CN110244044B - 一种稀土染色磁珠及其制备和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物纳米磁珠应用和医学检验技术领域，涉及一种稀土染色磁珠及其制备和应用，所述的稀土染色磁珠，包括三种各不相同的稀土荧光基团包埋于聚合物磁性微球内和/或连接于所述聚合物磁性微球表面，通过相容性的包埋、二次溶胀和表面的改性偶联三种不同的方法将稀土荧光基团连接到聚合物磁性微球上，能够准确并且灵活控制三种稀土荧光基团的质量比，提高作为检测基团检测时的精确度，而且粒径均一，染色均匀，引入稀土荧光基团作为荧光物质，在单束激光激发下即可以实现三色荧光编码，这对于设备的小型化智能化具有实际意义，进一步降低设备的制造以及应用成本，而且稀土荧光基团的发射峰极窄，提高了基于流式细胞术原理的解码的灵敏度。

Description

一种稀土染色磁珠及其制备和应用
技术领域
本发明属于生物纳米磁珠应用和医学检验技术领域，特别涉及一种稀土染色磁珠及其制备和应用。
背景技术
荧光编码微球，是通过吸附、包埋、共聚等方法在聚合物微球上连接荧光分子作为信号分子对微球进行编码，同时，所述聚合物微球表面还连接有生物分子探针，这样，通过分子识别和光学编码的结合，每个微球可以被看作一个化学实验单元，用它就可以测定混合物中特定的基因序列和化合物，特别适于和流式细胞仪或者悬浮阵列技术相结合，悬浮阵列技术是一种高通量检测技术，通过结合流式细胞仪对结合有靶分子的荧光编码微球进行高速测定，可同时检测上百种目标分子，其中荧光编码微球的制备与功能化，是实施该技术的关键。
目前，所述荧光编码微球中的荧光分子大多数为有机染料和量子点，但他们都存在荧光寿命短，易受背景荧光及杂散光的干扰等缺点，相对来说，稀土材料荧光寿命长，发生光谱窄，Stokes位移大，有利于消除背景荧光和杂散光的干扰，提高检测的灵敏度和分辨率，目前，稀土聚合物微球可通过包埋法和键合法来制备，中国专利文献CN106398683A公开了一种制备三色编码微球组合物的方法，通过制备子球和母球，将子球和母球组装成微球组合物，可以实现单色激光同时激发三种颜色荧光进行多色编码，提高了编码的数量和基于流式细胞术原理的解码的灵敏度和精准性，但是不能保证荧光微球的形状和粒径均一性，分散性不好，荧光染色不均匀，也不能对微球的荧光强度进行精确控制。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于现有的稀土聚合物微球粒径不均一，染色不均匀，荧光强度难以精确控制，灵敏度低，进而提供了一种稀土染色磁珠及其制备和应用，所述稀土染色磁珠，粒径均一，染色均匀，荧光强度能够精确控制，灵敏度高。
本发明公开了一种稀土染色磁珠，包括三种各不相同的稀土荧光基团包埋于聚合物磁性微球内和/或连接于所述聚合物磁性微球表面，所述聚合物磁性微球粒径为20-25μm。
优选的，所述稀土荧光基团包括含有铽、铕和镝的稀土离子配合物或稀土纳米粒子，所述稀土纳米粒子粒径为100-180nm。
优选的，所述稀土纳米粒子为油酸包裹的镱和铒掺杂的油溶性稀土纳米粒子或SiO2包裹的水溶性稀土纳米粒子，所述油溶性稀土纳米粒子包埋于所述聚合物磁性微球内，所述水溶性稀土纳米粒子连接于所述聚合物磁性微球表面。
优选的，所述聚合物磁性微球为包埋有磁性纳米粒子的聚合物微球，所述聚合物微球的聚合物单体包括聚苯乙烯和丙烯酰胺。
优选的，所述磁性纳米粒子材料选自γ-Fe2O3纳米粒子，CoFe2O3纳米粒子，Fe3O4纳米粒子和NiCoFe纳米粒子中至少一种，所述磁性纳米粒子粒径为5-50nm。
优选的，所述油溶性稀土纳米粒子中的稀土元素、配合物中的稀土元素、水溶性稀土纳米粒子中的稀土元素的摩尔比为(0.8-1.6):1:(0.8-1.6)。
本发明还公开了一种制备所述荧光微球的方法，包括以下步骤：
以稀土元素的三氟乙酸盐为原料，制备油酸包裹的油溶性稀土纳米粒子；
以稀土元素的硝酸盐为原料，微乳法制备水溶性稀土纳米粒子；
采用油酸包裹的油溶性稀土纳米粒子、磁性纳米粒子和聚合物单体为原料，通过微乳法制备第一种稀土荧光基团染色的聚合物磁性微球；
采用溶胀法包埋第二种稀土荧光基团于所述聚合物磁性微球内；
对所述聚合物磁性微球改性后连接第三种稀土荧光基团即得所述稀土染色磁珠。
优选的，以稀土元素的三氟乙酸盐和三氟乙酸钠为原料，掺杂镱和铒，以油酸和十八碳烯为反应溶剂，100-140℃升温溶解，330-350℃反应20-45min即得粒径为100-150nm的油酸包裹的油溶性纳米粒子。
优选的，以稀土元素的硝酸盐为原料，与吡啶二羧酸形成稀土配合物，经微乳法制成稀土纳米粒子，再经氨丙基三乙氧基硅改性制成粒径为120-180nm的水溶性稀土纳米粒子。
本发明还公开了一种荧光编码微球，包括所述的稀土染色磁珠或所述稀土染色磁珠制备方法制备的稀土染色磁珠。
优选的，还包括连接于所述稀土染色磁珠上的生物识别分子Ⅰ。
本发明还公开了一种检测试剂盒，包括所述的荧光编码磁珠，还包括荧光报告基团标记的生物识别分子Ⅱ，所述生物识别分子Ⅰ和生物识别分子Ⅱ均特异性识别检测目标分子。
本发明还公开了一种所述的稀土染色磁珠，或所述稀土染色磁珠制备方法制备的稀土染色磁珠，或所述的荧光编码磁珠，或所述的检测试剂盒在荧光分析领域的应用。
本发明还公开了一种所述的稀土染色磁珠，或所述稀土染色磁珠制备方法制备的稀土染色磁珠，或所述的荧光编码磁珠，或所述的检测试剂盒在流式细胞分析领域、液相芯片检测领域的应用。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明所述的稀土染色磁珠，包括三种各不相同的稀土荧光基团包埋于聚合物磁性微球内和/或连接于所述聚合物磁性微球表面，通过不同的连接或包埋方式，能够准确并且灵活控制三种稀土荧光基团的质量比，提高基团检测时的精确度，而且粒径均一，染色均匀，引入稀土荧光基团作为荧光物质，在单束激光激发下即可以实现三色荧光编码，这对于设备的小型化智能化具有实际意义，进一步降低设备的制造以及应用成本，而且稀土荧光基团的发射峰极窄，提高了基于流式细胞术原理的解码的灵敏度。
2.本发明所述的稀土染色磁珠，包埋于聚合物磁性微球内的稀土纳米粒子由油酸包裹，具有油溶性，与聚合物磁性微球的相容性好，性质稳定，不易溢出，提高稀土染色微球的存储稳定性和检测时的精确性。
3.本发明所述的稀土染色磁珠的制备方法，通过相容性的包埋、二次溶胀和表面的改性偶联三种不同的方法将稀土荧光基团连接到聚合物磁性微球上，能实现准确灵活控制三种稀土荧光基团的含量，实现编码微球荧光信号的特异性，有利于稀土染色磁珠实现编码多样性从而在应用于流式细胞仪和悬浮阵列液相芯片检测技术时实现多组分高通量的快速检测。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。
油酸，sigma aldrich，质量分数≥93％；
十八碳烯，sigma aldrich，质量分数≥95％；
正硅酸乙酯，sigma aldrich，质量分数≥99％；
氨丙基三乙氧基硅，sigma aldrich，质量分数≥99％；
二羧酸，sigma aldrich，质量分数≥99％；
所述乙醇、环己烷、正己烷、丙酮均为分析纯。
所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
本实施例提供了一种稀土染色磁珠及其应用的具体实施方式，如下所述：
取0.8mmol三氟乙酸铽、0.15mmol三氟乙酸镱、0.05mmo1三氟乙酸铒、1mmo1三氟乙酸钠于三口圆底烧瓶中，再加入4mL油酸和3mL十八碳烯；在氩气保护下将温度升至100℃搅拌反应35min，接着将温度继续升至330℃反应20min；停止加热，继续搅拌使反应装置自然冷却至室温；将反应产物转移至离心管中，加入乙醇使产物析出，离心得到产物；用环己烷和乙醇洗涤三次，离心得到的固体产物在65℃下干燥过夜，即得到油酸修饰的NaTbF4:Yb，Er油溶性稀土纳米粒子，粒径为100-120nm，荧光强度最强的发射峰波长为560nm。
将1.6mmol硝酸铕与3mmol吡啶二羧酸溶液混合反应形成稀土配合物，将4ml油相试剂环己烷、1ml表面活性剂壬基酚聚氧乙烯醚及1ml助表面活性剂正己醇混合搅拌均匀后，加入上述稀土配合物的混合水溶液，1000rpm搅拌30min，加入500ul正硅酸乙酯和500ul氨水(质量分数20％)继续搅拌；搅拌中加入500ul氨丙基三乙氧基硅继续反应20min，然后加入丙酮离心沉降，经乙醇、水洗涤以除去反应溶液，离心分离得到氨基改性的水溶性铕纳米粒子，粒径为120-150nm。
在氮气保护下，将200mg粒径为5-10nm的Fe3O4粒子、上述步骤制备的所述油酸修饰的NaTbF4:Yb，Er油溶性稀土纳米粒子，5g聚苯乙烯单体和5g丙烯酰胺单体于18g去离子水中1000rpm搅拌混合，升温至75℃，加入0.06g十二烷基苯磺酸钠作为乳化剂，0.2g硫酸铵作为引发剂，即得黄绿色聚苯乙烯-丙烯酰胺共聚物磁性微球，粒径为20-25μm。
称取1.6mmol Dy(DBM)3phen溶于10ml二氯甲烷溶胀剂中，加入所得黄绿色聚苯乙烯-丙烯酰胺共聚物磁性微球，分散于50ml质量浓度为0.25％的SDS水溶液中，将两者混合，用烷基苯磺酸钠乳化，室温下振荡反应一定时间，然后旋蒸除去溶胀剂，剩余的液体进行离心，弃去上清液，下层固体用水洗3次，除去SDS，用乙醇溶剂洗涤数次直至离心后上清液中无荧光，干燥，得到包埋有NaTbF4:Yb，Er纳米颗粒和配合物Dy(DBM)3phen的聚合物磁珠。
取3g聚乙烯亚胺PEI溶解于100mL 10mmol/L的2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲溶液中，取上述聚合物磁珠加入上述PEI溶液中，超声分散，避光反应30min，随后离心除去上清液，加入1ml超纯水和100mL乙醇溶剂，超声若干秒使微球充分分散，随后加入5ml戊二酸和8ml正硅酸乙酯TEOS，避光旋转反应30min，2000rpm离心2min除去上清，用乙醇溶剂在相同离心条件下离心洗涤5次，最后重悬于100mL超纯水中即得改性聚合物磁珠的重悬液。
取5mL上述改性聚合物磁珠的重悬液，加入上面步骤制备的所述氨基改性的水溶性铕纳米粒子，37℃避光偶联反应2h后低速离心，去除上清重新分散，得到稀土染色磁珠，再向分散液中加入150mg鼠抗人甲胎蛋白AFP单克隆抗体，37℃避光偶联反应2h后低速离心，去除上清重新分散，即得带有甲胎蛋白AFP识别分子Ⅰ的稀土染色磁珠；
以上述稀土染色磁珠作为试剂Ⅰ，以200μl CdSe/ZnS量子点(中心发射波长680nm，溶于正己烷中，30μM)标记的200mg鼠抗人甲胎蛋白AFP单克隆抗体作为生物识别分子Ⅱ，作为试剂Ⅱ，与试剂Ⅰ配合使用制成试剂盒，用于流式细胞分析和液相芯片检测。
实施例2
本实施例提供了一种稀土染色磁珠及其应用的具体实施方式，如下所述：
取1mmol三氟乙酸铕、0.15mmol三氟乙酸镱、0.05mmo1三氟乙酸铒、1mmo1三氟乙酸钠于三口圆底烧瓶中，再加入4mL油酸和3mL十八碳烯；在氩气保护下将温度升至140℃搅拌反应35min，接着将温度继续升至350℃反应45min；停止加热，继续搅拌使反应装置自然冷却至室温；将反应产物转移至离心管中，加入乙醇使产物析出，离心得到产物；用环己烷和乙醇洗涤三次，离心得到的固体产物在65℃下干燥过夜，即得到油酸修饰的NaEuF4:Yb，Er油溶性稀土纳米粒子，粒径为120-150nm，荧光强度最强的发射峰波长为620nm。
将1mmol硝酸镝与3mmol吡啶二羧酸溶液混合反应形成稀土配合物，将4ml油相试剂环己烷、1ml表面活性剂壬基酚聚氧乙烯醚及1ml助表面活性剂正己醇混合搅拌均匀后，加入上述稀土配合物的混合水溶液，1000rpm搅拌30min，加入500ul正硅酸乙酯和500ul氨水(质量分数20％)继续搅拌；搅拌中加入500ul氨丙基三乙氧基硅继续反应20min，然后加入丙酮离心沉降，经乙醇、水洗涤以除去反应溶液，离心分离得到氨基改性的水溶性镝纳米粒子，粒径为150-180nm，荧光强度最强的发射峰中心波长为560nm。
在氮气保护下，将200mg粒径为5-10nm的γ-Fe2O3纳米粒子、上面步骤制备的所述油酸修饰的NaEuF4:Yb，Er油溶性稀土纳米粒子，5g聚苯乙烯单体和5g丙烯酰胺单体于18g去离子水中1000rpm搅拌混合，升温至75℃，加入0.06g十二烷基苯磺酸钠作为乳化剂，0.2g硫酸铵作为引发剂，即得橙红色聚苯乙烯-丙烯酰胺共聚物磁性微球，粒径为20-25μm。
称取1mmol Tb(DBM)3phen溶于10ml二氯甲烷溶胀剂中，加入所得聚苯乙烯-丙烯酰胺共聚物磁性微球，分散于50ml质量分数为0.25％的SDS水溶液中，将两者混合，用烷基苯磺酸钠乳化，室温下振荡反应一定时间，然后旋蒸除去溶胀剂，剩余的液体进行离心，弃去上清液，下层固体用水洗3次，除去SDS，用乙醇洗涤数次直至离心后上清液中无荧光，干燥，得到包埋有NaEuF4:Yb，Er纳米颗粒和配合物Tb(DBM)3phen的聚合物磁珠。
取3g聚乙烯亚胺PEI溶解于100mL 10mmol/L的2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲溶液中，加入上述聚合物磁珠，加入上述PEI溶液中，超声分散，避光反应30min，随后离心除去上清液，加入1ml超纯水和100mL乙醇，超声若干秒使微球充分分散，随后加入5ml二羧酸和8ml正硅酸乙酯TEOS，避光旋转反应30min，2000rpm离心2min除去上清，用乙醇在相同离心条件下离心洗涤5次，最后重悬于100mL超纯水中即得改性聚合物磁珠的重悬液。
取5mL上述改性聚合物磁珠的重悬液，加入所述氨基改性的水溶性镝纳米粒子，37℃避光偶联反应2h后低速离心，去除上清重新分散，得到稀土染色磁珠，再向分散液中加入150mg鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体，37℃避光偶联反应2h后低速离心，去除上清重新分散，即得带有癌胚抗原识别分子Ⅰ的稀土染色磁珠；
以上述稀土染色磁珠作为试剂Ⅰ，以200μl CdSe/ZnS量子点(中心发射波长680nm，溶于正己烷中，30μM)标记的200mg鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体作为生物识别分子Ⅱ，作为试剂Ⅱ，与试剂Ⅰ配合使用制成试剂盒，用于流式细胞分析和液相芯片检测。
实施例3
本实施例提供了一种稀土染色磁珠及其应用的具体实施方式，如下所述：
取1.6mmol三氟乙酸镝、0.15mmol三氟乙酸镱、0.05mmo1三氟乙酸铒、1mmo1三氟乙酸钠于三口圆底烧瓶中，再加入4mL油酸和3mL十八碳烯；在氩气保护下将温度升至140℃搅拌反应35min，接着将温度继续升至330℃反应35min；停止加热，继续搅拌使反应装置自然冷却至室温；将反应产物转移至离心管中，加入乙醇使产物析出，离心得到产物；用环己烷和乙醇洗涤三次，离心得到的固体产物在65℃下干燥过夜，即得到油酸修饰的NaDyF4:Yb，Er油溶性稀土纳米粒子，粒径为100-150nm，荧光强度最强的发射峰波长为620nm。
将0.8mmol硝酸铽与3mmol吡啶二羧酸溶液混合反应形成稀土配合物，将4ml油相试剂环己烷、1ml表面活性剂壬基酚聚氧乙烯醚及1ml助表面活性剂正己醇混合搅拌均匀后，加入上述稀土配合物的混合水溶液，1000rpm搅拌30min，加入500ul正硅酸乙酯和500ul氨水(质量分数20％)继续搅拌；搅拌中加入500ul氨丙基三乙氧基硅继续反应20min，然后加入丙酮离心沉降，经乙醇、水洗涤以除去反应溶液，离心分离得到氨基改性的水溶性铽纳米粒子，粒径为120-180nm，荧光强度最强的发射峰中心波长为560nm。
在氮气保护下，将200mg粒径为5-10nm的γ-Fe2O3纳米粒子、上面步骤制备的所述油酸修饰的NaDyF4:Yb，Er油溶性稀土纳米粒子，5g聚苯乙烯单体和5g丙烯酰胺单体于18g去离子水中1000rpm搅拌混合，升温至75℃，加入0.06g十二烷基苯磺酸钠作为乳化剂，0.2g硫酸铵作为引发剂，即得黄绿色聚苯乙烯-丙烯酰胺共聚物磁性微球，粒径为20-25μm。
称取1mmol Eu(DBM)3phen溶于10ml二氯甲烷溶胀剂中，加入所得聚苯乙烯-丙烯酰胺共聚物磁性微球，分散于50ml质量分数为0.25％的SDS水溶液中，将两者混合，用烷基苯磺酸钠乳化，室温下振荡反应一定时间，然后旋蒸除去溶胀剂，剩余的液体进行离心，弃去上清液，下层固体用水洗3次，除去SDS，用乙醇洗涤数次直至离心后上清液中无荧光，干燥，得到包埋有NaDyF4:Yb，Er纳米颗粒和配合物Eu(DBM)3phen的聚合物磁珠。
取3g聚乙烯亚胺PEI溶解于100mL 10mmol/L的2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲溶液中，加入上述聚合物磁珠，加入上述PEI溶液中，超声分散，避光反应30min，随后离心除去上清液，加入1ml超纯水和100mL乙醇，超声若干秒使微球充分分散，随后加入5ml二羧酸和8ml正硅酸乙酯TEOS，避光旋转反应30min，2000rpm离心2min除去上清，用乙醇在相同离心条件下离心洗涤5次，最后重悬于100mL超纯水中即得改性聚合物磁珠的重悬液。
取5mL上述改性聚合物磁珠的重悬液，加入上面步骤制备的所述氨基改性的水溶性铕纳米粒子，37℃避光偶联反应2h后低速离心，去除上清重新分散，得到稀土染色磁珠，再向分散液中加入150mg鼠抗人糖链抗原199单克隆抗体，37℃避光偶联反应2h后低速离心，去除上清重新分散，即得带有糖链抗原199识别分子Ⅰ的稀土染色磁珠；
以上述稀土染色磁珠作为试剂Ⅰ，以200μl CdSe/ZnS量子点(中心发射波长680nm，溶于正己烷中，30μM)标记的200mg鼠抗人糖链抗原199单克隆抗体作为生物识别分子Ⅱ，作为试剂Ⅱ，与试剂Ⅰ配合使用制成试剂盒，用于流式细胞分析和液相芯片检测。
实验例1
取实施例1-3中获得的稀土染色磁珠分散液，用动态激光光散射仪测定微球的粒径分布，具体如表1所示。
表1实施例1-3稀土染色磁珠测试结果
Figure BDA0002093338350000101
Figure BDA0002093338350000111
实验例2
取人甲胎蛋白(AFP)标准品、人癌胚抗原标准品和人糖链抗原199标准品混合，采用血清稀释液稀释6个浓度梯度，将上述检测试剂盒中的实施例1-3所述稀土染色磁珠和试剂Ⅱ混合形成稀土染色磁珠液相芯片，随后将所述稀土染色磁珠液相芯片分别与样品1-6混合，目标分子分别同相应的稀土染色磁珠和生物识别分子Ⅱ结合，形成复合物稀土染色磁珠-目标分子-生物识别分子Ⅱ，根据不同稀土染色磁珠上稀土元素的荧光强度不同鉴别目标分子，然后检测CdSe/ZnS量子点的荧光强度，得到CdSe/ZnS量子点的荧光强度MFI值，建立每个标准品的浓度和MFI值的标准曲线。
取一定浓度的人甲胎蛋白(AFP)标准品、人癌胚抗原标准品和人糖链抗原199标准品混合，采用血清稀释液稀释6个浓度梯度的样品1-6，人甲胎蛋白(AFP)依次为10ng/mL、5ng/mL、4ng/mL、3ng/mL、2ng/mL、1ng/mL，人癌胚抗原依次为10ng/mL、5ng/mL、4ng/mL、3ng/mL、2ng/mL、1ng/mL，人糖链抗原199依次为10ng/mL、5ng/mL、4ng/mL、3ng/mL、2ng/mL、1ng/mL，每个浓度平行制备5份，采用实施例1-3所述试剂盒进行检测，以CdSe/ZnS量子点的荧光强度，代入上述标准曲线中，计算各指标的检测值，具体检测结果如表2所示。
表2实施例1-3荧光编码微球检测标准品结果。
Figure BDA0002093338350000112
Figure BDA0002093338350000121
采用现有的检测人甲胎蛋白(AFP)、人癌胚抗原和人糖链抗原定量试剂盒(胶体金法)检测上述样品1-6，具体检测结果如表3所示。
表3实施例1-3荧光编码微球检测标准品结果。
实施例 1 2 3
样品1 10 10 10
样品2 - 4.9 -
样品3 - - -
样品4 - - -
样品5 - - -
样品6 - - -
上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明技术方案所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (7)

1.一种稀土染色磁珠，其特征在于，包括三种各不相同的稀土荧光基团包埋于聚合物磁性微球内和/或连接于所述聚合物磁性微球表面，所述聚合物磁性微球粒径为20-25μm；
其中，所述稀土荧光基团包括含有铽、铕和镝的稀土离子配合物以及稀土纳米粒子，所述稀土纳米粒子为油酸包裹的镱和铒掺杂的油溶性稀土纳米粒子以及SiO2包裹的水溶性稀土纳米粒子，所述油溶性稀土纳米粒子和所述稀土离子配合物包埋于所述聚合物磁性微球内，所述水溶性稀土纳米粒子连接于所述聚合物磁性微球表面；
所述油溶性稀土纳米粒子中的稀土元素、配合物中的稀土元素、水溶性稀土纳米粒子中的稀土元素的摩尔比为(0.8-1.6):1:(0.8-1.6)；
所述聚合物磁性微球为包埋有磁性纳米粒子的聚合物微球，所述聚合物微球的聚合物单体包括聚苯乙烯和丙烯酰胺；所述磁性纳米粒子材料选自γ-Fe2O3纳米粒子，CoFe2O3纳米粒子，Fe3O4纳米粒子和NiCoFe纳米粒子中至少一种，所述磁性纳米粒子粒径为5-50nm；
所述稀土染色磁珠的制备方法包括以下步骤：
以稀土元素的三氟乙酸盐为原料，制备油酸包裹的油溶性稀土纳米粒子；
以稀土元素的硝酸盐为原料，微乳法制备水溶性稀土纳米粒子；
采用油酸包裹的油溶性稀土纳米粒子、磁性纳米粒子和聚合物单体为原料，通过微乳法制备第一种稀土荧光基团染色的聚合物磁性微球；
采用溶胀法包埋第二种稀土荧光基团于所述聚合物磁性微球内；
对所述聚合物磁性微球改性后连接第三种稀土荧光基团即得所述稀土染色磁珠；
其中，以稀土元素的三氟乙酸盐和三氟乙酸钠为原料，掺杂镱和铒，以油酸和十八碳烯为反应溶剂，100-140℃升温溶解，330-350℃反应20-45min即得粒径为100-150nm的油酸包裹的油溶性纳米粒子；
以稀土元素的硝酸盐为原料，与吡啶二羧酸形成稀土配合物，经微乳法制成稀土纳米粒子，再经氨丙基三乙氧基硅改性制成粒径为120-180nm的水溶性稀土纳米粒子。
2.根据权利要求1所述的稀土染色磁珠，其特征在于，所述稀土纳米粒子粒径为100-180nm。
3.一种荧光编码磁珠，其特征在于，包括权利要求1或2所述的稀土染色磁珠。
4.根据权利要求3所述的荧光编码磁珠，其特征在于，还包括连接于所述稀土染色磁珠上的生物识别分子Ⅰ。
5.一种检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求3或4所述的荧光编码磁珠，还包括荧光报告基团标记的生物识别分子Ⅱ，所述生物识别分子Ⅰ和生物识别分子Ⅱ均特异性识别检测目标分子。
6.一种权利要求1或2所述的稀土染色磁珠，或权利要求3或4所述的荧光编码磁珠，或权利要求5所述的检测试剂盒在荧光分析领域的应用。
7.一种权利要求1或2所述的稀土染色磁珠，或权利要求3或4所述的荧光编码磁珠，或权利要求5所述的检测试剂盒在流式细胞分析领域、液相芯片检测领域的应用。
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