CN110283773A - 一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法 - Google Patents

一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110283773A
CN110283773A CN201910554037.1A CN201910554037A CN110283773A CN 110283773 A CN110283773 A CN 110283773A CN 201910554037 A CN201910554037 A CN 201910554037A CN 110283773 A CN110283773 A CN 110283773A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacteria
sickle
induction
hungry
sterile
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910554037.1A
Other languages
English (en)
Inventor
郭力维
段润晴
何霞红
朱书生
杨敏
黄慧川
刘屹湘
邓维萍
杜飞
梅馨月
朱有勇
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yunnan Agricultural University
Original Assignee
Yunnan Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yunnan Agricultural University filed Critical Yunnan Agricultural University
Priority to CN201910554037.1A priority Critical patent/CN110283773A/zh
Publication of CN110283773A publication Critical patent/CN110283773A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N3/00—Spore forming or isolating processes

Landscapes

  • Zoology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法，包括以下步骤：(1)将组织分离的镰刀菌菌丝体接种于PDA(Potato Dextrose Agar)培养基；(2)25℃、12h/12h光暗交替条件下培养3～5d。(3)利用打孔器从菌株边缘打孔，制备菌饼；(4)无菌培养皿加入30mL无菌ddH2O，将菌饼浮于水面；(5)25℃、12h/12h光暗交替条件下培养1～2d，有大量分生孢子产生。其中，所述饥饿诱导方法为在无菌ddHH2O中进行培养；步骤(4)所述的培养过程中菌饼正面向上置于装有无菌ddH2O的培养皿中；所述饥饿诱导后菌丝体产生孢子的情况是在显微镜下观察。本发明诱导分生孢子的方法，整个操作过程简单、诱导周期短、成本低，还具有效率高的优点。

Description

一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法
技术领域
本发明属于植物保护技术领域，具体为一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法。
背景技术
镰刀菌是世界性农业生产中重要的病害之一，不仅能在土壤中越冬和越夏，而且寄主范围广，能够侵入粮食作物、经济作物、药用植物及观赏植物等100余种，通过破坏植物维管束疏导组织、细胞质膜系统、细胞核和核糖体结构等(刘开军等,2010)，引发植物萎蔫、根腐、茎腐、花腐和穗腐等多种病症，严重影响寄主植物的产量和品质；更为严重的是其分泌的毒素可以诱导人畜细胞发生凋亡，威胁人畜健康。
镰刀菌腐生能力强，以菌丝体或厚垣孢子在各种植物的残体中越冬，是翌年植物病害的主要初侵染源。分生孢子借气流、雨水、灌溉水的泼溅进行传播；通过幼根和茎基部的伤口侵入为害，病菌进入维管束系统后能马上堵塞导管，并产出有毒物质，扩散开来、且逐渐向上延展，导致病株叶片枯黄而死。农业生产中，明确致病菌是科学防治的重要前提，然而镰刀菌在室内分离和形态鉴定过程中，在多种培养基中以营养生长为主，不产生典型的分生孢子以供鉴定，因此对研究其致病性和准确防控带来一定难度。掌握镰刀菌产生分生孢子的方法是进行菌株科学鉴定和防治的先决条件。
研究者发现，在水琼脂培养基中通过外源添加康乃馨、石竹、绿豆粉或绿豆渣的方法，能够诱导镰刀菌大型分生孢子的产生，用于菌株的鉴定和底纹长期保存。但是利用这些方法不仅培养周期长，而且分子孢子数量相对较少且容易造成分生孢子形态变异，不宜于病原菌的鉴定和接种体的保存。
专利CN 106434521 A公开了一种诱导禾谷镰刀菌大量产生分生孢子的培养基及方法与流程。该方法主要是水琼脂培养基中添加绿豆粉或绿豆渣在诱导禾谷镰刀菌产孢上的应用。该诱导方法需要特制的培养基，在使用中受到一定限制。
因此需要研究一种成本低廉、操作简单、产生孢子量大、应用广泛的镰刀菌分生孢子诱导方法。
发明内容
为解决以上现有问题，本发明提供一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法。本发明通过以下技术方案实现。
一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法，包括以下步骤：
(1)将从植物病株组织分离的镰刀菌菌丝体接种于PDA(Potato Dextrose Agar)培养基；
(2)25℃、12h/12h光暗交替条件下培养3～5d；
(3)利用打孔器从菌株边缘打孔，制备菌饼；
(4)无菌培养皿加入30mL无菌ddH2O，将菌饼浮于水面；
(5)25℃、12h/12h光暗交替条件下培养1～2d，有大量分生孢子产生。
优选的，步骤(1)所述的镰刀菌为禾谷镰刀菌(Fusarium sp.)。
优选的，所述饥饿诱导方法为在无菌ddHH2O中进行培养。
优选的，步骤(4)所述的培养过程中菌饼正面向上置于装有无菌ddH2O的培养皿中。
更优选的，所述饥饿诱导后菌丝体产生孢子的情况是在显微镜下观察。
本发明的有益效果：
本发明一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法，整个操作过程简单、诱导周期短、成本低，还具有效率高的优点。
附图说明
图1为镰刀菌菌饼接种在PDA培养基中培养4天后照片；
图2为镰刀菌菌饼接种在PDA培养基中培养4天后菌丝在显微镜下观察照片；
图3为镰刀菌饥饿诱导后菌饼照片；
图4为镰刀菌饥饿诱导后菌丝在显微镜下观察照片。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图对本发明的技术方案作更为详细、完整的说明。
一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法，包括一下步骤：
(1)将组织分离的菌丝体接种于PDA(Potato Dextrose Agar)培养基；
(2)25℃、12h/12h光暗交替条件下培养3～5d；
(3)利用打孔器从菌株边缘打孔，制备菌饼；
(4)无菌培养皿加入30mL无菌ddH2O，将菌饼正面向上浮于水面；
(5)25℃、12h/12h光暗交替条件下培养1～2d，显微镜下观察有大量分生孢子产生。
在实施例1中，将从黄芪根腐病病害组织分离的镰刀菌(Fusarium sp.)菌饼接种在PDA培养基中培养4天作为对比项，与饥饿诱导培养的菌丝体进行对比(培养结果参见图1、2)。饥饿诱导的具体实施方式为，将PDA培养基中生长3天的菌丝体制成菌饼，正面向上浮于无菌ddH2O，25℃培养1天后结果见图3，在显微镜下观察菌丝产生分生孢子的情况，参见图4，结果显示菌丝体有大量分生孢子产生，而对比项即没有饥饿诱导、直接在PDA培养基中培养4天的结果则表明菌丝没有分生孢子产生。由此可以看出饥饿诱导是一种切实有效的镰刀菌菌丝分生孢子产生的诱导方法。
显然，所描述的实施例仅是本发明的个别实施例，而不是全部实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施，都属于本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将从植物病株组织分离的镰刀菌菌丝体接种于PDA(Potato Dextrose Agar)培养基；
(2)25℃、12h/12h光暗交替条件下培养3～5d；
(3)利用打孔器从菌株边缘打孔，制备菌饼；
(4)无菌培养皿加入30mL无菌ddH2O，将菌饼浮于水面；
(5)25℃、12h/12h光暗交替条件下培养1～2d，有大量分生孢子产生。
2.根据权利要求1所述的一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法，其特征在于：步骤(1)所述镰刀菌为禾谷镰刀菌(Fusarium sp.)。
3.根据权利要求1所述的一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法，其特征在于：所述饥饿诱导方法为在无菌ddHH2O中进行培养。
4.根据权利要求3所述的一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法，其特征在于：步骤(4)所述的培养过程中菌饼正面向上置于装有无菌ddH2O的培养皿中。
5.根据权利要求1所述的一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法，其特征在于：所述饥饿诱导后菌丝体产生孢子的情况是在显微镜下观察。
CN201910554037.1A 2019-06-25 2019-06-25 一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法 Pending CN110283773A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910554037.1A CN110283773A (zh) 2019-06-25 2019-06-25 一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910554037.1A CN110283773A (zh) 2019-06-25 2019-06-25 一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110283773A true CN110283773A (zh) 2019-09-27

Family

ID=68005617

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910554037.1A Pending CN110283773A (zh) 2019-06-25 2019-06-25 一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110283773A (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030100092A1 (en) * 1998-11-10 2003-05-29 Novozymes Biotech, Inc. Polypeptides having phospholipase activity and nucleic acids encoding same
WO2011114347A2 (en) * 2010-03-18 2011-09-22 Chetan Balar Synergistic effect of netural compound as a fungicide and bactericide for agriculture crop especially cumin crop.
CN104774905A (zh) * 2015-04-23 2015-07-15 河南省农业科学院园艺研究所 用于镰刀菌产孢细胞及其分生孢子产生方式的显微分析方法
CN104975031A (zh) * 2015-08-10 2015-10-14 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 尖孢镰刀菌古巴专化型G蛋白fogaa基因及其用途

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030100092A1 (en) * 1998-11-10 2003-05-29 Novozymes Biotech, Inc. Polypeptides having phospholipase activity and nucleic acids encoding same
WO2011114347A2 (en) * 2010-03-18 2011-09-22 Chetan Balar Synergistic effect of netural compound as a fungicide and bactericide for agriculture crop especially cumin crop.
CN104774905A (zh) * 2015-04-23 2015-07-15 河南省农业科学院园艺研究所 用于镰刀菌产孢细胞及其分生孢子产生方式的显微分析方法
CN104975031A (zh) * 2015-08-10 2015-10-14 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 尖孢镰刀菌古巴专化型G蛋白fogaa基因及其用途

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PALMERO LLAMAS等: "Effects of water potential on spore germination and viability of fusarium species.", 《J IND MICROBIOL BIOTECHNOL》 *
冯茜等: "川芎根腐病菌(Fusarium solani)的生物学特性 ", 《四川农业大学学报》 *
吴跃开等: "腐皮镰孢菌麻疯树专化型的生物学特性研究", 《广东农业科学》 *
王慧敏: "杂交竹枯萎病原生物学特性的研究 ", 《安徽农业科学》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102405763B (zh) 一种冬虫夏草的培育方法
CN104082034B (zh) 一种冬虫夏草子实体人工栽培方法
CN105104046B (zh) 一种褪黑素诱导处理提高水稻抗白叶枯病的方法
CN105420115B (zh) 一种用于蜜环菌孢子分离、培养的培养基及方法和应用
CN107460133B (zh) 深色有隔内生真菌hs40及其在铁皮石斛生产上的应用
CN103103152B (zh) 一种珊瑚球菌及其应用
Kumla et al. Basidiome formation of an edible wild, putatively ectomycorrhizal fungus, Phlebopus portentosus without host plant
CN106222241A (zh) 一种香蕉枯萎病内生生防菌株的筛选方法
CN103798058A (zh) 一种无菌蚕虫草的培育方法
CN103636408A (zh) 一种桑蚕虫草工厂化生产方法
CN105695344B (zh) 棒束孢微菌核的培养方法及其应用
CN104845892A (zh) 一种硬孔菌及其促进沉香属植物产生沉香的应用
CN103975765A (zh) 一种蝉花仿生的培养方法
CN101182471B (zh) 蛹虫草的一种高效培育方法
CN103589649B (zh) 农用线虫防控微生物淡紫拟青霉的生产方法
KR100288105B1 (ko) 신규한 번데기동충하초 균주와 그 종균 및 자실체 재배방법
CN106034738B (zh) 一种以家蚕蚕蛹为寄主人工培育蚕蛹蝉花的方法
CN103688760A (zh) 一种以黄粉虫为载体培养人工虫草的方法
CN110283773A (zh) 一种饥饿诱导镰刀菌产生分生孢子的方法
CN103704022A (zh) 一种以五龄桑蚕为载体培养人工虫草的方法
CN107099465B (zh) 用于促进扦插茶苗生根的促生菌株及其微生物育苗基质
CN109429900A (zh) 一种灵芝仿野生栽培方法
CN104446822A (zh) 一种淡褐奥德蘑的专用培养基及其栽培方法
CN109362479A (zh) 一种利用桑木屑栽培粗毛纤孔菌的方法
CN103749149A (zh) 一种以黄粉虫蛹为载体培养人工虫草的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Guo Liwei

Inventor after: Mei Xinyue

Inventor after: Zhu Youyong

Inventor after: Duan Runqing

Inventor after: He Xiahong

Inventor after: Zhu Shusheng

Inventor after: Yang Min

Inventor after: Huang Huichuan

Inventor after: Liu Yixiang

Inventor after: Deng Weiping

Inventor after: Du Fei

Inventor before: Guo Liwei

Inventor before: Mei Xinyue

Inventor before: Zhu Youyong

Inventor before: Duan Runqing

Inventor before: He Xiahong

Inventor before: Zhu Shusheng

Inventor before: Yang Min

Inventor before: Huang Huichuan

Inventor before: Liu Yixiang

Inventor before: Deng Weiping

Inventor before: Du Fei