CN103483273A - 6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物及其制备与应用 - Google Patents

6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物及其制备与应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种如式（Ⅰ）所示的6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物，并公开了其制备方法，以及其在制备抗肿瘤药物中的应用，特别是在制备抗肺癌、白血病、子宫颈癌和绒毛膜癌药物中的应用。本发明提供了一种新的具有明显抗肿瘤活性的抗肿瘤药物，为新药筛选提供了研究基础，同时提供所述化合物的制备方法简单，利于工业化生产。

Description

6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物及其制备与应用
（一）技术领域
本发明涉及一种6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物及其制备与应用。
（二）背景技术
恶性肿瘤（癌）是目前危害人类生命健康的常见疾病。据世界卫生组织（WHO）最新公布的数据，近年来全球每年新增癌症病例达到1200万例，因癌症死亡的人数达到760万人，占全球死亡人数的13％。在中国，每年新增癌症病人约240万人，因癌症死亡人数约170万人，其中癌症死亡人在总死亡人数中占20%。而且，据WHO预计，在全球范围内，新增癌症病例和癌症患者死亡率将会以每年1％的速度递增，而在中国、印度等发展中国家增长速度会更快。
近几年来，对肿瘤学和肿瘤病灶部位分子水平研究的深入以及许多新的治疗靶点的发现，为开发各种新型抗肿瘤药物提供可能。随着对肿瘤细胞信号转导途径研究的不断深入，设计与研究新型抗肿瘤靶向药物越来越受研究人员的关注。
近十年来，酪氨酸激酶抑制剂作为新型靶向性抗肿瘤药物已经用于临床并取得了令人满意的治疗效果。以伊马替尼和达沙替尼为代表的嘧啶类酪氨酸激酶抑制剂是目前抗肿瘤药物研究热点领域之一，而分析这类药物的结构发现，大多数都是以嘧啶为骨架的2(4)-胺基取代的衍生物结构，由于“相似”的化合物具有相似的生物活性，所以合成并研究嘧啶类化合物有助于发现新的酪氨酸激酶抑制剂小分子并有望从中筛选出具有良好抗肿瘤活性的化合物。由于氟原子具有独特的物理化学性质，氟原子的引入将改变母体化合物的极性、酸碱性、药代动力学性质等，进而影响其生物活性。因此，制备一系列结构新颖的含氟嘧啶类酪氨酸激酶抑制剂，并进行抗肿瘤活性筛选和构效关系研究具有重要的现实意义。
（三）发明内容
本发明的目的是提供一类新的具有抗肿瘤活性的5-氟嘧啶类化合物：6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物，和该类化合物的制备方法，以及其在制备抗肿瘤药物，特别是制备抗肺癌、白血病、子宫颈癌和绒毛膜癌药物中的应用。
本发明采用的技术方案是：
一种6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物，其结构如式（I）所示：
Figure BDA0000381024850000021
式（I）中：
R为H、C1～C4烷基或卤素；
式（I）中所述R优选为下列之一：H、CH3（邻位、间位或对位取代均可）、Cl（优选为间位或对位取代）或F（优选为对位取代）。
所述化合物更优选为下列之一：
Figure BDA0000381024850000023
Figure BDA0000381024850000031
Figure BDA0000381024850000041
本发明还涉及所述6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物的制备方法，所述方法如下：以式（Ⅱ）所示的6-甲基-5-氟2-氯嘧啶-4-胺与式（III）所示的胺类化合物为原料，在有机溶剂中，在碱存在下于50～150℃下充分反应，反应液冷却至室温，再加入乙酸乙酯萃取，有机层用水洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，所得粗品经硅胶柱层析分离得到如式（Ⅰ）所示的6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物；
所述的碱为下列之一：K2CO3、KHCO3、KOAc、KF、Et3N、EtN(i-Pr)2、吡啶，优选为K2CO3；
所述的有机溶剂为下列之一：DMSO、DMF、DMA、1,4-二氧六环、甲苯、乙腈、氯仿、四氢呋喃、乙醇，优选为DMSO；
所述6-甲基-5-氟2-氯嘧啶-4-胺、胺类化合物、碱的投料摩尔比为1：1～6：1～5，优选为1：3～5：2～3；
Figure BDA0000381024850000051
式（Ⅱ）、（III）中，R、定义如前所述。
所述式（Ⅱ）所示的6-甲基-5-氟2-氯嘧啶-4-胺可由如下方法制得：以式（IV）所示的6-甲基-5-氟-2,4-二氯嘧啶与式（V）所示的芳香胺为原料，在有机溶剂中，在碱存在下于30～150℃（优选在60℃下）下充分反应，反应液冷却至室温，再加入乙酸乙酯萃取，有机层用水洗1～3次，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，所得粗品经硅胶柱层析分离得到式（Ⅱ）所示的6-甲基-5-氟2-氯嘧啶-4-胺；
所述的碱为下列之一：K2CO3、KHCO3、KOAc、KF、Et3N、EtN(i-Pr)2、吡啶，优选为K2CO3；
所述的有机溶剂为下列之一：DMSO、DMF、DMA、1,4-二氧六环、甲苯、乙腈、氯仿、四氢呋喃，优选为DMSO；
所述6-甲基-5-氟-2,4-二氯嘧啶、芳香胺、碱的投料摩尔比为1：0.9～1.5：1～3，优选为1：1：1；
Figure BDA0000381024850000053
式（V）中，R定义如前所述。
所述的如式（IV）所示的6-甲基-5-氟-2,4-二氯嘧啶是按如下合成路线制备的：由式（IX）所示的2-氟乙酰乙酸乙酯出发，在甲醇钠的甲醇溶液中与式（VIII）所示的O-甲基异脲硫酸单甲酯盐进行缩合反应，制得嘧啶中间体（VII）；中间体（VII）在浓盐酸中进行酸解反应得到中间体（VI）；中间体（VI）再用三氯氧磷氯代制得关键中间体（IV）。
Figure BDA0000381024850000054
Figure BDA0000381024850000061
具体方法为：
（1）制备如式（VIII）所示的O-甲基异脲硫酸单甲酯盐：
在反应瓶中加入等量的尿素和硫酸二甲酯，搅拌下加热升温至50℃，保温反应6h，即得淡黄色透明粘稠液体，直接用于下一步反应。
（2）制备如式（VII）所示的6-甲基-4-羟基-2-甲氧基-5-氟嘧啶：
在装有干燥器及回流冷凝管的反应瓶中，加入无水甲醇，搅拌下分批加入金属钠丝，保持回流反应。待钠丝反应完毕后，冷却反应液至室温，加入如式（VIII）所示的O-甲基异脲硫酸单甲酯盐，再加入如式（IX）所示的2-氟乙酰乙酸乙酯，升温回流反应5h。反应停止后，减压蒸馏除去甲醇，加入适量水，以及适量活性炭在80℃下搅拌脱色1h，过滤得到深棕色液体，用2mol/L稀盐酸调pH至3，析出大量黄色沉淀，过滤烘干得米色固体。
（3）制备如式（VII）所示的6-甲基-5-氟脲嘧啶：
在反应瓶中加入6-甲基-4-羟基-2-甲氧基-5-氟嘧啶，适量的浓盐酸，升温至45℃搅拌3h。反应液用冰水浴冷却3小时，过滤得到灰白色固体。
（4）制备如式（IV）所示的6-甲基-5-氟-2,4-二氯嘧啶：
在反应瓶中加入6-甲基-5-氟脲嘧啶以及三氯氧磷，开启搅拌，待反应液升温至90℃后开始滴加二甲苯胺，约0.5h滴完。保温反应5h。反应完毕后，在冰浴下冷却缓慢滴加适量水，控制体系温度不超过30℃，再加入适量二氯甲烷以及适量活性炭，搅拌脱色1h，过滤，水洗至中性，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，得黄色液体，经冷藏放置后，逐渐形成晶体。
本发明还涉及所述的6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
优选的，所述抗肿瘤药物为治疗子宫颈癌、肺癌、白血病或绒毛膜癌的药物。
优选的，所述抗肿瘤药物为治疗子宫颈癌的药物，所述6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物为下列之一：式（I-1）化合物、式（I-7）化合物、式（I-9）化合物、式（I-15）化合物、式（I-17）化合物、式（I-19）化合物、式（I-20）化合物、式（I-24）化合物、式（I-27）化合物、式（I-28）化合物、式（I-29）化合物、式（I-30）化合物、式（I-32）化合物。经实验证实，化合物Ⅰ-1、Ⅰ-7、Ⅰ-9、Ⅰ-15、Ⅰ-17、Ⅰ-19、Ⅰ-20、Ⅰ-24、Ⅰ-27、Ⅰ-28、Ⅰ-29、Ⅰ-30和Ⅰ-32对Hela细胞株导致的人子宫颈癌具有较好的抗肿瘤活性，化合物Ⅰ-10、Ⅰ-13、Ⅰ-14、Ⅰ-26和Ⅰ-34对其有一定的抗肿瘤活性。
优选的，所述抗肿瘤药物为治疗肺癌的药物，所述6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物为下列之一：式（I-7）化合物、式（I-19）化合物、式（I-20）化合物、式（I-24）化合物、式（I-25）化合物式（I-28）化合物、式（I-29）化合物。经实验证实，化合物Ⅰ-7、Ⅰ-19、Ⅰ-20、Ⅰ-24、Ⅰ-25、Ⅰ-28和Ⅰ-29对A549细胞株导致的肺癌具有较好的抗肿瘤活性，化合物Ⅰ-9、Ⅰ-10、Ⅰ-14、Ⅰ-15、Ⅰ-17、Ⅰ-21、Ⅰ-22、Ⅰ-27和Ⅰ-30对其有一定的抗肿瘤活性。
优选的，所述抗肿瘤药物为治疗白血病的药物，所述6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物为下列之一：式（I-30）化合物、式（I-32）化合物。经实验证实，化合物Ⅰ-30和Ⅰ-32对HL-60细胞株导致的人白血病具有显著的抗肿瘤活性，化合物Ⅰ-7、Ⅰ-8、Ⅰ-9、Ⅰ-11、Ⅰ-13、Ⅰ-22、Ⅰ-24、Ⅰ-27、Ⅰ-28、Ⅰ-31和Ⅰ-33对其有较好的抗肿瘤活性。
优选的，所述抗肿瘤药物为治疗绒毛膜癌的药物，所述6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物为式（I-28）化合物。经实验证实，化合物Ⅰ-28对Bewo细胞株导致的人绒毛膜癌具有较好的抗肿瘤活性，化合物Ⅰ-8、Ⅰ-10、Ⅰ-11、Ⅰ-15、Ⅰ-16、Ⅰ-17、Ⅰ-18、Ⅰ-22、Ⅰ-24、Ⅰ-25、Ⅰ-29和Ⅰ-30对其有一定的抗肿瘤活性。
本发明的有益效果主要体现在：（1）提供了一种制备6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物的方法；（2）提供了一种新的、对肿瘤细胞具有明显抑制作用的抗肿瘤药物，为新药筛选提供了基础；（3）所提供的制备6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物的方法简单，有利于工业生产。
（四）具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
制备如式（VIII）所示的O-甲基异脲硫酸单甲酯盐：
在100ml三口瓶中加入尿素27g（0.45mol），硫酸二甲酯57g（0.45mol），开启搅拌，加热升温至50℃，保温反应6h，得淡黄色透明粘稠液体。
制备如式（VII）所示的6-甲基-4-羟基-2-甲氧基-5-氟嘧啶：
在装有干燥器及回流冷凝管的250ml四口瓶中，加入150ml无水甲醇，搅拌下分批加入9.6g Na丝（0.4mol），保持回流反应直至钠丝消失，冷却反应液至室温，加入O-甲异脲硫酸单甲酯盐38.9g（0.209mol），反应体系变成乳白色液体，再加入2-氟乙酰乙酸乙酯14.0g（0.105mol），升温回流反应5h。反应停止后，减压蒸馏除去甲醇，加入100ml水，加入适量活性炭，80℃下搅拌脱色1h，过滤得到深棕色液体，用2mol/L稀盐酸调PH至3，析出大量黄色沉淀，过滤烘干得米黄色固体11.0g。m.p.236-239℃，收率66.6%。
制备如式（VII）所示的6-甲基-5-氟脲嘧啶：
在100ml三口瓶中加入6.3g6-甲基-4-羟基-2-甲氧基-5-氟嘧啶（0.04mol），30ml浓盐酸，升温至45℃搅拌3h，冷却过滤得到灰白色固体，烘干3.7g，收率64.5%。
制备如式（IV）所示的6-甲基-5-氟-2,4-二氯嘧啶：
在100ml三口瓶中加入3.7g6-甲基-5-氟脲嘧啶（0.026mol），23.9(0.156mol)g三氯氧磷，搅拌，升温至90℃后开始滴加6.3g(0.052mol)二甲苯胺，约0.5h滴完,再保温反应5h。反应完毕后，在冰浴下缓慢滴加30ml水，控制体系温度不超过30℃，再加入30ml二氯甲烷，适量活性炭，搅拌脱色1h，过滤，水洗至中性，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，得黄色液体，经冷藏放置后，逐渐形成晶体，3.5g，m.p.38-40℃，收率74.5%。
实施例1：制备6-甲基-N-苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺：
Figure BDA0000381024850000081
在试管反应器中加入6-甲基-5-氟-2,4-二氯嘧啶0.181g（1mmol），苯胺0.093g（1mmol），KHCO30.1g（1mmol）和1ml DMSO，升温至60℃保温反应6h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到微黄色固体产物0.226克。m.p.145-147℃，收率95.4%。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.70-7.52(m,2H,ArH),7.41-7.30(m,2H,ArH),7.18-7.07(m,1H,ArH),6.89(s,1H,NH),2.41(d,J=3.0Hz,3H,CH3).
实施例2：制备6-甲基-N-间甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺：
Figure BDA0000381024850000082
在试管反应器中加入6-甲基-5-氟-2,4-二氯嘧啶0.181g（1mmol），间甲基苯胺0.107g（1mmol），KHCO30.1g（1mmol）和1ml DMSO，升温至60℃保温反应6h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到白色固体产物0.236克。m.p.99-101℃，收率94.0%。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.52-7.43(m,1H,ArH),7.35(s,1H,ArH),7.27-7.21(m,1H,ArH),6.96(d,J=7.5Hz,1H,ArH),6.85(s,1H,NH),2.41(d,J=3.0Hz,3H,CH3),2.37(s,3H,CH3).
实施例3：制备6-甲基-N-对甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺：
在试管反应器中加入6-甲基-5-氟-2,4-二氯嘧啶0.181g（1mmol），对甲基苯胺0.107g（1mmol），KHCO30.1g（1mmol）和1ml DMSO，升温至60℃保温反应6h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到白色固体产物0.216克。m.p.133-135℃，收率85.8%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.49(d,J=8.4Hz,2H,ArH),7.19(d,J=8.3Hz,2H),6.88(s,1H,NH),2.41(d,J=3.0Hz,3H,CH3),2.36(s,3H,CH3).
实施例4：制备6-甲基-N-邻甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺：
Figure BDA0000381024850000092
在试管反应器中加入6-甲基-5-氟-2,4-二氯嘧啶0.181g（1mmol），邻甲基苯胺0.107g（1mmol），KHCO30.1g（1mmol）和1ml DMSO，升温至60℃保温反应6h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到白色固体产物0.238克。M.p.157-159℃，收率94.5%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.85(d,J=8.1Hz,1H,ArH),7.29(d,J=7.4Hz,1H,ArH),7.26(d,J=7.6Hz,1H,ArH),7.15(td,J=7.4,0.8Hz,1H,ArH),6.71(s,1H,NH),2.43(d,J=3.1Hz,3H,CH3),2.32(s,3H,CH3).
实施例5：制备6-甲基-N-对氯苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺：
Figure BDA0000381024850000101
在试管反应器中加入6-甲基-5-氟-2,4-二氯嘧啶0.181g（1mmol），对氯苯胺0.128g（1mmol），KHCO30.1g（1mmol）和1ml DMSO，升温至60℃保温反应6h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到淡黄色固体产物0.210克。M.p.146-148℃，收率77.2%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.59(d,J=8.9Hz,2H,ArH),7.35(d,J=8.8Hz,2H,ArH),6.93(s,1H,NH),2.43(d,J=3.0Hz,3H,CH3).
实施例6：制备6-甲基-N-间氯苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺：
在试管反应器中加入6-甲基-5-氟-2,4-二氯嘧啶0.181g（1mmol），间氯苯胺0.128g（1mmol），KHCO30.1g（1mmol）和1ml DMSO，升温至60℃保温反应6h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到白色固体产物0.222克。M.p.115-117℃，收率81.7%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.71(t,J=2.0Hz,1H,ArH),7.56-7.52(m,1H,ArH),7.32(t,J=8.1Hz,1H,ArH),7.16-7.12(m,1H,ArH),6.93(s,1H,NH),2.44(d,J=3.0Hz,3H,CH3).
实施例7：制备6-甲基-N-对氟苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺：
Figure BDA0000381024850000103
在试管反应器中加入6-甲基-5-氟-2,4-二氯嘧啶0.181g（1mmol），对氟苯胺0.111g（1mmol），KHCO30.1g（1mmol）和1ml DMSO，升温至60℃保温反应6h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到白色固体产物0.249克。M.p.90-92℃，收率97.4%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.64-7.54(m,2H,ArH),7.15-7.05(m,2H,ArH),6.90(s,1H,NH),2.42(d,J=3.0Hz,3H,CH3).
实施例8：制备6-甲基-N-苯基-2-吗啉基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-1）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.238g（1mmol），吗啉0.435g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至130℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到白色固体产物0.259克。M.p.150-153℃,收率90.1%。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.57(d,J=7.7Hz,2H,ArH),7.32(t,J=7.9Hz,2H,ArH),7.06(t,J=7.4Hz,1H,ArH),6.66(s,1H,NH),3.79-3.72(m,4H,CH2),3.72-3.64(m,4H,CH2),2.29(d,J=2.6Hz,3H,CH3).
实施例9：制备6-甲基-N-苯基-2-哌啶基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-2）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.238g（1mmol），哌啶0.425g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到黄色固体产物0.269克。M.p.123-124℃,收率94.0%。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.60(d,J=8.2Hz,2H,ArH),7.31(t,J=7.8Hz,2H,ArH),7.03(t,J=7.3Hz,1H,ArH),6.60(s,1H,NH),3.70(d,J=5.5Hz,4H,CH2),2.27(d,J=2.7Hz,3H,CH3),1.60(d,J=8.3Hz,6H,CH2).
实施例10：制备6-甲基-N-苯基-2-吡咯烷基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-3）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.238g（1mmol），吡咯烷0.35g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到黄色固体产物0.248克。M.p.146-149℃，收率91.2%。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.77–7.64(m,2H,ArH),7.31(dd,J=10.7,5.2Hz,2H,ArH),7.02(t,J=7.4Hz,1H,ArH),6.63(s,1H,NH),3.55(t,J=6.6Hz,4H,CH2),2.30(d,J=2.9Hz,3H,CH3),2.04-1.90(m,4H,CH2).
实施例11：制备6-甲基-N-苯基-2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-4）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.238g（1mmol），羟乙基哌嗪0.65g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以二氯甲烷/甲醇(V/V=20/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到黄色固体产物0.256克。M.p.143-145℃，收率77.5%。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.58(d,J=7.7Hz,2H,ArH),7.32(t,J=7.9Hz,2H,ArH),7.05(t,J=7.4Hz,1H,ArH),6.65(s,1H,NH),3.79-3.71(m,4H,CH2),3.70-3.64(m,2H,CH2),2.70(s,1H,OH),2.59(m,6H,CH2),2.28(d,J=2.9Hz,3H,CH3).
实施例12：制备6-甲基-N-苯基-2-[(2-二乙胺基)乙胺基]-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-5）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.238g（1mmol），N,N-二乙基乙二胺0.58g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以二氯甲烷/甲醇(V/V=15/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到白色固体产物0.269克。M.p.103-105℃，收率85.0%。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.65(d,J=7.8Hz,2H,ArH),7.32(t,J=7.9Hz,2H,ArH),7.05(t,J=7.4Hz,1H,ArH),6.64(s,1H,NH),5.28(s,1H,NH),3.41(q,J=8.0Hz,2H,CH2),2.63(t,J=7.5Hz,2H,CH2),2.56(q,J=7.1Hz,4H,CH2),2.26(d,J=2.8Hz,3H,CH3),1.02(t,J=7.1Hz,6H,CH3).
实施例13：制备6-甲基-N-间甲苯基-2-吗啉基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-6）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-间甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.252g（1mmol），吗啉0.435g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至130℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到微黄色固体产物0.270克。M.p.146-149℃，收率89.4%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.47(d,J=8.1Hz,1H,ArH),7.41(s,1H,ArH),7.24(t,J=7.8Hz,1H,ArH),6.91(d,J=7.5Hz,1H,ArH),6.64(s,1H,NH),3.79-3.76(m,4H,CH2),3.73(d,J=5.1Hz,4H,CH2),2.37(s,3H,CH3),2.30(d,J=1.9Hz,3H,CH3).
实施例14：制备6-甲基-N-间甲苯基-2-哌啶基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-7）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-间甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.252g（1mmol），哌啶0.425g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到黄色固体产物0.280克。M.p.114-116℃，收率93.3%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.51(s,1H,ArH),7.45(d,J=8.1Hz,1H,ArH),7.24(t,J=7.8Hz,1H,ArH),6.89(d,J=7.5Hz,1H,ArH),6.60(s,1H,NH),3.74(d,J=5.3Hz,4H,CH2),2.37(s,3H,CH3),2.30(d,J=1.5Hz,3H,CH3),1.67-1.58(m,6H,CH2).
实施例15：制备6-甲基-N-间甲苯基-2-吡咯烷基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-8）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-间甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.252g（1mmol），吡咯烷0.35g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到黄色固体产物0.239克。M.p.110-112℃，收率83.9%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.57(d,J=9.1Hz,2H,ArH),7.23(t,J=7.7Hz,1H,ArH),6.88(d,J=7.5Hz,1H,ArH),6.63(s,1H,NH),3.58(t,J=6.6Hz,4H,CH2),2.37(s,3H,CH3),2.32(d,J=2.8Hz,3H,CH3),2.04-1.94(m,4H,CH2).
实施例16：制备6-甲基-N-间甲苯基-2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-9）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-间甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.252g（1mmol），羟乙基哌嗪0.65g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以二氯甲烷/甲醇(V/V=20/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到黄色固体产物0.279克。M.p.125-127℃，收率80.9%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.45(d,J=8.6Hz,2H,ArH),7.23(t,J=7.6Hz,1H,ArH),6.90(d,J=7.4Hz,1H,ArH),6.68(s,1H,NH),3.80(s,4H,CH2),3.70(t,J=5.2Hz,2H,CH2),3.39(s,1H,OH),2.63(dd,J=10.4,5.4Hz,6H,CH2),2.36(s,3H,CH3),2.29(d,J=2.4Hz,3H,CH3).
实施例17：制备6-甲基-N-间甲苯基-2-[(2-二乙胺基)乙胺基]-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-10）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-间甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.252g（1mmol），N,N-二乙基乙二胺0.58g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2mlDMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以二氯甲烷/甲醇(V/V=15:1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到白色固体产物0.271克。M.p.77-79℃，收率82.0%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.54(d,J=8.0Hz,1H,ArH),7.47(s,1H,ArH),7.22(t,J=7.8Hz,1H,ArH),6.89(d,J=7.4Hz,1H,ArH),6.65(s,1H,NH),3.30(s,1H,NH),3.43(q,J=6.0Hz,2H,CH2),2.64(t,J=6.2Hz,2H,CH2),2.56(q,J=7.1Hz,4H,CH2),2.36(s,3H,CH3),2.28(d,J=2.6Hz,3H,CH3),1.02(t,J=7.1Hz,6H,CH3).
实施例18：制备6-甲基-N-对甲苯基-2-吗啉基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-11）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-对甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.252g（1mmol），吗啉0.435g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2mlDMSO，升温至130℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到淡黄色固体产物0.296克。M.p.180-182℃，收率98.0%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.48(d,J=8.4Hz,2H,ArH),7.16(d,J=8.3Hz,2H,ArH),6.61(s,1H,NH),3.79-3.74(m,4H,CH2),3.71(dd,J=8.1,3.7Hz,4H,CH2),2.35(s,3H,CH3),2.30(d,J=2.2Hz,3H,CH3).
实施例19：制备6-甲基-N-对甲苯基-2-哌啶基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-12）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-对甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.252g（1mmol），哌啶0.425g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到微黄色固体产物0.288克。M.p.145-147℃，收率96.0%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.52(d,J=8.4Hz,2H,ArH),7.16(d,J=8.3Hz,2H,ArH),6.56(s,1H,NH),3.75-3.68(m,4H,CH2),2.34(s,3H,CH3),2.29(d,J=2.1Hz,3H,CH3),1.67-1.58(m,6H,CH2).
实施例20：制备6-甲基-N-对甲苯基-2-吡咯烷基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-13）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-对甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.252g（1mmol），吡咯烷0.35g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯（V/V=8/1）为洗脱剂经硅胶柱层析得到白色固体产物0.277克。M.p.118-120℃，收率97.3%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.62(d,J=8.5Hz,2H,ArH),7.15(d,J=8.3Hz,2H,ArH),6.59(s,1H,NH),3.56(t,J=6.6Hz,4H,CH2),2.34(s,3H,CH3),2.31(d,J=2.8Hz,3H,CH3),2.02-1.91(m,4H,CH2).
实施例21：制备6-甲基-N-对甲苯基-2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-14）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-对甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.252g（1mmol），羟乙基哌嗪0.65g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以二氯甲烷/甲醇(V/V=20/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到微黄色固体产物0.287克。M.p.128-130℃，收率83.2%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.49(d,J=8.4Hz,2H,ArH),7.16(d,J=8.3Hz,2H,ArH),6.60(d,J=2.5Hz,1H,NH),3.85-3.71(m,4H,CH2),3.68(t,J=5.3Hz,2H,CH2),2.75(s,1H,OH),2.65-2.52(m,6H,CH2),2.35(s,3H,CH3),2.29(d,J=2.9Hz,3H,CH3).
实施例22：制备6-甲基-N-对甲苯基-2-[(2-二乙胺基)乙胺基]-5-氟嘧啶-4-胺：（Ⅰ-15）
在试管反应器中加入6-甲基-N-对甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.252g（1mmol），N,N-二乙基乙二胺0.58g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以二氯甲烷/甲醇(V/V=15/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到白色固体产物0.288克。M.p.91-93℃,收率87.0%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.53(d,J=8.4Hz,2H,ArH),7.15(d,J=8.3Hz,2H,ArH),6.60(d,J=2.3Hz,1H,NH),5.29(s,1H,NH),3.47(q,J=5.9Hz,2H,CH2),2.70(t,J=6.1Hz,2H,CH2),2.63(q,J=6.9Hz,4H,CH2),2.34(s,3H,CH3),2.27(d,J=2.9Hz,3H,CH3),1.07(t,J=7.1Hz,6H,CH3).
实施例23：制备6-甲基-N-邻甲苯基-2-吗啉基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-16）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-邻甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.252g（1mmol），吗啉0.435g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至130℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到白色固体产物0.265克。M.p.108-110℃，收率87.6%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.99(d,J=8.0Hz,1H,ArH),7.24(dd,J=9.9,7.9Hz,2H,ArH),7.06(t,J=7.4Hz,1H,ArH),6.48(s,1H,NH),3.76-3.71(m,4H,CH2),3.70-3.65(m,4H,CH2),2.32(s,3,CH3),2.31(d,J=2.8Hz,3H,CH3).
实施例24：制备6-甲基-N-邻甲苯基-2-哌啶基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-17）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-邻甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.252g（1mmol），哌啶0.425g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到淡黄色固体产物0.263克。M.p.82-84℃，收率87.5%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:8.10(d,J=8.0Hz,1H,ArH),7.24(dd,J=17.5,7.9Hz,2H,ArH),7.04(t,J=7.3Hz,1H,ArH),6.45(s,1H,NH),3.69(d,J=5.1Hz,4H,CH2),2.33(s,3H,CH3),2.31(d,J=2.3Hz,3H,CH3),1.67-1.54(m,6H,CH2).
实施例25：制备6-甲基-N-邻甲苯基-2-吡咯烷基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-18）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-邻甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.252g（1mmol），吡咯烷0.35g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到淡黄色固体产物0.245克。M.p.103-105℃，收率86.0%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:8.31(d,J=8.1Hz,1H,ArH),7.27-7.19(m,2H,ArH),7.02(dt,J=7.4,3.7Hz,1H,ArH),6.50(s,1H,NH),3.53(t,J=6.6Hz,4H,CH2),2.34(s,3H,CH3),2.33(d,J=2.9Hz,3H,CH3),1.97-1.93(m,4H,CH2).
实施例26：制备6-甲基-N-邻甲苯基-2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-19）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-邻甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.252g（1mmol），羟乙基哌嗪0.65g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以二氯甲烷/甲醇(V/V=20/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到淡黄色固体产物0.283克。M.p.151-153℃，收率82.0%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:8.01(d,J=8.0Hz,1H,ArH),7.26-7.19(m,2H,ArH),7.08-7.01(m,1H,ArH),6.47(d,J=2.6Hz,1H,NH),3.75-3.70(m,4H,CH2),3.69-3.65(m,2H,CH2),2.69(s,1H,OH),2.61-2.58(m,2H,CH2),2.57-2.53(m,4H,CH2),2.32(s,3,CH3),2.30(d,J=2.9Hz,3H,CH3).
实施例27：制备6-甲基-N-邻甲苯基-2-[(2-二乙胺基)乙胺基]-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-20）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-邻甲苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.252g（1mmol），N,N-二乙基乙二胺0.58g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以二氯甲烷/甲醇(V/V=15/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到黄色固体产物0.271克。M.p.67-69℃，收率81.8%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:8.00(d,J=7.7Hz,1H,ArH),7.22(t,J=7.7Hz,2H,ArH),7.05(t,J=7.2Hz,1H,ArH),6.47(s,1H,NH),5.32(s,1,NH),3.46(d,J=5.6Hz,2H,CH2),2.72(t,J=5.7Hz,2H,CH2),2.65(d,J=6.9Hz,4H,CH2),2.31(s,3H,CH3),2.27(d,J=1.7Hz,3H,CH3),1.15-0.98(m,6H,CH3).
实施例28：制备6-甲基-N-对氯苯基-2-吗啉基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-21）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-对氯苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.272g（1mmol），吗啉0.435g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至130℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，EA有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到黄色固体产物0.257克。M.p.210-212℃，收率79.8%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.58-7.52(m,2H,ArH),7.35-7.29(m,2H,ArH),6.65(s,1H,NH),3.80-3.75(m,4H,CH2),3.72-3.67(m,4H,CH2),2.31(d,J=2.6Hz,3H,CH3).
例29：制备6-甲基-N-对氯苯基-2-哌啶基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-22）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-对氯苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.272g（1mmol），哌啶0.425g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到黄色固体产物0.310克。M.p.141-143℃，收率96.6%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.62-7.55(m,2H,ArH),7.33-7.28(m,2H,ArH),6.60(s,1H,NH),3.72-3.68(m,4H,CH2),2.29(d,J=2.8Hz,3H,CH3),1.72-1.53(m,6H,CH2).
实施例30：制备6-甲基-N-对氯苯基-2-吡咯烷基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-23）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-对氯苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.272g（1mmol），吡咯烷0.35g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到白色固体产物0.240克。M.p.155-157℃，收率78.6%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.77-7.63(m,2H,ArH),7.32-7.28(m,2H,ArH),6.63(s,1H,NH),3.55(t,J=6.6Hz,4H,CH2),2.31(d,J=2.8Hz,3H,CH3),2.02-1.94(m,4H,CH2).
实施例31：制备6-甲基-N-对氯苯基-2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-24）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-对氯苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.272g（1mmol），羟乙基哌嗪0.65g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以二氯甲烷/甲醇(V/V=20/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到微黄色固体产物0.287克。M.p.148-150℃，收率78.4%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.59-7.53(m,2H,ArH),7.35-7.28(m,2H,ArH),6.65(d,J=2.7Hz,1H,NH),3.78-3.73(m,4H,CH2),3.70-3.65(m,2H,CH2),2.73(s,1H,OH),2.62-2.56(m,6H,CH2),2.30(d,J=2.9Hz,3H,CH3).
例32：制备6-甲基-N-对氯苯基-2-[(2-二乙胺基)乙胺基]-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-25）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-对氯苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.272g（1mmol），N,N-二乙基乙二胺0.58g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以二氯甲烷/甲醇(V/V=15/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到黄色固体产物0.278克。M.p.94-96℃，收率79.1%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.74-7.55(m,2H,ArH),7.32-7.28(m,2H,ArH),6.64(d,J=2.4Hz,1H,NH),5.34(s,1H,NH),3.43(q,J=5.7Hz,2H,CH2),2.67(t,J=5.9Hz,2H,CH2),2.60(q,J=6.7Hz,4H,CH2),2.28(d,J=2.8Hz,3H,CH3),1.05(t,J=7.1Hz,6H,CH3).
实施例33：制备6-甲基-N-间氯苯基-2-吗啉基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-26）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-间氯苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.272g（1mmol），吗啉0.435g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至130℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到淡黄色固体产物0.273克。M.p.168-170℃，收率84.7%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.88(t,J=2.0Hz,1H,ArH),7.36(dd,J=8.2,1.5Hz,1H,ArH),7.25(d,J=8.1Hz,1H,ArH),7.09-7.01(m,1H,ArH),6.69(s,1H,NH),3.81-3.76(m,4H,CH2),3.76-3.70(m,4H,CH2),2.32(d,J=2.0Hz,3H,CH3).
实施例34：制备6-甲基-N-间氯苯基-2-哌啶基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-27）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-间氯苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.272g（1mmol），哌啶0.425g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到白色固体产物0.242克。M.p.88-90℃，收率75.5%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.95(s,1H,ArH),7.35(dd,J=8.1,1.8Hz,1H,ArH),7.25(t,J=8.1Hz,1H,ArH),7.04(d,J=7.8Hz,1H,ArH),6.65(s,1H,NH),3.74(s,4H,CH2),2.31(s,3H,CH3),1.80-1.55(m,6H,CH2).
实施例35：制备6-甲基-N-间氯苯基-2-吡咯烷基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-28）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-间氯苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.272g（1mmol），吡咯烷0.35g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到微黄色固体产物0.218克。M.p.114-115℃，收率71.3%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:8.10(t,J=2.0Hz,1H,ArH),7.41(dd,J=8.0,1.7Hz,1H,ArH),7.23(t,J=8.1Hz,1H,ArH),7.01(dd,J=8.0,1.2Hz,1H,ArH),6.69(s,1H,NH),3.57(t,J=6.6Hz,4H,CH2),2.31(d,J=2.9Hz,3H,CH3),2.03-1.92(m,4H,CH2).
实施例36：制备6-甲基-N-间氯苯基-2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-29）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-间氯苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.272g（1mmol），羟乙基哌嗪0.65g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以二氯甲烷/甲醇(V/V=20/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到淡黄色固体产物0.284克。M.p.166-168℃，收率77.6%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.91(t,J=2.0Hz,1H,ArH),7.34(dd,J=8.1,1.8Hz,1H,ArH),7.25(t,J=8.1Hz,1H,ArH),7.04(dd,J=7.9,1.8Hz,1H,ArH),6.69(d,J=2.6Hz,1H,NH),3.79-3.76(m,4H,CH2),3.70-3.67(m,2H,CH2),2.73(s,1H,OH),2.62-2.58(m,6H,CH2),2.30(d,J=2.8Hz,3H,CH3).
实施例37：制备6-甲基-N-间氯苯基-2-[(2-二乙胺基)乙胺基]-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-30）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-间氯苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.272g（1mmol），N,N-二乙基乙二胺0.58g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以二氯甲烷/甲醇(V/V=15/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到黄色固体产物0.276克。M.p.79-81℃，收率78.5%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.94(s,1H,ArH),7.42(d,J=8.1Hz,1H,ArH),7.25(t,J=8.1Hz,1H,ArH),7.04(d,J=7.9Hz,1H,ArH),6.69(s,1H,NH),5.40(s,1H,NH),3.48(q,J=5.8Hz,2H,CH2),2.72(t,J=6.0Hz,2H,CH2),2.63(q,J=6.9Hz,4H,CH2),2.28(d,J=2.7Hz,3H,CH3),1.07(t,J=7.1Hz,6H,CH3).
实施例38：制备6-甲基-N-对氟苯基-2-吗啉基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-31）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-对氟苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.256g（1mmol），吗啉0.435g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至130℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到黄色固体产物0.252克。M.p.169-171℃，收率82.5%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.57-7.50(m,2H,ArH),7.10-7.01(m,2H,ArH),6.62(s,1H,NH),3.81-3.73(m,4H,CH2),3.70(d,J=11.8Hz,4H,CH2),2.31(s,3H,CH3).
实施例39：制备6-甲基-N-对氟苯基-2-哌啶基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-32）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-对氟苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.256g（1mmol），哌啶0.425g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到白色固体产物0.261克。M.p.152-154℃，收率85.7%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.61-7.52(m,2H,ArH),7.10-6.99(m,2H,ArH),6.58(s,1H,NH),3.70(s,4H,CH2),2.30(s,3H,CH3),1.79-1.42(m,6H,CH2).
实施例40：制备6-甲基-N-对氟苯基-2-吡咯烷基-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-33）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-对氟苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.256g（1mmol），吡咯烷0.35g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以石油醚/乙酸乙酯(V/V=8/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到白色固体产物0.243克。M.p.142-144℃，收率84.1%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.71-7.64(m,2H,ArH),7.07-7.00(m,2H,ArH),6.63(s,1H,NH),3.55(t,J=6.6Hz,4H,CH2),2.32(d,J=2.9Hz,3H,CH3),2.02-1.92(m,4H,CH2).
实施例41：制备6-甲基-N-对氟苯基-2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-34）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-对氟苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.256g（1mmol），羟乙基哌嗪0.65g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以二氯甲烷/甲醇(V/V=20/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到白色固体产物0.306克。mp164-166℃，收率87.6%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.62-7.48(m,2H,ArH),7.11-6.97(m,2H,ArH),6.62(d,J=2.1Hz,1H,NH),3.79-3.72(m,4H,CH2),3.71-3.64(m,2H,CH2),2.81(s,1H,OH),2.65-2.54(m,6H,CH2),2.29(d,J=2.8Hz,3H,CH3).
例42：制备6-甲基-N-对氟苯基-2-[(2-二乙胺基)乙胺基]-5-氟嘧啶-4-胺（Ⅰ-35）：
在试管反应器中加入6-甲基-N-对氟苯基-5-氟-2-氯嘧啶-4-胺0.256g（1mmol），N,N-二乙基乙二胺0.58g（5mmol），K2CO30.414g（3mmol）和2ml DMSO，升温至80℃保温反应8h。往反应液中加入30ml乙酸乙酯，用30ml水洗3次，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以二氯甲烷/甲醇(V/V=15/1)为洗脱剂经硅胶柱层析得到黄色固体产物0.291克。M.p.89-91℃，收率87.0%。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.67-7.53(m,2H,ArH),7.08-6.98(m,2H,ArH),6.61(d,J=2.0Hz,1H,NH),5.32(s,1H,NH),3.44(q,J=5.9Hz,2H,CH2),2.68(t,J=6.1Hz,2H,CH2),2.61(q,J=6.8Hz,4H,CH2),2.27(d,J=2.9Hz,3H,CH3),1.05(t,J=7.1Hz,6H,CH3).
实施例43～77：抗人子宫颈癌活性测试
测试方法：体外抗肿瘤活性测试方法
A.原理：细胞通过线粒体水解酶将噻唑兰（MTT）分解为不溶于水的蓝紫色结晶并沉积在细胞中，结晶物能被二甲基亚砜溶解，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，间接反映细胞的增殖情况和数量变化。
B.细胞：Hela：人子宫颈癌细胞株（购自中国科学院上海生命科学院细胞库）
C.实验步骤
(1)样品的准备：对于可溶样品，每1mg用40μL DMSO溶解，取2uL用1000μL培养液稀释，使浓度为50μg/mL，再用培养液连续稀释至使用浓度。
(2)细胞的培养
培养基的配制:每1000mL培养基中含80万单位青霉素，1.0g链霉素，10％灭活胎牛血清。
细胞的培养：将肿瘤细胞接种于培养基中，置37℃，5％CO2培养箱中培养，3～5d传代。
(3)测定样品对肿瘤细胞生长的抑制作用
将细胞用EDTA-胰酶消化液消化，并用培养基稀释成1×106/mL，加到96孔细胞培养板中，每孔100uL，置37℃，5％CO2培养箱中培养。接种24h后，加入用培养基稀释的样品，每孔100μL，每个浓度加3孔，置37℃，5％CO2培养箱中培养，72h后在细胞培养孔中加入5mg/mL的MTT，每孔10μL，置37℃孵育3h，加入DMSO，每孔150μL，用振荡器振荡，使甲臢完全溶解，用酶标仪在570nm波长下比色。以同样条件用不含样品，含同样浓度DMSO的培养基培养的细胞作为对照，计算样品对肿瘤细胞生长的半数致死浓度（IC50）。
对照例1：
按照实施例43～77的体外抗肿瘤活性测试方法进行测试，所不同的是，使用的样品是甲磺酸伊马替尼药品。
抗肿瘤活性测试结果：
将制备的6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物进行了抗Hela活性测试，试验结果如下：
表1：化合物对Hela的IC50（μmol/mL）
实施例 化合物 IC50 评价
43 Ⅰ-1 42.73 有效
44 Ⅰ-2 >200 无效
45 Ⅰ-3 154.78 微效
46 Ⅰ-4 100.97 微效
47 Ⅰ-5 >200 无效
48 Ⅰ-6 >200 无效
49 Ⅰ-7 46.94 有效
50 Ⅰ-8 >200 无效
51 Ⅰ-9 30.78 有效
52 Ⅰ-10 54.76 弱效
53 Ⅰ-11 >200 无效
54 Ⅰ-12 158.24 微效
55 Ⅰ-13 83.08 弱效
56 Ⅰ-14 89.92 弱效
57 Ⅰ-15 37.20 有效
58 Ⅰ-16 >200 无效
59 Ⅰ-17 40.71 有效
60 Ⅰ-18 133.40 微效
61 Ⅰ-19 19.25 有效
62 Ⅰ-20 36.63 有效
63 Ⅰ-21 144.22 微效
64 Ⅰ-22 139.97 微效
65 Ⅰ-23 147.50 微效
66 Ⅰ-24 17.79 有效
67 Ⅰ-25 105.87 微效
68 Ⅰ-26 87.86 弱效
69 Ⅰ-27 37.84 有效
70 Ⅰ-28 27.12 有效
71 Ⅰ-29 37.28 有效
72 Ⅰ-30 28.82 有效
73 Ⅰ-31 >200 无效
74 Ⅰ-32 38.94 有效
75 Ⅰ-33 >200 无效
76 Ⅰ-34 64.66 弱效
77 Ⅰ-35 >200 无效
对照例1 甲磺酸伊马替尼 5.09 显著
按照抗肿瘤活性的评价标准，化合物Ⅰ-1、Ⅰ-7、Ⅰ-9、Ⅰ-15、Ⅰ-17、Ⅰ-19、Ⅰ-20、Ⅰ-24、Ⅰ-27、Ⅰ-28、Ⅰ-29、Ⅰ-30和Ⅰ-32具有较好的抗Hela人子宫颈癌细胞活性，化合物Ⅰ-10、Ⅰ-13、Ⅰ-14、Ⅰ-26和Ⅰ-34具有一定的抗Hela人子宫颈癌细胞活性。
实施例78～112：抗肺癌活性测试
测试方法：体外抗肿瘤活性测试方法
A.原理：细胞通过线粒体水解酶将噻唑兰（MTT）分解为不溶于水的蓝紫色结晶并沉积在细胞中，结晶物能被二甲基亚砜溶解，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，间接反映细胞的增殖情况和数量变化。
B.细胞：A549：肺癌细胞株（购自中国科学院上海生命科学院细胞库）
C.实验步骤
(1)样品的准备：对于可溶样品，每1mg用40μL DMSO溶解，取2uL用1000μL培养液稀释，使浓度为50μg/mL，再用培养液连续稀释至使用浓度。
(2)细胞的培养
培养基的配制:每1000mL培养基中含80万单位青霉素，1.0g链霉素，10％灭活胎牛血清。
细胞的培养：将肿瘤细胞接种于培养基中，置37℃，5％CO2培养箱中培养，3～5d传代。
(3)测定样品对肿瘤细胞生长的抑制作用
将细胞用EDTA-胰酶消化液消化，并用培养基稀释成1×106/mL，加到96孔细胞培养板中，每孔100uL，置37℃，5％CO2培养箱中培养。接种24h后，加入用培养基稀释的样品，每孔100μL，每个浓度加3孔，置37℃，5％CO2培养箱中培养，72h后在细胞培养孔中加入5mg/mL的MTT，每孔10μL，置37℃孵育3h，加入DMSO，每孔150μL，用振荡器振荡，使甲臢完全溶解，用酶标仪在570nm波长下比色。以同样条件用不含样品，含同样浓度DMSO的培养基培养的细胞作为对照，计算样品对肿瘤细胞生长的半数致死浓度（IC50）。
对照例2：
按照实施例78～112的体外抗肿瘤活性测试方法进行测试，所不同的是，使用的样品是甲磺酸伊马替尼药品。
抗肿瘤活性测试结果：
将制备的6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物进行了抗A549活性测试，试验结果如下：
表2：化合物对A549的IC50（μmol/mL）
实施例 化合物 IC50 评价
78 Ⅰ-1 192.18 微效
79 Ⅰ-2 139.55 微效
80 Ⅰ-3 175.86 微效
81 Ⅰ-4 151.51 微效
82 Ⅰ-5 174.39 微效
83 Ⅰ-6 >200 无效
84 Ⅰ-7 20.27 有效
85 Ⅰ-8 192.88 微效
86 Ⅰ-9 60.51 弱效
87 Ⅰ-10 97.15 弱效
88 Ⅰ-11 113.21 微效
89 Ⅰ-12 112.13 微效
90 Ⅰ-13 105.81 微效
91 Ⅰ-14 99.65 弱效
92 Ⅰ-15 51.20 弱效
93 Ⅰ-16 >200 无效
94 Ⅰ-17 63.22 弱效
95 Ⅰ-18 110.74 微效
96 Ⅰ-19 37.40 有效
97 Ⅰ-20 28.94 有效
98 Ⅰ-21 82.35 弱效
99 Ⅰ-22 68.14 弱效
100 Ⅰ-23 171.24 微效
101 Ⅰ-24 24.25 有效
102 Ⅰ-25 29.59 有效
103 Ⅰ-26 >200 无效
104 Ⅰ-27 55.21 弱效
105 Ⅰ-28 32.96 有效
106 Ⅰ-29 44.28 有效
107 Ⅰ-30 65.40 弱效
108 Ⅰ-31 >200 无效
109 Ⅰ-32 142.31 微效
110 Ⅰ-33 >200 无效
111 Ⅰ-34 112.17 微效
112 Ⅰ-35 118.82 微效
对照例2 甲磺酸伊马替尼 9.94 显著
按照抗肿瘤活性的评价标准，化合物Ⅰ-7、Ⅰ-19、Ⅰ-20、Ⅰ-24、Ⅰ-25、Ⅰ-28和Ⅰ-29具有较好的抗A549肺癌细胞活性，化合物Ⅰ-9、Ⅰ-10、Ⅰ-14、Ⅰ-15、Ⅰ-17、Ⅰ-21、Ⅰ-22、Ⅰ-27和Ⅰ-30具有一定的抗A549肺癌细胞活性。
实施例113～147：抗人白血病活性测试
测试方法：体外抗肿瘤活性测试方法
A.原理：细胞通过线粒体水解酶将噻唑兰（MTT）分解为不溶于水的蓝紫色结晶并沉积在细胞中，结晶物能被二甲基亚砜溶解，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，间接反映细胞的增殖情况和数量变化。
B.细胞：HL-60：人白血病细胞株（购自中国科学院上海生命科学院细胞库）
C.实验步骤
(1)样品的准备：对于可溶样品，每1mg用40μL DMSO溶解，取2uL用1000μL培养液稀释，使浓度为50μg/mL，再用培养液连续稀释至使用浓度。
(2)细胞的培养
培养基的配制:每1000mL培养基中含80万单位青霉素，1.0g链霉素，10％灭活胎牛血清。
细胞的培养：将肿瘤细胞接种于培养基中，置37℃，5％CO2培养箱中培养，3～5d传代。
(3)测定样品对肿瘤细胞生长的抑制作用
将细胞用EDTA-胰酶消化液消化，并用培养基稀释成1×106/mL，加到96孔细胞培养板中，每孔100uL，置37℃，5％CO2培养箱中培养。接种24h后，加入用培养基稀释的样品，每孔100μL，每个浓度加3孔，置37℃，5％CO2培养箱中培养，72h后在细胞培养孔中加入5mg/mL的MTT，每孔10μL，置37℃孵育3h，加入DMSO，每孔150μL，用振荡器振荡，使甲臢完全溶解，用酶标仪在570nm波长下比色。以同样条件用不含样品，含同样浓度DMSO的培养基培养的细胞作为对照，计算样品对肿瘤细胞生长的半数致死浓度（IC50）。
对照例3：
按照实施例113～147的体外抗肿瘤活性测试方法进行测试，所不同的是，使用的样品是甲磺酸伊马替尼药品。
抗肿瘤活性测试结果：
将制备的6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物进行了抗HL-60活性测试，试验结果如下：
表3：化合物对HL-60的IC50（μmol/mL）
实施例 化合物 IC50 评价
113 Ⅰ-1 >200 无效
114 Ⅰ-2 55.95 弱效
115 Ⅰ-3 >200 无效
116 Ⅰ-4 124.39 微效
117 Ⅰ-5 >200 无效
118 Ⅰ-6 59.10 弱效
119 Ⅰ-7 43.58 有效
120 Ⅰ-8 29.33 有效
121 Ⅰ-9 31.12 有效
122 Ⅰ-10 54.04 弱效
123 Ⅰ-11 44.58 有效
124 Ⅰ-12 64.85 弱效
125 Ⅰ-13 18.68 有效
126 Ⅰ-14 >200 无效
127 Ⅰ-15 58.35 弱效
128 Ⅰ-16 56.02 弱效
129 Ⅰ-17 103.17 微效
130 Ⅰ-18 114.16 微效
131 Ⅰ-19 >200 无效
132 Ⅰ-20 157.14 微效
133 Ⅰ-21 >200 无效
134 Ⅰ-22 21.73 有效
135 Ⅰ-23 167.19 微效
136 Ⅰ-24 27.96 有效
137 Ⅰ-25 97.57 弱效
138 Ⅰ-26 >200 无效
139 Ⅰ-27 33.11 有效
140 Ⅰ-28 21.48 有效
141 Ⅰ-29 75.61 弱效
142 Ⅰ-30 9.55 显著
143 Ⅰ-31 32.74 有效
144 Ⅰ-32 9.66 显著
145 Ⅰ-33 15.26 有效
146 Ⅰ-34 111.88 微效
147 Ⅰ-35 90.10 弱效
对照例3 甲磺酸伊马替尼 15.96 有效
按照抗肿瘤活性的评价标准，化合物Ⅰ-30和Ⅰ-32具有显著的抗HL-60人白血病细胞活性，化合物Ⅰ-7、Ⅰ-8、Ⅰ-9、Ⅰ-11、Ⅰ-13、Ⅰ-22、Ⅰ-24、Ⅰ-27、Ⅰ-28、Ⅰ-31和Ⅰ-33具有较好的抗HL-60人白血病细胞活性，化合物Ⅰ-2、Ⅰ-6、Ⅰ-10、Ⅰ-12、Ⅰ-15、Ⅰ-16、Ⅰ-25、Ⅰ-29和Ⅰ-35具有一定的抗HL-60人白血病细胞活性。
实施例148～182：抗人绒毛膜癌活性测试
测试方法：体外抗肿瘤活性测试方法
A.原理：细胞通过线粒体水解酶将噻唑兰（MTT）分解为不溶于水的蓝紫色结晶并沉积在细胞中，结晶物能被二甲基亚砜溶解，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，间接反映细胞的增殖情况和数量变化。
B.细胞：Bewo：人绒毛膜癌细胞株（购自中国科学院上海生命科学院细胞库）
C.实验步骤
(1)样品的准备：对于可溶样品，每1mg用40μL DMSO溶解，取2uL用1000μL培养液稀释，使浓度为50μg/mL，再用培养液连续稀释至使用浓度。
(2)细胞的培养
培养基的配制:每1000mL培养基中含80万单位青霉素，1.0g链霉素，10％灭活胎牛血清。
细胞的培养：将肿瘤细胞接种于培养基中，置37℃，5％CO2培养箱中培养，3～5d传代。
(3)测定样品对肿瘤细胞生长的抑制作用
将细胞用EDTA-胰酶消化液消化，并用培养基稀释成1×106/mL，加到96孔细胞培养板中，每孔100uL，置37℃，5％CO2培养箱中培养。接种24h后，加入用培养基稀释的样品，每孔100μL，每个浓度加3孔，置37℃，5％CO2培养箱中培养，72h后在细胞培养孔中加入5mg/mL的MTT，每孔10μL，置37℃孵育3h，加入DMSO，每孔150μL，用振荡器振荡，使甲臢完全溶解，用酶标仪在570nm波长下比色。以同样条件用不含样品，含同样浓度DMSO的培养基培养的细胞作为对照，计算样品对肿瘤细胞生长的半数致死浓度（IC50）。
对照例4：
按照实施例148～182的体外抗肿瘤活性测试方法进行测试，所不同的是，使用的样品是甲磺酸伊马替尼药品。
抗肿瘤活性测试结果：
将制备的6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物进行了抗Bewo活性测试，试验结果如下：
表4：化合物对Bewo的IC50（μmol/mL）
实施例 化合物 IC50 评价
148 Ⅰ-1 >200 无效
149 Ⅰ-2 >200 无效
150 Ⅰ-3 >200 无效
151 Ⅰ-4 154.92 微效
152 Ⅰ-5 >200 无效
153 Ⅰ-6 >200 无效
154 Ⅰ-7 157.67 微效
155 Ⅰ-8 92.51 弱效
156 Ⅰ-9 103.44 微效
157 Ⅰ-10 82.10 弱效
158 Ⅰ-11 89.60 弱效
159 Ⅰ-12 138.63 微效
160 Ⅰ-13 191.55 微效
161 Ⅰ-14 142.93 微效
162 Ⅰ-15 65.93 弱效
163 Ⅰ-16 75.38 弱效
164 Ⅰ-17 81.40 弱效
165 Ⅰ-18 71.28 弱效
166 Ⅰ-19 184.97 微效
167 Ⅰ-20 >200 无效
168 Ⅰ-21 167.89 微效
169 Ⅰ-22 62.88 弱效
170 Ⅰ-23 >200 无效
171 Ⅰ-24 97.15 弱效
172 Ⅰ-25 81.11 弱效
173 Ⅰ-26 >200 无效
174 Ⅰ-27 110.07 微效
175 Ⅰ-28 42.21 有效
176 Ⅰ-29 97.04 弱效
177 Ⅰ-30 87.37 弱效
178 Ⅰ-31 >200 无效
179 Ⅰ-32 123.51 微效
180 Ⅰ-33 199.10 微效
181 Ⅰ-34 148.86 微效
182 Ⅰ-35 >200 无效
对照例4 甲磺酸伊马替尼 26.00 有效
按照抗肿瘤活性的评价标准，化合物Ⅰ-28具有较好的抗Bewo人绒毛膜癌细胞活性，化合物Ⅰ-8、Ⅰ-10、Ⅰ-11、Ⅰ-15、Ⅰ-16、Ⅰ-17、Ⅰ-18、Ⅰ-22、Ⅰ-24、Ⅰ-25、Ⅰ-29和Ⅰ-30具有一定的抗Bewo人绒毛膜癌细胞活性。

Claims (10)

1.一种6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物，其结构如式（I）所示：
Figure FDA0000381024840000011
式（I）中：
R为H、C1～C4烷基或卤素；
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于所述R为下列之一：H、CH3、Cl或F。
3.权利要求1所述6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物的制备方法，所述方法如下：以式（Ⅱ）所示的6-甲基-5-氟2-氯嘧啶-4-胺与式（III）所示的胺类化合物为原料，在有机溶剂中，在碱存在下于50～150℃下充分反应，反应液冷却至室温，再加入乙酸乙酯萃取，有机层用水洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，所得粗品经硅胶柱层析分离得到如式（Ⅰ）所示的6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物；
所述的碱为下列之一：K2CO3、KHCO3、KOAc、KF、Et3N、EtN(i-Pr)2、吡啶；
所述的有机溶剂为下列之一：DMSO、DMF、DMA、1,4-二氧六环、甲苯、乙腈、氯仿、四氢呋喃、乙醇；
所述6-甲基-5-氟2-氯嘧啶-4-胺、胺类化合物、碱的投料摩尔比为1：1～6：1～5；
Figure FDA0000381024840000013
式（Ⅱ）、（III）中，R、
Figure FDA0000381024840000014
定义同权利要求1。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述式（Ⅱ）所示的6-甲基-5-氟2-氯嘧啶-4-胺由如下方法制得：以式（IV）所示的6-甲基-5-氟-2,4-二氯嘧啶与式（V）所示的芳香胺为原料，在有机溶剂中，在碱存在下于30～150℃下充分反应，反应液冷却至室温，再加入乙酸乙酯萃取，有机层用水洗1～3次，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，所得粗品经硅胶柱层析分离得到式（Ⅱ）所示的6-甲基-5-氟2-氯嘧啶-4-胺；
所述的碱为下列之一：K2CO3、KHCO3、KOAc、KF、Et3N、EtN(i-Pr)2、吡啶；
所述的有机溶剂为下列之一：DMSO、DMF、DMA、1,4-二氧六环、甲苯、乙腈、氯仿、四氢呋喃；
所述6-甲基-5-氟-2,4-二氯嘧啶、芳香胺、碱的投料摩尔比为1：0.9～1.5：1～3；
Figure FDA0000381024840000021
式（V）中，R定义同权利要求1。
5.权利要求1所述的6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述抗肿瘤药物为治疗子宫颈癌、肺癌、白血病或绒毛膜癌的药物。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述抗肿瘤药物为治疗子宫颈癌的药物，所述6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物为下列之一：
Figure FDA0000381024840000022
8.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述抗肿瘤药物为治疗肺癌的药物，所述6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物为下列之一：
Figure FDA0000381024840000032
Figure FDA0000381024840000041
9.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述抗肿瘤药物为治疗白血病的药物，所述6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物为下列之一：
Figure FDA0000381024840000042
10.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述抗肿瘤药物为治疗绒毛膜癌的药物，所述6-甲基-5-氟-2,4-嘧啶二胺类化合物为式（I-28）化合物：
Figure FDA0000381024840000043
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