CN110269158A - 一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料及其制备方法和应用 - Google Patents

一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种鱼饲料预混料，尤其涉及一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料及该预混料的制备方法和应用，预混料包括以下重量份的组分：松籽仁提取物45‑65份，田螺消化腺提取物0.3‑1.5份，椰肉提取物3‑15份，洋槐花提取物35‑55份。与现有的大黄鱼全价饲料中使用的营养性预混料相比，本发明利用独特的活性物提取工艺，充分提取松籽仁、田螺消化腺、椰肉和洋槐花四种成分中的适症成分，并保持这些适症成分的高活性，对大黄鱼高温期白鳃综合症具有显著的预防作用，以显著的降低高温期白鳃综合症的发生率和死亡率，提升大黄鱼高温期的养殖成数和养殖效益。

Description

一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料及其制备方法和 应用
技术领域
本发明涉及一种鱼饲料预混料，尤其涉及一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料及该预混料的制备方法和应用。
背景技术
大黄鱼(Larimichthys crocea)，与小黄鱼、带鱼、乌贼并称四大海产，养殖分布于我国福建、浙江等东南沿海浅海区域，以集约化海水网箱养殖为主，已成为当地重要的经济养殖品种之一。
每年8-9月，当网箱1米水深、海水温度大于26℃时，二龄大黄鱼将出现持续缓慢死亡现象，其中同期体重规格大的大黄鱼发生死亡的比例明显高于体重规格小的大黄鱼。研究发现，出现死亡的大黄鱼，在症状上主要表现为鳃丝发白，胆囊扩张，胆汁异常浓绿，肠道无内容物，肝脏发白，而脾脏、肾脏和肌肉则未见明显形态异常。出现初期症状时，发病大黄鱼体内脏器通常检测不到常见的致病菌或病毒；而出现症状后期，有一定比例的大黄鱼体内脏器可以分离到弧菌等病原，但所分离到的弧菌等病原人工感染时却无法复制出与发病大黄鱼相同或高度相似的症状。由于高温期鳃丝发白与大黄鱼死亡之间具有极高的正相关性，因此当地将大黄鱼高温期鳃丝发白且预后不良的这种现象称为大黄鱼白鳃综合症。
由于大黄鱼白鳃综合症对于大黄鱼人工养殖的影响，需要研发对于预防大黄鱼高温期白鳃综合症有显著效果的预混料。
发明内容
针对以上不足，本发明提供一种针对近海网箱养殖大黄鱼8-9月高发的高温期白鳃综合症的预防的预混料。
本发明通过以下方案达到上述目的：
在第一方面，本发明提供一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料，包括以下重量份的组分：松籽仁提取物45-65份，田螺消化腺提取物0.3-1.5份，椰肉提取物3-15份，洋槐花提取物35-55份。
在第二方面，本发明提供一种制备上述预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料的方法，所述方法包括以下步骤：将组分混合，在35-45℃下烘干至混合物的水分含量为8-10％，并可选地粉碎至80-150目筛范围内，得到预混料。
在第三方面，本发明还提供一种上述预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料的应用，用于预防高温期白鳃综合症和/或用于治疗发生初期病变的高温期白鳃综合症。
在第四方面，本发明还提供一种上述预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料的应用，用于制备预防高温期白鳃综合症和/或用于治疗发生初期病变的高温期白鳃综合症的饲料。
与现有的大黄鱼全价饲料中使用的营养性预混料相比，本发明利用独特的活性物提取工艺，充分提取松籽仁、田螺消化腺、椰肉和洋槐花四种成分中的适症成分，并保持这些适症成分的高活性，对大黄鱼高温期白鳃综合症具有显著的预防作用，以显著的降低高温期白鳃综合症的发生率和死亡率，提升大黄鱼高温期的养殖成数和养殖效益。
具体实施方式
在第一方面，本发明提供一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料，包括以下重量份的组分：松籽仁提取物45-65份，田螺消化腺提取物0.3-1.5份，椰肉提取物3-15份，洋槐花提取物35-55份。
在本发明的预混料中，上述四种物质单独使用时，对大黄鱼高温期白鳃的预防无明显效果。而松籽仁和田螺消化腺对肝脏发白和胆汁异常发绿具有明显的修复作用，椰肉提取物、洋槐花提取物则可持续改善鳃丝供血，对鳃丝发白具有显著的预防作用。松籽仁提取物、田螺消化腺提取物、椰肉提取物、洋槐花提取物联合使用时对预防高温期白鳃综合症具有协同增效作用。
发明人从作用机理方面分析认为，本发明的预混料通过修复受损肝细胞，维持肝细胞的胆汁分泌机能稳定，调节胆汁的排放节律，改善鳃部组织血液循环的通畅性，增强大黄鱼鱼体对高温期白鳃综合症的自主防御机能，从而实现预防或明显降低大黄鱼高温期白鳃综合症的发生率。
优选的，所述预混料还包括填充物，例如豆粕10-25份。
本发明提供的上述预防大黄鱼高温期白鳃症的预混料，其中，松籽仁提取物、田螺消化腺提取物、椰肉提取物、洋槐花提取物为预防大黄鱼高温期白鳃症的关键功能成分；豆粕为填充载体功能。
优选的，一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料，主要由以下重量份组分制备而成：松籽仁提取物50-60份，田螺消化腺提取物0.6-1.2份，椰肉提取物7-12份，洋槐花提取物45-51份，豆粕15-22份。
优选的，一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料，主要由以下重量份的组分制成：松籽仁提取物55份，田螺消化腺提取物0.9份，椰肉提取物10份，洋槐花提取物50份，豆粕20份。
优选的，一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料，主要由以下重量份的组分制成：松籽仁提取物60份，田螺消化腺提取物1.2份，椰肉提取物8份，洋槐花提取物48份，豆粕18份。
优选的，所述松籽仁提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取松籽仁，压榨收取松籽仁油，将榨油后的松籽仁粕与木质醋酸菌、水、培养液混合发酵4-6天，取发酵后松籽仁粕30-65℃烘干至含水量≤8％，再经粉碎获得发酵后的松籽仁粕超微粉，将松籽仁油与发酵后松籽仁粕超微粉混合，25-30℃烘干，再经粉碎获得松籽仁提取物。
优选的，所述制备方法中的粉碎后经80-120目筛。
在一个优选的实施例中，一种松籽仁提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取松籽仁压榨收取松籽仁油，将榨油后的松籽仁粕与木质醋酸菌、培养液发酵6天，取发酵后松籽仁粕40-45℃烘干至含水量≤8％，再经100目筛粉碎获得发酵后松籽仁粕超微粉，将松籽仁油与发酵后松籽仁粕超微粉混合，30℃烘干，再经100目筛粉碎获得复合物，即为松籽仁提取物。
其中，上述松籽仁粕与木质醋酸菌、培养液的发酵比例，按重量份：体积份：重量份计，为1-3：100-300：4-8。
优选的，所述发酵条件为28-35℃恒温持续密闭厌氧发酵6天。
优选的，上述木质醋酸菌为分离自椰果的菌株。
其中，上述培养液为普通肉汤培养液，提供一种优选的培养液包括以下组分：按重量百分比计，蛋白胨10％-30％，胰胨白胨1％-3％，Mg2+≥0.2mmol/L，K+≥0.5mmol/L，Ca2+≥0.4mmol/L，其中Mg2+、K+、Ca2+为独立添加的离子态，其来源优选MgCl2，、KCl、CaCl2，其余为水。
优选的，所述田螺消化腺提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取田螺消化腺置于30-45℃环境中烘干至含水量≤1％，研磨成粉，与30％-45％乙酸溶液按1：3-8的重量比混合，置于30-35℃避光密闭混合12-25天，开封取混合液，离心，取上清液，该上清液即为田螺消化腺提取物。
优选的，所述离心为3500-5000rpm离心10-15min。
在一个优选的实施例中，一种田螺消化腺提取物由包含以下步骤的方法制备得到：按重量份计，取田螺消化腺100份，置于35℃环境中烘干至含水量≤1％，研磨成粉，与35％乙酸溶液按1：5混合，置于室温35℃环境中避光密闭混合18天，开封取乙酸与田螺消化腺研磨粉混合液，5000rpm离心10min，去沉淀取上清液，即得的上清液即为田螺消化腺提取物。
其中，上述田螺消化腺泛指田螺科的软体动物的消化腺，例如可以为中国圆田螺消化腺。
其中，上述田螺消化腺烘干后的研磨粉与乙酸没有加入顺序的限制，例如采用先加入乙酸，再加入田螺消化腺烘干后研磨粉。
优选的，所述椰肉提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取椰肉置于45-55℃环境中烘干至含水量≤1％，切成椰肉粒，与5％-15％氨水溶液按1：12-26的重量比混合，置于4-10℃环境中避光密闭混合7-14天，开封捞取椰肉粒，在水中沉泡30-60min，重复2-5次，经吸湿处理的椰肉粒经粉碎制备微粉，再与100-250份水混合，过滤获得过滤物，将过滤物与30-50份豆粕混合，烘干至含水量≤8％，粉碎制备超微粉，所获得的超微粉即为椰肉提取物。
在一个优选的实施例中，一种椰肉提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取椰肉置于55℃环境中烘干至含水量≤1％，切成粒径1-2cn的椰肉粒，与10％氨水溶液按1：15-22的重量比混合，置于4℃环境中避光密闭混合12天，开封捞取椰肉粒，在水中沉泡30min，重复5次，经吸湿处理的椰肉粒经粉碎制备微粉，再与120份水混合，过滤获得过滤物，将过滤物与35份豆粕混合，烘干至含水量≤8％，粉碎制备超微粉，所获得的超微粉即为椰肉提取物。
优选的，所述吸湿处理的椰肉粒经粉碎过30-50目筛制备微粉。
优选的，所述过滤物与35份豆粕混合，烘干至含水量≤8％，粉碎过100-120目筛制备超微粉。
其中，上述的椰肉可以为鲜摘后保存1-20日内的椰果经去汁去皮后获得的椰果肉。
其中，上述制备方法中的水优选无菌蒸馏水。
其中，所述过滤可以采用无纺纱布过滤。
优选的，所述洋槐花提取物由包含以下步骤的方法制备得到：将洋槐花去杂除尘，用腐竹薄膜包裸封口，再经速冻、预膨化、真空脱油处理，获得洋槐花脱水干燥物，干燥物进行超微粉碎，获得的超微粉碎物与乙酸乙酯在20-35℃环境中混合48-72h，过滤除渣获得过滤液，重复过滤3-5次，装袋流水透析16-20h，经聚乙二醇6000浓缩至原容积的1/5-1/4即可，收集透析袋内物质即为洋槐花提取物。
优选的，所述干燥物过100-120目筛进行超微粉碎获得超微粉碎物。
在一个优选的实施例中，一种洋槐花提取物由包含以下步骤的方法制备得到：将洋槐花去杂除尘用腐竹薄膜包裸封口，再经速冻、预膨化、真空脱油处理，获得洋槐花脱水干燥物，干燥物过100目筛进行超微粉碎，获得的超微粉碎物与乙酸乙酯在25℃环境中充分混合72h，过滤除渣获得过滤液，重复过滤4次，装袋流水透析16-20h，经聚乙二醇6000浓缩至原容积的1/5-1/4即可，收集透析袋内物质即为洋槐花提取物。
优选的，所述速冻是将包裸洋槐花置于-20～-40℃速冻10～12h。
优选的，所述预膨化是将速冻后的包裸洋槐花置于真空度90～95KPa，温度70～80℃的条件下油炸膨化3～6min。
优选的，所述真空脱油是将油炸后的洋槐花置于转速150～250r/min的条件下脱油6～15min。
其中，洋槐花为市售普通干燥药用部位，含水量≤6％。
其中，上述去杂除尘是清除洋槐花中的杂质、泥尘和变质部分。
其中，上述流水透析，所用的透析袋孔径为0.25μm，所用的流水可以为普通自来水。
其中，所述过滤可以采用纱布过滤。
本发明的预混料利用独特的活性物质提取技术，将松籽仁、田螺消化腺、椰肉和洋槐花这四种物质按不同提取工艺，获得本发明预混料效果所需的各种活性物质，获得的各种提取物中富含多种适症于大黄鱼白鳃综合症修复因子，各种提取物组分的起效作用相互协同增效，对大黄鱼高温期白鳃综合症具有显著的预防效果，可明显降低大黄鱼高温期白鳃综合症的发生率和死亡率，同时对大黄鱼饲料适口性和全程饲料投喂期间的生长性能没有不良影响。
在第二方面，本发明提供一种制备上述预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料的方法，所述方法包括以下步骤：将组分混合，在35-45℃下烘干至混合物的水分含量为8-10％，并可选地粉碎至80-150目筛范围内，得到预混料。
在一个优选实施中，一种制备上述预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料的方法，包括以下步骤：将组分混合，在35-40℃下烘干至混合物的水分含量为8-9％，并粉碎至100-120目筛内，得到预混料。
在一个优选实施中，一种制备上述预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料的方法，包括以下步骤：将组分混合，在35℃下烘干至混合物的水分含量为8％，并粉碎至120目筛内，得到预混料。
在第三方面，本发明还提供一种上述预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料的应用，用于预防高温期白鳃综合症和/或用于治疗发生初期病变的高温期白鳃综合症。
其中，所述预混料用于预防大黄鱼高温期白鳃综合症时，按重量百分比0.3-0.5％添加于饲料中，优选连续使用15-20天为一周期。
其中，所述预混料用于治疗发生初期病变的大黄鱼高温期白鳃综合症时，按重量百分比0.3-0.8％添加于饲料中，优选连续使用10-22天为一周期。
进一步地，所述预混料的应用还包括降低大黄鱼高温期白鳃综合症的发生率和死亡率。
进一步地，所述预混料的应用还包括在不影响生长性能的基础上降低大黄鱼高温期白鳃综合症的发生率和死亡率。
在第四方面，本发明还提供一种上述预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料的应用，用于制备预防高温期白鳃综合症和/或用于治疗发生初期病变的高温期白鳃综合症的饲料。
其中，所述预混料用于制备预防大黄鱼高温期白鳃综合症的饲料时，所述饲料包括按重量百分比0.3-0.5％的预混料。
其中，所述预混料用于治疗发生初期病变的大黄鱼高温期白鳃综合症时，按重量百分比0.3-0.8％的预混料添加于饲料中。
进一步地，所述饲料还具有降低大黄鱼高温期白鳃综合症的发生率和死亡率的效果。
进一步地，所述饲料还具有在不影响生长性能的基础上降低大黄鱼高温期白鳃综合症的发生率和死亡率的效果。
以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
在本发明的实施例中，速冻是将包裸洋槐花置于-20～-40℃速冻10～12h。
在本发明的实施例中，预膨化是将速冻后的包裸洋槐花置于真空度90～95KPa，温度70～80℃的条件下油炸膨化3～6min。
在本发明的实施例中，真空脱油是将油炸后的洋槐花置于转速150～250r/min的条件下脱油6～15min。
在本发明的实施例中，培养液包括以下组分：按重量百分比计，蛋白胨10％-30％，胰胨白胨1％-3％，其中Mg2+、K+、Ca2+为独立添加的离子态，其来源优选MgCl2，、KCl、CaCl2，其余为水。
在本发明的实施例中，压榨松籽仁取油的具体要求可以参照中华人民共和国国家标准GB8615-88进行。
在本发明的实施例中，松籽仁选用松籽去壳后获得的松果仁，质量要求不霉变和不发生虫蛀。
在本发明的实施例中，松籽仁提取物可以保存于0-4℃环境中。
在本发明的实施例中，30％-45％乙酸溶液为市售分析纯级的乙酸经无菌蒸馏水稀释后的溶液。
在本发明的实施例中，烘干田螺消化腺的工具为温度调节且符合30-35℃烘烤要求的市售普通烤箱。
在本发明的实施例中，椰肉可以为鲜摘后保存1-20日内的椰果经去汁去皮后获得的椰果肉，霉变椰肉不得使用。
在本发明的实施例中，氨水可以为市售工业纯氨水溶液。
在本发明的实施例中，椰肉粒可以为普通切片机切割获得的不规则椰肉粒。
在本发明的实施例中，过筛可以为普通工业用超微粉碎机筛。
在本发明的实施例中，纱布为市售普通医用无纺纱布。
在本发明的实施例中，洋槐花为市售普通干燥药用部位，含水量≤6％，霉变禁用。
在本发明的实施例中，去杂除尘是清除洋槐花中的杂质、泥尘和变质部分。
在本发明的实施例中，包裸洋槐花所用的腐竹薄膜为食品级腐竹薄片，腐竹薄片单片面积为(0.4-0.5)*(0.4-0.5)cm2，切段长度1～2cm。
在本发明的实施例中，乙酸乙酯可以为市售分析纯级的乙酸乙酯。
在本发明的实施例中，聚乙二醇6000可以为市售分析纯级的聚乙二醇6000。
实施例1
一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料，由以下重量份的组分制备得到：松籽仁提取物55份，田螺消化腺提取物0.9份，椰肉提取物10份，洋槐花提取物50份，豆粕20份。
其中，松籽仁提取物由以下步骤的方法制备得到：取松籽仁，经过压榨收取松籽仁油，将榨油后的松籽仁粕与木质醋酸菌、水、培养液充分发酵6天，取发酵后松籽仁粕40-45℃烘干至含水量≤8％，再经100目筛粉碎获得发酵后松籽仁粕超微粉，将松籽仁油与发酵后松籽仁粕超微粉充分混合，30℃烘干，再经100目筛粉碎获得混合了松籽仁油和发酵后松籽仁粕超微粉的复合物，最后所得复合物即为松籽仁提取物。
其中，田螺消化腺提取物由以下步骤的方法制备得到：取田螺消化腺置于35℃环境中烘干至含水量≤1％，研磨成粉，与35％乙酸溶液按1：5的重量比混合，置于室温35℃环境中避光密闭混合18天，开封取乙酸与田螺消化腺研磨粉混合液，5000rpm离心10min，去沉淀取上清液，即得的上清液即为田螺消化腺提取物。
其中，椰肉提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取椰肉置于55℃环境中烘干至含水量≤1％，切成粒径1-2cn的椰肉粒，与10％氨水溶液按1：15-22的重量比混合，置于室温4℃环境中避光密闭混合12天，开封捞取椰肉粒，在无菌蒸馏水中沉泡30min，重复5次，经吸湿处理的椰肉粒经30目筛制备微粉，再与120份无菌蒸馏水充分混合，36层无纺纱布过滤查渣获得过滤物，将过滤物与35份豆粕混合，烘干至含水量≤8％，过120目筛制备超微粉，所获得的超微粉即为椰肉提取物。
其中，洋槐花提取物由以下步骤的方法制备得到：将洋槐花去杂除尘，取洋槐花100份，用腐竹薄膜包裸封口，再经速冻、预膨化、真空脱油处理，获得洋槐花脱水干燥物，干燥物过100目筛进行超微粉碎，获得的超微粉碎物与乙酸乙酯在室温25℃环境中充分混合72h，36层纱布过滤除渣获得过滤液，重复过滤4次，装袋流水透析16-20h，经聚乙二醇6000浓缩至原容积的1/5-1/4即可，收集透析袋内剩余物质即为洋槐花提取物。
制备该预混料的方法为：将各组分进行充分混合，接着置于35℃持续烘干至混合物含水量≤8％时，将混合物过120目粉碎机进行粉碎，获得的粉碎物即为预混料。
实施例2
一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料，由以下重量份的组分制备得到：松籽仁提取物60份，田螺消化腺提取物1.2份，椰肉提取物8份，洋槐花提取物48份，豆粕18份。
其中，松籽仁提取物由以下步骤的方法制备得到：取松籽仁经过压榨收取松籽仁油，将榨油后的松籽仁粕与木质醋酸菌、水、培养液充分发酵6天，取发酵后松籽仁粕40-45℃烘干至含水量≤8％，再经100目筛粉碎获得发酵后松籽仁粕超微粉，将松籽仁油与发酵后松籽仁粕超微粉充分混合，30℃烘干，再经100目筛粉碎获得混合了松籽仁油和发酵后松籽仁粕超微粉的复合物，最后所得复合物即为松籽仁提取物。
其中，田螺消化腺提取物由以下步骤的方法制备得到：取田螺消化腺置于35℃环境中烘干至含水量≤1％，研磨成粉，与35％乙酸溶液按1：5的重量比混合，置于室温35℃环境中避光密闭混合18天，开封取乙酸与田螺消化腺研磨粉混合液，5000rpm离心10min，去沉淀取上清液，即得的上清液即为田螺消化腺提取物。
其中，椰肉提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取椰肉置于55℃环境中烘干至含水量≤1％，切成粒径1-2cn的椰肉粒，与10％氨水溶液按1：15-22的重量比混合，置于室温4℃环境中避光密闭混合12天，开封捞取椰肉粒，在无菌蒸馏水中沉泡30min，重复5次，经吸湿处理的椰肉粒经30目筛制备微粉，再与120份无菌蒸馏水充分混合，36层无纺纱布过滤查渣获得过滤物，将过滤物与35份豆粕混合，烘干至含水量≤8％，过120目筛制备超微粉，所获得的超微粉即为椰肉提取物。
其中，洋槐花提取物由以下步骤的方法制备得到：将洋槐花去杂除尘，取洋槐花，用腐竹薄膜包裸封口，再经速冻、预膨化、真空脱油处理，获得洋槐花脱水干燥物，干燥物过100目筛进行超微粉碎，获得的超微粉碎物与乙酸乙酯在室温25℃环境中充分混合72h，36层纱布过滤除渣获得过滤液，重复过滤4次，装袋流水透析16-20h，经聚乙二醇6000浓缩至原容积的1/5-1/4即可，收集透析袋内剩余物质即为洋槐花提取物。
制备该预混料的方法为：将各组分进行充分混合，接着置于35℃持续烘干至混合物含水量≤8％时，将混合物过120目粉碎机进行粉碎，获得的粉碎物即为预混料。
试验例1本发明预混料对大黄鱼高温期白鳃综合症的预防性修复效果评估
市售的大黄鱼膨化颗粒饲料产品，作为本实验例的基础饲料，基础饲料产品营养成分主要：蛋白53％、脂肪14％、粗纤维12％、粗灰分14％、赖氨酸3.6％。
(1)预混料添加剂量组设定
以市售大黄鱼饲料产品为基础载体，分别向基础载体添加不同剂量的实施例1制备的预混料的组作为试验组，同时分别设定预混料中松籽仁提取物、田螺消化腺提取物、椰肉提取物、洋槐花提取物单独缺失时的预混料按不同剂量添加作为平行对照组，其中以不添加本发明实施例1制备的预混料为空白对照组。试验组设置详细信息见表1：
表1：不同试验组设置信息表
注：组别中所对应的缺成分预混料配方以实施例1制备的预混料配方为基础配方，所缺成分的配比量以等重量豆粕进行替换。
(2)试验分组与管理
选择104g±10g的健康大黄鱼，从200000尾大黄鱼中随机挑选96000尾，随机分为16组，其中每组下设3个平行，各组分别投喂上述16种饲料。试验周期120天。试验期间，各组大黄鱼均按0.8％-1.2％的日均投饵率进行投喂，一日二餐定时定点投喂。
(3)大黄鱼高温期白鳃综合症的预防效果评估
试验周期内，各组连续投喂对应的试验料。试验期间，每天巡查网箱，捞取发病死亡的大黄鱼，单独记录各个试验网箱出现高温期白鳃综合症的大黄鱼数量。
试验第121天时，统计各个试验网箱出现高温期白鳃综合症的数量，其中以鱼体鳃丝发白、绿胆、白肝和肠腔胆汁绿染这四个指标中，若其中三项为阳性，且濒死鱼体内肝脏分离不到致病菌为前提，则可判定为大黄鱼白鳃综合症。根据试验结束时各网箱高温期白鳃综合症数量的多少统计高温期白鳃综合症发生率和修复率，其计算公式如下。
白鳃综合症发生率(％)＝认定符合白鳃综合症的大黄鱼数量/同组试验大黄鱼总数量╳100
试验第121天时，各网箱大黄鱼经数据汇总统计确认，以对照组高温期白鳃综合症发生率为基准，统计各网箱高温期白鳃综合症发生率和修复率如表2。
表2：
从表2可以看出，试验周期内，没有添加本发明实施例1制备的预混料的空白对照组高温期白鳃综合症发生率高达38％，而按不同剂量添加了本发明实施例1制备的预混料的试验组高温期白鳃综合症发生率分别为8％、9％、8％，与空白对照组相比，高温期白鳃综合症修复率分别提升79％、76％、79％。而出现单一组分缺失的本发明实施例1制备的预混料对应的试验组，大黄鱼高温期白鳃综合症的发生率和修复也明显高于空白对照组，但也明显低于没有组分缺失的本发明实施例1制备的预混料对应的试验组。因此，松籽仁提取物、田螺消化腺提取物、椰肉提取物和洋槐花提取物任一组分单独缺失均可降低本发明预混料对高温期白鳃综合症的预防效果。
从上述结果可知，，松籽仁提取物、田螺消化腺提取物、椰肉提取物和洋槐花提取物任一组分对本发明中其他组分在预防高温期白鳃综合症时具有协同增效作用，也是预防高温期白鳃综合症的关键功能组分。
试验例2本发明预混料对高温期白鳃综合症的治疗性修复效果评估
市售的大黄鱼膨化颗粒饲料产品，作为本实验例的基础饲料，基础饲料产品营养成分主要：蛋白53％、脂肪14％、粗纤维12％、粗灰分14％、赖氨酸3.6％。
(1)预混料添加剂量组设定
以市售大黄鱼饲料产品为基础载体，分别向基础载体添加不同剂量的实施例2制备的预混料的组作为试验组，同时分别设定预混料中松籽仁提取物、田螺消化腺提取物、椰肉提取物、洋槐花提取物单独缺失时的预混料按不同剂量添加作为平行对照组，其中以不添加本发明实施例2制备的预混料为空白对照组。试验组设置详细信息见表3：
表3：不同试验组设置信息表
注：组别中所对应的缺成分预混料配方以实施例2制备的预混料配方为基础配方，所缺成分的配比量以等重量豆粕进行替换。
(2)试验分组与管理
选择104g±10g的健康大黄鱼，从200000尾大黄鱼中随机挑选96000尾，随机分为16组，其中每组下设3个平行，各组全部投喂市售大黄鱼空白饲料。当试验网箱开始出现高温期白鳃综合症案例的次日起，既定义为正式试验的首日，并从首日起开始投喂对应的添加了不同预混料的市售饲料，投喂的饲料种类见表4，并以连续投喂30天为一个使用周期，累计投喂各种饲料的时间为30天。试验期间，各组大黄鱼均按0.8％-1.5％的日均投饵率进行投喂，一日二餐定时定点投喂。
(3)高温期白鳃综合症的治疗性修复效果评估
不同试验组，连续投喂市售大黄鱼空白饲料，各组出现高温期白鳃综合症的时间略有不同，但都比较接近，如表4：
表4：投喂市售空白大黄鱼饲料期间出现
在发现高温期白鳃综合症案例的次日，该网箱随即投喂含有添加本发明制备的不同剂量预混料的大黄鱼饲料，并连续投喂15天。并在正式试验的第16日，根据试验结束时各网箱高温期白鳃综合症数量的多少统计高温期白鳃综合症发生率和修复率，其计算公式如下。
白鳃综合症发生率(％)＝认定符合白鳃综合症的大黄鱼数量/同组试验大黄鱼总数量╳100
表5：不同试验组设置信息表
从表5可以看出，正式试验期间，没有添加本发明实施例1制备的预混料的空白对照组高温期白鳃综合症发生率高达19％，而按不同剂量添加了本发明实施例1制备的预混料的试验组高温期白鳃综合症发生率分别为2％、1％、2％，与空白对照组相比，高温期白鳃综合症修复率分别提升90％、94％、94％。而出现单一组分缺失的本发明实施例1制备的预混料对应的试验组，对已经发生大黄鱼高温期白鳃综合症的发生率和修复也明显高于空白对照组，但也明显低于没有组分缺失的本发明实施例1制备的预混料对应的试验组。因此，松籽仁提取物、田螺消化腺提取物、椰肉提取物和洋槐花提取物任一组分单独缺失均可降低本发明预混料对高温期白鳃综合症的预防效果。
从上述结果可见，松籽仁提取物、田螺消化腺提取物、椰肉提取物和洋槐花提取物任一组分对本发明中其他组分在预防高温期白鳃综合症时具有协同增效作用，也是预防高温期白鳃综合症的关键功能组分。
以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料，其特征在于，包括以下重量份的组分：松籽仁提取物45-65份，田螺消化腺提取物0.3-1.5份，椰肉提取物3-15份，洋槐花提取物35-55份。
2.根据权利要求1所述的一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料，其特征在于，所述预混料还包括填充物，优选包括豆粕10-25份。
3.根据权利要求2所述的一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料，其特征在于，所述预混料主要由以下重量份组分制备而成：松籽仁提取物50-60份，田螺消化腺提取物0.6-1.2份，椰肉提取物7-12份，洋槐花提取物45-51份，豆粕15-22份。
4.根据权利要求3所述的一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料，其特征在于，所述预混料主要由以下重量份的组分制成：松籽仁提取物55份，田螺消化腺提取物0.9份，椰肉提取物10份，洋槐花提取物50份，豆粕20份；和/或，所述预混料主要由以下重量份的组分制成：松籽仁提取物60份，田螺消化腺提取物1.2份，椰肉提取物8份，洋槐花提取物48份，豆粕18份。
5.根据权利要求1至4中任一所述的一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料，其特征在于，所述松籽仁提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取松籽仁，压榨收取松籽仁油，将榨油后的松籽仁粕与木质醋酸菌、培养液混合发酵4-6天，取发酵后松籽仁粕30-65℃烘干至含水量≤8％，再经粉碎获得发酵后的松籽仁粕超微粉，将松籽仁油与发酵后松籽仁粕超微粉混合，25-30℃烘干，再经粉碎获得松籽仁提取物。
6.根据权利要求1至4中任一所述的一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料，其特征在于，所述田螺消化腺提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取田螺消化腺置于30-45℃环境中烘干至含水量≤1％，研磨成粉，与30％-45％乙酸溶液按1：3-8的重量比混合，置于30-35℃避光密闭混合12-25天，开封取混合液，离心取上清液，该上清液即为田螺消化腺提取物。
7.根据权利要求1至4中任一所述的一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料，其特征在于，所述椰肉提取物由包含以下步骤的方法制备得到：取椰肉置于45-55℃环境中烘干至含水量≤1％，切成椰肉粒，与5％-15％氨水溶液按1：12-26的重量比混合，置于4-10℃环境中避光密闭混合7-14天，开封捞取椰肉粒，在水中沉泡30-60min，重复2-5次，经吸湿处理的椰肉粒经粉碎制备微粉，再与100-250份水混合，过滤获得过滤物，将过滤物与30-50份豆粕混合，烘干至含水量≤8％，粉碎制备超微粉，所获得的超微粉即为椰肉提取物。
8.根据权利要求1至4中任一所述的一种预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料，其特征在于，所述洋槐花提取物由包含以下步骤的方法制备得到：将洋槐花去杂除尘，用腐竹薄膜包裸封口，再经速冻、预膨化、真空脱油处理，获得洋槐花脱水干燥物，干燥物进行超微粉碎，获得的超微粉碎物与乙酸乙酯在20-35℃环境中混合48-72h，过滤除渣获得过滤液，重复过滤3-5次，装袋流水透析16-20h，经聚乙二醇6000浓缩至原容积的1/5-1/4即可，收集透析袋内物质即为洋槐花提取物。
9.一种制备权利要求1至8中任一所述的预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：将组分混合，在35-45℃下烘干至混合物的水分含量为8-10％，并可选地粉碎至80-150目筛范围内，得到预混料。
10.一种权利要求1至8中任一所述的预防大黄鱼高温期白鳃综合症的预混料的应用，其特征在于，用于制备预防高温期白鳃综合症和/或用于治疗发生初期病变的高温期白鳃综合症的饲料。
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