CN110274975A - 一种测定食用菌中麦角甾醇和维生素d2含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食品领域,具体涉及一种食用菌中麦角甾醇和维生素D2的提取及含量测定方法,该法可高效、准确、简便的同时提取测定食用菌中麦角甾醇和维生素D2,有优异的重现性、精密度、准确性、稳定性和操作简便性。
Description
技术领域
本发明涉及一种测定食用菌中麦角甾醇和维生素D2含量的方法,属于食品营养技术和含量测定方法建立领域。
背景技术
食用菌具有丰富的营养价值备受青睐,尤其食用菌中富含麦角甾醇,可通过紫外照射转化为维生素 D2(VD2),进而可作为补充为维生素D2的重要食物来源。食用菌中麦角甾醇和VD2的准确高效测定是食用菌普通食品和保健食品研究及产品开发的必要前提。
目前食用菌中麦角甾醇和(或)VD2提取方法主要有回流提取法、闪式提取法、超临界CO2萃取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法等,但均具有一定的局限性。回流提取法是最传统的提取方法,提取效果较好,所需成本低,但需要多种的有机溶剂,操作费时、步骤繁琐,生产成本高,安全系数小。闪式提取法操作简单、节省时间、适用于多种溶剂,有利于环保,但闪式提取法对闪式提取器有一定的要求,对单次提取量有一定限制,不适用于质地柔软、粘性大的材料,且仪器容易损坏。超临界CO2萃取法绿色环保,有毒有机溶剂使用少,萃取时间较少,但成本较高,不能进行大规模的应用。超声波辅助提取法是目前最常用的食用菌中麦角甾醇和VD2提取方法,减少了大量有机溶剂的使用,安全性好,但大多采用超声处理1小时,操作比较费时,不便于大批量的样品处理;且在提取时往往需要加热升温,增加了提取的成本。
麦角甾醇和维生素D2是评价食用菌类品质和营养价值的重要指标之一,然而现有技术中对麦角甾醇和维生素D2含量的测定方法程序繁琐。因此,如何进一步探索和开发能高效、准确、简便的同时提取并测定食用菌中麦角甾醇和VD2的方法,具有重要现实意义。
发明内容
为解决现有提取测定食用菌中麦角甾醇和VD2含量的方法操作费时、步骤繁琐、成本高、安全系数小、不便于大批量样品处理的技术不足,本发明的目的在于提供一种能够高效、准确、简便的同时提取并测定食用菌中麦角甾醇和VD2含量的方法。
进一步的,本发明的方法不仅可同时测定食用菌中麦角甾醇和VD2含量;而且还适用于麦角甾醇和 VD2含量的单独测定。
为了实现上述目标,本发明采用如下的技术方案:
一种同时提取测定食用菌中麦角甾醇和维生素D2的方法,包含以下步骤:
(1)提取步骤:取食用菌粉末,采用无水乙醇、超声波微波协同提取;
(2)检测步骤:提取液0.45μm微孔滤膜滤过后采用HPLC进行测定。
本发明所述的方法,还包含食用菌粉末紫外照射的前处理步骤。前处理步骤为:取定量干燥食用菌粉末,加入无水乙醇,在磁力搅拌作用下,采用紫外照射后,减压蒸除溶剂,干燥至恒重,低温保存备用。
本发明所述的方法,提取条件为,提取时间5-40min,料液比1:15-1:40(g/ml),提取温度为室温,超声波功率为100-400W,微波功率为100-800W;
本发明所述的方法,提取条件优选,所述的料液比1:15-1:30(g/ml),所述的提取时间为10-30min、超声波功率为100-400W、所述的微波功率为100-400W。
本发明所述的方法,提取条件进一步优选,所述的料液比1:15-1:25(g/ml),所述的提取时间15-25min,超声波功率为350-400W,微波功率为150-250W。
本发明所述的方法,提取条件进一步优选,所述的料液比1:20(g/ml),所述的提取时间20min,超声波功率为400W,微波功率为200W。
本发明所述的方法,紫外照射时间为0.5-1h。
本发明所述的方法,提取液0.45μm微孔滤膜滤过后采用HPLC进行测定。
本发明所述的方法,HPLC检测条件:色谱柱为Agilent RP C18(4.6mm×100mm,3.5μm),柱温为 30℃,流速1.0mL/min,进样量10μL。流动相为乙腈和0.1%甲酸水溶液95:5(V/V)混合,检测波长 264nm。
本发明所述的方法中,食用菌可以为各类食用菌,例如:平菇、金针菇、香菇等。
本发明中,干燥食用菌粉的制备方法为:新鲜菌菇剪去根部,切成约2mm厚的薄片,置于烘箱内80 度烘干,粉碎,过40目筛,装袋密封低温冷藏备用。
菌菇粉的前处理步骤为:称取干燥菌菇粉210g于烧杯中,加入无水乙醇1300mL,所得混悬液在磁力搅拌作用下,采用UV-C紫外照射,照射距离50cm,照射1h后,减压蒸除溶剂,置于烘箱中干燥至恒重,装密封袋低温保存备用。
本发明的有益效果
(1)本发明提供的一种快速准确同时提取测定食用菌中麦角甾醇和维生素D2含量的方法,该法可高效、准确、简便的同时测定食用菌中麦角甾醇和VD2的含量,为其研究及产品开发及应用提供有益参考。
(2)与其他方法相比,本发明方法可以在室温条件下进行,同时减少了有机溶剂的使用,避免复杂的溶剂后处理步骤,操作简便,安全环保,且大大节约了提取成本。
(3)本方法可以同时高效的提取麦角甾醇和维生素D2。尤其,在超声波功率400W,微波功率200W,对料液比为1:20(g/ml)的样品溶液提取20min的此条件下,菌菇粉中麦角甾醇含量最高,远远高于其他提取方法。
(4)与其他方法相比,本发明的方法具有优异的重现性、精密度、准确性、稳定性。
附图说明
图1:不同提取时间对香菇粉中麦角甾醇和VD2提取效果的影响。
图2:不同超声波功率对香菇粉中麦角甾醇和VD2提取效果的影响。
图3:不同微波功率对香菇粉中麦角甾醇和VD2提取效果的影响。
图4:麦角甾醇标准曲线图。
图5:VD2标准曲线图。
图6:麦角甾醇标准品溶液色谱图。
图7:VD2标准品溶液色谱图。
图8:样品溶液色谱图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。
1、紫外转化后的香菇粉制备
新鲜香菇(购自汉中市过街楼蔬菜批发市场)剪去根部约2cm,切成约2mm厚的薄片,置于烘箱内 80度烘干,粉碎,过40目筛,装袋密封低温冷藏备用。称取干燥香菇粉210g于烧杯中,加入无水乙醇1300mL,所得混悬液在磁力搅拌作用下,采用UV-C紫外照射,照射距离50cm,照射1h后,减压蒸除溶剂,置于烘箱中干燥至恒重,装密封袋低温保存备用。
2、单因素实验
2.1提取时间对香菇粉中麦角甾醇和VD2提取效率的影响
称取紫外转化后的香菇粉2.000g,按1g:20ml料液比加入40mL无水乙醇,在超声波微波协同反应工作站中,室温条件下,固定超声波功率为400W,微波功率为400W,考察不同提取时间(5min、10min、 20min、40min)对麦角甾醇和VD2提取率的影响。定容体积为40mL。提取液0.45μm微孔滤膜滤过,直接进色谱系统分析。参照峰面积、线性回归方程、提取液总体积和称样量计算样品中VD2和麦角甾醇含量。每处理3个重复。
由图1可知,不同提取时间对香菇中麦角甾醇和VD2的提取效率影响较大,其中20min的麦角甾醇和VD2含量均最高。而20min和40min时麦角甾醇提取含量间无显著差异(p>0.05),但两者均与5min、 10min间的提取含量差异显著(p<0.05);20min时VD2提取含量和5min、10min和40min时的提取含量差异显著(p<0.05)。
2.2超声波功率对香菇粉中麦角甾醇和VD2提取效果的影响
称取紫外转化后的香菇粉2.000g,按1g:20ml料液比加入40mL无水乙醇,在超声波微波协同反应工作站中,室温条件下,固定提取时间为20min,微波功率为400W,考察不同超声波功率(100W、200 W、400W、800W)对麦角甾醇和VD2提取率的影响。定容体积为40mL。提取液0.45μm微孔滤膜滤过,直接进色谱系统分析。参照峰面积、线性回归方程、提取液总体积和称样量计算样品中VD2和麦角甾醇含量。每处理3个重复。
由图2可知,不同超声波功率对香菇中麦角甾醇和VD2的提取效率有一定影响,其中超声波功率为 100W、200W、400W时麦角甾醇提取含量无显著差异(p>0.05),VD2提取率在超声波功率为100W、200 W和400W时差异不显著(p>0.05),超声波功率为100W、400W和800W时VD2提取率差异也不显著(p >0.05)。当超声波功率为800W时,其VD2和麦角甾醇的提取效果较好,但在实际操作中,液体飞溅现象严重。
2.3微波功率对香菇粉中麦角甾醇和VD2提取效果的影响
称取紫外转化后的香菇粉2.000g,按1g:20ml料液比加入40mL无水乙醇,在超声波微波协同反应工作站中,室温条件下,固定提取时间为20min,超声波功率为100W,考察不同微波功率(50W、100W、 200W、400W、800W)对麦角甾醇和VD2提取率的影响。定容体积为40mL。提取液0.45μm微孔滤膜滤过,直接进色谱系统分析。参照峰面积、线性回归方程、提取液总体积和称样量计算样品中VD2和麦角甾醇含量。每处理3个重复。
由图3可知,不同微波功率对香菇中麦角甾醇和VD2的提取效率有一定影响,在100W、200W、400 W和800W提取条件下,其VD2和麦角甾醇的提取效果相比均无显著差异(p>0.05),但均显著高于50W 条件下的提取效果(p<0.05)。
3、正交优化实验
在单因素实验结果的基础上,为获得最佳提取时间、超声波功率和微波功率,设计正交实验。以无水乙醇为提取溶剂,料液比为1:20(g/ml)对麦角甾醇和VD2进行提取,提取温度为室温,选取提取时间、超声波功率和微波功率作为影响香菇粉麦角甾醇和VD2提取效率的三个因素,分别选取三个水平进行正交实验,对提取条件进行优化,正交实验设计见表1,正交实验结果见表2和表3。
表1正交实验因素与水平表
表2正交实验设计与结果分析a(n=3)
表3正交实验设计与结果分析b(n=3)
实验号 | A | 空列 | B | C | 条件 | VD<sub>2</sub>含量(μg/g) |
1 | 1 | 1 | 1 | 1 | A<sub>1</sub>B<sub>1</sub>C<sub>1</sub> | 108.27 |
2 | 1 | 2 | 2 | 2 | A<sub>1</sub>B<sub>2</sub>C<sub>2</sub> | 113.07 |
3 | 1 | 3 | 3 | 3 | A<sub>1</sub>B<sub>3</sub>C<sub>3</sub> | 116.22 |
4 | 2 | 1 | 2 | 3 | A<sub>2</sub>B<sub>2</sub>C<sub>3</sub> | 119.33 |
5 | 2 | 2 | 3 | 1 | A<sub>2</sub>B<sub>3</sub>C<sub>1</sub> | 118.72 |
6 | 2 | 3 | 1 | 2 | A<sub>2</sub>B<sub>1</sub>C<sub>2</sub> | 121.47 |
7 | 3 | 1 | 3 | 2 | A<sub>3</sub>B<sub>3</sub>C<sub>2</sub> | 123.52 |
8 | 3 | 2 | 1 | 3 | A<sub>3</sub>B<sub>1</sub>C<sub>3</sub> | 119.22 |
9 | 3 | 3 | 2 | 1 | A<sub>3</sub>B<sub>2</sub>C<sub>1</sub> | 119.23 |
K<sub>1</sub> | 337.56 | 351.12 | 348.96 | 346.22 | ||
K<sub>2</sub> | 359.52 | 351.00 | 351.62 | 358.05 | ||
K<sub>3</sub> | 361.52 | 356.92 | 358.46 | 354.77 | ||
k<sub>1</sub> | 112.52 | 117.04 | 116.32 | 115.41 | ||
k<sub>2</sub> | 119.84 | 117.00 | 117.21 | 119.35 | ||
k<sub>3</sub> | 120.65 | 118.97 | 119.49 | 118.26 | ||
R | 8.13 | 1.97 | 3.17 | 3.94 |
由表2和表3中R值知,影响香菇粉中麦角甾醇和VD2提取效果的先后顺序为:提取时间(A)>微波功率(C)>超声波功率(B)>空列。对结果进行分析可知,提取时间对麦角甾醇和VD2提取效果的影响极为显著,超声波功率和微波功率对香菇粉中麦角甾醇和VD2提取效果的影响不显著。正交实验优化得出的条件为A3B3C2,即室温条件下,超声波功率400W,微波功率200W,对料液比为1:20(g/ml)的样品溶液提取20min。此条件下,香菇粉中麦角甾醇含量高达3.59±0.69mg/g(n=3),VD2含量高达123.52±0.69 μg/g(n=3),即两种物质含量均为最高。
3、HPLC含量检测方法
3.1标准曲线的绘制
麦角甾醇标准溶液:精确称取麦角甾醇标准品0.100g,于50mL棕色容量瓶中,用无水乙醇溶解并定容至刻度线,配制成2mg/mL的麦角甾醇标品母液。稀释成1、5、10、20、40、60、80、100、200、400、 600、800、1000、1200、1400、1600、1800、2000μg/mL的梯度标准品溶液。0.45μm微孔滤膜过滤后分别进样10μL,于264nm处测定吸收峰面积,拟合浓度-峰面积曲线。
VD2标准溶液:精确称取VD2标准品0.100g,于50mL棕色容量瓶中,用无水乙醇溶解并定容至刻度线,配制成2mg/mL的VD2标品母液。逐步稀释成1、5、10、15、20、40、60、80、100、200、800μg/mL 的梯度标准品溶液。0.45μm微孔滤膜过滤后分别进样10μL,在264nm处测定吸收峰面积,拟合浓度-峰面积曲线。
3.2色谱条件
色谱柱为Agilent RP C18(4.6mm×100mm,3.5μm),柱温为30℃,流速1.0mL/min,进样量10μL。流动相为乙腈和0.1%甲酸水溶液95:5(V/V)混合,检测波长264nm。
4、含量测定方法学考察
4.1色谱图
麦角甾醇和VD2标准品溶液和样品溶液均进样10μL,利用液相色谱仪测定,记录色谱图。麦角甾醇和VD2的保留时间分别为7.6min和5.7min左右,麦角甾醇、VD2标准品色谱图和样品色谱图分别见图6、图7和图8,结果表明所用色谱条件下,麦角甾醇、VD2与相邻色谱峰均能达到较好的分离,且出峰时间合适,峰形较好,干扰少。
4.2线性及范围
系列麦角甾醇和VD2标准品溶液分别进样10μL,以264nm处的吸收峰面积对浓度拟合曲线。麦角甾醇和VD2的标准曲线如图4和图5,麦角甾醇的标准曲线方程为:y=7.59x+15.86,线性范围为1.00-2000.00 μg/mL,相关系数为0.9999。VD2的标准曲线方程为:y=17.37x-10.65,线性范围为1.00-800.00μg/mL,线性相关系数为0.9999。
4.3重复性实验
称取紫外转化后的香菇粉2.000g,采用正交实验优化的最佳提取条件(室温条件下,提取溶剂为无水乙醇,超声波功率400W,微波功率200W,料液比为1g:20ml,提取时间20min)制备样品溶液。提取液0.45μm微孔滤膜滤过,直接进色谱系统分析。参照峰面积、线性回归方程、提取液总体积和称样量计算样品中VD2和麦角甾醇含量。每处理3个重复。结果表明麦角甾醇和VD2含量的RSD(n=3)分别为1.11%和0.55%,表明该方法的重现性较好。
4.4精密度实验
选取4.3重复性试验中的所制备样品溶液一个,0.45μm微孔滤膜滤过后直接进色谱系统分析,连续测定5次。参照峰面积、线性回归方程、提取液总体积和称样量计算样品中VD2和麦角甾醇含量。结果表明麦角甾醇和VD2含量的RSD(n=5)分别为0.12%和0.17%,表明该方法精密度良好。
4.5稳定性实验
选取4.3重复性试验中的所制备样品溶液一个,0.45μm微孔滤膜滤过后,分别在0、2、4、8、12和24h进色谱系统分析,参照峰面积、线性回归方程、提取液总体积和称样量计算样品中VD2和麦角甾醇含量。每处理三个重复。结果表明麦角甾醇和VD2含量的RSD(n=18)分别为0.12%和0.22%,说明供试品溶液在24h内稳定。
4.6加样回收率实验
取已知麦角甾醇和VD2含量的香菇粉3份,分别加入5.744、7.180、8.616mg麦角甾醇标准品,按正交实验优化的最佳提取工艺条件(室温条件下,提取溶剂为无水乙醇,超声波功率400W,微波功率200W,料液比为1g:20ml,提取时间20min)制备样品溶液,依次测定,计算麦角甾醇回收率,每处理2个重复。
取已知麦角甾醇和VD2含量的香菇粉3份,分别加入197.632、247.04、296.448μgVD2标准品,按正交实验优化的最佳提取工艺条件(室温条件下,提取溶剂为无水乙醇,超声波功率400W,微波功率200W,料液比为1g:20ml,提取时间20min)制备样品溶液,计算VD2回收率。每处理2个重复。
结果表明麦角甾醇的平均加样回收率(n=6)为114.57%,RSD(n=6)为3.83%。VD2的平均加样回收率(n=6) 为102.26%,RSD(n=6)为1.95%,说明该方法的准确性良好。
5不同提取方法提取效果比较
5.1皂化回流提取
精确称取1.000g紫外转化后的香菇粉,溶解于32mL KOH-EtOH溶液中,磁力搅拌器中85℃下回流提取3h,所得混悬液3500rpm/min离心10min,收集上清液于分液漏斗中,加入10mL正庚烷进行萃取,静置后收集上层有机相,下层再用等体积萃取剂萃取两次,合并三次萃取液,于旋转蒸发仪蒸干有机溶剂,然后用无水乙醇溶解并定容至10mL。提取液0.45μm微孔滤膜滤过,直接进色谱系统分析。参照峰面积、线性回归方程、提取液总体积和称样量计算样品中VD2和麦角甾醇含量。每处理3个重复。
5.2无水乙醇超声波辅助提取
精确称取1.000g紫外转化后的香菇粉,溶解于20mL无水乙醇中,50℃超声提取20min,3500rpm/min 离心10min,收集上清液,残渣再加20mL无水乙醇,重复上述操作,合并提取液,无水乙醇定容至40mL。提取液0.45μm微孔滤膜滤过,直接进色谱系统分析。参照峰面积、线性回归方程、提取液总体积和称样量计算样品中VD2和麦角甾醇含量。每处理3个重复。
5.3KOH-EtOH超声波辅助提取
精确称取0.200g紫外转化后的香菇粉,用10mL KOH-EtOH溶液进行溶解,60℃超声提取40min, 3500rpm/min离心10min,收集上清液,残渣再加10mL KOH-EtOH溶液,60℃超声提取40min,重复上述操作,合并2次上清液,置于分液漏斗中,加入10mL正庚烷进行萃取,静置后收集上层有机相,下层再用等体积萃取剂萃取两次,合并三次萃取液,于旋转蒸发仪蒸干溶剂,然后用无水乙醇进行溶解,并定容至10mL。提取液0.45μm微孔滤膜滤过,直接进色谱系统分析。参照峰面积、线性回归方程、提取液总体积和称样量计算样品中VD2和麦角甾醇含量。每处理3个重复。
5.4微波辅助提取
精确称取0.050g紫外转化后的香菇粉,溶解于5mL KOH-EtOH溶液中,520W微波处理100s,所得混悬液3500rpm/min离心10min,收集上清液于分液漏斗中,10mL石油醚(60-90℃)萃取三次,合并萃取液,蒸除溶剂,无水乙醇溶解定容至10mL。提取液0.45μm微孔滤膜滤过,直接进色谱系统分析。参照峰面积、线性回归方程、提取液总体积和称样量计算样品中VD2和麦角甾醇含量。每处理3个重复。
超声波微波协同提取法与其他提取方法的结果比较如表4。从料液比方面来说,KOH-EtOH超声波辅助提取所需的提取溶剂最多,微波辅助提取法所需的提取溶剂最少,皂化回流提取法、无水乙醇超声波辅助提取法和超声波微波协同提取法所需提取溶剂均适中。
从提取温度方面来说,皂化回流提取法的温度要求最为严格,需在85-90℃条件下进行,其次为 KOH-EtOH超声波辅助提取和无水乙醇超声波辅助提取,KOH-EtOH超声波辅助提取温度为60℃,无水乙醇超声波辅助提取的温度为50℃,而微波辅助提取法和超声波微波协同提取法均在室温下即可进行。
从提取时间方面来说,皂化回流提取法所需的时间最长,长达3小时,微波辅助提取法所需时间最少, 100s就可以完成,KOH-EtOH超声波辅助提取时间为40min,且需要提取两次,总计提取时间80min;无水乙醇超声波辅助提取时间为20min,也需要提取两次,总计提取时间40min;优化后超声波微波协同提取法仅需要20min,只需提取一次。
从操作简便性方面来说,一方面,皂化回流提取法、微波辅助提取法和KOH-EtOH超声波辅助提取法中均用KOH-EtOH溶液进行提取,提取完成后需用有机溶剂萃取三次,再减压蒸除溶剂,随后进行溶解定容的操作;另一方面,无水乙醇超声波辅助提取法和KOH-EtOH超声波辅助提取法均需提取两次,需要进行两次离心操作。优化后超声波微波协同提取法仅需要提取一次后离心定容,且不涉及三次萃取、蒸除溶剂、溶解定容等繁琐步骤,具有良好的操作简便性。
从提取效果方面来说,优化后超声波微波协同提取法、KOH-EtOH超声波辅助提取法和无水乙醇超声波辅助提取法的提取效果较好,香菇粉中VD2的含量分别为123.52μg/g、122.81μg/g和119.01μg/g,而皂化回流提取法和微波辅助提取法的提取效果较差,皂化回流提取法香菇粉中VD2的含量为83.34μg/g,为超声波微波协同提取法的67.47%,微波辅助提取法香菇粉中VD2的含量为76.77μg/g,为超声波微波协同提取法的62.15%。
从重现性方面来说,优化后超声波微波协同提取法的VD2和麦角甾醇含量的重现性均较好,VD2和麦角甾醇含量的RSD(n=3)分别为0.55%和1.11%,而其他提取方法的VD2和麦角甾醇含量的RSD较差。KOH-EtOH超声波辅助提取法中VD2和麦角甾醇含量的RSD(n=3)分别为10.55%和4.08%,皂化回流提取法中VD2和麦角甾醇含量的RSD(n=3)分别为10.22%和1.00%,微波辅助提取法中VD2和麦角甾醇含量的RSD(n=3)分别为4.42%和7.65%,无水乙醇超声波辅助提取法中VD2和麦角甾醇含量的 RSD(n=3)分别为2.74%和4.54%。
综合考虑料液比、提取温度、提取时间、操作简便性、提取效果和重现性等几方面因素,认为超声波微波协同提取法为提取食用菌中麦角甾醇和VD2的最佳方法,不但可以实现麦角甾醇和VD2同时提取,而且提取效率高,提取时间较短,室温即可操作,只需一种提取溶剂且用量较少,操作简便,方法的重现性大大高于其他任何一种方法。
表4超声波微波协同提取法与其他提取方法比较
Claims (8)
1.一种测定食用菌中麦角甾醇和维生素D2含量的方法,其特征在于,包含以下步骤:
(1)提取步骤:取食用菌粉末,采用无水乙醇、超声波和微波协同提取;提取条件为,提取时间5-40min,料液比1:15-1:40(g/ml),提取温度为室温,超声波功率为100-400W,微波功率为100-800W;
(2)检测步骤:提取液采用HPLC进行测定。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中所述的料液比1:15-1:30(g/ml),所述的提取时间为10-30min、超声波功率为100-400W、所述的微波功率为100-400W。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:所述的料液比1:15-1:25(g/ml),所述的提取时间15-25min,超声波功率为350-400W,微波功率为150-250W。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:所述的料液比1:20(g/ml),所述的提取时间20min,超声波功率为400W,微波功率为200W。
5.根据权利要求1-4所述的方法,还包含食用菌粉末紫外照射的前处理步骤。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:紫外照射时间为0.5-1h。
7.根据权利要求1-4所述的方法,其特征在于:提取液经0.45μm微孔滤膜滤过后采用HPLC进行测定。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于:HPLC检测条件为:色谱柱为Agilent RPC18,柱温为30℃,流速1.0mL/min,进样量10μL;流动相为乙腈和0.1%甲酸水溶液95:5(V/V)混合,检测波长264nm。
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