CN108976172A - 一类4-嘧啶二胺类小分子有机化合物及其衍生物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一类4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐，其结构如式(I)‐(VI)所示。本发明还公开了所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其药物组合物在制备预防和/或治疗各种恶性肿瘤、自身免疫性疾病、炎症等药物中的用途，作为B细胞淋巴因子6(BCL6)的抑制剂在制备预防和/或治疗BCL6介导的疾病药物中的用途。

Description

一类4-嘧啶二胺类小分子有机化合物及其衍生物及其应用
技术领域
本发明涉及一类4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物及其衍生物及其用途。所述化合物或含有该类化合物的药物组合物能够用于制备抗肿瘤药物，用于治疗各种恶性肿瘤，包括肿瘤转移等相关疾病，作为B细胞淋巴因子6(BCL6)抑制剂能够用于预防和/或治疗BCL6介导的疾病(如自身免疫性疾病、过敏和炎症)。
背景技术
癌症是一种不受有机体控制的能够无限增殖的恶性肿瘤细胞的统称。当前社会，癌症已经成为除了心血管疾病之外人类的第二大致死病因。根据世界卫生组织(WHO)最新发布的《全球癌症报告2014》称，目前全球癌症患者数目正成快速增长态势，将会由2012年的1400万人，增加到2035年的2400万人。报告还显示，全球2012年新增癌症患者中有一半来自亚洲，其中中国占据了大部分，中国俨然成为了癌症的高发区。
现有的治疗癌症的常规疗法包括：手术治疗、放射治疗、化疗等。到目前为止手术治疗仍然是治疗癌症的最有效的手段，然而手术治疗只适用于早期的癌症患者，对于复发的和转移性的恶性肿瘤，手术治疗则不能达到治疗的目的。放射治疗是使用辐射线杀死肿瘤细胞，然而放疗在杀死肿瘤细胞的同时也会杀死正常细胞。化疗可以分为传统的化疗药物治疗和靶向药物治疗，其中传统的化疗药物因为没有选择性，而常常具有很大的副作用。靶向药物治疗往往是通过特异性的靶向肿瘤细胞的致癌位点，特异性的干预肿瘤细胞的某些信号通路，从而达到治疗癌症的目的，靶向治疗因为能够特异性的杀死肿瘤细胞，因此与传统的化疗相比，靶向治疗的毒副作用更小，广泛受到人们的关注。
原癌基因B细胞淋巴因子6(B-cell lymphoma 6,BCL6)是一种转录抑制因子，在生物体内BCL6与生发中心的形成有十分重要的关系。BCL6是BTB/POZ/锌指核酶家族中的一员，由706个氨基酸组成。根据结构和功能可将BCL6分为三个部分：N端的BTB/POZ结构域(1-130号氨基酸残基)、预测具有很少或没有固定结构的中心区域(129-517号氨基酸残基)、C端的六个锌指结构域(518-681 号氨基酸残基)。其中N端的BTB/POZ结构域可以以相互排斥的方式与三种已知的辅助抑制子：SMRT、N-CoR和BCOR相互作用，从而发挥转录抑制作用。被BCL6抑制的基因涉及细胞的活化、分化、凋亡、细胞周期阻滞等方面，如： BCL6可以抑制PRDM1、cyclinD2、p53等基因的表达，这些基因是浆细胞分化、细胞周期调控、凋亡、DNA修复和维持基因组稳定性的重要基因。因此，BCL6 的正常下调如果被阻断，细胞易发生分化阻滞、持续增殖、长期生存、基因不稳定，最终导致恶变。它的功能是阻止细胞分化和淍亡，促进细胞的发育增殖。 BCL6与多种肿瘤的发生、发展有十分重要的关系。
非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin's lymphoma,NHL)是一类高发的恶性淋巴瘤，在常见肿瘤中排名第6位，依据细胞来源将其分为三种基本类型：B细胞、T细胞和NK/T细胞NHL。临床大多数NHL为B细胞型，占总数70％～85％，其中弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuse LargeB-Cell Lymphoma,DLBCL)是最常见的B细胞型NHL，约占全部NHL的40％。根据基因表达谱的不同，可将DLBCL分为生发中心B细胞样(GCB-like)型、活化B细胞样(ABC-like)型、原发性纵隔B细胞样(PMBL)型。目前，治疗DLBCL的一线疗法是R-CHOP(美罗华+环磷酰胺+ 阿霉素+长春新碱+强的松)疗法，经过化疗后有>50％的患者可以被治愈。但仍然有1/3以上患者经治疗后复发或难治疗。因此开发一种新的治疗DLBCL耐药的药物十分重要(NATURE REVIEWS|CLINICAL ONCOLOGY VOLUME 11|JANUARY2014)。
据文献报道，BCL6在GCB-DLBCL的表达量高达86％，在ABC-DLBCL 的表达量为34％，DLBCL的耐药可能与BCL6的高表达有关，R-CHOP能够选择性的杀死BCL6阴性的DLBCL，而对BCL6阳性的DLBCL几乎没有作用。不仅如此，BCL6在滤泡性淋巴瘤(follicularlymphomas,FLs)等中也高表达。BCL6 是治疗DLBCL和FLs的十分重要的靶点。除此之外，研究者发现，BCL6在自身免疫性疾病方面也发挥着十分重要的作用。BCL6是生发中心(GC)的重要调控因子，BCL6与生发中心异常密切相关。已有报道证实，生发中心样(GC-like)结构存在于自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)以及1 型糖尿病等患者的唾液腺、脑膜、滑膜、甲状腺、皮肤、胰腺及肾脏等多种组织病灶中(Aloisi F etal./Nat Rev Immunol.2006Mar；6(3):205-17)。人重症肌无力症 (Myasthenia gravis，MG)是一种T细胞依赖性抗体介导的器官特异性自身免疫性疾病。到目前为止还没有选择性靶向MG的特异性免疫抑制剂，使用皮质类固醇和其它非特异性免疫抑制药物，会带来与全球非特异性抑制免疫应答相关的潜在副作用和风险，包括感染和恶性肿瘤，因此开发MG特异性的免疫抑制剂具有十分重要的意义。有文章报道，在实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental autoimmune myasthenia gravis，EAMG)的动物模型中BCL6和IL-21的表达明显提高，用siRNA干扰沉默掉BCL6的表达后，能够明显缓解EAMG的严重程度，提示，BCL6可以作为MG的治疗靶标，不仅如此，文章中还提到，BCL6不仅可以作为治疗MG的靶标，同时可以作为其它抗体介导的自身免疫性疾病的治疗靶标，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等(N.Xin et al./Molecular and Cellular Neuroscience 58(2014)85–94)。
BCL6多肽类的抑制剂(BCL6peptide inhibitor,BPI)能够通过与共抑制因子SMRT等竞争性的结合到BCL6的N端BTB/POZ结构域从而重新激活BCL6的靶基因，并且能在体内外杀死BCL6高表达的DLBCL，但是BPI具有口服生物利用率低，花费大等问题，因此限制了它在临床上的进一步应用。79-6是第一个被文献报道的BCL6小分子抑制剂，但它与BCL6的亲和力很差(IC50＝212μM) (Cancer Cell 17,400–411,April 13,2010)。FX1是在79-6的基础上改造而得，它的活性与79-6相比有很大提高，IC50约为36μM(The Journal ofClinical Investigation,June 3,2016.)。但是，FX1仍然存在较大劣势，FX1对肿瘤细胞增殖抑制活性仍然较差，由于这个劣势限制了它们在临床上的进一步研发。
发明内容
本发明以二氨基嘧啶为基本的结构骨架，经过结构改造成一类新型的4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物。在分子水平上，本发明化合物能够通过竞争性的方式结合到BCL6的N端的BTB/POZ结构域，从而使BCL6下游的靶基因重新激活。在细胞水平上，本发明化合物能够强烈的抑制DLBCL的增殖，促进DLBCL的凋亡，其抗增殖活性达到1μM以下。本发明化合物与已报到的BCL6小分子抑制剂79-6和FX1比较，其活性得到极大提高，结构完全不同，可作为BCL6的先导化合物和潜在的临床候选药物。
本发明提供了一类结构新颖的可作为BCL6抑制剂和抗肿瘤药物的4‐嘧啶二氨基类小分子有机化合物及其相关类似物，包括其可用盐、以及酯等。
本发明提供的4‐嘧啶二氨基类小分子有机化合物或相关类似物或药学上可接受的盐，其结构如(I)所示：
其中：
R1和R2选自下列基团中的一个或多个：氢(其中，R1和R2不同时为氢)、卤素、C1‐C3烷氧基、C1‐C3烷胺基、羟基、硝基、氨基、羧基、其中，R8选自下列基团中的一个或多个：氢、卤素、羟基、羧基、C1‐C3烷氧基、 C1‐C3烷基、酯基、硝基、氨基、腈基。
选自下列芳香基或杂环芳香基中的任意一个或者两个串联而成：苯环、吡啶、咪唑、呋喃、噻吩、吡唑、苯并噻吩、吲哚、喹啉、苯并呋喃，苯基噻吩，苯基呋喃。
R3选自下列基团中的一个：C1‐C5的链状醇氨基、C1‐C5的脂肪链状氨基、C3‐C6环氨基、四氢吡咯基、哌嗪基、C1‐C3烷基哌嗪基、哌啶基、C1‐C3烷基哌啶基、吗啉基、C1‐C3烷基吗啉基、硫代吗啉基、C1‐C3烷基硫代吗啉基。
R4选自下列基团中的一个：氢、卤素、腈基、三氟甲基、C1‐C3烷氧基、羟基、C1‐C3烷基。
本发明所述式(I)中，当R3为哌嗪基或者2,6‐二烷基哌嗪时，所述4‐嘧啶二氨基类小分子有机化合物结构如下式(II)所示：
其中：
R1和R2选自下列基团中的一个或多个：氢(其中R1和R2不同时为氢)、卤素、C1‐C3烷氧基、C1‐C3烷胺基、羟基、硝基、氨基、羧基、其中，R8选自下列基团中的一个或多个：氢、卤素、羟基、羧基、C1‐C3烷氧基、C1‐C3烷基、酯基、硝基、氨基、腈基。
选自下列芳香基或杂环芳香基中的任意一个或者两个串联而成：苯环、吡啶、咪唑、呋喃、噻吩、吡唑、苯并噻吩、吲哚、喹啉、苯并呋喃，苯基噻吩，苯基呋喃。
R4选自下列基团中的一个：氢、卤素、腈基、三氟甲基、C1‐C3烷氧基、羟基、C1‐C3烷基。
R5和R6分别选自下列基团中的一个：氢、C1‐C3烷基。
本发明所述式(I)中，当R3为哌嗪或者2,6‐二烷基哌嗪，R2为C1‐C3烷氧基或C1‐C3烷胺基时，所述4‐嘧啶二氨基类小分子有机化合物结构如下式(III)所示：
其中：
X为O或者N；
R1选自下列基团中的一个或多个：氢(其中R1和R2不同时为氢)、卤素、C1‐C3烷氧基、C1‐C3烷胺基、羟基、硝基、氨基、羧基、其中，R8选自下列基团中的一个或多个：氢、卤素、羟基、羧基、C1‐C3烷氧基、 C1‐C3烷基、酯基、硝基、氨基、腈基。
选自下列芳香基或杂环芳香基中的任意一个或者两个串联而成：苯环、吡啶、咪唑、呋喃、噻吩、吡唑、苯并噻吩、吲哚、喹啉、苯并呋喃，苯基噻吩，苯基呋喃。
R4选自下列基团中的一个：氢、卤素、腈基、三氟甲基、C1‐C3烷氧基、羟基、C1‐C3烷基。
R5和R6分别选自下列基团中的一个：氢、C1‐C3烷基。
R7为C1‐C3烷基。
本发明中所述结构式(III)中，当R1为时，所述4‐嘧啶二氨基类小分子有机化合物结构如下式(IV)所示：
其中：
X为O或者N；
R4选自下列基团中的一个：氢、卤素、腈基、三氟甲基、C1‐C3烷氧基、羟基、C1‐C3烷基。
R5和R6分别选自下列基团中的一个：氢、C1‐C3烷基。
R7为C1‐C3烷基。
R8选自下列基团中的一个或多个：氢、卤素、羟基、羧基、C1‐C3烷氧基、 C1‐C3烷基、酯基、硝基、氨基、腈基。
选自下列芳香基或杂环芳香基中的任意一个或者两个串联而成：苯环、吡啶、咪唑、呋喃、噻吩、吡唑、苯并噻吩、吲哚、喹啉、苯并呋喃，苯基噻吩，苯基呋喃。
本发明所述式(IV)中，当X为氧原子时，其结构如式(V)所示：
其中：
R4选自下列基团中的一个：氢、卤素、腈基、三氟甲基、C1‐C3烷氧基、羟基、C1‐C3烷基。
R5和R6分别选自下列基团中的一个：氢、C1‐C3烷基。
R7为C1‐C3烷基。
R8选自下列基团中的一个或多个：氢、卤素、羟基、羧基、C1‐C3烷氧基、 C1‐C3烷基、酯基、硝基、氨基、腈基。
选自下列芳香基或杂环芳香基中的任意一个或者两个串联而成：苯环、吡啶、咪唑、呋喃、噻吩、吡唑、苯并噻吩、吲哚、喹啉、苯并呋喃，苯基噻吩，苯基呋喃。
本发明中所述结构式(V)中，当X为氧原子时，R5和R6为顺势甲基时，其结构如下式(VI)所示：
其中：
R4选自下列基团中的一个：氢、卤素、腈基、三氟甲基、C1‐C3烷氧基、羟基、C1‐C3烷基。
R7为C1‐C3烷基。
R8选自下列基团中的一个或多个：氢、卤素、羟基、羧基、C1‐C3烷氧基、 C1‐C3烷基、酯基、硝基、氨基、腈基。
选自下列芳香基或杂环芳香基中的任意一个或者两个串联而成：苯环、吡啶、咪唑、呋喃、噻吩、吡唑、苯并噻吩、吲哚、喹啉、苯并呋喃，苯基噻吩，苯基呋喃。
本发明还提供了所述的4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐，所述双取代嘧啶二胺类小分子有机化合物与酸形成酸加成盐；其中，所述酸包括但不限于是：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、酒石酸、水杨酸、柠檬酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、马来酸、琥珀酸。
本发明中所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐，其中，所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物可以与放射性基团、荧光基团或者生物素结合形成标记物。
本发明提供的4‐嘧啶胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐，包括：
N2‐乙氨基‐N4‐(3‐氯‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐异丁氨基‐N4‐(3‐氯‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐乙醇氨基‐N4‐(3‐氯‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐丙醇氨基‐N4‐(3‐氯‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐吗啉基‐N4‐(3‐氯‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(6‐溴‐2‐吡啶酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐(4‐(6‐溴‐2‐吡啶酰胺基)苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐(4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(对氯苯酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐氟‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐5‐甲氧基‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐5‐氯‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐5‐甲基‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐6‐氯‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐6‐甲基‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐6‐三氟甲基‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐溴‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(4‐溴‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐氯‐2‐呋喃酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐苯基‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐(2‐甲氧基)苯基‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐(2‐氯)苯基‐2‐噻吩酰胺基)) 苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐(3‐吡啶基)‐2‐噻吩酰胺基)) 苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐(3‐噻吩基)‐2‐噻吩酰胺基)) 苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐溴‐2‐呋喃酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴‐2‐呋喃酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐(3‐呋喃基)‐2‐噻吩酰胺基)) 苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(苯并噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(苯并呋喃酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(吲哚酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐氯‐2‐吲哚酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐氟‐2‐吲哚酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐溴‐2‐噻吩乙基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐硝基‐2‐呋喃乙基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐硝基‐2‐噻吩乙基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐溴‐2‐吡啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐硝基‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐氨基‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐溴‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(4‐溴‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(3‐溴‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐溴‐2‐呋喃酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐氯‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐苯并噻吩酰胺基)‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐恶唑酰胺基)‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐嘧啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(2‐吡啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4((3‐(5‐溴‐3‐吡啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4((3‐(4‐溴‐2‐吡啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4((3‐(6‐溴‐4‐吡啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
本发明还提供了一种药物组合物，其中药物组合物含有所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或相关类似物或药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。所述药物组合物被配制成可注射流体、气雾剂、乳膏、凝胶剂、丸剂、胶囊剂、糖浆剂、透皮贴剂或赋形剂。
本发明还提供了所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或相关类似物或药学上可接受的盐或药物组合物在作为BCL6抑制剂中的应用。
本发明还提供了所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或相关类似物或药学上可接受的盐或药物组合物在抑制BCL6蛋白与多肽SMRT的相互作用中的应用。
本发明还提供了所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或相关类似物或药学上可接受的盐或药物组合物在抑制生发中心的形成中的应用。
本发明还提供了所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或相关类似物或药学上可接受的盐或药物组合物在制备预防和/或治疗BCL6介导的疾病的药物中的应用；其中，所述疾病包括但不限于自身免疫性疾病、过敏或炎症；其中，所述自身免疫性疾病包括红斑狼疮、多发性硬化症、关节炎、皮肌炎、慢性甲状炎，青少年型糖尿病、恶习性贫血、萎缩性胃炎、非特异性溃疡性结肠炎、自身免疫性肾小球肾炎、肺肾出血性综合症、特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、自身免疫性溶血性贫血和特发性白细胞减少症。
本发明还提供了所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或相关类似物或药学上可接受的盐或药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用；本发明所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物、水合物或药学上可接受的盐或药物组合物可以抑制肿瘤细胞的增殖、生长、迁移和浸润。其中，所述肿瘤细胞包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(如，人淋巴瘤细胞SUDHL4)、滤泡性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非小细胞肺癌细胞、乳腺癌细胞、B细胞急性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病、食管癌细胞，卵巢癌细胞，头颈部鳞状细胞癌细胞、结肠癌细胞、前列腺癌细胞、肝癌细胞。
本发明还提供了所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或相关类似物或药学上可接受的盐或药物组合物在制备预防和/或治疗恶性肿瘤的药物中的应用；所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或相关类似物或药学上可接受的盐或药物组合物用于抑制恶性肿瘤的增殖、生长、浸润、转移、复发。其中，所述恶性肿瘤包括弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非小细胞肺癌、乳腺癌、B细胞急性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病、食管癌，卵巢癌，头颈部鳞状细胞癌、结肠癌、前列腺癌、肝癌。
本发明提供了所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或相关类似物或药学上可接受的盐或药物组合物在上调BCL6下游基因CXCR4，CD69，Caspase8和 DUSP5表达中的应用；优选地，所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物为 N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐(4‐(6‐溴‐2‐吡啶酰胺基)苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺 (WH-007)，N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH-009)，N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐苯基‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH-023)和N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐(2‐氯)苯基‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH-025)。
本发明还提供了所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或相关类似物或药学上可接受的盐或药物组合物在BCL6阳性细胞株和BCL6阴性细胞中BCL6上调 BCL6下游基因CXCR4，CD69，CASPASE8和DUSP5表达中的应用；优选地，所述BCL6阳性细胞株为SUDHL4，所述BCL6阴性细胞株为TOLEDO；优选地，所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物为所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物为N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐(4‐(6‐溴‐2‐吡啶酰胺基)苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH-007)，N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基)) 苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH-009)，N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐苯基‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH-023)和N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐(2‐氯)苯基‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH-025)。
本发明还提供了所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或相关类似物或药学上可接受的盐或药物组合物在抑制LPS刺激的TNFα的表达中的应用。
本发明中，所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或相关类似物或药学上可接受的盐或药物组合物可以单独使用或与其它药物联合使用。
本发明的有益效果在于，本发明提供的式(I)～(VI)所示的4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或相关类似物或药学上可接受的盐或药物组合物能够显著抑制BCL6片段蛋白与多肽SMRT的相互作用，抑制弥漫大B细胞淋巴瘤的增殖 (人淋巴瘤细胞SUDHL4)，抑制生发中心的形成，抑制LPS刺激的TNFα的表达，能够用于预防和/或治疗自身免疫性疾病、过敏或炎症，抑制恶性肿瘤的增殖、生长、迁移和浸润，具有广泛的应用前景。
附图说明
图1为举例说明本发明部分化合物与BCL6蛋白结合效果检测的效果图。其中，横坐标表示时间(秒)，纵坐标表示反射率单位。
图2为本发明化合物对BCL6下游基因上调的效果图。其中图A、B、C和 D分别为本发明化合物对基因CD69、CXCR4、CASPASE8和DUSP5的上调效果图。
图3A为人弥漫大B细胞株SUDHL4和TOLEDO中BCL6蛋白表达水平的示意图。图3B为本发明化合物WH-007和WH-023在细胞株SUDHL4和TOLEDO 中对BCL6下游基因CD69和CXCR4的上调效果图。
图4为本发明化合物WH-007抑制小鼠生发中心形成的效果图。其中A图为小鼠脾脏重量的统计图(其中，纵坐标表示脾脏重量(g))，B图为本发明化合物WH-007抑制小鼠生发中心形成的流式图，C图为本发明化合物WH-007在 50mg/kg/d的灌胃剂量下抑制小鼠生发中心形成的统计图。
图5为本发明化合物WH-023抑制小鼠生发中心形成的效果图。其中A图为小鼠脾脏重量的统计图(其中，纵坐标表示脾脏重量(g))，B图为本发明化合物WH-023抑制小鼠生发中心形成的流式图，C图为本发明化合物WH-023在 50mg/kg/d的灌胃剂量下抑制小鼠生发中心形成的统计图(图中上方为生发中心 B细胞比例)。
图6为本发明化合物抑制LPS刺激的TNFα的表达。
图7为本发明化合物对关节炎具有显著的治疗效果；其中图A为本发明化合物治疗关节炎的典型效果图，图B为关节炎治疗效果统计评分图。
其中，图中，*表示p<0.05，**表示p<0.01，***表示p<0.001。
图8为本发明含有末端哌嗪类官能团和吗啉类官能团的化合物可与BCL6蛋白的BTB区域H14残基形成稳定的氢键作用；其中A图为哌嗪类化合物形成氢键的效果图，B图为吗啉类化合物形成氢键的效果图。
具体实施方式
结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的保护内容不局限于以下实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。
1H-NMR用Bruker 500MHz型仪测定；所有溶剂在使用前均经过重新蒸馏，所使用的无水溶剂均是按标准方法干燥处理获得；除说明外，所有反应均是在氮气保护下进行并用TLC跟踪，后处理时均经饱和食盐水洗和无水硫酸钠干燥过程；产品的纯化除说明外均使用硅胶(200-300目)的柱色谱法；所使用的硅胶，包括200-300目和GF254为青岛海洋化工厂或烟台缘博硅胶公司生产。
实施例1：4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物的制备
实施例1‐01、N2‐乙氨基‐N4‐(3‐氯‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐001)的制备
取3‐氯‐4‐甲氧基苯胺(1.567g,10.0mmol)于无水乙醇(30mL)中，加入5‐氟‐2,4‐二氯嘧啶(1.837g,11.0mmol)和5.2mL的DIEA，升温至40℃搅拌过夜。后处理：减压出去大部分的有机溶剂，用二氯甲烷和水萃取三次，将有机相合并后用无水硫酸钠干燥，减压除去二氯甲烷，通过柱层析得到中间体2‐氯‐5‐氟‐N‐(3‐氯‐4‐甲氧基苯基)嘧啶‐4‐胺(2.707g,94％)。
将2‐氯‐5‐氟‐N‐(3‐氯‐4‐甲氧基苯基)嘧啶‐4‐胺(144.06mg,0.5mmol)于5mL的正丁醇中，加入2mL的乙胺和0.26mL的DIEA，升温至120℃搅拌过夜。后处理：减压出去大部分的有机溶剂，用二氯甲烷和水萃取三次，将有机相合并后用无水硫酸钠干燥，减压除去二氯甲烷，通过柱层析得到产物WH‐001(115mg)。1HNMR (500MHz,DMSO)δ9.10(s,1H),8.06(s,1H),7.91(d,J＝3.9Hz,1H),7.69–7.68 (m,1H),7.09(d,J＝9.0Hz,1H),6.75(s,1H),3.83(s,3H),3.26–3.19(m,2H),1.11 (t,J＝7.1Hz,3H).
实施例1‐06、化合物N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(6‐溴‐2‐吡啶酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐006)的制备
取3‐甲氧基‐4‐硝基苯胺(841.0mg,5.0mmol)于无水DMF(5mL)中，加入5‐氟‐2,4‐二氯嘧啶(1.25g,7.5mmol)和碳酸铯(4.89g,15.0mmol)常温下反应过夜。后处理：用二氯甲烷和水萃取三次，将有机相合并后用无水硫酸钠干燥，减压除去二氯甲烷，通过柱层析得到中间体2‐氯‐5‐氟‐N‐(3‐甲氧基‐4‐硝基苯基)嘧啶‐4‐胺(944 mg,63％)。
将2‐氯‐5‐氟‐N‐(3‐甲氧基‐4‐硝基苯基)嘧啶‐4‐胺(944.0mg,3.16mmol)溶于15mL的正丁醇中，在体系中加入顺式‐2,6‐二甲基哌嗪(1.08g,9.48mmol)和 DIEA(1.63mL,9.48mmol)加热至120℃回流过夜。后处理：减压除去大部分溶剂，常规处理后柱层析得到中间体2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐5‐氟‐N‐(3‐甲氧基‐4‐硝基苯基)嘧啶‐4‐胺(786mg,66％)。
将2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐5‐氟‐N‐(3‐甲氧基‐4‐硝基苯基)嘧啶‐4‐胺(786.0mg,2.09mmol)溶于50mL无水甲醇中密封，在氮气保护下加入35mg钯/ 炭，将体系全部置换成氢气，反应过夜。后处理：减压除去溶剂，得到粗产物 2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐5‐氟‐N‐(3‐甲氧基‐4‐氨基苯基)嘧啶‐4‐胺直接用于下一步反应。
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸(120.0mg,0.6mmol)，溶于1.5mL的DMF中，加入 EDC·HCl(118mg)、HOBt(112mg)常温下搅拌10min后加入2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐5‐氟‐N‐(3‐甲氧基‐4‐氨基苯基)嘧啶‐4‐胺(173.2mg,0.5mmol)，搅拌过夜。后处理：用二氯甲烷和水萃取三次，将有机相合并后加入无水硫酸钠干燥，减压除去二氯甲烷，柱层析得到WH‐006(192mg)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ 10.06(s,1H),9.44(s,1H),8.29(d,J＝8.8Hz,1H),8.18(d,J＝7.5Hz,1H),8.09(d, J＝3.5Hz,1H),8.04(t,J＝7.7Hz,1H),7.96(d,J＝7.9Hz,1H),7.68(d,J＝2.1Hz, 1H),7.35–7.34(m,1H),4.58(d,J＝13.4Hz,2H),3.95(s,3H),3.22–3.21(m,2H), 2.86–2.81(m,2H),1.26(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例1-07、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐(4‐(6‐溴‐2‐吡啶酰胺基)苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐007)的制备
取4‐硝基苯胺(276.26mg,2.0mmol)于无水DMF(2mL)中，加入5‐氟‐2,4‐二氯嘧啶(400.7mg,2.4mmol)和碳酸铯(2.0g,6.0mmol)在常温下反应过夜。后处理：用二氯甲烷和水萃取三次，将有机相合并后加入无水硫酸钠干燥，减压除去二氯甲烷，柱层析得到中间体2‐氯‐5‐氟‐N‐(4‐硝基苯基)嘧啶‐4‐胺(227mg,42.3％)。
将2‐氯‐5‐氟‐N‐(4‐硝基苯基)嘧啶‐4‐胺(227mg,0.85mmol)溶于5mL正丁醇中，加入顺式‐2,6‐二甲基哌嗪(289mg,2.54mmol)和DIEA(0.44mL,2.54mmol)加热至120℃回流过夜。后处理：减压除去大部分溶剂，常规处理后，柱层析得到中间体2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐5‐氟‐N‐(4‐硝基苯基)嘧啶‐4‐胺(173mg,59％)。
将2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐5‐氟‐N‐(4‐硝基苯基)嘧啶‐4‐胺(173mg,0.5mmol)于20mL无水甲醇中之后密封，在氮气保护下加入20mg钯/炭，将体系全部置换成氢气反应过夜。后处理：减压除去溶剂，得到粗产物2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐5‐氟‐N‐(4‐氨基苯基)嘧啶‐4‐胺直接用于下一步反应。
将3‐溴‐2‐吡啶苯甲酸(114.7mg,0.57mmol)溶于1.5mL的DMF中，加入 EDC·HCl(118mg)、HOBt(112mg)常温下搅拌10min后加入2-((3S,5R)-3,5- 二甲基哌基)‐5‐氟‐N‐(4‐氨基苯基)嘧啶‐4‐胺(151.0mg,0.47mmol)，搅拌过夜，用二氯甲烷和水萃取三次，将有机相合并后加入无水硫酸钠干燥，减压除去二氯甲烷，柱层析得到产物WH‐007(119mg)。1HNMR(500MHz,DMSO)δ10.37(s,1H), 9.27(s,1H),8.14(d,J＝7.4Hz,1H),8.01(d,J＝7.7Hz,1H),7.99(d,J＝2.5Hz, 1H),7.92(d,J＝7.9Hz,1H),7.82(d,J＝8.8Hz,2H),7.73(d,J＝8.9Hz,2H),4.35 (d,J＝12.5Hz,2H),2.68–2.64(m,2H),2.33–2.38(m,2H),1.00(d,J＝6.1Hz, 6H).
实施例1‐23、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐苯基‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐023)的制备
取一个干燥的圆底烧瓶将其密封后用氮气保护，加入5‐溴噻吩‐2‐甲酸甲酯(221.07mg,1.0mmol)，Pd(PPh3)4(35mg)于2.5mL的DME和5mL Na2CO3(2.0 mol/L)，体系在氮气保护下常温搅拌10min。在混合物中加入苯硼酸(243.8mg,2.0 mmol)和5mL的甲醇，将其密封，在氮气保护下加热至85℃，反应过夜。后处理：减压把溶剂蒸干，用二氯甲烷和水萃取三次，合并水相，将水相调至酸性，抽虑，烘干得到中间体5‐苯基‐2‐噻吩甲酸(178mg)。
将5‐苯基‐2‐噻吩甲酸(118.5mg,0.58mmol)，溶于1.5mL的DMF中，加入 EDC·HCl(118mg)、HOBt(112mg)常温下搅拌10min后加入2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐5‐氟‐N‐(3‐甲氧基‐4‐氨基苯基)嘧啶‐4‐胺(100.0mg,0.29mmol)，搅拌过夜。后处理：用二氯甲烷和水萃取三次，将有机相合并后加入无水硫酸钠干燥，减压除去二氯甲烷，柱层析得到产物WH‐023(74mg)。1H NMR(500MHz,DMSO) δ9.57(s,1H),9.39(s,1H),8.08(d,J＝2.9Hz,1H),8.00(d,J＝2.4Hz,1H),7.75(d, J＝7.5Hz,2H),7.67(s,1H),7.60(d,J＝3.5Hz,1H),7.53(d,J＝8.5Hz,1H),7.47(t, J＝7.4Hz,2H),7.39(t,J＝7.3Hz,1H),7.30(d,J＝8.6Hz,1H),4.53(d,J＝12.8Hz, 2H),3.85(s,3H),3.09–3.08(m,2H),2.74–2.64(m,2H),1.18(d,J＝5.5Hz,6H).
实施例1‐36、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐溴‐2‐噻吩乙基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐036)的制备
取5‐溴噻吩‐2‐甲醛(421.0mg,2.2mmol)于50mL干燥的圆底烧瓶中，加入10 mL的无水乙醇，在冰浴下加入硼氢化钠(417.0mg,11.01mmol)，之后常温搅拌 10min。减压把溶剂蒸干，用二氯甲烷和水萃取三次，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥，减压除去有机溶剂，得到5‐溴噻吩‐2‐甲醇(400mg)。
取5‐溴噻吩‐2‐甲醇(400.0mg,2.07mmol)于100mL的圆底烧瓶中，加入20 mL的无水二氯甲烷，在冰浴下滴加三溴化磷(0.59mL,6.22mmol)，滴加完后在常温下搅拌过夜。后处理：减压把溶剂蒸干，用二氯甲烷和水萃取三次，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥，减压除去二氯甲烷，得到5‐溴噻吩‐2‐溴甲基(514 mg)。
取4‐甲氧基‐3‐硝基苯胺(841.0mg,5.0mmol)于无水DMF(5mL)中，加入5‐氟‐2,4‐二氯嘧啶(1.25g,7.5mmol)和碳酸铯(4.89g,15mmol)常温下反应过夜。用二氯甲烷和水萃取三次，将有机相合并后加入无水硫酸钠干燥，减压除去二氯甲烷，柱层析得到中间体2‐氯‐5‐氟‐N‐(4‐甲氧基‐3‐硝基苯基)嘧啶‐4‐胺(944mg,63％)。
将2‐氯‐5‐氟‐N‐(4‐甲氧基‐3‐硝基苯基)嘧啶‐4‐胺(944.0mg,3.16mmol)溶于15mL正丁醇中，加入顺式‐2,6‐二甲基哌嗪(1.08g,9.48mmol)和DIEA(1.63mL,9.48 mmol)加热至120℃回流过夜。后处理：减压除去大部分溶剂，常规处理后柱层析，得到中间体2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐5‐氟‐N‐(4‐甲氧基‐3‐硝基苯基)嘧啶‐4‐胺(786mg,66％)。
将2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐5‐氟‐N‐(4‐甲氧基‐3‐硝基苯基)嘧啶‐4‐胺(786.0mg,2.09mmol)溶于50mL无水甲醇中将其密封，体系在氮气保护下加入 35mg钯/炭，将体系全部置换成氢气搅拌过夜。后处理：减压除去溶剂，得到粗产物2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐5‐氟‐N‐(4‐甲氧基‐3‐氨基苯基)嘧啶‐4‐胺直接用于下一步反应。
取5‐溴噻吩‐2‐溴甲基(255.96mg,1.0mmol)于50mL的圆底烧瓶中，加入10 mL的无水乙醇，之后加入2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐5‐氟‐N‐(4‐甲氧基‐3‐氨基苯基)嘧啶‐4‐胺(346.4mg,1.0mmol)，常温下搅拌过夜。后处理：减压把溶剂蒸干，用二氯甲烷和水萃取三次，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥，减压除去有机溶剂，柱层析得到产物WH‐036(204mg)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.23(s,1H), 8.81(t,J＝6.0Hz,1H),8.48(d,J＝2.8Hz,1H),7.97(d,J＝3.7Hz,1H),7.67–7.66 (m,1H),7.12(d,J＝9.0Hz,1H),7.05(d,J＝3.7Hz,1H),6.85(d,J＝3.7Hz,1H), 4.57(d,J＝5.9Hz,2H),4.40–4.39(m,2H),3.88(s,3H),2.68–2.64(m,2H),2.29– 2.24(m,2H),1.01(d,J＝6.2Hz,6H).
实施例1‐1到1‐53化合物WH‐001到WH‐053的制备方法如表1所示
实施例2：均相时间分辨荧光技术(HTRF)检测本发明化合物抑制BCL6片段蛋白与其共抑制因子SMRT的相互作用
技术方法：
均相时间分辨荧光(HTRF)是结合了荧光共振能量转移(FRET)和时间分辨荧光(TRF)两种技术的一种用来检测纯液相体系中待测物的方法。在这一体系中，本发明选定的能量供体是GST-Tb，受体是6His-XL665(Cisbio)。相应的，本发明表达纯化出的蛋白也分别带有GST和His标签，分别为BCL6-GST和 6His-SMRT。BCL6的转录抑制活性结构域BTBdomain是和转录共抑制因子 SMRT(多肽SMRT)结合的结构域。本发明所需BCL6蛋白N端的BTB/POZ 结构域序列为ADSCIQFTRHASDVLLNLNRLRSRDILTDVVIVVSREQFRAHKT-VLMACSGLFYSIFTDQLKCNLSVINLDPEINPEGFCILLDFMYTSRLNLREGNIMAVMATAMYLQMEHVVDTCRKFIKASE-GST。SMRT多肽的序列为6HISGL- VATVKEAGRSIHEIPREEL。HTRF实验需要两个蛋白在某一浓度下结合后的荧光比值相对于不结合时的荧光比值有一个较好的性噪比，根据研究发现，本发明选定的6His-SMRT浓度为200nM，BCL6-GST的浓度为6.25nM。实验为20μL 的体系，首先于384孔板中每孔加入4μL的5×BCL6-GST和4μL的5×6His-SMRT 室温孵育30min，各组设2个复孔。之后加入2μL的10×不同浓度化合物，最后加入GST-Tb和6His-XL665各5μL，室温孵育过夜，第二天于Cytation 5细胞成像微孔板检测仪上读值。实验结果用GraphPadPrism处理，实验独立重复3 次。
实验结果如表2所示，本发明化合物能抑制BCL6片段蛋白与多肽SMRT 的相互作用，其中，所有本发明化合物(WH‐001至WH‐053)均能有效抑制片段蛋白与多肽SMRT的相互作用，半数抑制浓度(IC50)均在20μM以下，如化合物WH‐001～WH005，WH017、WH018、WH-026，WH-028，WH-032，WH-035， WH-037至WH-046，WH-051至WH-053的IC50在10‐20μM之间；化合物WH-010 至WH016、WH-019至WH-022，WH-036，WH-047和WH-050对BCL6片段蛋白与SMRT相互作用的半数抑制浓度(IC50)在5‐10μM之间；化合物WH-006至WH-009，WH-023至WH-025，WH-027，WH-030，WH-031和WH-033对BCL6 片段蛋白与SMRT相互作用的半数抑制浓度(IC50)在5μM以下。
表2为本发明化合物抑制BCL6片段蛋白与其共抑制因子SMRT的相互作用的IC50值
实施例3：本发明化合物抑制弥漫大B细胞淋巴瘤的增殖
技术方法：
1.细胞的培养
本发明中所用人淋巴瘤细胞SUDHL4(人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞 SUDHL4)来自上海市调控生物学重点实验室郑彪教授实验室。细胞培养于37℃恒温培养箱(湿度95％，CO2浓度5％)中，其中SUDHL4培养基为含20％胎牛血清(Gemini)的RPMI-1640(Gibco)。
2.细胞增殖实验
用CCK8法测定细胞增殖。人淋巴瘤细胞株SUDHL4以2×104个/孔的密度接种于96孔板(90μL)，24h后加入10μL不同浓度化合物，各组设3个复孔。继续培养48h后，避光加入10μL的CCK8于37℃孵育1-4小时，用酶标仪检测450nm处的吸光度值。实验独立重复3次。细胞存活率(％)＝加药物 OD值/对照组OD值×100％。
实验结果如表3所示，本发明化合物WH‐001至WH053对人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞SUDHL4增殖的抑制的半数有效抑制浓度(IC50)都在10μM以下，说明本发明化合物对淋巴瘤细胞增殖具有明显的抑制效果。另外，化合物 WH-023，WH-024，WH-027，WH-029，WH-030，WH-031，WH-033，WH-034 和WH-035对细胞SUDHL4增殖的半数抑制浓度IC50均在1μM以下，显示出强烈的抗肿瘤细胞增殖效果。
在相似的抑制实验还发现，本发明化合物WH‐001至WH053对滤泡性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非小细胞肺癌、乳腺癌、B细胞急性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病、食管癌，卵巢癌，头颈部鳞状细胞癌、结肠癌、前列腺癌和肝癌细胞的增殖也有相似的抑制效果。
表3.本发明化合物在无毒剂量下对BCL6高表达肿瘤细胞增殖的抑制效果
实施例4：本发明化合物与BCL6蛋白亲和力检测
该实验通过采用Biacore生物大分子相互作用仪检测本发明化合物与含有 BTB/POZ结构域的BCL6片段蛋白之间的亲和力。本发明挑选了HTRF测试效果和抑制肿瘤细胞增殖效果均好的四个化合物WH-007，WH-009，WH-023和 WH-025进行与BCL6蛋白结合效果的检测实验。
技术方法：
1.BCL6片段蛋白的固定：首先，利用氨基偶联法将BCL6片段蛋白固定到芯片表面。通过NHS与EDC现混溶液活化CM5芯片Fc2通道表面的羧基。然后，将BCL6片段蛋白稀释到pH4.0的醋酸钠缓冲液中通过Fc2通道进行偶联。最后，利用乙醇胺将活化后未结合BCL6片段蛋白的羧基进行封闭。
2.亲和力测试：将本发明化合物WH-007，WH-009，WH-023和WH-025系列稀释到PBS缓冲液中，制备成0.01-10μM的多个浓度的测试样品。以未结合 BCL6片段蛋白的Fc1通道作为参比，以Fc2作为测试通道，将化合物测试样品分别流经上述两个通道，针对同一化合物测试多个不同浓度与BCL6片段蛋白结合的响应值，获得浓度依赖性曲线，并基于1:1结合模型拟合出所测化合物与蛋白之间的亲和力。
实验结果如图1所示，随着本发明化合物WH-007，WH-009，WH-023和 WH-025的浓度上升，其与BCL6片段蛋白的响应值也随之提高，两者的结合具有浓度依赖性，说明本发明化合物和BCL6片段蛋白能特异性的结合。根据不同浓度化合物与蛋白的响应值曲线作图，结果发现本发明化合物的平衡解离常数 KD处于0.4-5μM之间，KD值越小，代表两者之间亲和力越强。化合物WH-007 的KD值为1.61μM，WH-009的KD值为3.05μM，WH-023的KD值为0.47μM，WH-025的KD值为3.6μM，表明本发明化合物WH-007，WH-009，WH-023和 WH-025能与BCL6蛋白强烈结合。
实施例5：本发明化合物上调BCL6下游基因的表达
实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)是利用荧光信号的变化实时检测PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。本发明采用qRT-PCR来检查本发明化合物对BCL6下游基因表达的调节情况。BCL6为转录抑制因子，BCL6功能受到抑制其下游基因表达则会上调。对本发明化合物进行的相关检测如图2和图3所示；其中，图2是以WH-007，WH-009，WH-023和WH-025为例说明本发明化合物在BCL6阳性细胞株SUDHL4上的检测结果；图3是以WH-007和WH-023为例说明本发明化合物在BCL6阳性细胞株SUDHL4和BCL6阴性细胞株TOLEDO中设置浓度梯度对基因CD69和CXCR4的检测结果。
技术方法：
1.RNA的提取：
(1)在6cm皿中接入1.5mL细胞悬液和1.5mL用培养基稀释的双倍浓度的药物(终浓度5μM)，细胞经药物处理24h后离心收集细胞，使用预冷PBS洗 2遍；
(2)加入1mL Trizol试剂，用枪吹打裂解细胞，此时样品可放置于-80℃保存数星期；
(3)将裂解后的细胞12000rpm离心5分钟，取上清至新的1.5mL无RNAse 的EP管，加入200μL三氯甲烷(氯仿)，轻颠数次，静置5分钟后12000rpm 4℃离心15min；
(4)将上清吸入干净无RNAse的EP管中，注意不要吸到中间液相层，加入 500μL的异丙醇，轻颠数次，放置10分钟沉淀RNA；
(5)将样品12000rpm 4℃离心10min，尽量吸除上清，加入1mL 75％乙醇 (使用DEPC水配制)洗涤沉淀两次，室温晾干，之后加适量DEPC水溶解RNA 沉淀；
(6)紫外可见分光光度计测定RNA浓度和纯度。
2、qRT-PCR：
(1)反转录：mRNA逆转为cDNA。反应体系为20μL，其中ddH2O为15μL， 5×Mixbuffer为4μL，RNA为1Μl(1000ng)。反应条件为：37℃反应30min，85℃反应5s，16℃保存；
(2)qRT-PCR反应：根据Takara SYBR试剂盒进行。反应体系(25mL)如下： ddH2O为10μL，2×SYBR Mix buffer为12.5μL，上下游引物(10μM)各1μL，模板cDNA为0.5μL。BCL6下游基因CD69的引物序列为 CTGGTCACCCATGGAAGTG和CATGCTGCTGACCTCTGTGT，CXCR4的引物序列为AGGCCCTAGCTTTCTTCCAC和CTGCTCACAGAGGTGAGTGC， Caspase8的引物序列为CTGGGAGAAGGAAAGTTGGA和 CAAGGCTGCTGCTTCTCTCT，DUSP5的引物序列为:ATGGATCCCTGTGGAAGACA和TCACAGTGGACCAGGACCTT。内参基因 actin的引物序列为GTACGCCAACACAGTGCTG和 CGTCATACTCCTGCTTGCTG。反应条件为：预变性(95℃、5min)1个循环， PCR反应(95℃、30s，60℃、30s，72℃、30s)40个循环。
部分实验结果如图2和图3所示，图2中，化合物WH-007，WH-009，WH-023 和WH-025均能上调BCL6下游基因CXCR4，CD69，CASPASE8和DUSP5的表达，其中WH-023的效果最为显著，其对基因CASPASE8表达上调的效果达 10倍左右，对基因CXCR4和DUSP5表达上调的效果达几十倍，对基因CD69 的上调效果达2000多倍。图3A为细胞株SUDHL4和TOLEDO中BCL6蛋白的表达图。图3B中，化合物WH-007和WH-023在BCL6阳性细胞株SUDHL4中对CD69和CXCR4上调的效果明显优于阴性细胞株TOLEDO，尤其是化合物 WH-023，其在SUDHL4细胞中对基因CD69上调效果达2000多倍，而在TOLEDO 中上调基因CD69只有10倍左右。
实施例6：本发明化合物体内抑制小鼠生发中心的形成
生发中心反应是一种T细胞依赖性抗原免疫应答的过程，在这个过程中活化的B细胞经历克隆增殖、功能成熟到分化产生高亲和力抗体的浆细胞以及分化成记忆B细胞。在大多数的抗体应答抗原蛋白的反应中，生发中心(GC)B细胞以细胞表面蛋白GL7、FAS高表达为特征。生发中心形成的最主要调控因子 BCL6，是生发中心B细胞发育中所必须的转录抑制因子。在BCL6缺失的情况下，生发中心的形成被抑制。本实验采用小鼠体内生发中心形成模型，以WH-007 和WH-023为例来检测本发明化合物抑制BCL6功能进而对生发中心形成影响的效果。
技术方法：
1.动物免疫：采用8-10周的C57/BL6，腹腔注射100μg 4-羟基-3-硝基苯基乙酰基(NP)欧联的鸡γ球蛋白(CGG)，免疫两天后开始灌胃给药；
2.每天灌胃给药小鼠50mg/kg/d(低浓度)和100mg/kg/d(高浓度)的本发明化合物，化合物溶于羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，空白对照组灌胃给等体积的溶剂CMC-Na；
3.给药10天，即免疫12天处死小鼠，取小鼠脾脏并称量脾脏重量；
4.将小鼠脾脏置于70μm的cell strainer，用注射器内芯研磨。用MACS buffer(PBS+2％FBS)冲洗收集细胞悬液；
5.1500rpm离心5min，去上清；
6.加入红细胞裂解液ACK buffer，每个脾脏2mL，处理2min；
7.加入4倍体积的MACS buffer终止裂解，用70μm的cell strainer过滤去除杂质，1500rpm离心5min，去上清；
8.MACS buffer重悬细胞，并进行细胞计数；
9.将106个细胞重悬到100μL的MACS buffer里，分别加入1μL的 APC-B220，PE-FAS和FITC-GL7抗体于4℃孵育40min。
10.加入MACS buffer 1500rpm离心5min洗涤细胞，用500μL的MACS buffer重悬细胞并转移至流式管，上机检测。
实验结果如图4和图5所示，本发明化合物对小鼠生发中心的形成有抑制作用。图4A和图5A是小鼠脾脏重量的统计图，表明本发明化合物WH-007和 WH-023对小鼠脾脏没有影响。在较低的给药浓度下(50mg/kg/d)，本发明化合物 WH-007(图4B)和WH-023(图5B)对小鼠生发中心的形成就有显著的抑制，GCB cell(GL7+FAS+)的比例就有明显下降。图4C和图5C是在50mg/kg/d的给药剂量下，生发中心B细胞的百分比统计图。
实施例7：本发明化合物抑制LPS刺激的TNFα的表达。
小鼠RAW 264.7细胞(10000个/孔)分别加入96孔培养板中，然后加入LPS (100ng/ml)处理6小时，再加入浓度为100nM的本发明化合物WH-001至 WH-053继续处理12个小时，收集上清后用BD公司TNF-α的ELISA试剂盒对上清中的细胞因子含量进行检测。结果如图6所示，本发明化合物在较低浓度下都有抑制LPS激活的TNFα表达的能力，特别是化合物WH-007、WH-009、 WH-015、WH-023、WH-025、WH-030、WH-036、WH-037和WH-053都有强烈抑制LPS激活的TNFα表达的能力，具有较好的抗炎效果。
实施例8：本发明化合物对关节炎具有显著的治疗效果
胶原诱导关节炎模型Collagen‐Induced Arthritis in Mice
材料
1. 8‐10周、雌性C57BL/6小鼠
2. 100％冰醋酸(Merck,cat.no.1.00063.1000)
3.鸡II型胶原(Chondrex Inc.；cat.no.20011)。使用0.1M冰醋酸溶解胶原至浓度为2mg/ml。
4.弗氏完全佐剂CFA，5mg/ml(Chondrex Inc.；cat.no.7023)
方法
1.胶原乳化：实验中模型制备采用两次免疫的方法，两次均使用完全弗氏佐剂与鸡II型胶原乳化，体积比为1：1。
2.免疫小鼠：第0天，在小鼠尾根部皮下注射已经乳化好的胶原，每只100ul；同时以50mg/kg/2d浓度的本发明化合物WH-007、WH-009、WH-015、WH-023、 WH-025、WH-030、WH-036、WH-037和WH-053对小鼠进行灌胃给药，第21 天，进行第二次免疫，同样在小鼠尾根部第一次免疫点旁边注射乳化好的胶原，每只100ul。
3.小鼠观察评分：从第22天起每个2天观察小鼠，采用标准的四分法进行评分及脚掌厚度的测量，记录并分析实验结果。
附：临床评分标准四分法
实验结果表明，本发明化合物具有显著治疗关节炎的能力，图7是一个典型的治疗效果图，从图中可以发现，给予本发明化合物WH-007、WH-009、WH-015、 WH-023、WH-025、WH-030、WH-036、WH-037和WH-053一段时间治疗后，小鼠关节炎症状得到了极大的减轻，图7B评分上也证实了这一点，说明本发明化合物具有显著治疗关节炎的潜力。同时，本发明化合物还在其它自身免疫性疾病进行了治疗效果的评价，结果发现，本发明化合物在自身免疫性疾病如红斑狼疮、多发性硬化症、关节炎、皮肌炎、慢性甲状炎，青少年型糖尿病、恶习性贫血、萎缩性胃炎、非特异性溃疡性结肠炎、自身免疫性肾小球肾炎、肺肾出血性综合症、特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、自身免疫性溶血性贫血和特发性白细胞减少症等上都有明显的治疗效果。
实施例9：本发明化合物中含有末端哌嗪类和哌啶类官能团的化合物与BCL6蛋白的结合中发挥了关键作用
为验证末端哌嗪类和哌啶类官能团是否在本发明化合物与BCL6蛋白的结合中发挥了关键作用，本发明进行了如下对接实验：
技术方法：将本发明中含末端哌嗪类和吗啉类官能团的化合物在BCL‐6BTB 结构域中结合进行对接。BCL‐6BTB结构域结构来自于RCSB蛋白质数据库(PDB 编号为1R2B)。在该结构中，BCL‐6BTB区域是以二聚体形式结晶，同时在晶体中还存在SMRT蛋白的一段小肽(残基号从S1424到I1425)。分子对接前，采用 SWISS‐MODEL资源库对BCL‐6BTB结构补全残基，然后采用Grmoacs程序并用 amber力场对蛋白质进行加氢和能量最小化。得到的蛋白质作为分子对接的蛋白质结构文件。
进行对接前，本发明中用到的末端哌嗪类和吗啉类化合物分子运用量子化学计算软件Gaussion 03进行结构构型优化。优化应用密度泛函B3LYP方法在6‐31G (d)基组水平上进行计算优化。优化后的药物分子的可旋转键及扭转角根据AutoDock4.0进行确定，然后进行加电荷处理，得到用于分子对接的小分子结构文件。
本发明采用分子对接软件AutoDock4.0获取末端哌嗪和吗啉类分子与BCL‐6 BTB结构域结合信息。分子对接所需的蛋白和小分子结构文件和参数文件由程序自动生成。计算时选择自由能函数和Lamarckian遗传算法。分子对接过程中，以晶体结构中SMRT小肽在BCL‐6BTB结构域中的结合区域作为结合口袋，蛋白质侧链和小分子都保持柔性进行对接，每个分子进行500次独立的对接操作，选取打分最高的结合构象进行分析。
从图8A对接结果中可以发现，哌嗪类官能团在本发明化合物WH‐006与BCL‐6 蛋白的BTB区域结合中发挥了关键作用：含末端哌嗪类官能团的本发明化合物能与位于BCL‐6BTB区域14位组氨酸(H14)形成一个稳定的氢键，具体作用方式为哌嗪类官能团氮原子上的极性氢作为氢供体能与H14侧链咪唑环上不带氢的氮原子形成氢键，以此来稳定化合物分子与BCL‐6分子结合。这个氢键的存在对于化合物与蛋白特异性结合发挥了关键作用。本发明中其它含末端哌嗪类官能团的化合物如WH‐007至WH‐053等都有相似的结合模式。
从图8B对接结果中可以发现，含末端吗啉类官能团在本发明化合物WH‐005 与BCL‐6蛋白的BTB区域结合中发挥了关键作用：含末端吗啉类官能团的本发明化合物能与BCL‐6蛋白的BTB区域H14残基形成一个稳定的氢键作用，具体作用方式为吗啉类官能团氧原子作为氢受体与H14侧链咪唑环含氮原子上的极性氢作用，以此来稳定吗啉类化合物分子与BCL‐6分子结合。这个氢键的存在对于化合物与蛋白特异性结合发挥了关键作用。
这两部分的结果表明末端哌嗪类和哌啶类官能团的存在对本发明化合物与 BCL6蛋白的特异性结合有着非常重要的作用。
以下实施例提供了本发明001‐053部分化合物的制备方法及产物检测结果。
实施例1‐02、N2‐异丁氨基‐N4‐(3‐氯‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐002) 的制备
将乙胺置换成异丁胺，按制备化合物WH‐001的方法制备化合物WH‐002。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.10(s,1H),8.08(s,1H),7.89(d,J＝3.9Hz,1H), 7.66–7.64–7.63(m,1H),7.09(d,J＝9.0Hz,1H),6.86(s,1H),3.83(s,3H),3.03–3.00(m,2H),1.88–1.80(m,1H),0.88(d,J＝6.7Hz,6H).
实施例1‐03、N2‐乙醇氨基‐N4‐(3‐氯‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐003) 的制备
将乙胺置换成乙醇胺，按制备化合物WH‐001的方法制备化合物WH‐003。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.11(s,1H),7.98(s,1H),7.91(d,J＝3.9Hz,1H), 7.72–7.71(m,1H),7.09(d,J＝9.0Hz,1H),6.61(t,J＝5.7Hz,1H),4.63(t,J＝5.4 Hz,1H),3.83(s,3H),3.53–3.49(m,2H),3.29–3.26(m,2H).
实施例1‐04、N2‐丙醇氨基‐N4‐(3‐氯‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐004) 的制备
将乙胺置换成丙醇胺，按制备化合物WH‐001的方法制备化合物WH‐004。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.10(s,1H),8.03(s,1H),7.90(d,J＝3.9Hz,1H), 7.72–7.70–7.69(m,1H),7.09(d,J＝9.0Hz,1H),6.73(s,1H),4.43(t,J＝5.1Hz, 1H),3.83(s,3H),3.47(m,2H),3.25–3.24(m,2H),1.71–1.63(m,2H).
实施例1‐05、N2‐吗啉基‐N4‐(3‐氯‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐005)的制备
将乙胺置换成吗啉，按制备化合物WH‐001的方法制备化合物WH‐005。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.30(s,1H),8.03(d,J＝3.7Hz,1H),7.87(d,J＝2.6Hz, 1H),7.67–7.62(m,1H),7.13(d,J＝9.0Hz,1H),3.83(s,3H),3.67–3.61(m,4H), 3.60–3.54(m,4H).
实施例1‐08、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐(4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐008)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成3‐溴苯甲酸，按制备化合物WH‐007的方法制备化合物WH‐008。1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.35(s,1H),9.38(s,1H),8.16(s,1H), 8.04(d,J＝3.5Hz,1H),7.97(d,J＝7.8Hz,1H),7.80(d,J＝8.8Hz,1H),7.74(d,J＝ 9.0Hz,2H),7.69(d,J＝9.1Hz,2H),7.51(t,J＝7.9Hz,1H),4.49(d,J＝13.0Hz, 2H),3.12–3.00(m,2H),2.71–2.64(m,2H),1.19(d,J＝6.5Hz,6H).
实施例1‐09、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基)) 苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐009)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成3‐溴苯甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐009。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.65(s,1H),9.44(s,1H),8.12(d,J＝ 20.7Hz,2H),7.96(d,J＝3.6Hz,1H),7.79(d,J＝5.5Hz,1H),7.62(s,1H),7.55(s, 1H),7.49(s,1H),7.31(d,J＝6.3Hz,1H),4.60(d,J＝12.9Hz,2H),3.83(s,3H), 3.30–3.20(m,2H),2.99–2.83(m,2H),1.29(d,J＝6.2Hz,6H).
实施例1‐10、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(对氯苯酰胺基)) 苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐010)的制备
将6-溴-2-吡啶甲酸置换成对氯苯甲酸，按制备化合物WH-006的方法制备化合物WH-010。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.56(s,1H),9.44(s,1H),9.00(d,J ＝24.2Hz,1H),8.09(d,J＝5.4Hz,1H),7.98(d,J＝5.4Hz,2H),7.60–7.59(m,3H), 7.31(s,1H),4.60(d,J＝6.4Hz,2H),3.83(s,3H),3.30–3.15(m,2H),2.97–2.80 (m,2H),1.28(d,J＝0.6Hz,6H).
实施例1-11、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐氟‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH-011)的制备
将4‐硝基苯胺置换成3‐氟‐4硝基苯胺，将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成3‐溴苯甲酸，按制备化合物WH‐007的方法制备化合物WH‐011。1H NMR(500MHz,DMSO) δ9.59(s,1H),8.46(d,J＝2.3Hz,1H),8.39(d,J＝3.9Hz,1H),8.08(s,1H),7.92(d, J＝7.5Hz,1H),7.88(d,J＝8.6Hz,1H),7.82(d,J＝7.7Hz,1H),7.67(d,J＝8.7Hz, 1H),7.60(s,1H),7.53(t,J＝7.8Hz,1H),3.03–3.02(m,2H),3.00(d,J＝11.3Hz, 2H),2.31–2.30(m,2H),1.02(d,J＝6.1Hz,6H).
实施例1‐12、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基)) 苯基)‐5‐甲氧基‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐012)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对3‐溴苯甲酸，将5‐氟‐2,4‐二氯嘧啶置换成5‐甲氧基‐2,4‐二氯嘧啶，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐012。1H NMR (500MHz,DMSO)δ9.63(s,1H),8.81(s,1H),8.14(s,1H),7.96(d,J＝7.2Hz,1H), 7.84(s,1H),7.80(d,J＝7.4Hz,1H),7.67(s,1H),7.54–7.48(m,2H),7.40(d,J＝ 8.4Hz,1H),4.60(d,J＝13.3Hz,2H),3.86(s,3H),3.83(s,3H),3.27–3.26(m,2H), 2.86–2.77(m,2H),1.27(d,J＝5.6Hz,6H).
实施例1‐13、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基)) 苯基)‐5‐氯‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐013)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对3‐溴苯甲酸，将5‐氟‐2,4‐二氯嘧啶置换成5‐氯‐2,4‐二氯嘧啶，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐013。1H NMR(500 MHz,DMSO)δ9.62(s,1H),9.54(s,1H),8.14(s,1H),7.97(d,J＝10.9Hz,2H), 7.79(d,J＝4.4Hz,1H),7.61(s,1H),7.55–7.44(m,2H),7.09(d,J＝5.7Hz,1H), 4.73(d,J＝11.3Hz,2H),3.84(s,3H),3.29–3.22(m,2H),2.97–2.83(m,2H),1.30 (d,J＝5.5Hz,6H).
实施例1‐14、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基)) 苯基)‐5‐甲基‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐014)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对3‐溴苯甲酸，将5‐氟‐2,4‐二氯嘧啶置换成5‐甲基‐2,4‐二氯嘧啶，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐014。1H NMR(500 MHz,DMSO)δ9.60(s,1H),9.27(s,1H),8.14(s,1H),7.96(d,J＝7.4Hz,1H),7.79 (d,J＝7.5Hz,2H),7.69(s,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,1H),7.27(dd,J＝20.4,7.8Hz, 1H),5.97(s,1H),4.64(d,J＝12.4Hz,2H),3.83(s,3H),3.17(s,2H),2.98(s,2H), 2.17(s,3H),1.13(d,J＝6.1Hz,6H).
实施例1‐15、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基)) 苯基)‐6‐氯‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐015)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对3‐溴苯甲酸，将5‐氟‐2,4‐二氯嘧啶置换成6‐氯‐2,4‐二氯嘧啶，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐015。1H NMR(500 MHz,DMSO)δ9.60(s,1H),9.33(s,1H),8.14(s,1H),7.96(d,J＝7.8Hz,1H),7.93 (d,J＝5.6Hz,1H),7.78(d,J＝8.0Hz,1H),7.74(s,1H),7.49(d,J＝8.1Hz,2H), 7.01(dd,J＝8.6,2.0Hz,1H),6.05(d,J＝5.7Hz,1H),4.54(d,J＝12.1Hz,2H),3.84 (s,3H),3.17(d,J＝3.9Hz,2H),2.76(s,2H),1.03(d,J＝6.0Hz,6H).
实施例1‐16、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基)) 苯基)‐6‐甲基‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐016)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对3‐溴苯甲酸，将5‐氟‐2,4‐二氯嘧啶置换成6‐甲基‐2,4‐二氯嘧啶，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐016。1H NMR(500 MHz,DMSO)δ9.61(s,1H),8.27(s,1H),8.14(s,1H),7.96(d,J＝7.7Hz,1H),7.84 (s,1H),7.79(d,J＝7.7Hz,1H),7.57(s,1H),7.53(d,J＝8.5Hz,1H),7.50(d,J＝7.9 Hz,1H),7.29(dd,J＝8.6,1.9Hz,1H),4.55(d,J＝12.2Hz,2H),3.82(s,3H),3.17(s, 2H),3.02(s,2H),2.08(s,3H),1.15(d,J＝6.0Hz,6H).
实施例1‐17、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基)) 苯基)‐6‐三氟甲基‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐017)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对3‐溴苯甲酸，将5‐氟‐2,4‐二氯嘧啶置换成6‐三氟甲基‐2,4‐二氯嘧啶，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐017。1H NMR (500MHz,DMSO)δ9.89(s,1H),9.65(s,1H),8.14(s,1H),7.96(d,J＝7.0Hz,1H), 7.79(d,J＝7.8Hz,1H),7.67(s,1H),7.57(d,J＝8.6Hz,1H),7.50(d,J＝7.9Hz, 1H),7.05(dd,J＝8.6,2.0Hz,1H),6.44(s,1H),4.59(d,J＝11.6Hz,2H),3.85(s, 3H),3.00(s,2H),2.64(s,2H),1.24(s,1H),1.13(d,J＝6.0Hz,6H).
实施例1‐18、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(2‐噻吩酰胺基)) 苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐018)的制备
将6-溴-2-吡啶甲酸置换成噻吩-2-甲酸，按制备化合物WH-006的方法制备化合物WH-018。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.51(s,1H),9.36(s,1H),8.06(d,J ＝2.8Hz,1H),7.98(s,1H),7.83(d,J＝4.6Hz,1H),7.80(d,J＝8.3Hz,1H),7.68(s, 1H),7.50(d,J＝8.6Hz,2H),4.50(d,J＝12.4Hz,2H),3.83(s,3H),3.03–2.94(m, 2H),2.64–2.56(m,2H),1.11(d,J＝5.4Hz,6H).
实施例1‐19、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐溴‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐019)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成5‐溴噻吩‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐019。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.67(s,1H),9.45(s,1H),8.92 (d,J＝2.2Hz,1H),8.10(d,J＝2.2Hz,1H),7.85(d,J＝4.5Hz,1H),7.60(s,1H), 7.47(d,J＝7.3Hz,1H),7.34(s,1H),4.60(d,J＝13.4Hz,2H),3.83(s,3H),3.20– 3.16(m,2H),2.92–2.85(m,2H),1.27(d,J＝3.0Hz,6H).
实施例1‐20、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(4‐溴‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐020)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成4‐溴噻吩‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐020。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.68(s,1H),9.29(s,1H),8.07 (s,1H),8.02(d,J＝3.6Hz,1H),7.98(d,J＝1.3Hz,1H),7.76(d,J＝2.2Hz,1H), 7.45(d,J＝8.6Hz,1H),7.25(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),4.38(d,J＝10.0Hz,2H),3.84 (s,3H),2.71–2.64(m,2H),2.33–2.26(m,2H),0.99(d,J＝6.2Hz,6H).
实施例1‐21、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐021)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成3‐溴噻吩‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐021。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.52(s,1H),9.46(s,1H),8.83 (s,1H),8.10(d,J＝3.6Hz,1H),7.96(d,J＝5.2Hz,1H),7.64(d,J＝1.9Hz,1H), 7.34(dd,J＝8.8,1.9Hz,1H),7.31(d,J＝5.2Hz,1H),4.61(d,J＝14.5Hz,2H),3.93 (s,3H),3.29–3.23(m,2H),2.93–2.83(m,2H),1.28(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例1‐22、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐氯‐2‐呋喃酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐022)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对5‐氯呋喃‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐022。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.43(s,1H),9.30(s,1H), 8.09(s,1H),7.68–7.58(m,2H),7.38(d,J＝2.0Hz,1H),7.30(d,J＝8.1Hz,1H), 6.75(s,1H),4.60(d,J＝11.2Hz,2H),3.85(s,3H),3.28–3.18(m,2H),2.89–2.77 (m,2H),1.25(d,J＝1.2Hz,6H).
实施例1‐24、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐(2‐甲氧基)苯基‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐024)的制备
将苯硼酸置换成2‐甲氧基苯硼酸，按制备化合物WH‐023的方法制备化合物 WH‐024。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.49(s,1H),9.45(s,1H),8.10(s,1H),7.96 (s,1H),7.83(d,J＝5.6Hz,1H),7.67(s,1H),7.62(s,1H),7.56(d,J＝7.3Hz,1H), 7.38(s,1H),7.32(d,J＝6.2Hz,1H),7.19(d,J＝6.8Hz,1H),7.07(d,J＝5.5Hz, 1H),4.61(d,J＝11.4Hz,2H),3.95(s,3H),3.85(s,3H),3.29–3.19(m,2H),2.96– 2.81(m,2H),1.29(d,J＝1.2Hz,6H).
实施例1‐25、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐(2‐氯)苯基‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐025)的制备
将苯硼酸置换成2‐氯苯硼酸，按制备化合物WH‐023的方法制备化合物 WH‐025。1HNMR(500MHz,DMSO)δ9.66(s,1H),9.48(s,1H),8.11(d,J＝3.5Hz, 1H),8.03(d,J＝3.5Hz,1H),7.71(dd,J＝7.0,2.3Hz,1H),7.63(dd,J＝6.9,1.9Hz, 2H),7.52(dd,J＝7.9,6.4Hz,2H),7.48–7.44(m,2H),7.33(dd,J＝8.6,1.9Hz,1H), 4.61(d,J＝13.0Hz,2H),3.85(s,3H),3.30–3.29(m,2H),2.91–2.89(m,2H),1.29 (d,J＝6.3Hz,6H).
实施例1‐26、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐(3‐吡啶基)‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐026)的制备
将苯硼酸置换成3‐吡啶硼酸，按制备化合物WH‐023的方法制备化合物 WH‐026。1HNMR(500MHz,DMSO)δ9.65(s,1H),9.42(s,1H),8.99(s,1H),8.56 (s,1H),8.21–7.94(m,3H),7.73(d,J＝4.3Hz,1H),7.63(d,J＝3.4Hz,1H),7.51(d, J＝2.3Hz,2H),7.32(s,1H),4.59(d,J＝5.5Hz,2H),3.85(s,3H),3.27–3.17(m, 2H),2.92–2.75(m,2H),1.25(d,J＝3.6Hz,6H).
实施例1‐27、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐(3‐噻吩基)‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐027)的制备
将苯硼酸置换成3‐噻吩硼酸，按制备化合物WH‐023的方法制备化合物 WH‐027。1HNMR(500MHz,DMSO)δ9.53(s,1H),9.36(s,1H),8.06(d,J＝3.5Hz, 1H),7.96(d,J＝3.8Hz,1H),7.91(dd,J＝2.8,1.2Hz,1H),7.69(dd,J＝4.9,2.9Hz, 2H),7.54–7.50(m,2H),7.48(d,J＝3.9Hz,1H),7.29(dd,J＝8.6,1.9Hz,1H),4.50 (d,J＝12.0Hz,2H),3.85(s,3H),3.08–2.87(m,2H),2.60–2.59(m,2H),1.13(d,J ＝6.0Hz,6H).
实施例1‐28、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐溴‐2‐呋喃酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐028)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对5‐溴呋喃‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐028。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.40(s,1H),9.30(s,1H), 8.08(d,J＝1.9Hz,1H),7.64(d,J＝5.9Hz,1H),7.62(s,1H),7.34(s,1H),7.29(d,J ＝8.5Hz,1H),6.83(d,J＝3.3Hz,1H),4.54(d,J＝13.0Hz,2H),3.85(s,3H),3.14– 3.12(m,2H),2.73–2.66(m,2H),1.19(d,J＝4.8Hz,6H).
实施例1‐29、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴‐2‐呋喃酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐029)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对3‐溴呋喃‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐029。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.44(s,1H),9.10(s,1H), 8.10(d,J＝1.1Hz,1H),8.01(s,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.62(s,1H),7.33(d,J ＝7.8Hz,1H),6.95(s,1H),4.60(d,J＝12.8Hz,2H),3.89(s,3H),3.30–3.24(m, 2H),2.94–2.83(m,2H),1.28(d,J＝3.2Hz,6H).
实施例1‐30、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐(3‐呋喃基)‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐030)的制备
将苯硼酸置换成3‐呋喃硼酸，按制备化合物WH‐023的方法制备化合物 WH‐030。1HNMR(500MHz,DMSO)δ9.53(s,1H),9.44(s,1H),8.23(s,1H),8.10 (d,J＝3.0Hz,1H),7.95(s,1H),7.80(s,1H),7.62(s,1H),7.54(d,J＝8.5Hz,1H), 7.37(d,J＝3.5Hz,1H),7.32(d,J＝8.6Hz,1H),6.92(s,1H),4.61(d,J＝12.6Hz, 2H),3.85(s,3H),3.31–3.24(m,2H),2.90–2.89(m,2H),1.28(d,J＝5.4Hz,6H).
实施例1‐31、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(苯并噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐031)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对苯并噻吩‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐031。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.80(s,1H),9.47(s,1H), 8.35(s,1H),8.11(d,J＝3.5Hz,1H),8.05(d,J＝7.5Hz,1H),7.99(d,J＝7.0Hz, 1H),7.64(d,J＝2.0Hz,1H),7.60(d,J＝8.6Hz,1H),7.52–7.40(m,2H),7.34(dd, J＝8.6,2.0Hz,1H),4.61(d,J＝12.4Hz,2H),3.86(s,3H),3.30–3.26(m,2H),2.96 –2.84(m,2H),1.29(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例1‐32、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(苯并呋喃酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐032)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对苯并呋喃‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐032。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.48(s,1H),9.47(s,1H), 8.10(d,J＝3.0Hz,1H),7.83(t,J＝8.3Hz,2H),7.74(d,J＝7.2Hz,2H),7.66(s,1H), 7.52(t,J＝7.6Hz,1H),7.38(t,J＝7.5Hz,1H),7.34(d,J＝8.6Hz,1H),4.61(d,J＝ 12.7Hz,2H),3.90(s,3H),3.28–3.27(m,2H),2.91–2.89(m,2H),1.29(d,J＝6.1 Hz,6H).
实施例1‐33、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(吲哚酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐033)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对吲哚‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐033。1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.74(s,1H),9.42(d,J＝3.8Hz, 2H),8.08(d,J＝0.7Hz,1H),7.67(s,2H),7.46(d,J＝7.1Hz,1H),7.37–7.28(m, 2H),7.25–7.19(m,1H),7.11–7.02(m,1H),4.56(d,J＝10.9Hz,2H),3.87(s,3H), 3.20–3.10(m,2H),2.84–2.69(m,2H),1.21(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例1‐34、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐氯‐2‐吲哚酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐034)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对5‐氯吲哚‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐034。1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.95(s,1H),9.53(s,1H), 9.37(s,1H),8.06(s,1H),7.78(d,J＝8.1Hz,1H),7.71(d,J＝16.4Hz,2H),7.62(d, J＝7.2Hz,1H),7.50(d,J＝6.8Hz,1H),7.47(d,J＝8.4Hz,1H),7.36–7.32(m,1H), 4.50(d,J＝11.5Hz,2H),3.85(s,3H),3.32–3.30(m,2H),3.05–2.95(m,2H),1.12 (d,J＝5.6Hz,6H).
实施例1‐35、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐氟‐2‐吲哚酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐035)的制备
将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对5‐氟吲哚‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐035。1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.85(s,1H),9.49(s,1H), 9.39(s,1H),8.07(s,1H),7.68(s,1H),7.64(s,1H),7.44(d,J＝6.0Hz,2H),7.31(d, J＝10.5Hz,2H),7.08(s,1H),4.53(d,J＝10.3Hz,2H),3.85(s,3H),3.12–2.99(m, 2H),2.69–2.59(m,2H),1.15(d,J＝6.0Hz,6H).
实施例1‐37、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐硝基‐2‐呋喃乙基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐037)的制备
将5‐溴‐2‐噻吩溴乙基溴置换为5‐硝基‐2‐呋喃溴乙基溴，按制备化合物 WH‐036的方法制备化合物WH‐037。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.84(s,1H), 7.91(d,J＝3.8Hz,1H),7.63(d,J＝3.7Hz,1H),7.10–7.09(m,1H),6.92(d,J＝2.4 Hz,1H),6.80(d,J＝8.7Hz,1H),6.64(d,J＝3.8Hz,1H),4.41(d,J＝6.2Hz,2H), 4.35–4.34(m,2H),3.79(s,3H),2.67–2.64(m,2H),2.29–2.25(m,2H),0.99(d,J ＝6.2Hz,6H).
实施例1‐38、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐硝基‐2‐噻吩乙基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐038)的制备
将5‐溴‐2‐噻吩溴乙基溴置换为5‐硝基‐2‐噻吩溴乙基溴，按制备化合物 WH‐036的方法制备化合物WH‐038。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.88(s,1H), 8.02(d,J＝4.2Hz,1H),7.91(d,J＝3.7Hz,1H),7.14(d,J＝4.2Hz,1H),7.08–7.07 (m,1H),6.85(d,J＝2.3Hz,1H),6.82(d,J＝8.7Hz,1H),4.53(d,J＝6.2Hz,2H), 4.37(d,J＝12.0Hz,2H),3.81(s,3H),2.79–2.69(m,2H),2.38–2.28(m,2H),1.02 (d,J＝5.9Hz,6H).
实施例1‐39、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐溴‐2‐吡啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐039)的制备
将3‐甲氧基4‐硝基苯胺置换为3‐硝基‐4甲氧基苯，按制备化合物WH‐006 的方法制备化合物WH‐039。1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.35(s,1H),9.35(s, 1H),9.14(s,1H),8.92(s,1H),8.40(d,J＝8.4Hz,1H),8.07(d,J＝8.3Hz,1H),8.04 (s,1H),7.24(d,J＝8.8Hz,1H),7.12(d,J＝8.9Hz,1H),4.68(d,J＝13.4Hz,2H), 3.93(s,3H),3.27–3.26(m,2H),2.81–2.76(m,2H),1.20(d,J＝5.2Hz,6H).
实施例1‐40、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐硝基‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐040)的制备
将3‐甲氧基4‐硝基苯胺置换为3‐硝基‐4甲氧基苯，将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对5‐硝基噻吩‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐040。1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.13(s,1H),9.19(s,1H),8.29(d,J＝1.8Hz,1H),8.20 (d,J＝4.3Hz,1H),8.07(d,J＝3.8Hz,1H),7.96(d,J＝3.1Hz,1H),7.44–7.43(m, 1H),7.10(d,J＝8.9Hz,1H),4.34(d,J＝11.8Hz,2H),3.83(s,3H),2.64–2.62(m, 2H),2.24–2.20(m,2H),0.91(d,J＝6.0Hz,6H).
实施例1‐41、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐氨基‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐041)的制备
取化合物N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐硝基‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺100mg溶于10ml的甲醇中密封，在氮气保护下加入钯/炭35mg密封，将体系完全置换成氢气，反应过夜，简单处理后，柱层析得到WH‐041。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.29(s,1H),8.87(s,1H),8.63(s,1H), 8.10(d,J＝3.5Hz,1H),7.63(d,J＝4.0Hz,1H),7.37–7.34(m,1H),7.14(d,J＝8.9 Hz,1H),6.58(s,2H),6.01(d,J＝4.0Hz,1H),4.64(d,J＝11.4Hz,2H),3.96(s,3H), 3.17–2.97(m,2H),2.62–2.48(m,2H),1.22(d,J＝4.0Hz,6H).
实施例1‐42、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐溴‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐042)的制备
将3‐甲氧基4‐硝基苯胺置换为3‐硝基‐4甲氧基苯，将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对5‐溴噻吩‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐042。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.66(s,1H),9.30(s,1H),8.33(d,J＝2.4Hz,1H),8.02 (d,J＝3.6Hz,1H),7.88(d,J＝4.0Hz,1H),7.36(d,J＝4.0Hz,1H),7.31–7.30(m, 1H),7.08(d,J＝9.0Hz,1H),4.59(d,J＝13.3Hz,2H),3.83(s,3H),3.17–3.16(m, 2H),2.74–2.69(m,2H),1.19(d,J＝6.2Hz,7H).
实施例1‐43、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(4‐溴‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐043)的制备
将3‐甲氧基4‐硝基苯胺置换为3‐硝基‐4甲氧基苯，将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对4‐溴噻吩‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐043。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.70(s,1H),9.29(s,1H),8.34(d,J＝2.5Hz,1H),8.11(s, 1H),8.02(d,J＝3.4Hz,2H),7.34–7.33(m,1H),7.09(d,J＝9.0Hz,1H),4.57(d,J ＝12.2Hz,2H),3.84(s,3H),3.18–3.17(m,2H),2.67–2.61(m,2H),1.15(d,J＝ 0.7Hz,6H).
实施例1‐44、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(3‐溴‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐044)的制备
将3‐甲氧基4‐硝基苯胺置换为3‐硝基‐4甲氧基苯，将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对3‐溴噻吩‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐044。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.63(s,1H),9.32(s,1H),8.97(d,J＝2.3Hz,1H),8.04 (d,J＝3.6Hz,1H),8.00(d,J＝5.2Hz,1H),7.34(d,J＝5.3Hz,1H),7.23–7.22(m, 1H),7.11(d,J＝8.9Hz,1H),4.68(d,J＝12.2Hz,2H),3.93(s,3H),3.31–3.20(m, 2H),2.77–2.69(m,2H),1.20(d,J＝2.5Hz,6H).
实施例1‐45、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐溴‐2‐呋喃酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐045)的制备
将3‐甲氧基4‐硝基苯胺置换为3‐硝基‐4甲氧基苯，将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对5‐溴呋喃‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐045。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.27(s,1H),9.21(s,1H),8.50(d,J＝2.6Hz,1H),7.98 (d,J＝3.7Hz,1H),7.34(d,J＝3.6Hz,1H),7.07(d,J＝9.0Hz,1H),6.84(d,J＝3.6 Hz,1H),4.43(d,J＝11.9Hz,2H),3.85(s,3H),2.81–2.80(m,2H),2.38–2.34(m, 2H),1.00(d,J＝5.9Hz,6H).
实施例1‐46、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐氯‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐046)的制备
将3‐甲氧基4‐硝基苯胺置换为3‐硝基‐4甲氧基苯，将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对5‐氯噻吩‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐046。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.69(s,1H),9.33(s,1H),8.32(d,J＝2.6Hz,1H),8.03 (d,J＝3.6Hz,1H),7.94(d,J＝4.1Hz,1H),7.31–7.30(m,1H),7.27(d,J＝4.1Hz, 1H),7.09(d,J＝9.0Hz,1H),4.62(m,2H),3.83(s,3H),2.84–2.76(m,2H),2.09– 2.08(m,2H),1.23(d,J＝6.1Hz,6H).
实施例1‐47、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐苯并噻吩酰胺基)‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐047)的制备
将3‐甲氧基4‐硝基苯胺置换为3‐硝基‐4甲氧基苯，将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对苯并噻吩‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐047。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.75(s,1H),9.29(s,1H),8.47(d,J＝1.8Hz,1H),8.36 (s,1H),8.05(d,J＝7.6Hz,1H),8.03–7.97(m,2H),7.51–7.47(m,2H),7.34–7.33 (m,1H),7.11(d,J＝8.9Hz,1H),4.57(d,J＝13.0Hz,2H),3.87(s,3H),3.06–3.05 (m,2H),2.59–2.58(m,2H),1.12(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例1‐48、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐噁唑酰胺基)‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐048)的制备
将3‐甲氧基4‐硝基苯胺置换为3‐硝基‐4甲氧基苯，将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对噁唑甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐048。1H NMR(500 MHz,DMSO)δ10.00(s,1H),9.52(s,1H),8.94(s,1H),8.79(s,1H),8.67(s,1H), 8.02(s,1H),7.26(d,J＝7.0Hz,1H),7.09(d,J＝8.0Hz,1H),4.60(d,J＝12.0Hz, 2H),3.90(s,3H),3.23–3.08(m,2H),2.98–2.87(m,2H),1.28(d,J＝6.2Hz,6H).
实施例1‐49、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐嘧啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐049)的制备
将3‐甲氧基4‐硝基苯胺置换为3‐硝基‐4甲氧基苯，将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对5‐嘧啶甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐049。1H NMR (500MHz,DMSO)δ10.12(s,1H),9.52(s,1H),9.37(s,2H),9.27(s,1H),8.42(s, 1H),8.03(d,J＝3.6Hz,1H),7.38–7.36(m,1H),7.10(d,J＝9.0Hz,1H),4.57(d,J ＝13.5Hz,2H),3.83(s,3H),3.17–3.16(m,2H),2.96–2.89(m,2H),1.24(d,J＝ 6.1Hz,6H).
实施例1‐50、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(2‐吡啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐050)的制备
将3‐甲氧基4‐硝基苯胺置换为3‐硝基‐4甲氧基苯，将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对吡啶‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐050。1H NMR (500MHz,DMSO)δ10.54(s,1H),9.54(d,J＝9.6Hz,1H),9.16(d,J＝2.5Hz,1H), 8.99(d,J＝8.5Hz,1H),8.77(d,J＝4.5Hz,1H),8.13–8.12(m,1H),7.74–7.71(m, 1H),7.23–7.22(m,1H),7.13(d,J＝8.9Hz,1H),4.69(d,J＝12.6Hz,2H),3.95(s, 3H),3.33–3.30(m,2H),2.94–2.85(m,2H),1.22(d,J＝5.2Hz,6H).
实施例1‐51、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐溴‐3‐吡啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐051)的制备
将3‐甲氧基4‐硝基苯胺置换为3‐硝基‐4甲氧基苯，将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对5‐溴噻吩‐2‐甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐051。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.93(s,1H),9.33(s,1H),9.07(s,1H),8.93(s,1H),8.54 (s,1H),8.43(s,1H),8.03(s,1H),7.34(d,J＝8.9,1H),7.10(d,J＝9.0Hz,1H),4.60 (d,J＝15.7Hz,2H),3.84(s,3H),3.17–3.16(m,2H),2.74–2.68(m,2H),1.16(d,J ＝6.2Hz,6H).
实施例1‐52、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(4‐溴‐2‐吡啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐052)的制备
将3‐甲氧基4‐硝基苯胺置换为3‐硝基‐4甲氧基苯，将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对4‐溴‐2‐吡啶甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐052。1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.42(s,1H),9.36(s,1H),9.17(d,J＝2.5Hz,1H),8.67 (d,J＝5.2Hz,1H),8.28(d,J＝1.6Hz,1H),8.08–8.01(m,2H),7.24(d,J＝8.8,1H), 7.13(d,J＝8.9Hz,1H),4.69(d,J＝13.6Hz,2H),3.94(s,3H),3.29–3.28(d,J＝5.1 Hz,2H),2.83–2.78(m,2H),1.21(d,J＝5.8Hz,6H).
实施例1‐53、N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(6‐溴‐4‐吡啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺(WH‐053)的制备
将3‐甲氧基4‐硝基苯胺置换为3‐硝基‐4甲氧基苯，将6‐溴‐2‐吡啶甲酸置换成对6‐溴‐4‐吡啶甲酸，按制备化合物WH‐006的方法制备化合物WH‐053。1H NMR (500MHz,DMSO)δ9.99(s,1H),9.36(s,1H),8.61(d,J＝4.8Hz,1H),8.39(s,1H), 8.10(s,1H),8.04(d,J＝3.3Hz,1H),7.89(d,J＝4.4Hz,1H),7.35(d,J＝6.9Hz, 1H),7.11(d,J＝8.9Hz,1H),4.63(d,J＝13.3Hz,2H),3.84(s,3H),3.26–3.25(m, 2H),2.83–2.77(m,2H),1.20(d,J＝5.7Hz,6H)。
<110> 华东师范大学，上海邦耀生物科技有限公司
<120> 一类4-嘧啶二胺类小分子有机化合物及其衍生物及其应用
<160> 12
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 128
<212> Protein
<213> 人工序列
<400> 1
ADSCIQFTRHASDVLLNLNRLRSRDILTDVVIVVSREQFRAHKTVLMACSGLFYSIFTDQLKCNLSVINLDPEINPEGFCILLDFMYTSRLNLREGNIMAVMATAMYLQMEHVVDTCRKFIKASEGST
<210> 2
<211> 24
<212> Protein
<213> 人工序列
<400> 2
HISGLVATVKEAGRSIHEIPREEL
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
CTGGTCACCCATGGAAGTG
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
CATGCTGCTGACCTCTGTGT
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
AGGCCCTAGCTTTCTTCCAC
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
CTGCTCACAGAGGTGAGTGC
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
CTGGGAGAAGGAAAGTTGGA
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
CAAGGCTGCTGCTTCTCTCT
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
ATGGATCCCTGTGGAAGACA
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
TCACAGTGGACCAGGACCTT
<210> 11
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
GTACGCCAACACAGTGCTG
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
CGTCATACTCCTGCTTGCTG

Claims (15)

1.一类4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐，其特征在于，其结构如下式(I)所示：
其中：
R1和R2选自下列基团中的一个或多个：氢、卤素、C1‐C3烷氧基、C1‐C3烷胺基、羟基、硝基、氨基、羧基、且R1和R2不同时为氢；其中，R8选自下列基团中的一个或多个：氢、卤素、羟基、羧基、C1‐C3烷氧基、C1‐C3烷基、酯基、硝基、氨基、腈基；选自下列芳香基或杂环芳香基中的任意一个或者两个串联而成：苯环、吡啶、咪唑、呋喃、噻吩、吡唑、苯并噻吩、吲哚、喹啉、苯并呋喃，苯基噻吩，苯基呋喃；
R3选自下列基团中的一个：C1‐C5的链状醇氨基、C1‐C5的脂肪链状氨基、C3‐C6环氨基、四氢吡咯基、哌嗪基、C1‐C3烷基哌嗪基、哌啶基、C1‐C3烷基哌啶基、吗啉基、C1‐C3烷基吗啉基、硫代吗啉基、C1‐C3烷基硫代吗啉基；
R4选自下列基团中的一个：氢、卤素、腈基、三氟甲基、C1‐C3烷氧基、羟基、C1‐C3烷基。
2.根据权利要求1所述的4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐，其特征在于，当R3为哌嗪基或者2,6‐二烷基哌嗪时，其结构如下式(II)所示：
其中：
R1和R2选自下列基团中的一个或多个：氢、卤素、C1‐C3烷氧基、C1‐C3烷胺基、羟基、硝基、氨基、羧基、且R1和R2不同时为氢；其中，R8选自下列基团中的一个或多个：氢、卤素、羟基、羧基、C1‐C3烷氧基、C1‐C3烷基、酯基、硝基、氨基、腈基；选自下列芳香基或杂环芳香基中的任意一个或者两个串联而成：苯环、吡啶、咪唑、呋喃、噻吩、吡唑、苯并噻吩、吲哚、喹啉、苯并呋喃，苯基噻吩，苯基呋喃；
R4选自下列基团中的一个：氢、卤素、腈基、三氟甲基、C1‐C3烷氧基、羟基、C1‐C3烷基；
R5和R6分别选自下列基团中的一个：氢、C1‐C3烷基。
3.根据权利要求2所述的4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐，其特征在于，当R2为C1‐C3烷氧基或C1‐C3烷胺基时，其结构如下式(III)所示：
X为O或者N；
R1选自下列基团中的一个或多个：氢、卤素、C1‐C3烷氧基、C1‐C3烷胺基、羟基、硝基、氨基、羧基、且R1和R2不同时为氢；其中，R8选自下列基团中的一个或多个：氢、卤素、羟基、羧基、C1‐C3烷氧基、C1‐C3烷基、酯基、硝基、氨基、腈基；选自下列芳香基或杂环芳香基中的任意一个或者两个串联而成：苯环、吡啶、咪唑、呋喃、噻吩、吡唑、苯并噻吩、吲哚、喹啉、苯并呋喃，苯基噻吩，苯基呋喃；
R4选自下列基团中的一个：氢、卤素、腈基、三氟甲基、C1‐C3烷氧基、羟基、C1‐C3烷基；
R5和R6分别选自下列基团中的一个：氢、C1‐C3烷基；
R7为C1‐C3烷基。
4.根据权利要求3所述的4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐，其特征在于，当R1为时，其结构如下式(IV)所示：
其中：
X为O或者N；
R4选自下列基团中的一个：氢、卤素、腈基、三氟甲基、C1‐C3烷氧基、羟基、C1‐C3烷基；
R5和R6分别选自下列基团中的一个：氢、C1‐C3烷基；
R7为C1‐C3烷基；
R8选自下列基团中的一个或多个：氢、卤素、羟基、羧基、C1‐C3烷氧基、C1‐C3烷基、酯基、硝基、氨基、腈基；
选自下列芳香基或杂环芳香基中的任意一个或者两个串联而成：苯环、吡啶、咪唑、呋喃、噻吩、吡唑、苯并噻吩、吲哚、喹啉、苯并呋喃，苯基噻吩，苯基呋喃。
5.根据权利要求4所述的4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐，其特征在于，当X为氧原子时，其结构如下式(V)所示：
其中：
R4选自下列基团中的一个：氢、卤素、腈基、三氟甲基、C1‐C3烷氧基、羟基、C1‐C3烷基；
R5和R6分别选自下列基团中的一个：氢、C1‐C3烷基；
R7为C1‐C3烷基；
R8选自下列基团中的一个或多个：氢、卤素、羟基、羧基、C1‐C3烷氧基、C1‐C3烷基、酯基、硝基、氨基、腈基；
选自下列芳香基或杂环芳香基中的任意一个或者两个串联而成：苯环、吡啶、咪唑、呋喃、噻吩、吡唑、苯并噻吩、吲哚、喹啉、苯并呋喃，苯基噻吩，苯基呋喃。
6.根据权利要求5所述的4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐，其特征在于，当X为氧原子时，R5和R6为顺势甲基时，其结构如下式(VI)所示：
其中：
R4选自下列基团中的一个：氢、卤素、腈基、三氟甲基、C1‐C3烷氧基、羟基、C1‐C3烷基；
R7为C1‐C3烷基；
R8选自下列基团中的一个或多个：卤素、羟基、羧基、C1‐C3烷氧基、C1‐C3烷基、酯基、硝基、氨基、腈基；
选自下列芳香基或杂环芳香基中的任意一个或者两个串联而成：苯环、吡啶、咪唑、呋喃、噻吩、吡唑、苯并噻吩、吲哚、喹啉、苯并呋喃，苯基噻吩，苯基呋喃。
7.4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐，其特征在于，选自：
N2‐乙氨基‐N4‐(3‐氯‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐异丁氨基‐N4‐(3‐氯‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐乙醇氨基‐N4‐(3‐氯‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐丙醇氨基‐N4‐(3‐氯‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐吗啉基‐N4‐(3‐氯‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(6‐溴‐2‐吡啶酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐(4‐(6‐溴‐2‐吡啶酰胺基)苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐(4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐5‐甲氧基‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐5‐氯‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(对氯苯酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐氟‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐5‐甲基‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐6‐氯‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐6‐甲基‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴苯甲酰胺基))苯基)‐6‐三氟甲基‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐溴‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(4‐溴‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐氯‐2‐呋喃酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐苯基‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐(2‐甲氧基)苯基‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐(2‐氯)苯基‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐(3‐吡啶基)‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐(3‐噻吩基)‐2‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐溴‐2‐呋喃酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(3‐溴‐2‐呋喃酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐(3‐呋喃基)‐噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(苯并噻吩酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(苯并呋喃酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(吲哚酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐氯‐2‐吲哚酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐甲氧基‐4‐(5‐氟‐2‐吲哚酰胺基))苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐溴‐2‐噻吩乙基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐硝基‐2‐呋喃乙基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐硝基‐2‐噻吩乙基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐溴‐2‐吡啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐硝基‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐氨基‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐溴‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(4‐溴‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(3‐溴‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐溴‐2‐呋喃酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐氯‐2‐噻吩酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐苯并噻吩酰胺基)‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐恶唑酰胺基)‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(5‐嘧啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4‐((3‐(2‐吡啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4((3‐(5‐溴‐3‐吡啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4((3‐(4‐溴‐2‐吡啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺
N2‐((3S,5R)‐3,5‐二甲基哌嗪基)‐N4((3‐(6‐溴‐4‐吡啶酰胺基))‐4‐甲氧基苯基)‐5‐氟‐2,4‐嘧啶二胺。
8.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有如权利要求1‐7之任一项所述的4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
9.如权利要求1‐7之任一项所述的4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐在制备BCL6抑制剂中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐在制备抑制BCL6蛋白与多肽SMRT的相互作用，或上调BCL6下游基因CXCR4，CD69，Caspase8和DUSP5的表达药物中的应用。
11.如权利要求1‐7之任一项所述的4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐在制备抑制生发中心的形成的药物中的应用。
12.如权利要求1‐7之任一项所述的4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐在在制备预防和/或治疗BCL6介导的疾病药物中的应用；其中，所述疾病包括自身免疫性疾病、过敏或炎症；其中，所述自身免疫性疾病选自红斑狼疮、多发性硬化症、关节炎、皮肌炎、慢性甲状炎，青少年型糖尿病、恶习性贫血、萎缩性胃炎、非特异性溃疡性结肠炎、自身免疫性肾小球肾炎、肺肾出血性综合症、特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、自身免疫性溶血性贫血和特发性白细胞减少症。
13.如权利要求1‐7之任一项所述的4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。
14.如权利要求11所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括恶性肿瘤，所述4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐在制备抑制肿瘤细胞的增殖、生长、迁移和浸润、复发药物中的应用；其中，所述肿瘤或恶性肿瘤选自弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非小细胞肺癌、乳腺癌、B细胞急性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病、食管癌，卵巢癌，头颈部鳞状细胞癌、结肠癌、前列腺癌、肝癌。
15.如权利要求1‐7之任一项所述的4‐嘧啶二胺类小分子有机化合物或其相关类似物或药学上可接受的盐在制备抑制LPS刺激的TNFα的表达的抑制剂中的应用。
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