CN110279045A - 一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料及其制备方法和应用 - Google Patents

一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及鱼饲料预混料，尤其涉及一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料及该预混料的制备方法和其应用，该预混料，主要由以下重量份的组分制成：益母草提取物5‑10份，枳壳提取物15‑35份，车前草提取物10‑15份，复合增效物0.1‑0.5份；其中，所述复合增效物包括重量比100‑130：1‑1.5：1‑2.5：10‑18的薄荷叶粉、氯化钙、柠檬酸、和五倍子。与现有的金鲳饲料中添加的营养性预混料相比，本发明利用独特的发酵技术获得多种活性因子，并配伍复合增效物协同增强预防效果，对金鲳应激性鳃损伤具有显著的预防作用，能有效的缓解金鲳应激性鳃损伤的症状，能有效的降低金鲳应激性鳃损伤导致的死亡率。

Description

一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及鱼饲料预混料，尤其涉及一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料及该预混料的制备方法和其应用。
背景技术
金鲳是我国重要的海水经济养殖品种之一，持续高产带来产量提升的同时，也影响了金鲳的供需平衡，一定程度上影响了金鲳鱼价和养殖经济回报。因此，在金鲳鱼价低迷的背景下，稳定金鲳产量和提高养殖成活率必将是金鲳养殖盈利的重要前提。
与其他鱼类相似，金鲳鳃部组织的重要生理功能依然是气体交换的重要场所，同时也承担鱼体内有害物质代谢的部分功能。因此，鳃部组织的健康与病变程度将直接关系金鲳的养殖成活率。受异常天气、潮汐变化和鱼体代谢物污染和药物刺激等因素的影响，通常会对金鲳的鳃部产生不同程度的应激作用，造成金鲳应激性鳃损伤。应激作用初期，金鲳局部鳃丝分泌细胞肿大，粘液分泌功能亢进，局部鳃丝上皮呼吸细胞肿大，鳃丝局部血液循环障碍，鳃丝局部气体交换与代谢功能受抑制，鱼体体表防御机能下降和体表粘液分泌功能弱化，导致鱼体对海水寄生虫的敏感性急速上升，大大提升了鱼体感染海水寄生虫的发生风险；应激作用持续进行，金鲳鳃丝血液循环障碍部位迅速扩大，鳃丝暗红，严重影响鱼体鳃部的正常或代偿性气体交换，鱼体逐渐出现缺氧症状，当金鲳养殖所在的海水域中水体溶氧量低时，两种问题同时叠加将可能导致金鲳的大面积死亡，危害十分严重。
通过内服药剂预防金鲳应激性鳃损伤是一个重要的技术途径，而通过在饲料中添加对金鲳应激性鳃损伤具有预防效果的活性物质，既将大大提升了应激性鳃损伤的人工预防操作的便利性，也可避免活性物质拌饲后遇海水溶散损失的问题。
因此，有必要研发一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料及该预混料的制备方法和其应用。
发明内容
针对金鲳应激性鳃损伤的预防，本发明提供一种靶向于鳃组织应激性损伤预防或修复的环保型预混料。
本发明通过以下方案达到上述目的：
在第一方面，本发明提供一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料，主要由以下重量份的组分制成：益母草提取物5-10份，枳壳提取物15-35份，车前草提取物10-15份，复合增效物0.1-0.5份；其中，所述复合增效物包括重量比100-130：1-1.5：1-2.5：10-18的薄荷叶粉、氯化钙、柠檬酸、和五倍子。
在第二方面，本发明提供一种制备上述预防金鲳应激性鳃损伤的预混料的方法，所述方法包括以下步骤：将组分混合，在25-45℃烘干至混合物的水分含量为8-10％，并可选地粉碎至80-120目筛内，得到预混料。
在第三方面，本发明还提供一种上述预防金鲳应激性鳃损伤的预混料的应用，用于预防金鲳应激性鳃损伤和/或用于治疗性修复发生初期的预防金鲳应激性鳃损伤。
在第四方面，本发明还提供一种上述预防金鲳应激性鳃损伤的预混料的应用，用于制备预防金鲳应激性鳃损伤和/或用于治疗性修复发生初期的预防金鲳应激性鳃损伤的饲料。
与现有的金鲳饲料中添加的营养性预混料相比，本发明利用独特的发酵技术获得多种活性因子，并配伍复合增效物协同增强预防效果，对金鲳应激性鳃损伤具有显著的预防作用，能有效的缓解金鲳应激性鳃损伤的症状，能有效的降低金鲳应激性鳃损伤导致的死亡率。
具体实施方式
在第一方面，本发明提供一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料，主要由以下重量份的组分制成：益母草提取物5-10份，枳壳提取物15-35份，车前草提取物10-15份，复合增效物0.1-0.5份；其中，所述复合增效物包括重量比100-130：1-1.5：1-2.5：10-18的薄荷叶粉、氯化钙、柠檬酸、和五倍子。
上述预防金鲳应激性鳃损伤的预混料针对背景技术中所述的发病机理或相似发病机理的海水养殖鱼类的应激性鳃损伤具有良好的修复效果，针对金鲳应激性鳃损伤预防效果明显，而试验同时证明，本发明对金鲳、金目鲈和咸水石斑鱼的应激性鳃损伤也有良好的预防效果。
在上述预防金鲳应激性鳃损伤的预混料中，其中，益母草提取物、枳壳提取物、车前草提取物的组合对金鲳应激性鳃损伤具有较好的预防效果，上述三种物质在复合增效物的基础上，对金鲳的应激性鳃损伤具有更显著的预防效果。益母草提取物、枳壳提取物、车前草提取物为金鲳应激性鳃损伤预防的关键功能成分，而复合增效物则是益母草提取物、枳壳提取物、车前草提取物三种物质在预防金鲳应激性鳃损伤方面的配伍增效剂。
在本发明的预混料中，所述四种物质单独使用时，对金鲳应激性鳃损伤的预防无明显效果。当益母草提取物、枳壳提取物、车前草提取物的组合，可快速激活或修复鳃组织分泌细胞和呼吸上皮细胞，稳定鳃丝粘液分泌和气体交换的功能；也可快速改善鳃组织局部病变的血液循环障碍，提升鳃丝有氧血和无氧血的交换效率，快速缓解鱼体全身因应激性鳃损伤的缺氧或低氧胁迫；同时。在上述三种物质基础上再配伍复合增效物，对上述三种物质在起效机理方面的作用效率有明显增效作用，通过复配综合提升对金鲳应激性鳃损伤的预防效果。
优选的，一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料，主要由以下重量份组分制备而成：益母草提取物25-38份，枳壳提取物27-42份，车前草提取物35-55份，复合增效物0.5-1.5份；其中，所述复合增效物包括重量比100-130：1-1.5：1-2.5：10-18的薄荷叶粉、氯化钙、柠檬酸、和五倍子。
进一步优选的，一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料，主要由以下重量份的组分制成：益母草提取物30-38份，枳壳提取物30-42份，车前草提取物35-50份，复合增效物0.5-1.0份；其中，所述复合增效物包括重量比100-130：1-1.5：1-2.5：10-18的薄荷叶粉、氯化钙、柠檬酸、和五倍子。
进一步优选的，一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料，主要由以下重量份的组分制成：益母草提取物35份，枳壳提取物38份，车前草提取物45份，复合增效物1份；其中，所述复合增效物包括重量比100-130：1-1.5：1-2.5：10-18的薄荷叶粉、氯化钙、柠檬酸、和五倍子。
进一步优选的，按重量份计，所述复合增效物包括以下组分：100-120：1-1.2：1.4-2.2：13-16的薄荷叶灰、氯化钙、柠檬酸、五倍子。
优选的，所述益母草提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取益母草充分研磨，挤压过滤收取汁液得到原液A，将滤渣放入研磨钵中，并加入水8-10份，继续充分研磨，挤压过滤挤压收取汁液得到原液B，将原液A和原液B充分混合，并与5-10体积份浓度为35％-60％乙醇溶液充分混合，室温静置12-24h，去上清液获取沉淀物，将沉淀物与氧化钙和水混合，搅均后静置4-8h，去上清液获得最终沉淀物，再经紫外线照射10-25min，最后经过筛获得的超微粉碎物为益母草提取物。
优选的，一种益母草提取物，由包含以下步骤的方法制备得到：取益母草，充分研磨，挤压过滤收取汁液得到原液A，将滤渣放入研磨钵中，并加入水8-9份，继续充分研磨，挤压过滤挤压收取汁液得到原液B，将原液A和原液B充分混合，并与7-10体积份浓度为45％-60％乙醇溶液充分混合，室温静置16-24h，去上清液获取沉淀物，将沉淀物与氧化钙和水混合，搅均静置4-6h，去上清液获得最终沉淀物，再经紫外线照射10-15min，最后经过筛获得的超微粉碎物为益母草提取物。
优选的，一种益母草提取物，由包含以下步骤的方法制备得到：取益母草充分研磨，挤压过滤收取汁液得到原液A，将滤渣放入研磨钵中，并加入水8份，继续充分研磨，挤压过滤挤压收取汁液得到原液B，将原液A和原液B充分混合，并与10体积份浓度为50％乙醇溶液充分混合，室温静置20h，去上清液获取沉淀物，将沉淀物与氧化钙和水混合，搅均静置6h，去上清液获得最终沉淀物，再经紫外线照射15min，最后经过筛获得的超微粉碎物为益母草提取物。
其中，在上述制备方法中，益母草经乙醇溶液处理获得的沉淀物与氧化钙和水的比例，按重量份计，沉淀物与氧化钙和水的比例为1：1-3：5-10。
其中，在上述制备方法中，沉淀物与氧化钙和水的加入顺序为：先加沉淀物，再加氧化钙，充分混合，最后加水，均匀搅动至混悬。
其中，在上述制备方法中，过筛优选过80-100目筛。
其中，在上述制备方法中，挤压过滤收取汁液采用无纺纱布进行。
优选的，所述枳壳提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取枳壳经打磨成粗粉，再与抗凝猪血1-3份、大豆磷酯油1-5份、水20-40份充分混合，室温瓦罐密闭厌氧发酵25-60天，取出发酵混合物，30-55℃烘干至含水量≤5％，加入3％-8％稀盐酸100-260份，过滤收集滤渣，再经30-55℃烘干至含水量≤5％，所得物标为枳壳提取物A，而将过滤液经离心后再次收集滤渣，再经30-55℃烘干至含水量≤5％，所得物标为枳壳提取物B，枳壳提取物A和枳壳提取物B的混合物即为所述的枳壳提取物。
在一个优选的实施例中，所述枳壳提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取枳壳打磨成粗粉，再与抗凝猪血1-2.5份、大豆磷酯油1-3份、水25-35份充分混合，室温瓦罐密闭厌氧发酵35-56天，取出发酵混合物，45-50℃烘干至含水量≤5％，加入3％-8％稀盐酸120-210份，过滤收集滤渣，再经45-50℃烘干至含水量≤5％，所得物标为枳壳提取物A，而将过滤液经离心后再次收集滤渣，再经45-50℃烘干至含水量≤5％，所得物标为枳壳提取物B，枳壳提取物A和枳壳提取物B的混合物即为所述的枳壳提取物。
其中，所述抗凝猪血为添加了抗凝剂的猪血，优选为新鲜抗凝猪血，抗凝剂优选肝素钠粉。
其中，上述新鲜抗凝猪血可以屠宰健康猪只现场所取的抗凝血液，抗凝剂添加浓度为分分之一至万分之四，抗凝剂优选肝素钠粉。
其中，上述枳壳研磨粉、与抗凝猪血、大豆磷酯油、水的加入顺序为：枳壳研磨粉与猪血混合均匀，在猪血变黑前分别依次加入大豆磷酯油和水。
其中，上述过滤液离心优选在3000-5000rpm离心，离心5-10分钟。
其中，上述过滤收集滤渣采用无房纱布进行，例如采用24-36层无纺纱布过滤收集滤渣。
其中，上述取枳壳打磨成粗粉优选为取枳壳经40-50目打磨成粗粉。
优选的，所述车前草提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取车前草依次经氢氧化钠溶液、氯化钾溶液、水分别反复浸洗2-4次，自然烘干，粉碎获得车前草粉，再与鸭蛋清50-120份充分混合，装入陶瓦罐中置于20-28℃环境中封口静态发酵8-21天，取出车前草发酵产物，并计重量份以车前草重量份的3-6倍重量的水稀释溶解，过滤除渣，收集滤液，再经离心去渣，将离心上清液入透析袋，袋口封闭，流水透析过液，聚乙二醇6000浓缩至原体积的1/5至1/2，收集透析袋内物质即为车前草提取物。
优选的，一种车前草提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取车前草依次经氢氧化钠溶液、氯化钾溶液、水反复浸洗2-4，自然烘干，粉碎获得车前草粉，再与鸭蛋清50-120份充分混合，装入陶瓦罐中置于20-28℃环境中封口静态发酵8-21天，取出车前草发酵产物，并计重量份以车前草重量份的3-6倍重量的水稀释溶解，过滤除渣，收集滤液，再经离心去渣，将离心上清液入透析袋，袋口封闭，流水透析过液，聚乙二醇6000浓缩至原体积的1/5至1/2，收集透析袋剩余物质即为车前草提取物。
优选的，所述粉碎获得车前草粉优选为粉碎过40-80目获得车前草粉。
其中，在上述制备方法中，车前草、氢氧化钠、氯化钾和水依次加入冲洗，否则会影响车前草提取物对本发明的预防效果。
优选的，在上述制备中，车前草发酵物的滤液离心优选在3000-5000rpm离心，离心5-10分钟。
优选的，所述复合增效物由包含以下步骤的方法制备得到：将薄荷叶灰与氯化钙、柠檬酸、五倍子混合，常温下过80-120目筛获得超微粉碎物，所得的超微粉碎物为复合增效物。
在一个优选的实施例中，所述复合增效物由包含以下步骤的方法制备得到：将薄荷叶灰与氯化钙、柠檬酸、五倍子混合，常温下过100-120目筛获得超微粉碎物，所得的超微粉碎物即为复合增效物。
其中，所述薄荷叶灰为薄荷叶经火烧后残留的物质为薄荷叶灰。
其中，上述薄荷叶灰与氯化钙、柠檬酸、五倍子的混合没有加入顺序的限制。
上述多种活性物质以不经任何提取或复配处理而简单以单种原型物质复配，对金鲳应激性鳃损伤无任何明显预防效果。
本发明的预混料利用独特的提取技术，获得多种对金鲳应激性鳃损伤有预防作用的活性物质，这些活性物质经复配可以大大提升对金鲳应激性鳃损伤的预防成功率。
上述多种活性物质的提取工艺或参数要求对于活性物质效果具有影响。上述多种活性物质复配可相互协同增效，缺失任何一种活性成分均会影响本发明对金鲳应激性鳃损伤的预防效果。
在第二方面，本发明提供一种制备上述预防金鲳应激性鳃损伤的预混料的方法，所述方法包括以下步骤：将组分混合，在25-45℃烘干至混合物的水分含量为8-10％，并可选地粉碎至80-120目筛内，得到预混料。
在一个优选的实施例中，一种制备上述预防金鲳应激性鳃损伤的预混料的方法，该方法包括以下步骤：将所述组分混合，在35-38℃下烘干至混合物的水分含量为8-9％，并粉碎至100-120目筛内，得到预混料。
在一个优选的实施例中，一种制备上述预防金鲳应激性鳃损伤的预混料的方法，该方法包括以下步骤：将所述组分混合，在35℃下烘干至混合物的水分含量为8％，并粉碎至120目筛内，得到预混料。
在第三方面，本发明还提供一种上述预防金鲳应激性鳃损伤的预混料的应用，用于预防金鲳应激性鳃损伤和/或用于治疗性修复发生初期的预防金鲳应激性鳃损伤。
其中，所述预混料用于预防金鲳应激性鳃损伤时，按重量百分比0.1％-0.5％添加于饲料中，优选连续使用3-7天为一周期。
其中，所述预混料用于治疗性修复发生初期的金鲳应激性鳃损伤时，按重量百分比0.6％-1.5％添加于饲料中，优选连续使用5-12天为一周期。
在第四方面，本发明还提供一种上述预防金鲳应激性鳃损伤的预混料的应用，用于制备预防金鲳应激性鳃损伤和/或用于治疗性修复发生初期的预防金鲳应激性鳃损伤的饲料。
其中，所述预混料用于制备预防金鲳应激性鳃损伤的饲料时，所述饲料包括重量百分比0.1％-0.5％的预混料。
其中，所述预混料用于治疗性修复制备发生初期的金鲳应激性鳃损伤饲料时，所述饲料包括重量百分比0.6％-1.5％的预混料。
以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
在本发明实施例中，原液A、原液B均可以保存于0-4℃环境中12-24h，若液面有白膜即视为变质。
在本发明实施例中，益母草为当天鲜摘益母草，栽植龄以20-35天的益母草效果最佳，霉变叶、茎必须摘除。
在本发明实施例中，水为无菌水或蒸馏水。
在本发明实施例中，大豆磷酯油可以为市售普通饲料级大豆磷酯油。
在本发明实施例中，无纺纱布为市售医用无纺纱布。
在本发明实施例中，枳壳为为芸香科植物酸橙及其栽培变种的干燥未成熟果实，含水量要求≤8％。
在本发明实施例中，车前草可以为车前草自然烘干带根全草株，含水量≤8％。
在本发明实施例中，鸭蛋清优选鲜期为产蛋后20天以内的鸭蛋蛋清。
在本发明实施例中，车前草离心上清液流水透析中的流水优选为自来水。
在本发明实施例中，透析袋可以为化工用途级的市售透析袋，孔径优选为0.25-0.45微米。
在本发明实施例中，五倍子为四川产地的市售五倍子，含水量无特殊要求，霉变禁用。
在本发明实施例中，薄荷叶灰为2年种植龄以上当年7-9月的薄荷新鲜叶经火烧后残留的物质即为鲜薄荷叶灰。
在本发明实施例中，氯化钙、柠檬酸均为化学分析纯级物质。
在本发明实施例中，氢氧化钠可以为分析纯级的市售氢氧化钠，使用浓度优选为1-6M/L。
在本发明实施例中，氯化钾可以为分析纯级的市售氯化钾，使用浓度优选为3-5M/L。
在本发明实施例中，盐酸为普通市售化学分析纯盐酸。
实施例1
一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料，由以下重量份的组分制备得到：益母草提取物38份，枳壳提取物40份，车前草提取物48份，复合增效物0.8份。
其中，一种益母草提取物，由包含以下步骤的方法制备得到：按重量份计，取益母草100份，充分研磨，36层无纺纱布挤压过滤收取汁液，标示为原液A，将滤渣将入研磨钵中，并加入无菌水蒸馏水8份，继续充分研磨，36层无纺纱布挤压过滤挤压收取汁液，标示为原液B。将原液A和原液B充分混合，并与10份浓度为50％乙醇溶液充分混合，室温静默20h，去上清液获取沉淀物，将沉淀物与氧化钙、无菌蒸馏水混合，搅均静置6h，去上清液获得最终沉淀物，再经紫外线照射15min，最后经100目筛获得的超微粉碎物即为益母草提取物。
其中，一种枳壳提取物，由包含以下步骤的方法制备得到：按重量份计，取枳壳100份，40-50目打磨成粗粉，再与新鲜抗凝猪血1-2.5份、大豆磷酯油1-3份、无菌蒸馏水25-35份充分混合，室温瓦罐密闭厌氧发酵35-56天，取出发酵混合物，45-50℃烘干至含水量≤5％，加入3％-8％稀盐酸120-210份，30-36层无纺纱布过滤收集滤渣，再经45-50℃烘干至含水量≤5％，所得物标为枳壳提取物A，而过滤液经离心后收集的滤渣，同样再经45-50℃烘干至含水量≤5％，所得物标为枳壳提取物B，枳壳提取物A和枳壳提取物B的混合物即为所述的枳壳提取物
其中，一种车前草提取物，由包含以下步骤的方法制备得到：按重量份计，取车前草100份，将车前草依次经氢氧化钠溶液、氯化钾溶液、无菌蒸馏水反复浸洗2-4次三个步骤前处理，自然烘干，过40-80目粉碎获得车前草粉，再与新鲜鸭蛋清50-120份充分混合，装入陶瓦罐中置于20-28℃环境中封口静态发酵8-21天，取出车前草发酵产物并计重量份，以车前草重量份的3-6倍重量的无菌蒸馏水稀释溶解，24-36层无纺纱布过滤除渣，收集滤液，再经离心去渣，将离心上清液入透析袋，袋口封闭，流水透析过液，聚乙二醇6000浓缩至原体积的1/5至1/2，收集透析袋剩余物质即为车前草提取物。
其中，一种复合增效物由包含以下步骤的方法制备得到：将鲜薄荷叶灰与氯化钙、柠檬酸、五倍子按(100-120)：(1-1.2)：(1.4-2.2)：(13-16)的重量比进行混合，常温下过100-120目筛获得超微粉碎物，所得的超微粉碎物即为所述的复合增效物。
制备该预混料的方法为：将各组分进行充分混合，接着置于35℃持续烘干至混合物含水量≤8％时，将混合物过120目粉碎机进行粉碎，获得的粉碎物即为预混料。
实施例2
一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料，由以下重量份的组分制备得到：益母草提取物35份，枳壳提取物38份，车前草提取物45份，复合增效物1份。
其中，一种益母草提取物，由包含以下步骤的方法制备得到：按重量份计，取益母草100份，充分研磨，36层无纺纱布挤压过滤收取汁液，标示为原液A，将滤渣将入研磨钵中，并加入无菌水蒸馏水8份，继续充分研磨，36层无纺纱布挤压过滤挤压收取汁液，标示为原液B。将原液A和原液B充分混合，并与10份浓度为50％乙醇溶液充分混合，室温静默20h，去上清液获取沉淀物，将沉淀物与氧化钙、无菌蒸馏水混合，搅均静置6h，去上清液获得最终沉淀物，再经紫外线照射15min，最后经100目筛获得的超微粉碎物即为益母草提取物。
其中，一种枳壳提取物，由包含以下步骤的方法制备得到：按重量份计，取枳壳100份，40-50目打磨成粗粉，再与新鲜抗凝猪血1-2.5份、大豆磷酯油1-3份、无菌蒸馏水25-35份充分混合，室温瓦罐密闭厌氧发酵35-56天，取出发酵混合物，45-50℃烘干至含水量≤5％，加入3％-8％稀盐酸120-210份，30-36层无纺纱布过滤收集滤渣，再经45-50℃烘干至含水量≤5％，所得物标为枳壳提取物A，而过滤液经离心后收集的滤渣，同样再经45-50℃烘干至含水量≤5％，所得物标为枳壳提取物B，枳壳提取物A和枳壳提取物B的混合物即为所述的枳壳提取物
其中，一种车前草提取物，由包含以下步骤的方法制备得到：按重量份计，取车前草100份，将车前草依次经氢氧化钠溶液、氯化钾溶液、无菌蒸馏水反复浸洗2-4次三个步骤前处理，自然烘干，过40-80目粉碎获得车前草粉，再与新鲜鸭蛋清50-120份充分混合，装入陶瓦罐中置于20-28℃环境中封口静态发酵8-21天，取出车前草发酵产物并计重量份，以车前草重量份的3-6倍重量的无菌蒸馏水稀释溶解，24-36层无纺纱布过滤除渣，收集滤液，再经离心去渣，将离心上清液入透析袋，袋口封闭，流水透析过液，聚乙二醇6000浓缩至原体积的1/5至1/2，收集透析袋剩余物质即为车前草提取物。
其中，一种复合增效物由包含以下步骤的方法制备得到：按重量份计，将鲜薄荷叶灰与氯化钙、柠檬酸、五倍子按(100-120)：(1-1.2)：(1.4-2.2)：(13-16)比例进行混合，常温下过100-120目筛获得超微粉碎物，所得的超微粉碎物即为所述的复合增效物。
制备该预混料的方法为：将各组分进行充分混合，接着置于35℃持续烘干至混合物含水量≤8％时，将混合物过120目粉碎机进行粉碎，获得的粉碎物即为预混料。
养殖试验证明，针对金鲳应激性鳃损伤的高发阶段提前进行拌饲内服或作为饲料预混料按推荐用量添加于饲料中，对金鲳的应激性鳃损伤具有明显的预防效果。
养殖试验也证明，针对金鲳应激性鳃损伤的高发阶段提前进行拌饲内服或作为饲料预混料按推荐用量添加于饲料中，对于金鲳的应激性鳃损伤发生初期具有明显的治疗效果，可明显降低已经出现应激性鳃损伤的金鲳死亡率。
试验例1：本发明实施例对金鲳应激性鳃损伤的预防效果评估
市售的金鲳膨化颗粒饲料产品，作为本实验例的基础饲料，基础饲料产品营养成分主要：蛋白42％、脂肪12.5％、粗纤维10％、粗灰分12％、赖氨酸2.0％。
(1)预混料添加剂量组设定
以市售金鲳饲料产品为基础载体，分别向基础载体添加不同剂量的实施例1制备的预混料的组作为试验组，同时分别设定预混料中益母草提取物、枳壳提取物、车前草提取物、复合增效物单独缺失时的预混料按不同剂量添加作为平行对照组，其中以不添加本发明实施例1制备的预混料为空白对照组。试验组设置详细信息见表1。
表1：不同试验组设置信息表
注：组别中所对应的缺成分预混料配方以实施例1制备的预混料配方为基础配方，所缺成分的配比量以等重量豆粕进行替换。
(2)试验分组与管理
选择20g±6g的健康金鲳，从6000尾金鲳中随机挑选4800尾，随机分为16组，其中每组下设3个平行，每个平行一个网箱，一个网箱用鱼100尾，各组分别投喂上述16种饲料。试验周期90天。试验期间，各组金鲳均按1.5％-2.0％的日均投饵率进行投喂，一日三餐定时定点投喂。
(3)应激性鳃损伤的预防效果评估
试验周期内，各组连续投喂对应的试验料。试验期间，每天巡查网箱，捞取发病死亡的金鲳，单独记录各个试验网箱出现应激性鳃损伤的金鲳数量。
试验第91天时，统计各个试验网箱出现应激性鳃损伤的数量，其中以游边、鳃部局部或大部应激性窦状充血，或是鳃部局部黏液异常分泌鳃丝局部发白、肿胀，且鱼体内肝脏无任何致病菌检测出以及鳃丝无任何寄生虫病原检出，则可认定为应激性鳃损伤的阳性案例。根据试验结束时各网箱金鲳应激性鳃损伤数量的多少，进而统计应激性鳃损伤发生率和预防率，其计算公式如下。
应激性鳃损伤发生率(％)＝认定符合应激性鳃损伤的金鲳数量/同组试验金鲳总数量╳100
试验第91天时，各网箱金鲳经数据汇总统计确认，以对照组金鲳应激性鳃损伤发生率为基准，统计各网箱金鲳应激性鳃损伤发生率和预防率如表2。
表2：
组别 应激性鳃损伤发生率(％) 应激性鳃损伤预防率(％)
1 11 100
2 2 81.8
3 2 81.8
4 4 63.6
5 7 36.4
6 9 18.2
7 8 27.3
8 5 54.5
9 7 36.4
10 7 36.4
11 6 45.5
12 7 36.4
13 5 54.5
14 7 36.4
15 7 36.4
16 8 27.3
从表2可以看出，试验周期内，与空白对照组应激性鳃损伤发生率相比，按0.1％、0.3％、0.5％比例添加了本发明实施例1制备的预混料对试验组金鲳的应激性鳃损伤发生率具有不同程度的降低效果，对试验组金鲳应激性鳃损伤发生率分别为2％、2％、4％，与空白对照组相比，本发明制备的预混料对金鲳应激性鳃损伤预防率分别提升82％、82％、64％，这说明本发明实施例1制备的预混料对金鲳应激性鳃损伤具有明显的预防效果。
同时，从表2还可以看出，当基础饲料中分别添加缺失益母草提取物、缺失枳壳提取物、缺失车前草提取物、缺失复合增效物的本发明预混料时，对应组分缺失的0.1％、0.3％和0.5％三个剂量组金鲳应激性鳃损伤发生率较之空白对照组有不同程度的降低，但这些试验组金鲳应激性鳃损伤的预防率明显低于完整添加本发明实施例1制备的预混料的组。
因此，从上述结果可以看出，益母草提取物、枳壳提取物、车前草提取物、复合增效物任一组分单独缺失，即使与本发明实施例1使用相同剂量的添加比例，均可不同程度的降低本发明预混料对应激性鳃损伤的预防效果。可见，益母草提取物、枳壳提取物、车前草提取物、复合增效物任一组分对本发明中其他组分在预防金鲳应激性鳃损伤时具有协同增效作用，也是预防金鲳应激性鳃损伤的关键功能组分。
试验例2复合增效剂对其他预混料组分的增效作用
市售的金鲳膨化颗粒饲料产品，作为本实验例的基础饲料，基础饲料产品营养成分主要：蛋白42％、脂肪12.5％、粗纤维10％、粗灰分12％、赖氨酸2.0％。
(1)预混料添加剂量组设定
以市售金鲳饲料产品为基础载体，分别向基础载体添加不同剂量的实施例1制备的预混料的组作为试验组，同时分别设定本发明实施例1制备的预混料中复合增效剂全缺失、复合增效剂中薄荷叶粉缺失、复合增效剂中氯化钙缺失、复合增效剂中柠檬酸缺失、复合增效剂中和五倍子缺失的预混料按不同剂量添加作为平行对照组，其中以不添加本发明实施例1制备的预混料为空白对照组。试验组设置详细信息见表3。
表3：不同试验组设置信息表
注：组别中所对应的缺成分预混料配方以实施例1制备的预混料配方为基础配方，所缺成分的配比量以等重量豆粕进行替换。
(2)试验分组与管理
选择20g±6g的健康金鲳，从8000尾金鲳中随机挑选5100尾，随机分为19组，其中每组下设3个平行，每个平行一个网箱，一个网箱用鱼100尾，各组分别投喂上述19种饲料。试验周期90天。试验期间，各组金鲳均按1.5％-2.0％的日均投饵率进行投喂，一日三餐定时定点投喂。
(3)应激性鳃损伤的预防效果评估
试验周期内，各组连续投喂对应的试验料。试验期间，每天巡查网箱，捞取濒死发病死亡的金鲳，单独记录各个试验网箱出现应激性鳃损伤的金鲳数量。
试验第91天时，统计各个试验网箱出现应激性鳃损伤的数量，其中以游边、鳃部局部或大部应激性窦状充血，或是鳃部局部黏液异常分泌鳃丝局部发白、肿胀，且鱼体内肝脏无任何致病菌检测出以及鳃丝无任何寄生虫病原检出，则可认定为应激性鳃损伤的阳性案例。根据试验结束时各网箱金鲳应激性鳃损伤数量的多少，进而统计应激性鳃损伤发生率和预防率，其计算公式如下。
应激性鳃损伤发生率(％)＝认定符合应激性鳃损伤的金鲳数量/同组试验金鲳总数量╳100
试验第91天时，各网箱金鲳经数据汇总统计确认，以对照组金鲳应激性鳃损伤发生率为基准，统计各网箱金鲳应激性鳃损伤发生率和预防率如表4。
表4：
从表4可以看出，试验周期内，与空白对照组应激性鳃损伤发生率相比，按0.1％、0.3％、0.5％比例添加了本发明实施例1制备的预混料对试验组金鲳的应激性鳃损伤发生率具有不同程度的降低效果，对试验组金鲳应激性鳃损伤发生率分别为2％、3％、3％，与空白对照组相比，本发明制备的预混料对金鲳应激性鳃损伤预防率分别提升78％、67％、67％，这说明本发明实施例1制备的预混料对金鲳应激性鳃损伤具有明显的预防效果。
同时，从表2还可以看出，当基础饲料中分别添加完全缺失复合增效剂、单独缺失复合增效剂中薄荷叶粉、单独缺失复合增效剂中氯化钙、单独缺失复合增效剂中柠檬酸、单独缺失复合增效剂中和五倍子的本发明预混料时，复合增效剂对应组分缺失的0.1％、0.3％和0.5％三个剂量组金鲳应激性鳃损伤发生率较之空白对照组有不同程度的降低，但这些试验组金鲳应激性鳃损伤的预防率则明显低于完整添加本发明实施例1制备的预混料的组。
因此，从上述结果可以看出，即使与本发明实施例1使用相同剂量的添加比例，本发明实施例1中复合增效剂完全缺失或任一组分单独缺失，均可不同程度的降低本发明预混料对应激性鳃损伤的预防效果。可见，复合增效剂、复合增效剂中薄荷叶粉、复合增效剂中氯化钙、复合增效剂中柠檬酸、复合增效剂中和五倍子完全缺失或任一组分缺失，均对本发明中其他组分在预防金鲳应激性鳃损伤效果上的明显降低。由此可见，复合增效剂全组分均是预防金鲳应激性鳃损伤的关键功能组分，复合增效剂组分间对预防金鲳应激性鳃损伤的具有协同增效作用。
以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料，其特征在于，主要由以下重量份的组分制成：益母草提取物5-10份，枳壳提取物15-35份，车前草提取物10-15份，复合增效物0.1-0.5份；其中，所述复合增效物包括重量比100-130：1-1.5：1-2.5：10-18的薄荷叶粉、氯化钙、柠檬酸、和五倍子。
2.如权利要求1所述的一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料，其特征在于，主要由以下重量份的组分制成：益母草提取物25-38份，枳壳提取物27-42份，车前草提取物35-55份，复合增效物0.5-1.5份；其中，所述复合增效物包括重量比100-130：1-1.5：1-2.5：10-18的薄荷叶粉、氯化钙、柠檬酸、和五倍子。
3.如权利要求1所述的一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料，其特征在于，主要由以下重量份的组分制成：益母草提取物30-38份，枳壳提取物30-42份，车前草提取物35-50份，复合增效物0.5-1.0份；其中，所述复合增效物包括重量比100-130：1-1.5：1-2.5：10-18的薄荷叶粉、氯化钙、柠檬酸、和五倍子。
4.如权利要求1所述的一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料，其特征在于，主要由以下重量份的组分制成：益母草提取物35份，枳壳提取物38份，车前草提取物45份，复合增效物1份；其中，所述复合增效物包括重量比100-130：1-1.5：1-2.5：10-18的薄荷叶粉、氯化钙、柠檬酸、和五倍子。
5.如权利要求1至4中任一所述的一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料，其特征在于，主要由以下重量份的组分制成：按重量份计，所述复合增效物包括以下组分：100-120：1-1.2：1.4-2.2：13-16的薄荷叶灰、氯化钙、柠檬酸、五倍子。
6.如权利要求1至4中任一所述的一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料，其特征在于，主要由以下重量份的组分制成：所述益母草提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取益母草充分研磨，挤压过滤收取汁液得到原液A，将滤渣放入研磨钵中，并加入水8-10份，继续充分研磨，挤压过滤挤压收取汁液得到原液B，将原液A和原液B充分混合，并与5-10体积份浓度为35％-60％乙醇溶液充分混合，室温静置12-24h，去上清液获取沉淀物，将沉淀物与氧化钙和水混合，搅均后静置4-8h，去上清液获得最终沉淀物，再经紫外线照射10-25min，最后经过筛获得的超微粉碎物为益母草提取物。
7.如权利要求1至4中任一所述的一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料，其特征在于，主要由以下重量份的组分制成：所述枳壳提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取枳壳经打磨成粗粉，再与抗凝猪血1-3份、大豆磷酯油1-5份、水20-40份充分混合，室温瓦罐密闭厌氧发酵25-60天，取出发酵混合物，30-55℃烘干至含水量≤5％，加入3％-8％稀盐酸100-260份，过滤收集滤渣，再经30-55℃烘干至含水量≤5％，所得物标为枳壳提取物A，而将过滤液经离心后再次收集滤渣，再经30-55℃烘干至含水量≤5％，所得物标为枳壳提取物B，枳壳提取物A和枳壳提取物B的混合物即为所述的枳壳提取物。
8.如权利要求1至4中任一所述的一种预防金鲳应激性鳃损伤的预混料，其特征在于，主要由以下重量份的组分制成：所述车前草提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取车前草依次经氢氧化钠溶液、氯化钾溶液、水分别反复浸洗2-4次，自然烘干，粉碎获得车前草粉，再与鸭蛋清50-120份充分混合，装入陶瓦罐中置于20-28℃环境中封口静态发酵8-21天，取出车前草发酵产物，并计重量份以车前草重量份的3-6倍重量的水稀释溶解，过滤除渣，收集滤液，再经离心去渣，将离心上清液入透析袋，袋口封闭，流水透析过液，聚乙二醇6000浓缩至原体积的1/5至1/2，收集透析袋内物质即为车前草提取物。
9.一种制备权利要求1-4中任一所述的预防金鲳应激性鳃损伤的预混料的方法，所述方法包括以下步骤：将组分混合，在25-45℃烘干至混合物的水分含量为8-10％，并可选地粉碎至80-120目筛内，得到预混料。
10.一种权利要求1-4中任一所述的预防金鲳应激性鳃损伤的预混料的应用，用于制备预防金鲳应激性鳃损伤和/或用于治疗性修复发生初期的预防金鲳应激性鳃损伤的饲料；优选的，所述预混料用于制备预防金鲳应激性鳃损伤的饲料时，所述饲料包括重量百分比0.1％-0.5％的预混料；或，所述预混料用于治疗性修复制备发生初期的金鲳应激性鳃损伤饲料时，所述饲料包括重量百分比0.6％-1.5％的预混料。
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