmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:10 v/v氨甲醇/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色固体状的化合物BT2059(10mg,81％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.28(s,1H),7.67(d,J＝7.9Hz,1H),7.39(d,J＝8.1Hz,1H),7.21(t,J＝7.5Hz,1H),7.11(t,J＝7.5Hz,1H),7.07(s,1H),6.91(s,1H),6.58(s,1H),5.64(s,1H),5.52(s,1H),3.96–3.90(m,2H),3.89(s,3H),3.73(s,3H),3.17(t,J＝6.6Hz,2H),2.94–2.81(m,1H),0.84–0.75(m,2H),0.61–0.56(m,2H)；(+)-LRESIMSm/z(相对丰度)404(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C23H26N5O2[M+H]+计算值404.2081,测得404.2088；νmax 1626,1580,1496,1459,1235,1209,1009,785,740cm-1.
合成实施例17–BT2060
根据一般方法D由色胺(109mg,0.68mmol)与N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(65mg,0.17mmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:10 v/v氨甲醇/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色固体状的化合物BT2060(22mg,26％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.08(s,1H),8.04(s,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.66(d,J＝8.0Hz,1H),7.40(dt,J＝8.2,0.8Hz,1H),7.36(dt,J＝8.0,0.8Hz,1H),7.24–7.21(m,1H),7.20–7.17(m,1H),7.13–7.09(m,2H),7.08(d,J＝2.3Hz,1H),7.04(d,J＝2.3Hz,1H),6.87(s,1H),6.45(s,1H),5.45(s br,2H),3.93(s,3H),3.92–3.81(m,4H),3.73(s,3H)；3.15(t,J＝6.5Hz,2H),3.12(t,J＝6.5Hz,2H)；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)507(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C30H31N6O2[M+H]+计算值507.2503,测得507.2508；νmax 1644,1580,1502,1454,1231,1210,739cm-1.
合成实施例18–BT2062
根据一般方法C由8-喹啉硼酸(44mg,0.25mmol)与N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(65mg,0.17mmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:30 v/v MeOH/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到无色针状的化合物BT2062(55mg,68％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ10.72(s,1H),8.82(dd,J＝4.1,1.5Hz,1H),8.43(dd,J＝8.3,1.5Hz,1H),8.17(t,J＝5.4Hz,1H),8.06(d,J＝8.1Hz,1H),7.87(d,J＝6.9Hz,1H),7.70(d,J＝7.7Hz,1H),7.67(s,1H),7.51(dd,J＝8.3,4.1Hz,1H),7.37(d,J＝7.7Hz,1H),7.25(d,J＝8.1Hz,1H),7.16(s,1H),7.11(d,J＝1.7Hz,1H),6.94(t,J＝7.5Hz,1H),6.54(t,J＝7.5Hz,1H),3.93(s,3H),3.90(s,3H),3.76–3.66(m,2H),3.07(表观t,J＝7.7Hz,2H)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ161.5,158.1,153.8,150.1,148.2,146.2,145.9,140.5,136.2,136.1,129.5,128.2,128.0,127.3,125.9,122.5,121.2,120.7,118.6,117.8,112.1,111.1,107.2,107.1,102.0,56.0,55.7,41.7,24.9；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)476(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C29H26N5O2[M+H]+计算值476.2081,测得476.2087；νmax1622,1585,1524,1502,1419,1356,1219,851,797,745,639cm-1.
合成实施例19–BT2090
根据一般方法C由4-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊烷-2-基)苄基)吗啉(119mg,0.39mmol)与N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(100mg,0.26mmol)反应制备，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:10氨甲醇/DCM洗脱]，浓缩适当级分之后得到白色粉末状的BT2090(57mg,42％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.81(s,1H),8.15(s,1H),7.74(d,J＝7.5Hz,1H),7.65(s,1H),7.59(d,J＝7.9Hz,1H),7.55(dd,J＝7.5,0.8Hz,1H),7.43–7.29(m,3H),7.18(d,J＝2.3Hz,1H),7.15(s,1H),7.04(ddd,J＝8.0,6.9,1.1Hz,1H),6.84(ddd,J＝8.0,6.9,1.0Hz,1H),3.98–3.88(m,8H),3.35–3.27(m,4H),3.87–3.80(m,2H),3.14–3.06(m,2H),2.21–2.10(m,4H)；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)524(100)[M+H]+；(+)-HRESIMS C31H34N5O3[M+H]+计算值524.2656,测得524.2662.
合成实施例20–BT2120
按照一般方法F用TFA(2.0mL)和DCM(8.0mL)将(1-(1H-吲哚-2-羰基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(383mg,1.22mmol)脱保护，用醚(10mL)打浆之后得到胶状的(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)(1H-吲哚-2-基)甲酮的TFA盐(348mg,87％)，不进一步纯化而直接用于下一步。磁力搅拌下将冷却至0℃的TFA盐在DMF(5mL)中的溶液用2,4-二氯-6,7-二甲氧基喹唑啉(274mg,1.06mmol)处理，随后逐滴加入三乙胺(595μL,4.24mmol)。将混合物在0℃下搅拌5h，然后在18℃下进一步搅拌18h。减压过滤收集沉淀，并且用DMF(5mL)然后醚(15mL)洗涤，得到白色粉末状的(3-((2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氨基)氮杂环丁烷-1-基)(1H-吲哚-2-基)甲酮(329mg,71％)，不进一步纯化而使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.66(s,1H),8.89(d,J＝6.4Hz,1H),7.72(s,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.45(d,J＝8.3Hz,1H),7.20(t,J＝8.0Hz,1H),7.12(s,1H),7.05(t,J＝7.3Hz,1H),6.90–6.86(m,1H),5.14–5.01(m,1H),5.00–4.92(m,1H),4.62–4.46(m,2H),4.32–4.18(m,1H),3.91(s,3H),3.90(s,3H).(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)438(80)[M+H]+,460(100)[M+Na]+；νmax 3303,1617,1577,1541,1516,1452,1432,1240,1149,960,736cm-1.将以上直接形成的产物(100mg,0.23mmol)进行钯催化的Suzuki–Miyaura反应并根据一般方法C与8-喹啉硼酸(59mg,0.35mmol)反应，获取残余物，将残余物进行快速柱层析[硅胶，1:10MeOH:DCM]，浓缩适当级分之后得到白色晶体状的BT2120(75mg,61％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.63(s,1H),8.94(dd,J＝4.4,1.7Hz,1H),8.70(s,1H),8.49(d,J＝8.5Hz,1H),8.15–8.04(m,2H),7.78(s,1H),7.72(t,J＝7.6Hz,1H),7.66–7.59(m,2H),7.44(d,J＝8.3Hz,1H),7.30(s,1H),7.20(t,J＝7.6Hz,1H),7.05(t,J＝7.5Hz,1H),6.83(d,J＝1.7Hz,1H),5.14–5.02(m,1H),4.90–4.80(m,1H),4.64–4.55(m,1H),4.50–4.41(m,1H),4.32–4.24(m,1H),3.96(s,3H),3.93(s,3H).(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)531(100)[M+H]+；νmax 3248,1602,1586,1519,1499,1447,1416,1218,794,743639cm-1.
合成实施例21–BT2148
1H-吲哚-6-羧酸甲酯
磁力搅拌下，将1H-吲哚-6-羧酸(5.00g,31.02mmol)在DMF(40mL)中的溶液用碳酸钾(4.29g,31.02mmol)处理并用碘甲烷(1.93mL,31.02mmol)逐滴处理。在室温下搅拌3h之后，将所得混合物用二乙醚(150mL)稀释，然后用水(2x 100mL)洗涤，之后在硫酸镁上干燥，过滤并在减压下浓缩。将随后的残余物进行快速柱层析[硅胶，20:80 v/v二乙醚/己烷]，并且浓缩适当级分提供浅黄色晶状固体的1H-吲哚-6-羧酸甲酯(4.29g,83％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.71(brs,1H),8.19(s,1H),7.84(dd,J＝8.4和1.3Hz,1H),7.67(d,J＝8.4Hz,1H),7.37(t,J＝2.8Hz,1H),6.60(s,1H),3.95(s,3H)；13C NMR(100MHz,氯仿-d)δ168.5,135.3,131.7,127.8,123.6,120.9,120.4,113.7,103.0,52.1；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)198(100)[M+Na]+；νmax 3337,1680,1617,1569,1508,1438,1335,1290,1262,1220,1205,1128,1115,1084,982,911,828,775,736,659cm–1.
3-(氯磺酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯
将1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.10g,6.28mmol)小份加入至剧烈搅拌的氯磺酸(2mL)。15min之后，将混合物小心地移液至置于冰浴中的包含乙酸乙酯(30mL)的烧瓶中。然后将所得混合物缓慢地倒入冰中并用乙酸乙酯(3x30mL)萃取分离的水层。将合并的有机相用NaHCO3(饱和水溶液，1x 50mL)、盐水(1x 50mL)洗涤，然后在硫酸镁上干燥，过滤并在减压下浓缩。将随后的残余物进行快速柱层析[硅胶，80:20 v/v二乙醚/己烷]，并且浓缩适当级分(Rf＝0.36,80:20 v/v二乙醚/己烷)提供黄色晶状固体的3-(氯磺酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.10g,64％)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ12.08(s,1H),8.55(d,J＝3.4Hz,1H),8.35(s,1H),8.05(dd,J＝8.5和1.3Hz,1H),8.00(d,J＝8.5Hz,1H),3.92(s,3H)；13C NMR(100MHz,丙酮-d6)δ167.1,136.6,136.2,127.4,126.7,124.8,120.0,119.6,116.1,52.5；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)270(70)[M–Cl+MeOH]+；νmax 3287,1710,1625,1495,1438,1367,1311,1294,1215,1159,1116,1087,1018,766cm–1.
BT2148
在0℃下，将3-(氯磺酰基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(149.1mg,0.54mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液用2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(50mg,0.18mmol)在吡啶(0.5mL)中的溶液处理。30min之后，允许将所得混合物升温至20℃保持2h。将溶剂蒸发并将由此获得的残余物进行快速柱层析[硅胶，10:90 v/v甲醇/二氯甲烷洗脱]以在浓缩适当级分(Rf＝0.22)之后得到白色固体状的BT2148(75mg,75％)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ11.57(s,1H),8.33(s,1H),8.15(s,1H),8.03(d,J＝8.5Hz,1H),7.91(dd,J＝8.5和1.4Hz,1H),7.32(s,1H),7.17(d,J＝9.5Hz,1H),6.74(s,1H),6.57(s,1H),4.31(m,1H),4.02(t,J＝8.2Hz,2H),3.91(s,3H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.64(dd,J＝8.9和5.7Hz,2H)；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)513(100)[M+H]+；HRMS(ESI,+ve)测得:[M+H]+513.1555,C23H25N6O6S应为513.1556；νmax 3180,1703,1649,1625,1565,1486,1455,1438,1380,1311,1241,1210,1140,1105,1019,999,844,768cm–1.
合成实施例22–BT2162和BT2172
根据一般方法E，将N2-(2-氨基乙基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-2,4-二胺(120.7mg,0.46mmol)、根据Dost,et al.(J.Prakt.Chem.1985,327,109)的方法制备的5-苯基-1,3,4-噁二唑-2-羧酸乙酯(50.0mg,0.23mmol)在乙醇(1mL)中的溶液在80℃下辐照3h。获得白色固体状的BT2162(91.0mg,91％)(Rf＝0.24,10:90 v/v甲醇/二氯甲烷)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.93(brs,1H),8.04(d,J＝7.1Hz,2H),7.67(m,1H),7.61(m,2H),7.43(s,1H),7.16(brs,2H),6.91(s,1H),6.52(brs,1H),3.86(s,3H),3.78(s,3H),3.51(s,4H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.9,161.2,159.1,158.6,154.1,153.1,147.8,144.8,132.6,129.5(2C),127.0(2C),122.8,104.8,103.9,103.3,55.9,55.4,41.2,39.9；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)436(100)[M+H]+；HRMS(ESI,+ve)测得:(M+H)436.1719,C21H22N7O4应为436.1733；νmax 3246,2969,1675,1648,1601,1578,1547,1503,1451,1384,1366,1318,1276,1235,1210,1112,1006,829,709cm-1.
BT2172
磁力搅拌下，维持在0℃(冰水浴)下，将BT2162(22.5mg,52μmol)在二噁烷(3mL)中的悬浮液用HCl溶液(100μL，二噁烷中4M)逐滴处理。将混合物搅拌5min然后通过温和的氮气流浓缩，然后用醚(2mL)打浆固体并将残余物保持在高真空下1h，得到BT2172(20mg,82％)，白色粉末状的BT2162的盐酸盐。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.28(br s,1H),9.47(t,J＝5.7Hz,1H),8.81(br s,1H),8.60(br s,1H),8.07(d,J＝7.6Hz,2H),7.86(br s,1H),7.74–7.56(m,4H),7.00(br s,1H),3.88(s,3H),3.82(s,3H),3.65–3.61(m,2H),3.59–3.55(m,2H)；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)436[(M+H)+,100％].
合成实施例23–BT2164
根据一般方法B，将2,4-二氯-6,7-二甲氧基喹唑啉(390.0mg,1.52mmol)、苯乙胺(382μL,3.04mmol)、三乙胺(212μL,1.52mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液在18℃下搅拌18h。获得白色固体状的2-氯-6,7-二甲氧基-N-苯乙基喹唑啉-4-胺(500.0mg,96％)(Rf＝0.21,50:50 v/v乙酸乙酯/己烷)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.30–7.27(m,2H),7.20–7.23(m,3H),7.03(s,1H),6.88(s,1H),6.26(t,J＝5.7Hz,1H),3.87–3.91(m,重叠,2H),3.88(s,3H),3.83(s,3H),3.00(t,J＝7.1Hz,2H)；13C NMR(101MHz,氯仿-d)δ159.9,156.2,154.9,149.0,147.8,138.7,128.9(2C),128.7(2C),126.7,106.9,106.9,100.0,56.2,56.1,42.6,35.2；MS(ESI,+ve)m/z 366.1[(M+Na),100％]；νmax 3399,3279,2936,1621,1582,1530,1508,1454,1425,1340,1240,1221,1146,942,851,750,700cm–1.根据一般方法C，将2-氯-6,7-二甲氧基-N-苯乙基喹唑啉-4-胺(50.0mg,0.14mmol)、喹啉-8-基硼酸(37.7mg,0.21mmol)、K2CO3(100.5mg,0.72mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(5.1mg,0.007mmol)在二甲氧基乙烷-水-乙醇(2mL)中的溶液在120℃下辐照25min。获得黄绿色固体状的BT2164(60.0mg,94％)(Rf＝0.33,10:90 v/v甲醇/二氯甲烷)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.74(brs,NH),9.07(s,1H),8.67(d,J＝7.4Hz,1H),8.31(d,J＝8.0Hz,1H),8.03(d,J＝8.0Hz,1H),8.00(s,1H),7.69(t,J＝7.7Hz,1H),7.52(dd,J＝8.3,4.0Hz,1H),7.32(s,1H),7.16–7.24(m,5H),4.05(s,3H),3.98(s,3H),3.81(t,J＝7.5Hz,2H),3.07(t,J＝7.5Hz,2H)；13C NMR(101MHz,氯仿-d)δ158.5,157.9,154.9,150.4,149.4,146.0,139.7,137.7,132.3,132.1,131.1,129.1(2C),128.8,128.5(2C),126.7,126.3,121.6,107.4,104.1,103.1,56.9,56.6,43.1,35.3；MS(ESI,+ve)m/z 437.1[(M+H),100％]；HRMS(ESI,+ve)测得:(M+H)+437.1978,C27H25N4O2应为437.1978；vmax 3393,3235,3027,1625,1597,1549,1514,1479,1401,1279,1232,1126,1036,794cm–1.
合成实施例24–BT2167
根据一般方法E，将2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(100.0mg,0.36mmol)、5-苯基-1,3,4-噁二唑-2-羧酸乙酯(52.8mg,0.24mmol)在乙醇(1mL)中的溶液在80℃下辐照4h。获得白色固体状的BT2167(40.0mg,25％)(Rf＝0.28,5:95 v/v甲醇/二氯甲烷)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.98(d,J＝7.2Hz,1H),8.11(m,2H),7.66(m,3H),7.44(s,1H),7.26(brs,2H),6.79(s,1H),4.81(h,J＝7.3Hz,1H),4.29(t,J＝8.2Hz,2H),4.08(dd,J＝8.6和5.7Hz,2H),3.83(s,3H),3.79(s,3H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.9,161.3,160.3,158.3,154.2,152.8,148.5,145.0,132.7,129.5(2C),127.1(2C),122.7,105.0,103.7,103.1,56.4(2C),55.8,55.5,39.9；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)448[(M+H)+,100％]；HRMS(ESI,+ve)测得:(M+H)+448.1732,C22H22N7O4应为448.1733；νmax 3341,2871,2393,1672,1651,1624,1556,1479,1452,1434,1414,1377,1336,1240,1214,1005,851cm–1.
合成实施例25–BT2169和BT2173
磁力搅拌下，0℃下，将1H-吲哚-2-羧酸(3.56g,22.1mmol)在DCM(80mL)中的悬浮液用草酰氯(1.99mL,23.2mmol)逐滴处理，然后DMF(1滴)处理。将混合物在0℃下搅拌1h，然后移除冷浴并在rt下继续搅拌1h。然后将澄清的溶液在40℃下的水浴中用加热的温和氮气流浓缩。然后将所得棕褐色粉末置于高真空(1mm Hg)下1h并重新溶解于二噁烷(60mL)，逐滴加入2-肼基-2-氧代乙酸乙酯(2.92g,22.1mmol)随后碳酸氢钠(1.86,22.1mmol)，然后在45–50℃下磁力搅拌18h。然后将混合物过滤并将滤液减压浓缩，得到棕褐色固体，将其用冷醚(15mL)洗涤，得到2-(2-(1H-吲哚-2-羰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯(2.08g)，不进一步纯化而直接使用。MS(ESI,+ve)m/z 298[(M+Na),100％].将一部分以上形成的产物(1.00g,3.64mmol)悬浮于磷酰氯(5mL)中并在65℃和氮气气氛下磁力搅拌4h。通过在高真空下短程蒸馏去除磷酰氯，加入水(100mL，冰冷的)并搅拌0.2h。收集橙色沉淀并通过快速层析(1:10v/v二乙醚/二氯甲烷)纯化，得到黄色粉末状的5-(1H-吲哚-2-基)-1,3,4-噁二唑-2-羧酸乙酯(351mg,38％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.71(s,1H),7.72(d,J＝8.1Hz,1H),7.60(d,J＝8.3Hz,1H),7.42–7.35(m,2H),7.20(表观t,J＝7.6Hz,1H),4.58(q,J＝7.1Hz,2H),1.50(t,J＝7.1Hz,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ161.4,155.9,154.2,137.9,127.6,126.0,122.2,121.4,119.7,112.2,108.4,63.6,14.1；MS(ESI,+ve)m/z 280[(M+Na),100％].
根据一般方法E，将N2-(2-氨基乙基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-2,4-二胺(102.4mg,0.38mmol)、5-(1H-吲哚-2-基)-1,3,4-噁二唑-2-羧酸乙酯(50.0mg,0.19mmol)在乙醇(1mL)中的溶液在80℃下辐照3h。获得白色固体状的BT2169(80.0mg,87％)(Rf＝0.22,15:85 v/v甲醇/二氯甲烷)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.37(s,1H),9.93(s,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.49(d,J＝8.3Hz,1H),7.45(s,1H),7.29(t,重叠,J＝7.2Hz,1H),7.26(s,重叠,1H),7.21(brs,重叠,NH2),7.11(t,J＝7.5Hz,1H),6.93(s,1H),6.57(brs,1H),3.88(s,3H),3.79(s,3H),3.52(s,4H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ161.3,160.3,158.8,157.9,154.2,153.1,147.6,144.9,138.0,127.2,124.6,121.7,120.5,120.4,112.4,106.1,104.8,104.0,103.3,55.9,55.5,41.4,39.9；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)475[(M+H)+,100％]；HRMS(ESI,+ve)测得:(M+H)+448.1732,C22H22N7O4应为448.1733.νmax 3465,3331,3216,3158,2966,1681,1636,1609,1572,1505,1484,1460,1397,1346,1320,1277,1238,1228,1212,1183,1109,1007,831,814,736cm–1.
BT2173
磁力搅拌下，维持在0℃(冰水浴)下，将BT2169(21.7mg,52μmol)在二噁烷(3mL)中的悬浮液用HCl溶液(100μL，二噁烷中4M)逐滴处理。将混合物搅拌5min然后通过温和的氮气流浓缩，然后用醚(2mL)打浆固体并将残余物保持在高真空下1h，得到BT2173(19.5mg,82％)，白色粉末状的BT2169的盐酸盐。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)一个NH未观察到δ12.42(s,1H),9.47(t,J＝5.7Hz,1H),8.84(br s,1H),8.62(br s,1H),7.89(s,1H),7.72(s,1H),7.69(d,J＝8.2Hz,1H),7.49(d,J＝8.3Hz,1H),7.32–7.26(m,2H),7.12(t,J＝7.5Hz,1H),6.99(br s,1H),3.89(s,3H),3.82(s,3H),3.71–3.61(m,2H),3.64–3.53(m,2H).
合成实施例26–BT2170
根据一般方法E，将N2-(2-氨基乙基)-6,7-二甲氧基-N4-苯乙基喹唑啉-2,4-二胺(101mg,0.24mmol)、5-(1H-吲哚-2-基)-1,3,4-噁二唑-2-羧酸乙酯(30.0mg,0.14mmol)在乙醇(1mL)中的溶液在80℃下辐照3h。获得黄色固体状的BT2170(70.0mg,94％)(Rf＝0.14,3.5:96.5 v/v甲醇饱和氨/二氯甲烷)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ10.45(s,NH),8.03(d,J＝7.5Hz,2H),7.58–7.37(m,4H),7.31–7.14(m,5H),6.59(s,1H),5.40(brs,重叠,NH),(brs,重叠,NH),4.11(s,3H),3.81(s,3H),3.77(q,重叠,J＝6.6Hz,2H),3.70(s,4H),2.94(t,J＝7.0Hz,2H)；13C NMR(100MHz,氯仿-d)δ166.0,159.9,159.3,159.0,154.80,153.8,148.1,146.0,139.3,132.4,129.2(2C),129.0(2C),128.8(2C),127.5(2C),126.7,123.2,106.9,104.1,100.4,56.6,56.2,44.2,42.3,41.1,35.6；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)540.3(100)[M+H]+；HRMS(ESI,+ve)测得:[M+H]+540.2356,C29H30N7O4应为540.2359.[M+Na]+562.2182,C29H29N7O4Na应为562.2179；νmax 3402,2934,1680,1626,1582,1547,1504,1474,1451,1354,1316,1250,1233,1213,1014,855,710cm–1.
合成实施例27–BT2171
根据一般方法C，将N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(50.0mg,0.13mmol)、1,4-苯并二噁烷-6-硼酸(35.5mg,0.19mmol)、K2CO3(90.2mg,0.65mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(4.6mg,0.006(5)mmol)在二甲氧基乙烷-水-乙醇(2mL)中的溶液在120℃下辐照25min。获得白色固体状的BT2171(40.0mg,63％)(Rf＝0.25,70:30 v/v乙酸乙酯/己烷)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.86(s,NH),8.11(t,J＝5.5Hz,NH),8.03–7.98(m,2H),7.67(d,J＝7.8Hz,1H),7.61(s,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,1H),7.24(d,J＝2.2Hz,1H),7.15(s,1H),7.09(t,J＝8.0Hz,1H),7.01(t,J＝7.8Hz,1H),6.94(d,J＝8.4Hz,1H),4.30(s,4H),3.93(s,3H),3.91(m,重叠,2H),3.89(s,3H),3.16(m,重叠,2H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ158.4,157.5,153.8,147.9,146.7,144.9,143.0,136.3,132.6,127.3,122.7,121.0,120.8,118.3,118.3,116.7,116.3,112.1,111.4,107.34,107.2,102.1,64.3,64.1,56.0,55.7,41.7,25.0；MS(ESI,+ve)m/z 483.2[(M+H),100％]；HRMS(ESI,+ve)测得:(M+H)+483.2035,C28H27N4O4应为483.2032；νmax 3307,2932,1622,1577,1528,1502,1457,1433,1420,1359,1313,1283,1259,1237,1222,1210,1171,1127,1065,1049,1025,894,740cm–1.
合成实施例28–BT2177
1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰肼
将1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酸甲酯(882mg,5.20mmol)在二噁烷(5mL)中的溶液用一水合肼(1.51mL,31mmol)处理并回流18h。将反应混合物冷却，通过减压过滤收集固体并用醚(10mL)洗涤晶体，得到白色细小晶体状的1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰肼(553mg,60％)，不进一步纯化而使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.03(s,1H),9.27(s,1H),8.43(d,J＝7.8Hz,1H),8.26(d,J＝4.6Hz,1H),8.08(s,1H),7.16(dd,J＝7.9,4.7Hz,1H),4.34(s,2H).
5-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-羧酸乙酯
0℃下，将1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰肼(500.0mg,2.84mmol)在DCM(20mL)中的溶液用三乙胺(1.19mL,8.51mmol)处理，然后用氯氧代乙酸乙酯(0.33mL,2.98mmol)逐滴处理。将混合物在相同温度下搅拌30min，然后加热至18℃保持30min，之后加入对甲苯磺酰氯(541.0mg,2.84mmol)。获得白色固体状的5-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-羧酸乙酯(120.0mg,16％)(Rf＝0.31,2:98 v/v甲醇/二乙醚)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.79(s,1H),8.48(s,1H),8.47–8.36(m,2H),7.34(dd,J＝7.8,4.8Hz,1H),4.45(q,J＝7.1Hz,2H),1.37(t,J＝7.1Hz,3H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ162.9,154.8,154.2,148.7,144.7,130.2,128.6,117.9,116.6,97.5,62.8,13.9；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)281.1(100)[M+Na]+；νmax 3140,2993,2817,1732,1624,1578,1533,1495,1470,1411,1330,1265,1167,1037,1014,839,808,780,730cm–1.
BT2177
根据一般方法E，将N2-(2-氨基乙基)-6,7-二甲氧基-N4-苯乙基喹唑啉-2,4-二胺(80.0mg,0.30mmol)、5-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-羧酸乙酯(46.1mg,0.18mmol)在乙醇(1mL)中的溶液在80℃下辐照3h。获得淡黄色固体BT2177(60.0mg,71％)(Rf＝0.47,2.5:17.5:80 v/v/v甲醇饱和氨/甲醇/二氯甲烷)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.40(brs,NH),9.98(brs,NH),8.50–8.32(m,3H),7.41(s,1H),7.34(m,1H),7.05(brs,NH2),6.96(s,1H),6.42(brs,NH),3.90(s,3H),3.78(s,3H),3.51(s,4H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ162.8,161.6,160.0,157.4,154.5,153.7,149.2,149.0,145.1(CH+Cq),130.2,129.0,118.2,117.0,105.9,104.2,103.8,98.2,56.3,55.8,41.9,40.5；(+)-LRESIMS m/z(相对丰度)476.3(100)[M+H]+；HRMS(ESI,+ve)测得:(M+H)+476.1797,C22H22N9O4应为476.1795；νmax 3556,3398,3279,1686,1651,1630,1563,1502,1446,1313,1271,1231,1211,1184,1143,1103,997,852,807,791,766cm–1.
合成实施例29–BT2178
根据一般方法C，将2-氯-6,7-二甲氧基-N-(2-(吡啶-2-基)乙基)喹唑啉-4-胺(50.0mg,0.14mmol)、喹啉-8-基硼酸(37.6mg,0.21mmol)、K2CO3(100.2mg,0.72mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(5.1mg,0.007(3)mmol)在二甲氧基乙烷-水-乙醇(1.5mL)中的溶液在120℃下辐照25min。获得白色固体状的BT2178(55.0mg,87％)(Rf＝0.18,5:95 v/v甲醇饱和氨/二氯甲烷)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.83(d,J＝4.0Hz,1H),8.46(d,J＝4.6Hz,1H),8.41(d,J＝8.3Hz,1H),8.08(t,J＝5.1Hz,NH),8.03(d,J＝8.2Hz,1H),7.85(d,J＝7.0Hz,1H),7.68(t,J＝7.7Hz,1H),7.64(s,1H),7.61(t,J＝7.7Hz,1H),7.52(dd,J＝8.2,4.0Hz,1H),7.20–7.13(m,3H),3.90(s,3H),3.89(s,3H),3.80(q,J＝6.5Hz,2H),3.17(m,与MeOH重叠,2H)；13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ161.5,159.5,158.1,153.7,150.0,149.0,148.2,146.5,145.9,140.9,136.3,136.0,129.4,128.1,128.0,125.9,123.1,121.4,121.2,107.2,107.12,101.9,56.0,55.6,40.6,36.9；MS(ESI,+ve)m/z 438.3[(M+H),100％]；HRMS(ESI,+ve)测得:(M+H)+438.1929,C26H24N5O2应为438.1930；νmax 3266,2935,1619,1586,1522,1499,1474,1423,1355,1253,1219,1175,1145,1042,1000,855,836,801,788cm–1.
合成实施例30–BT2179
在10mL卡合盖微波容器中加入N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(75.0mg,0.19mmol)、2-吡啶基乙胺(117μL,0.98mmol)、N,N-二异丙基乙胺(63μL,0.49mmol)和正丁醇(2mL)的混合物。将管密封，然后进行微波辐照(120℃/2h，斜坡时间5分钟，最大功率250W)。将混合物冷却并减压浓缩，将所得残余物进行快速柱层析[硅胶，5:95 v/v甲醇饱和氨/乙酸乙酯洗脱]并浓缩适当级分(Rf＝0.39,5:95 v/v甲醇饱和氨/乙酸乙酯洗脱)以得到白色固体状的化合物BT2179(60.0mg,65％)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.38(d,J＝4.7Hz,1H),7.54(m,2H),7.32(d,J＝8.1Hz,1H),7.20(s,1H),7.15(m,2H),7.06(t,重叠,J＝7.4Hz,1H),7.04(s,1H),6.92(t,J＝7.4Hz,1H),6.76(s,1H),3.85(s,3H),3.84(m,重叠,2H),3.80(s,3H),3.76(m,重叠,2H),3.12(t,J＝7.4Hz,2H),3.07(t,J＝7.0Hz,2H)；13C NMR(101MHz,甲醇-d)δ169.1,168.9,168.6,163.7,157.5,157.0,154.7,146.4,146.1,136.9,133.1,131.3,130.8,130.2,127.5,127.4,121.9,120.2,113.2,112.9,111.9,64.6,64.1,51.1,50.4,47.2,34.2；MS(ESI,+ve)m/z 469.2[(M+H),100％]；HRMS(ESI,+ve)测得:(M+H)+469.2352,C27H29N6O2应为469.2352；νmax 3408,2933,1626,1583,1505,1457,1435,1359,1303,1234,1212,1008,853,744cm–1.
合成实施例31–BT2181
根据一般方法B，将2,4-二氯-6,7-二甲氧基喹唑啉(200.0mg,0.78mmol)、乙二胺(104μL,1.56mmol)、三乙胺(108μL,0.78mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液在18℃下搅拌18h。快速层析(Rf＝0.19,12.5:87.5 v/v甲醇饱和氨/二氯甲烷)得到乳白色固体状的N1-(2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)乙烷-1,2-二胺(200.0mg,91％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,NH),7.63(s,1H),7.05(s,1H),3.88(s,6H),3.49(t,J＝6.6Hz,2H),2.97(重叠,brs,NH2),2.81(t,J＝6.6Hz,3H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ160.2,155.2,154.3,148.4,147.1,107.0,106.5,102.4,56.1,55.8,44.3,40.6；MS(ESI,+ve)m/z 283[(M+H)+,100％].
根据一般方法C，将N1-(2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)乙烷-1,2-二胺(126.0mg,0.73mmol)、喹啉-8-基硼酸(189.0mg,1.09mmol)、K2CO3(503.3mg,3.64mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(25.6mg,0.03(6)mmol)在二甲氧基乙烷-水-乙醇(4mL)中的溶液在120℃下辐照25min。快速层析Rf＝0.14,15:15:95v/v/v甲醇饱和氨/甲醇/乙酸乙酯)，得到带有喹啉-8-基硼酸的黄色固体状的N1-(6,7-二甲氧基-2-(喹啉-8-基)喹唑啉-4-基)乙烷-1,2-二胺(200.0mg,73％)。MS(ESI,+ve)m/z 376[(M+H)+,100％].
将上述N1-(6,7-二甲氧基-2-(喹啉-8-基)喹唑啉-4-基)乙烷-1,2-胺(100.0mg,0.27mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液用(Z)-(((叔丁氧基羰基)氨基)(1H-吡唑-1-基)亚甲基)氨基甲酸叔丁酯(82.7mg,0.27mmol)处理并将所得反应混合物在18℃下搅拌18h。将溶剂蒸发，将残余物进行快速柱层析(硅胶，5:95 v/v甲醇饱和氨/二乙醚洗脱)并浓缩适当级分(Rf＝0.19,5:95v/v甲醇饱和氨/二乙醚洗脱)得到乳白色固体状的双Boc保护的胍衍生物(128.0mg,77.8％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ11.45(s,1H),9.14(d,J＝4.1Hz,1H),8.46(t,J＝5.3Hz,1H),8.28(d,J＝8.3Hz,1H),7.96(d,J＝7.6Hz,1H),7.93(d,J＝7.6Hz,1H),7.67(t,J＝7.6Hz,1H),7.49(dd,J＝8.3,4.1Hz,1H),7.31–7.29(m,1H),7.05(s,1H),7.04(s,1H),3.92(s,3H),3.66(s,3H),3.57(m,2H),3.51(m,2H),1.49(s,9H),1.45(s,9H)；13CNMR(101MHz,氯仿-d)δ163.6,161.5,159.0,156.6,153.9,153.1,150.2,148.3,146.7,146.5,140.8,136.9,130.5,128.9,128.3,126.7,121.1,107.9,107.2,101.0,83.1,79.3,56.1,56.0,40.3,39.9,28.4(3C),28.1(3C)；MS(ESI,+ve)m/z 618[(M+H)+,100％]；IR(ATR)νmax 3285,2980,2254,1720,1621,1582,1528,1501,1415,1367,1344,1252,1218,1134,1045,1021,905,724cm–1.
将以上形成的Boc保护的胍化合物在二氯甲烷(5mL)中的溶液用三氟乙酸(2.0mL)在0℃下逐滴处理。将所得混合物在18℃下搅拌直至完成转化(通过TLC观察)。然后将溶剂蒸发以获得黄色固体状的BT2181的TFA盐(100.0mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.88(t,J＝5.8Hz,NH),9.31–9.19(m,1H),9.07(d,J＝7.5Hz,1H),8.75(d,J＝8.2Hz,1H),8.41(d,J＝8.2Hz,1H),8.13(t,J＝6.3Hz,NH),7.92–7.87(m,2H),7.81(s,1H),7.74(s,1H),7.38(brs,3NH),4.04(s,3H),3.99–3.97(m,2H),3.94(s,3H),3.62–3.57(m,2H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ159.5,157.6,156.5,155.1,151.2,150.5,145.0,139.8,134.9,134.7,134.1,128.9,127.5,124.3,123.0,106.6,103.6,101.9,57.2,56.8,41.0,40.3；MS(ESI,+ve)m/z418[(M+H)+,100％]；HRMS(ESI,+ve)测得:(M+H)+418.1993,C22H24N7O2应为418.1991；IR(ATR)νmax 3333,3095,1710,1673,1621,1598,1549,1510,1471,1443,1424,1401,1274,1198,1176,1119,1105,1053,1042,1027,835,796,719cm–1.
合成实施例32–BT2187
根据一般方法E，将N1-(6,7-二甲氧基-2-(喹啉-8-基)喹唑啉-4-基)乙烷-1,2-二胺(103.2mg,0.27mmol)、5-苯基-1,3,4-噁二唑-2-羧酸乙酯(40.0mg,0.18mmol)和乙醇(1mL)的溶液在80℃下辐照3h。快速层析(Rf＝0.19,10:90 v/v甲醇饱和氨/二乙醚)得到乳白色固体状的BT2187(79.5mg,79％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.03–9.02(m,1H),8.64(brs,1H),8.24(d,J＝8.3Hz,1H),8.04(d,J＝7.0Hz,1H),7.99–7.92(m,2H),7.87(d,J＝8.3Hz,1H),7.66–7.58(m,1H),7.58–7.47(m,2H),7.47–7.38(m,3H),7.11(s,1H),6.95(s,1H),3.80(s,3H),3.65(m,5H),3.59(s,2H)；13C NMR(101MHz,氯仿-d)δ166.0,161.3,159.3,158.3,154.4,154.1,149.9,148.5,146.5,146.3,140.0,137.2,132.5,130.9,129.2(2C),128.8,128.6,127.4(2C),126.8,122.9,121.2,107.5,107.0,100.8,56.1,55.9,40.8,40.2.MS(ESI,+ve)m/z 548[(M+H),100％]；HRMS(ESI,+ve)测得:(M+H)+548.2044,C30H26N7O4应为548.2046；IR(ATR)νmax 3279,3060,3006,2937,2833,2251,1683,1622,1578,1548,1525,1499,1449,1421,1352,1245,1217,1174,1143,911,798,727,711cm–1.
合成实施例33–BT2184
在0℃下，将苯磺酰氯(45.5mg,0.40mmol)在二氯甲烷(2mL)和吡啶(1mL)中的溶液用N1-(6,7-二甲氧基-2-(喹啉-8-基)喹唑啉-4-基)乙烷-1,2-二胺(50.0mg,0.13mmol)处理。将所得混合物在相同温度下搅拌1h然后加热至18℃直至转化完成(通过TLC观察)。然后将溶剂蒸发，将残余物进行快速柱层析(硅胶，5:95 v/v甲醇饱和氨/乙酸乙酯洗脱)并浓缩适当级分(Rf＝0.30，5:95 v/v甲醇饱和氨/乙酸乙酯洗脱)以得到灰白色固体状的BT2184(50.0mg,44％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.00(d,J＝3.8Hz,1H),8.23(d,J＝8.2Hz,1H),8.08(d,J＝7.0Hz,1H),7.91(d,J＝8.2Hz,1H),7.66(t,J＝7.6Hz,1H),7.66(重叠,brs,NH),7.50(d,J＝7.6Hz,2H),7.42(dd,J＝8.1,4.1Hz,1H),7.15(t,J＝7.4Hz,1H),7.07(s,1H),7.04–7.01(m,2H),6.72(s,1H),6.63(brs,NH),3.89(s,3H),3.67(s,3H),3.52(m,2H),3.22(m,2H)；13C NMR(101MHz,氯仿-d)δ161.0,158.8,154.0,150.6,148.4,146.7,146.0,140.6,139.2,136.9,131.5,131.2,129.0,128.8(2C),126.5,126.3(2C),121.2,107.2,107.0,100.4,77.4,56.1,56.0,44.6,39.9；MS(ESI,+ve)m/z 516[(M+H),100％]；HRMS(ESI,+ve)测得:(M+H)+516.1695,C27H26N5O4S应为516.1706；IR(ATR)νmax 3273,3002,2936,2833,1623,1589,1526,1501,1420,1361,1321,1305,1258,1244,1217,1156,1092,999,796,754,689cm–1.
合成实施例34–BT2182
在10mL卡合盖微波容器中加入N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(100.0mg,0.26mmol)、乙二胺(261μL,3.91mmol)、N,N-二异丙基乙胺(159μL,0.91mmol)和正丁醇(2mL)的混合物。将管密封，然后进行微波辐照(120℃/2h，斜坡时间5分钟，最大功率250W)。将混合物冷却并减压浓缩，将所得残余物进行快速柱层析(硅胶，12.5:87.5 v/v甲醇饱和氨/二氯甲烷洗脱)并浓缩适当级分(Rf＝0.24。12.5:87.5 v/v甲醇饱和氨/二氯甲烷洗脱)，得到黄色油状的N4-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-N2-(2-氨基乙基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-2,4-二胺(95.0mg,89％)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.57(d,J＝7.9Hz,1H),7.33(d,J＝8.1Hz,1H),7.22(s,1H),7.10–7.06(m,2H),6.97(t,J＝7.5Hz,1H),6.80(s,1H),3.89(s,3H),3.85(重叠t,J＝7.3Hz,2H),3.82(s,3H),3.49(t,J＝6.2Hz,3H),3.14(t,J＝7.3Hz,2H),2.85(t,J＝6.2Hz,2H)；13C NMR(101MHz,甲醇-d4)δ161.2,161.0,155.8,149.0,146.8,138.2,129.0,123.4,122.3,119.5,119.4,113.9,112.2,105.3,105.1,104.0,56.7,56.2,44.8,43.1,42.6,26.3；MS(ESI,+ve)m/z 407.3[(M+H)+,100％].
将上述N4-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-N2-(2-氨基乙基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-2,4-二胺(84.0mg,0.21mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液用(Z)-(((叔丁氧基羰基)氨基)(1H-吡唑-1-基)亚甲基)氨基甲酸叔丁酯(70.5mg,0.23mmol)处理并将所得反应混合物在18℃下搅拌18h。将溶剂蒸发，将残余物进行快速柱层析(硅胶，5:95 v/v甲醇饱和氨/二乙醚洗脱)并浓缩适当级分(Rf＝0.19,5:95 v/v甲醇饱和氨/二乙醚洗脱)得到乳白色固体状的Boc保护的胍衍生物(110.0mg,82.0％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ11.50(s,1H),8.85(s,1H),8.57(m,1H),7.60(d,J＝8.0Hz,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.15(t,J＝7.5Hz,1H),7.06(t,J＝7.5Hz,1H),7.02(s,1H),6.82(s,1H),6.59(s,1H),5.95(brs,1H),4.86(brs,1H),3.94–3.83(重叠,m,2H),3.83(s,3H),3.62(m,7H),3.12(t,J＝6.3Hz,2H),1.47(s,9H),1.40(s,9H).13C NMR(101MHz,氯仿-d)δ163.5,159.4,159.3,156.7,154.2,153.0,148.7,145.2,136.4,127.7,122.3,122.0,119.4,118.6,113.3,111.5,105.6,104.1,101.2,83.0,79.4,55.9(3),
55.8(7),41.9,41.4,40.7,28.3(3C),28.0(3C),24.9；MS(ESI,+ve)m/z 649.5[(M+H)+,100％]；IR(ATR)νmax 3328,2977,1722,1615,1580,1499,1455,1413,1323,1294,1228,1211,1132,1050,1024,732cm–1.
将以上获得的Boc保护的胍化合物(70mg,0.11mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液用三氟乙酸(1.0mL)在0℃下逐滴处理。将所得混合物在20℃下搅拌直至完成转化(通过TLC观察)。然后将溶剂蒸发以获得乳白色固体状的BT2182的TFA盐(70.0mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.87(brs,1H),10.90(s,1H),9.40(brs,1H),8.36(brs,1H),7.93(brs,1H),7.70(s,1H),7.56(d,J＝7.9Hz,1H),7.36(d,J＝8.2Hz,1H),7.20(s,1H),7.07(t,J＝7.7Hz,1H),7.00–6.95(m,2H),3.89–3.84(重叠,m,8H),3.58(brs,2H),3.40(brs,2H),3.11(brs,2H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ159.6,157.6,155.6,153.2,147.1,136.7,135.8,127.6,123.4,121.4,118.8,118.6,111.9,111.9,104.9,102.6,98.7,65.4,56.6,56.5,42.6,24.8,15.6；MS(ESI,+ve)m/z 449.3[(M+H)+,100％]；HRMS(ESI,+ve)测得:(M+H)+449.2413,C23H29N8O2应为449.2413；IR(ATR)νmax 3310,3145,1673,1611,1580,1515,1432,1395,1278,1199,1176,1127,835,743,720cm–1.
合成实施例35–BT2179
根据一般方法D，将N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(75.0mg,0.19mmol)、2-吡啶基乙胺(117μL,0.98mmol)、N,N-二异丙基乙胺(63μL,0.49mmol)和正丁醇(1.5mL)的溶液进行微波辐照(120℃/2h，斜坡时间5分钟，最大功率250W)。快速层析(Rf＝0.38，5:95 v/v甲醇饱和氨/乙酸乙酯洗脱)得到乳白色固体状的BT2179(60.0mg,65％)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.38(d,J＝4.7Hz,1H),7.56–7.51(m,2H),7.32(d,J＝8.1Hz,1H),7.20(s,1H),7.19–7.13(m,2H),7.09–7.00(m,2H),6.92(t,J＝7.4Hz,1H),6.76(s,1H),3.86(s,3H),3.86–3.83(重叠,m,2H),3.80(s,3H),3.80–3.75(m,2H),3.12(app,t,J＝7.4Hz,2H),3.07(app,t,J＝7.0Hz,2H)；13C NMR(101MHz,甲醇-d4)δ161.1,161.0,160.6,155.8,149.6,149.0,146.7,138.5,138.1,129.0,125.2,123.3,122.9,122.3,119.6,119.4,113.9,112.2,105.2,105.0,103.9,56.7,56.2,43.1,42.4,39.2,26.3；MS(ESI,+ve)m/z469.2[(M+H)+,100％]；HRMS(ESI,+ve)测得:(M+H)+469.2352,C27H29N6O2应为469.2352；IR(ATR)νmax 3408,2933,2626,1583,1504,1457,1435,1359,1303,1234,1212,743cm–1.
合成实施例36–BT2185
磁力搅拌下，维持在0℃下，将3-氟苯甲酰肼(502mg,3.26mmol)在DCM(20mL)中的溶液用三乙胺(1.20mL,8.60mmol)处理然后逐滴加入氯氧代乙酸乙酯(0.33mL,2.98mmol)。将混合物搅拌0.5h然后加热并维持在18℃下0.5h，之后一次性加入对甲苯磺酰氯(543mg,2.85mmol)。将混合物搅拌18h，然后加入NaHCO3的饱和水溶液(10mL)并将溶液用DCM(2x15mL)萃取。然后将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并减压浓缩，得到残余物，通过快速层析(1:20 v/v二乙醚/DCM洗脱)纯化残余物，得到白色晶体状的5-(3-氟苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(442mg,66％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.99–7.95(m,1H),7.89–7.85(m,1H),7.57–7.51(m,1H),7.34–7.28(m,1H),4.56(q,J＝7.1Hz,2H),1.49(t,J＝7.2Hz,3H)；13C NMR(101MHz,氯仿-d)δ165.5(d,JC-F＝3.3Hz),164.2,161.7,155.6(d,J＝242.7Hz),131.3(d,JC-F＝8.1Hz),124.7(d,JC-F＝8.6Hz),123.5(d,JC-F＝3.2Hz),120.1(d,JC-F＝21.1Hz),114.7(d,JC-F＝24.5Hz),63.8,14.2.
根据一般方法E，将N2-(2-氨基乙基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-2,4-二胺(83.6mg,0.32mmol)、上文直接描述的5-(3-氟苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(50.0mg,0.21mmol)和乙醇(1mL)的溶液在80℃下辐照3h。快速层析(Rf＝0.32，8:92 v/v甲醇饱和氨/二氯甲烷)得到灰白色固体状的BT2185(85.0mg,88％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.94(brs,1H),7.87(d,J＝7.7Hz,1H),7.79(d,J＝9.0Hz,1H),7.66(q,J＝7.6Hz,1H),7.52(t,J＝8.2Hz,1H),7.41(s,1H),7.08(brs,2H),6.88(s,1H),6.44(brs,1H),3.86(s,3H),3.78(s,3H),3.52(brs,4H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ163.8(JC-F＝3.2Hz),162.2(JC-F＝245.6Hz),161.2,159.4,158.8,154.1,152.9,148.2,144.7,131.8(JC-F＝8.3Hz),124.8(JC-F＝8.9Hz),123.3(JC-F＝3.0Hz),119.5(JC-F＝21.1Hz),113.8(JC-F＝21.4Hz),105.1,103.8,103.3,55.8,55.4,41.3,39.9；MS(ESI,+ve)m/z 454.1[(M+H),100％]；HRMS(ESI,+ve)测得:(M+H)+454.1639,C21H21N7O4F要求454.1639；IR(ATR)νmax 3542,3412,3345,3231,3045,1681,1652,1605,1578,1554,1504,1455,1434,1364,1321,1227,1208,1112,998,852,830,789,727cm–1.
合成实施例37–BT2229
按照Banville,J et al in WO 2013/163279报道的方法，磁力搅拌下，将2-(2-苯甲酰基肼基)-2-氧代乙酸乙酯(790mg,3.35mmol)在无水THF(5mL)中的混合物在rt下用Lawesson试剂(1.35g,3.35mmol)处理，然后在回流下加热24h。减压去除溶剂并通过快速柱层析(硅胶，1:20 v/v EtoAc/DCM洗脱)纯化残余物，得到白色粉末状的5-苯基-1,3,4-噻二唑-2-甲酸乙酯(239mg,30％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.06–7.99(m,2H),7.59–7.46(m,3H),4.54(q,J＝7.1Hz,2H),1.48(t,J＝7.1Hz,3H)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ172.6,159.6,158.8,132.1,129.4(3C),128.3(2C),63.3,14.2；MS(ESI,+ve)m/z 257[(M+Na),100％].
根据一般方法E，将N2-(2-氨基乙基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-2,4-二胺(247mg,0.94mmol)、5-苯基-1,3,4-噻二唑-2-甲酸酯(110mg,0.47mmol)和乙醇(4mL)的溶液在80℃下辐照3h。快速层析(1:20 v/v甲醇饱和氨/二氯甲烷)得到黄色固体状的BT2229(177mg,83％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.04(br s,1H),8.08–7.99(m,2H),7.65–7.55(m,3H),7.42(s,1H),7.07(br s,2H),6.99(br s,1H),6.45(s,1H),3.94(s,3H),3.78(s,3H),3.56–3.47(m,4H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)一个峰模糊或重叠δ171.3,165.5,161.2,159.5,157.4,154.0,148.4,144.7,132.0,129.6(2C),129.1,127.9(2C),103.8,103.3,64.9,55.8,55.4,41.9,40.1；MS(ESI,+ve)m/z 452[(M+H),100％]；单晶体X-射线数据收集:CrysAlis PRO 1.171.38.46(Rigaku OD,2015)；晶胞精修:CrysAlis PRO 1.171.38.46(Rigaku OD,2015)；数据还原:CrysAlis PRO 1.171.38.46(Rigaku OD,2015)；用来解析结构的程序:SHELXT(Sheldrick,Acta Cryst.A71,3-8.2015)；用来精修结构的程序:SHELXL(Sheldrick,Acta Cryst.A71,3-8.2015)；分子图形学:Olex2(Dolomanov et al.,J.Appl.Cryst.42,339-341.2009)；用来准备出版材料的软件:Olex2(Dolomanov et al.,J.Appl.Cryst.42,339-341.2009).晶体数据:C21H21N7O3S Mr＝451.51单斜,P21/nβ＝97.834(9)°3Z＝4F(000)＝944Dx＝.415Mg m-3Cu Kα辐照,λ＝来自2892反射的晶胞参数θ＝5.1–71.8°μ＝1.70mm-1.T＝150K Plate,无色0.18x 0.09x0.02mm.
II.生物实施例
比较实施例I–在转基因RIP-OVAhi小鼠中建立I型糖尿病的过继转移：用于快速药物效力谱的急性实验I型糖尿病模型
在NOD小鼠中，因为不同胰岛中β细胞的异步破坏，自身免疫性疾病过程发展缓慢。实际上I型糖尿病仅在>90％的总胰岛β细胞团块已破坏之后发展。NOD小鼠中缓慢的疾病过程为免疫干预提供现实潜力，但不幸的是，受试药物的高通量筛选是不可行的。糖尿病的更急性的模型可以利用RIP-OVAhi转基因小鼠实验诱导，RIP-OVAhi转基因小鼠仅在胰岛β细胞中在大鼠胰岛素启动子(RIP)的控制下表达外源卵清蛋白(OVA)肽。幼稚OVA特异性CD8+(OT-I)和激活的OVA-特异性CD4+(OT-II)转基因T细胞过继转移之后，转基因T细胞运输至宿主淋巴结，在这里OT-I T细胞激活然后至表达OVA的胰岛，在表达OVA的胰岛它们快速诱导胰岛β细胞破坏和糖尿病，所有小鼠在细胞转移后第二周快速出现高血液葡萄糖水平(高血糖)。利用乙酰肝素酶敲除供体和受体小鼠品系，已证实这种I型糖尿病的急性模型是乙酰肝素酶依赖性的(图1)。与乙酰肝素酶正常小鼠中14天内I型糖尿病的发展相比，缺少乙酰肝素酶完全预防I糖尿病，并且小鼠在实验期间保持正常血糖(图1)。这些发现与这种高度侵袭性的“伪自身免疫性”疾病一起允许化合物的快速初步筛选以鉴定抑制I型糖尿病发展的化合物。利用I型糖尿病的RIP-OVAhi急性模型，发明人已证实以10mg/kg给药的乙酰肝素酶抑制化合物("BT-2012"，在US 62/433,639中公开，)以及以"BT-1056"和"BT-1055"表示的比较物乙酰肝素酶抑制化合物)在致糖尿病性tg T细胞的过继转移之后保护RIPOVAhi小鼠免受I型糖尿病诱导，大量小鼠在转移之后14天保持没有I型糖尿病(图2和3)。
比较实施例II–血液葡萄糖水平的对照
利用RIP-OVAhi转基因小鼠，测试乙酰肝素酶抑制化合物(以"BT-1055"表示)对血液葡萄糖水平的影响。幼稚OVA特异性CD8+(OT-I)和激活的OVA特异性CD4+(OT-II)转基因T细胞过继转移入一定数量的RIP-OVAhi小鼠之后，在用比较化合物处理的小鼠群体和给予盐水的对照组中在两周内定期监测血液葡萄糖(图3)。
比较实施例III–用硫酸寡糖(PI-88)处理对胰岛素生成的影响
db/db小鼠具有由瘦蛋白受体基因中的点突变所致的缺陷的瘦蛋白信号传导。血浆胰岛素水平在生命早期(10-14日龄)就开始升高，并且受影响的动物在它们3-4周龄时肥胖。动物是胰岛素抗性的，高甘油三酯血症的，并且具有受损的葡萄糖耐受性。
通过每日腹腔内注射将db/db小鼠用盐水或50mg/kg的PI-88处理。在处理终止时，分离胰岛并对胰岛素染色，并且通过定量形态学分析评价胰岛素表达的水平。图5显示与来自未被处理的野生型小鼠的胰岛相比，在用盐水处理的db/db小鼠中出现胰岛素表达的显著减少。但是用PI-88处理db/db小鼠导致胰岛中胰岛素的表达与盐水处理的db/db小鼠相比增加，并且接近野生型小鼠中的胰岛素表达水平。
比较实施例IV–用硫酸寡糖(PI-88)处理对硫酸乙酰肝素水平的影响通过腹腔内注射将db/db小鼠每日用盐水或50mg/kg的PI-88处理。在处理终止时分离胰岛并用阿利新蓝染色以使硫酸乙酰肝素可见，并且通过定量形态学分析评价胰岛的硫酸乙酰肝素含量。图6显示与来自未被处理的野生型小鼠的胰岛相比，在用盐水处理的db/db小鼠中出现胰岛的硫酸乙酰肝素含量的显著减少。但是用硫酸多糖处理db/db小鼠导致胰岛硫酸乙酰肝素水平与盐水处理的db/db小鼠相比增加，并且接近野生型小鼠胰岛中的硫酸乙酰肝素水平。
实施例V–受试化合物的一般筛选方案
1.乙酰肝素酶抑制：
利用标准酶促测定(Hammond E,et al.Development of a colorimetric assayfor heparanase activity suitable for kinetic analysis and inhibitorscreening.Anal Biochem.2010；396:112–116)可以测试本发明的乙酰肝素酶抑制化合物在10μM下的乙酰肝素酶抑制。可以进一步评价表现出50％或更大乙酰肝素酶抑制的分子以确定具体的乙酰肝素酶半最大抑制物浓度(IC50)。具有期望范围内(例如，100μM和以下、50μM和以下、10μM和以下、5μM和以下、2μM和以下等)的乙酰肝素酶抑制IC50的分子可以在适当时优先用于进一步的体外和体内筛选。
2.建立脱靶活性反向筛选：
第一类反向筛选可以用来确定式(I)的化合物的乙酰肝素酶抑制是否通过竞争性抑制而不是蛋白聚集发生。第二类反向筛选作为一大套生物化学表征的一部分，以鉴定可以改进的区域，所述改进是先导优化的一部分。例如，第二类反向筛选可以用来评价针对以下的脱靶活性：
·乙酰肝素酶相关的糖苷酶，包括(α,β)-葡糖苷酶和β-葡糖醛酸糖苷酶；
·硫酸乙酰肝素结合蛋白，包括VEGF、FGF-1和FGF-2；以及
·激酶抑制图以确定在靶与脱靶活性的比例。
3.体外毒性：
可以利用Jurkat细胞系和MTT测定测试式(I)的乙酰肝素酶抑制剂的剂量依赖性体外毒性，MTT测定提供线粒体功能的度量作为细胞活力的指征。数据表示为Tox50，是仅50％的细胞仍然存活的药物浓度。通常，具有200μM或更大的Tox50的化合物可以优先用于进一步评价。
4.体外ADME(吸收、分布、代谢和排泄):
利用标准方法，式(I)的化合物可以接受ADMET(吸收、分布、代谢、排泄和毒理学)特性的初始评价。
初始体外评价可以包括以下：
A.溶解度：在标准动力学溶解度测定中，于不同pH水平(pH 2.1、4.0和7.4)下用100μg/ml的靶溶解度测试化合物的溶解度。
B.PAMPA测定(膜通透性/吸收)：PAMPA测定是经过充分验证的膜通透性的指征度量，其使用人工脂质双层，并且越来越多地用于代替Caco2细胞。将化合物与已知的标准药物化合物进行比较，包括维拉帕米(高通透性)和Theophyline(低)。优先的分子需要高通透性。
C.肝微粒体测定：肝微粒体测定是用于确定药物候选物的氧化代谢稳定性的成熟方法。我们建议使用小鼠和人微粒体以在选择小鼠模型中的体内研究的候选物时支持决策。确定在多个时间点(0,5,15,30,45min)剩余的化合物百分比与标准药物化合物进行比较，包括普萘洛尔(高度稳定)、酮洛芬(中等程度稳定性)和维拉帕米(快速清除)。
D.蛋白结合：通过代谢和肾清除的组合确定药物候选物的血浆清除。具有高蛋白结合的药物候选物的肾清除降低，因为肾清除是尺寸依赖性的并且蛋白超过其上限。但是过量的蛋白结合可以限制对生物靶标的药物可及性。可接受的值通常可以为90-98％。利用平衡透析测量血浆中的游离药物浓度，与药物标准品进行比较，包括普萘洛尔(低结合)、帕罗西汀(中等)和氯沙坦(高)。优先考虑具有中等蛋白结合的化合物。
实施例VI–乙酰肝素酶抑制
如之前所述进行乙酰肝素酶抑制测定(Hammond et al.Anal Biochem,396(1):112-116(2010))。源自中国仓鼠卵巢细胞的重组人活性乙酰肝素酶来自R&D Systems。牛血清白蛋白包被的96孔微孔板(96F Maxisorp NNC#456537,Thermo Scientific)用于测定，并且通过用溶于包含0.05％(v/v)Tween-20的磷酸缓冲盐水(PBST)中的1％(w/v)BSA在37℃下温育板1h来制备。将板用PBST洗涤3次，甩干并在使用之前于4℃下储存最多2周。测定混合物通常在100μL的总体积中包含42.5mM乙酸钠缓冲液(pH5.0)、0.8nM乙酰肝素酶、100μM磺达肝素(ArixtraTM,Aspen Pharmacare)、5％(v/v)DMSO和不同浓度的抑制剂。通过加入磺达肝素开始反应之后，将平板用粘性膜密封并在37℃下温育20–24h。将100μL的0.1MNaOH中的1.69mM WST-1(Dojindo)溶液加入至测定混合物。将板重新密封并通过在60℃下温育1h显影，并且在584nm下测定吸光度。对于酶促测定，将受试化合物溶解并以不同浓度加入至测定，以计算抑制水平。
利用标准方法确定本发明的各种化合物的乙酰肝素酶抑制活性。表1中示出结果，表达为半最大抑制浓度(IC50)，是达到乙酰肝素酶的50％抑制所需要的本发明的化合物的浓度：
表1–乙酰肝素酶抑制(IC50)
利用化合物的一个子集进一步确定乙酰肝素酶抑制，与之前描述的乙酰肝素酶抑制剂OGT_2115直接比较，据报道OGT_2115具有400μM的相对乙酰肝素酶抑制活性以及其他生物活性(Courtney SM et al.Bioorg Med Chem Lett,15:2295-9(2005))。表2中示出每种受试化合物的平均IC50值，以及之前的OGT_2115(获得自Tocris Biosciences)。总的来说，受试化合物证实与对照OGT_2115相似或提高的乙酰肝素酶酶促抑制。
表2：与OGT_2115相比所选化合物的乙酰肝素酶抑制
实施例VII–视网膜光-氧化损伤之后乙酰肝素酶抑制剂的体内效力
材料和方法
动物实验
所有实验均按照在眼科和视觉研究中使用动物的ARVO声明进行。研究由澳大利亚国立大学动物实验伦理委员会批准。C57BL6J小鼠在单独通风的笼中并在5lux的12:12小时光照:黑暗循环中出生和生长，自由获得食物和水。将年龄匹配的成年小鼠(8-10周)随机分配至光损伤和昏暗饲养的对照(非光损伤)组。将光损伤组的动物连续暴露于100k lux白LED光1、3、5和7天。用单滴1％硫酸阿托品(8.3mg阿托品)在10am和6pm将瞳孔每天扩大两次。昏暗饲养的对照动物也每天将瞳孔扩大两次，但是返回昏暗循环光(12:12小时光照:黑暗，5lux光)。
光暴露装置
在强光暴露期间，将动物安置在塑料箱中(2只/箱)，自由获得食物和水。笼子的地板涂上了反射性的Perspex表面并用安装在塑料箱上方18cm处的100-W 65000k自然白LED(高CRI LED,Yuji,Beijing)照明。LED光具有比卤素或白炽灯泡更像日光的发射光谱。笼中的温度维持在～23±2℃，具有双排气系统以缓解产生自LED的任何热量，一个排气扇安装在LED光源旁，而另一个在笼子侧面。为了调节准确照明，每个箱均装有减光器并利用光表数据记录装置(Extech HD450)调整至100k lux。在光暴露的时间过程中，为动物提供垫草、食物和水，并且每天监测它们的行为。利用Prism 6(GraphPad Software,CA,USA)进行所有图表和统计分析。利用单向或双向方差分析(ANOVA)确定时间-过程数据集的显著趋势以确定统计显著性(p<0.05)。
利用视网膜电图(ERG)测量视网膜功能
进行全视野暗视ERG以评价昏暗饲养的对照和7天光损伤的动物的视网膜功能。简单地说，让小鼠黑暗适应过夜，通过腹腔内注射的赛拉嗪(10mg/kg)和氯胺酮(100mg/kg)麻醉并用单滴1％硫酸阿托品(8.3mg阿托品)扩大瞳孔。单或双-闪光模式分别用来引发混合(杆和锥)或分离的锥反应。混合反应的闪光刺激由基于LED的系统(FS-250A EnhancedGanzfeld,Photometric Solutions International,Melbourne)提供，在6.3log cd s m-2的刺激强度范围中(范围-4.4–1.9log cd s m-2)。刺激间间隔从最低强度的2s增加至最高强度的5min以允许完全恢复刺激间的b-波。在受试刺激之前给出400ms的1.9log cd s m-2的杆-饱和刺激之后获得1.6log cd s m-2的分离的锥反应。杆-饱和闪光之后的这个短暂间隔不允许恢复杆功能，从而恢复仅锥反应。从基线至a-波反应的波谷测量a-波振幅，并且从a-波的波谷至b-波的波峰测量b-波振幅。数据表示为平均波振幅±SEM(μV)。用Tukey的多重比较post-hoc检验进行双向ANOVA以比较在闪光刺激范围中来自对照和光损伤小鼠的反应。在Excel(Microsoft版本2013)中利用Solver函数用Naka-Rushton等式[R/Rmax＝I/(I+K)]拟合a-波和b-波数据以在4.4至1.9log cd s m-2的范围中从反应振幅(R)和闪光强度(I)确定Rmax(最大振幅)和K(半饱和常数)。利用Prism(GraphPad Software V5；GraphPadSoftware,Inc.,La Jolla,CA,USA)以及混合a-波和b-波的双向ANOVA和锥b-波的学生t-检验进行统计。对于每个分析，认为p<0.05的差异是统计显著的(通过星号*表示，在图8中)。
玻璃体内注射
如之前详细描述的进行玻璃体内注射(Rutar MV et al(2012)JNeuroinflammation 9:221)，其中利用腹腔内注射的氯胺酮(100mg/kg；TroyLaboratories,NSW,Australia)和xylazil(12mg/kg；Troy Laboratories)将动物麻醉。
BT-2172制剂制备如下。将BT2172悬浮于超纯PBS中至200μM的浓度并超声直至溶解。利用0.22μm注射器过滤系统过滤溶液。进入个体动物的注射液由1μL溶液组成，溶液包含PBS(对照)或BT-2172(200μM)。
允许动物从麻醉中醒来，期间通过使用合成泪液凝胶(GenTeal Gel；Novartis,NSW,Australia)保持角膜水化。然后如上文所述将动物暴露于光-氧化损伤5天。
结果
与单独用媒介物(PBS)处理和在暴露于光-氧化损伤的小鼠中敲除C3补体因子基因(与干性年龄相关性黄斑变性相关的模型)相比，通过玻璃体内注射递送的乙酰肝素酶抑制剂BT-2172维持视网膜功能(图8A和8B)。ERG的a-波和b-波反应(图8A)反映上述未被处理和处理的动物的视网膜形态学的差异。与对照小鼠(PBS)相比，BT-2172处理的小鼠之间的ERG a-波和b-波强度反应特征显著不同(p<0.05)。在多个闪光强度下证实BT-2172的治疗益处，并且在最高闪光强度下最显著(p<0.05,图8A)。BT-2172处理的具有比对照(PBS)组高的a-和b-波反应，并且在高闪光强度下与C3补体因子基因敲除相似(图8B)。
本领域技术人员会理解，如具体实施方案所示，可以对本发明进行许多变化和/或修改而不背离广泛描述的本发明的精神或范围。因此在各方面均认为目前的实施方案是说明性而不是限制性的。

Claims (26)

1.通式(I)的化合物
或者其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，
其中：
R1选自H、羟基、卤代、C1-6烷基、C1-4烷氧基、O-CH2苯基、O-苯基；
R2选自H、羟基、卤代、C1-6烷基、C1-4烷氧基、O-CH2苯基、O-苯基；
R3选自H、羟基、卤代、C1-6烷基、C1-4烷氧基、O-CH2苯基、O-苯基；
R4选自H、羟基、卤代、C1-6烷基、C1-4烷氧基、O-CH2苯基、O-苯基；
或者R1和R2、或者R2和R3、或者R3和R4一起形成C1-3亚烷基二氧基；
L1选自C6-10芳基、NH、NHC1-4烷基、NHC1-4烷基-NHC(O)-、NHC1-4烷基-NHSO2-、氮杂环丁烷基-NHC(O)-、氮杂环丁烷基-NHSO2-、N(C1-4烷基)2，其中每个烷基相同或不同，并且任选地被卤代或羟基取代，或者L1不存在；
R5选自H、卤代、羟基、C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6炔基、C3-6环烷基、任选地被1或2个RX基团取代的C6-10芳基、任选地被1或2个RX基团取代的C2-9杂芳基、任选地被1或2个RX基团取代的杂环烷基、任选地被1或2个RX基团取代的烷基杂环烷基、任选地被1或2个RX基团取代的C(O)-杂环烷基、NHC(NH)NR'R"(其中R'和R”独立地选自H和C1-3烷基)、NHC(O)NR'R"(其中R'和R”独立地选自H和C1-3烷基)，或者R5不存在；
L2选自C1-4烷基、氮杂环丁烷基-C(O)-、C1-4烷基-NHC(O)-、C1-4烷基-NHSO2-、-C(O)-、-SO2-；或者L2不存在；
R6选自H、C1-6烷基、胍基、NHC(NH)NH(C1-3烷基)、脲基、NHC(O)NH(C1-3烷基)、任选地被1或2个RX基团取代的C6-10芳基、任选地被1或2个RX基团取代的C1-9杂芳基、任选地被1或2个RX基团取代的C2-5杂环烷基、任选地被1或2个RX基团取代的C3-6环烷基；
R7为H或C1-6烷基；
或者当L2不存在时，R6和R7与它们连接的氮一起形成任选地被1或2个RX基团取代的杂环烷基环；
每个RX独立地选自羟基、卤代、硝基、NR'R"(其中R'和R”独立地选自H和C1-3烷基)、C1-4烷基、C3-6环烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、C(O)C1-3烷基、C(O)OC1-4烷基、C(O)NHRY、任选地被1或2个RY基团取代的C6-10芳基、任选地被1或2个RY基团取代的C2-9杂芳基、C1-4烷基-(C2-9杂芳基)、任选地被1或2个C1-4烷基取代的C2-5杂环烷基、任选地被1或2个C1-4烷基取代的C1-4烷基-(C2-5杂环烷基)、任选地被1或2个C1-4烷基取代的C(O)-C2-9杂芳基；任选地被1或2个C1-4烷基取代的SO2-C2-9杂芳基、或者卤代C1-4烷基；或者2个相邻的RX基团一起形成C1-3亚烷基二氧基；
RY选自H、羟基、卤代、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基。
2.权利要求1的化合物，其中每个杂芳基和每个杂环烷基具有至少一个氮杂原子。
3.权利要求1的化合物，其中R1和R4为H，并且R2和R3独立地为H、卤代或C1-3烷氧基，或者R2和R3一起形成亚甲基二氧基。
4.权利要求1的化合物，其中L1选自NH、NHC1-2烷基、NHC1-2烷基-NHC(O)-、NHC1-2烷基-NHSO2-、氮杂环丁烷基-NHC(O)-、氮杂环丁烷基-NHSO2-、苯基或不存在。
5.权利要求1的化合物，其中R5为卤代、胍基、脲基或者为选自C3-6环丙基、苯基、萘基、吲哚基、吡啶基、喹啉基、异喹啉基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、三唑基、吡唑基、噁唑基、噁二唑基、苯并二唑基、吡咯并吡啶基的基团，其中每个基团任选地被1或2个RX基团取代。
6.权利要求1的化合物，其中L1是苯基，并且R5是任选地被1或2个C1-3烷基取代的C(O)哌嗪基。
7.权利要求1的化合物，其中R5是选自哌嗪基C2-9杂芳基和SO2-杂芳基的基团，其中每个基团任选地被1或2个C1-4烷基或卤代C1-4烷基取代。
8.权利要求1的化合物，其中R7为H、甲基或乙基。
9.权利要求1的化合物，其中L1不存在；L2不存在；R5是N-哌嗪基，所述N-哌嗪基任选地被选自以下的1或2个基团取代：C1-3烷基、任选地被1或2个C1-4烷基或卤代C1-4烷基取代的C2-9杂芳基(例如吲哚基、吡啶基)、或者任选地被1或2个C1-4烷基或卤代C1-4烷基取代的SO2-C2-9杂芳基(例如，吲哚基、吡啶基)；R6为H并且R7为H。
10.权利要求1的化合物，其中L2不存在；并且R6和R7与它们连接的氮一起形成任选地被1或2个RX基团取代的哌嗪基环。
11.权利要求1的化合物，其中L2为C1-3烷基；R6为吲哚基、吡啶基或苯基，其中每个基团任选地被1或2个RX基团取代；并且R7为H。
12.权利要求1-11中任一项的化合物，其中每个RX独立地选自羟基、卤代、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、C1-3烷氧基、C(O)C1-3烷基、C(O)OC1-3烷基、NR'R"(其中R'和R”独立地选自H和C1-3烷基)、任选地被1或2个RY基团取代的苯基、任选地被1或2个RY基团取代的吗啉基、任选地被1或2个RY基团取代的哌嗪基、任选地被1或2个RY基团取代的C(O)哌嗪基、任选地被1或2个RY基团取代的C(O)吗啉基、任选地被1或2个RY基团取代的吡啶基、任选地被1或2个RY基团取代的吲哚基或者任选地被1或2个RY基团取代的SO2-吲哚基，或者两个相邻的RX基团一起形成亚甲基二氧基。
13.权利要求1的化合物，其中RY选自羟基、卤代、C1-3烷基、卤代C1-3烷基、C1-3烷氧基。
14.式(IA)、式(IB)、式(IC)或式(ID)的化合物，或其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体：
其中R2、R3、R6、RX和L2如权利要求1中独立地定义。
15.式(IE)的化合物或者其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体：
其中R2、R3、R5、L1和RX如权利要求1中独立地定义。
16.化合物，其选自
或其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体。
17.化合物，其选自
或其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体。
18.化合物，其选自：
19.一种药物组合物，其包含权利要求1-18中任一项的化合物，以及药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
20.一种治疗个体中与乙酰肝素酶活性相关的疾病或疾病状况的方法，所述方法包括向所述个体给药有效量的权利要求1-18中任一项的化合物或者权利要求19的药物组合物。
21.一种治疗个体中与乙酰肝素酶活性相关的疾病或疾病状况的方法，所述方法包括向所述个体给药有效量的多沙唑嗪或者其盐、水合物、溶剂合物、互变异构体或立体异构体。
22.权利要求20或21的方法，其中所述疾病或疾病状况选自1型糖尿病、2型糖尿病、肾炎、肾小球肾炎、细胞介导的自身免疫性炎症、糖尿病肾病、妊娠期糖尿病、糖尿病酮症酸中毒、高血糖、高渗状态、低血糖、糖尿病昏迷、糖尿病心肌病、糖尿病神经病变、糖尿病足、糖尿病视网膜病变、糖尿病性肌坏死、糖尿病脑病、癌症、变态反应、皮炎、银屑病、黄斑变性、视网膜色素变性和胰腺炎。
23.权利要求20-22中任一项的方法，其中所述疾病或疾病状况是1型糖尿病或2型糖尿病。
24.权利要求20或21的方法，其中所述疾病或疾病状况是眼部炎性病症。
25.权利要求20、21或22的方法，其中所述疾病或疾病状况选自年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖尿病视网膜病变、视网膜色素变性、视网膜静脉阻塞、视网膜母细胞瘤、葡萄膜炎、黄斑水肿、干眼症、病毒感染和圆锥角膜。
26.权利要求25的方法，其中所述疾病或疾病状况选自AMD、糖尿病视网膜病变和视网膜色素变性。
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