CN102288695A - 婴幼儿奶粉中常见四种不饱和脂肪酸的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种婴幼儿奶粉中常见四种不饱和脂肪酸的检测方法，包括：称取婴幼儿奶粉样品，热水溶解、振摇；水冷至室温后加氨水，于65℃水浴，取出轻摇，冷却至室温后加入无水乙醇和无水乙醚，使醚层和水层分开；将醚层进行提取，加入无水乙醇、无水乙醚和石油醚，使醚层和水层分开；将醚层进行提取，加入无水乙醚和石油醚，使醚层和水层分开；合并上述三次提取的醚层液，经浓缩，以庚烷溶解残留物，加氢氧化钾甲醇溶液加热回流，加入三氟化硼甲醇溶液继续加热回流；停止加热冷却至室温，调节pH＜1.5，加入饱和NaCl溶液，使分层；移取上层有机相，无水硫酸钠脱水，上清液用0.45μm滤膜过滤，气相色谱仪测定，检测极限低，线性好。
Description
技术领域
本发明涉及婴幼儿奶粉中常见四种不饱和脂肪酸的检测方法，尤其涉及婴幼儿奶粉中亚麻酸、亚油酸、花生四烯酸和二十二碳六烯酸的检测方法。
背景技术
不饱和脂肪酸是人体重要的必需脂肪酸，亚麻酸(LA)、亚油酸(LNA)、花生四烯酸(AA)和二十二碳六烯酸(DHA)是常见的几种不饱和脂肪酸。进年来的科学研究表明，不饱和脂肪酸是大脑和脑神经的重要营养成分，对婴幼儿的发育起着至关重要的作用，能提升婴儿智力发育指数、提升视力敏锐度，摄人不足将影响记忆力和思维力。有些不饱和脂肪酸是人体不能自身合成，需要通过添加食物的方式摄取。因此，对婴幼儿奶粉中不饱和脂肪酸含量的测定尤为重要。现有的标准方法测定奶粉不饱和脂肪酸含量，其对样品前处理要求以及检测方法各不相同，有的较为复杂，不仅试剂消耗过多，而且待测成分易损失等使测定值偏低及影响了工作效率。
发明内容
本发明的目的是提供一种婴幼儿奶粉中常见四种不饱和脂肪酸的检测方法。
本发明的目的是这样实现的，所述的婴幼儿奶粉中常见四种不饱和脂肪酸的检测方法，所述常见四种不饱和脂肪酸指麻酸(LA)、亚油酸(LNA)、花生四烯酸(AA)和二十二碳六烯酸(DHA)，包括如下步骤：
1）称取婴幼儿奶粉样品，以65℃热水溶解、振摇；水冷至室温后再加入氨水(优选体积分数25%)，于65℃水浴，取出轻摇，冷却至室温后再加入无水乙醇和无水乙醚，塞上塞子振摇，离心或静止，使醚层和水层分开；2）将有机的醚层进行第二次提取，加入的试剂为无水乙醇、无水乙醚和石油醚，塞上塞子振摇，离心或静止，使醚层和水层分开；3）将有机的醚层进行第三次提取，加入的试剂为无水乙醚和石油醚，塞上塞子振摇，离心或静止，使醚层和水层分开；4）合并上述三次提取的有机的醚层液，经旋转蒸发仪浓缩，以庚烷溶解残留物，加氢氧化钾甲醇溶液(2mol/L)加热回流，往球形冷凝器顶部加入三氟化硼甲醇溶液(质量分数14%)继续加热回流；5）停止加热冷却至室温，取下球形冷凝器，用硫酸溶液调节PH＜1.5，加入饱和NaCl溶液，振摇静置分层；移取上层有机相，采用无水硫酸钠脱水后，上清液采用0.45μm滤膜过滤，采用气相色谱仪测定；6）在测定亚油酸、亚麻酸时用庚烷稀释100倍后测定，经试验获得LA，LNA，AA和DHA标准曲线的相关系数分别为0.9996，0.9996，0.9992，0.9991； LA，LNA，AA和DHA的检出限分别为0.057μg/mL, 0.06μg/mL,0.085μg/mL和0.25μg/mL。
上述步骤1）的本发明实例用的是体积分数为25%的浓氨水（密度为0.91g/cm3）。
上述步骤4）的氢氧化钾甲醇溶液的摩尔浓度是2mol/L，所加入三氟化硼甲醇溶液的质量分数为14%。
本发明的优点是：本发明采用气相色谱法同时测定婴幼儿奶粉中的亚麻酸(LA)、亚油酸(LNA)、花生四烯酸(AA)和二十二碳六烯酸(DHA)的含量，该方法检测极限低， LA，LNA，AA和DHA的检出限分别为0.057μg/mL, 0.06μg/mL,0.085μg/mL和0.25μg/mL。线性好，样品的重复性和回收率高，样品组份之间能得到较好的分离，为快速和准确测定婴幼儿奶粉中不饱和脂肪酸的含量提供借鉴。
附图说明
图1为LA标准曲线和相关系数图。
图2为LNA标准曲线和相关系数图。
图3为AA标准曲线和相关系数图。
图4为DHA标准曲线和相关系数图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细说明
1.材料与方法
1.1.材料和仪器
1.1.1.原料和试剂
婴幼儿奶粉，明一(福建)婴幼儿营养品有限公司；
各种脂肪酸标准品，购于sigma公司；
氢氧化钾、氯化钠、无水硫酸钠、无水乙醇、无水乙醚、石油醚均为分析纯(天津永大化学试剂有限公司)，体积分数为25%的氨水(优级纯，天津科密欧化学试剂有限公司)，三氟化硼甲醇溶液(质量分数为14%，CNW)，庚烷(色谱纯，CNW)，正己烷(色谱纯，TEDIA)，实验用水均为超纯水。
1.1.2.实验仪器
气相色谱仪( Focus，赛默飞世尔科技公司)，带FID检测器、自动进样器(AI 3000)；色谱柱(AB-InoWax 30mm×0.25mm×0.25um,美国Abel Industries公司)；旋转蒸发仪(RE-52AA，上海亚荣生化仪器厂)；水浴锅(HH-4，国华电器有限公司)；超纯水机（SAGA-40TJ，南京易普易达）。
2.实验方法
2.1 样品处理
准确称取1g样品（样品取自婴幼儿奶粉，明一(福建)婴幼儿营养品有限公司）至250ml三角烧瓶中，以10ml 65℃的热水溶解，振摇；水冷至室温后再加入2ml体积分数为25%的氨水，于65℃水浴15min，取出轻摇，冷却至室温后再加入10ml无水乙醇和25ml无水乙醚，塞上塞子振摇1min，离心或静止，使醚层和水层分开。随后，将有机层转入烧瓶中进行第二次提取，加入的试剂为5ml无水乙醇，15ml无水乙醚和15ml石油醚，操作同前。第三次提取不加乙醇，只用15ml无水乙醚和15ml石油醚，如上操作。
2.2 皂化和酯化
合并提取后的醚液置于磨口圆底烧瓶中，经旋转蒸发仪浓缩，以10ml庚烷溶解残留物，加2ml摩尔浓度是2mol/L的氢氧化钾甲醇溶液回流5～10min，往球形冷凝器顶部加入10ml质量分数为14%的三氟化硼甲醇溶液继续回流2min。停止加热，冷却至室温后取下球形器，用硫酸溶液调节PH＜1.5，加入15ml饱和NaCl溶液，振摇15s静置分层。移取上层有机相，采用无水硫酸钠脱水后，上清液采用0.45μm滤膜过滤，采用气相色谱仪测定。基于上述的婴幼儿奶粉中亚油酸、亚麻酸含量较高，因此测亚油酸、亚麻酸需要庚烷稀释100倍后测定。
2.3 测定条件
进样口温度：220℃，不分流进样，不分流时间1min，检测器温度：280℃。
进样体积：1μL。
灵敏度：≤3×10-12g/s(C16)。
柱前压：101.0KPa；氢气流速：1.5mL／min；空气流速：20mL／min。
分流比：50：1。
程序升温条件：140℃保持1min；以25℃/min升至230℃，保持8min；再以25℃/min升至245℃，保持6min，载气流速：1.5ml/min。
3. 结果与分析
3.1定性分析
从上述程序升温条件下测出标样中各组分的色谱图中，可见标样中各组分的分离度较好，表明分析方法的可靠性。其中LA、LNA、AA和DHA的四个组分保留时间依次为7.187min、7.738min、9.943min、16.363min。
从本发明样品中的亚油酸、亚麻酸庚烷稀释100倍后测定的LA、LNA色谱图可见，本发明样品中LA、LNA的出峰时间分别为：7.180min；7.733min ；与标准品出峰时间的重合性好、分离度好、干扰小。从本发明样品中的AA、DHA图谱可知，其出峰时间分别为：9.990min；16.405min；与标准品出峰时间的重合性好、分离度好、干扰小。
定量分析
3.2.1 方法的线性和检出限
采用外标法定量，以目标组分的峰面积Y对相应的质量浓度x(μg/mL)做标准曲线。标准曲线各点浓度如表1所示。
LA，LNA，AA和DHA标准曲线和相关系数如图1、图2、图3和图4所示，曲线的相关系数分别为R2 LA=0.9996，R2 LNA=0.9996，R2 AA=0.9992，R2 DHA=0.9991；检出限按信噪比为3计算，得到LA，LNA，AA和DHA的检出限分别为0.057μg/mL, 0.06μg/mL,0.085μg/mL和0.25μg/mL。
重复性
重复性检测选择低中高（1μg/mL，10μg/mL和100μg/ mL）三个浓度的样品，每个样品分别进样三次，以峰面积计算重复性，结果如表2所示。
表2为重复性实验
3.2.3 回收率
向空白样品中分别添加低浓度和高浓度的各种组分，检测回收率。添加的量和回收率如表3 所示。实验结果表明LNA，LA，AA和DHA的回收率在82.1%～105.7%之间。
表3为加标量、检测值和回收率关系表
4.结论
本发明采用气相色谱法同时测定婴幼儿奶粉中的亚麻酸(LA)、亚油酸(LNA)、花生四烯酸(AA)和二十二碳六烯酸(DHA)的含量，该方法检测极限低，线性好，样品的重复性和回收率高，样品组份之间能得到较好的分离，为快速和准确测定婴幼儿奶粉中不饱和脂肪酸的含量提供借鉴。
Claims (3)
1.一种婴幼儿奶粉中常见四种不饱和脂肪酸的检测方法，包括如下步骤：
1）称取婴幼儿奶粉样品，以65℃热水溶解、振摇；水冷至室温后再加入氨水，于65℃水浴，取出轻摇，冷却至室温后再加入无水乙醇和无水乙醚，塞上塞子振摇，离心或静止，使醚层和水层分开；2）将有机的醚层进行第二次提取，加入的试剂为无水乙醇、无水乙醚和石油醚，塞上塞子振摇，离心或静止，使醚层和水层分开；3）将有机的醚层进行第三次提取，加入的试剂为无水乙醚和石油醚，塞上塞子振摇，离心或静止，使醚层和水层分开；4）合并上述三次提取的有机的醚层液，经旋转蒸发仪浓缩，以庚烷溶解残留物，加氢氧化钾甲醇溶液加热回流，往球形冷凝器顶部加入三氟化硼甲醇溶液继续加热回流；5）停止加热冷却至室温，取下球形冷凝器，用硫酸溶液调节PH＜1.5，加入饱和NaCl溶液，振摇静置分层；移取上层有机相，采用无水硫酸钠脱水后，上清液采用0.45μm滤膜过滤，采用气相色谱仪测定；6）在测定亚油酸、亚麻酸时用庚烷稀释100倍后测定。
2.根据权利要求1所述的婴幼儿奶粉中常见四种不饱和脂肪酸的检测方法，其特征在于步骤1）的氨水是体积分数为25%、密度为0.91g/cm3的浓氨水。
3.根据权利要求1或所述的婴幼儿奶粉中常见四种不饱和脂肪酸的检测方法，其特征在于上述步骤4）的氢氧化钾甲醇溶液的摩尔浓度是2mol/L，所加入三氟化硼甲醇溶液的质量分数为14%。
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