CN110226593A

CN110226593A - 一种生物组织冷冻保护液

Info

Publication number: CN110226593A
Application number: CN201910695604.5A
Authority: CN
Inventors: 葛亮
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2019-07-30
Filing date: 2019-07-30
Publication date: 2019-09-13

Abstract

本发明公开了一种生物组织冷冻保护液，具体涉及医学研究领域，包括：去离子水50‑65份、乙二醇14‑20份、丙三醇6‑14份、乙酰胺15‑23份、氨基酸5‑11份、水合氯醛1‑7份、微晶纤维素3‑10份、低聚果糖8‑10份和沙棘萃取原液4‑12份。本发明通过加入水合氯醛提供麻醉作用，微晶纤维素稀释冷冻液，使冷冻液在冷冻组织细胞时缓慢冷冻，避免细胞冰晶损伤，低聚果糖和沙棘萃取原液提供营养成分，维持组织细胞活性，提供组织所需矿物质、微量元素和维生素等成分，修复受损细胞，有效杀灭细菌，碱性螺旋藻营养液调节保护液PH值，氯化钠溶液与氯化钙溶液混合液调节保护液渗透压，维持细胞脱水平衡，避免细胞溶液损伤。

Description

一种生物组织冷冻保护液

技术领域

本发明涉及医学研究领域，更具体地说，本发明涉及一种生物组织冷冻保护液。

背景技术

目前，玻璃化冷冻技术作为一种快速冷冻细胞或组织的方法，随着辅助生殖技术的发展而受到广泛关注，在国外已将玻璃化冷冻技术扩展应用到了人体器官冷冻的研究当中。该项技术具有冷冻速度快、冻融损伤小，操作简单等优点，能够提高冷冻复苏后的存活率。实践中，人体器官冷冻极为困难，面临不少技术障碍。低温在达到一定的低温时，可以保存人体组织细胞的活力，但是细胞往往会在降温的过程中死亡。因为细胞富含水分，在降温过程中会形成冰晶对人体组织细胞造成损伤。为了使人体的器官组织细胞在温度下降的过程中，尽量不受到低温产生冰晶的损伤，要求在人体器官降温过程中加入冷冻保护液，使细胞在冷冻中能动性得到改善。

专利申请公布号CN 101228867 B的发明专利公开了一种人体精液及卵巢组织冷冻保护液，包括二甲基亚砜19%-23%、乙酰胺15%-20%、丙三醇15%-19%、丙二醇10%-14%、乙酸8%-10%、乙酸正丙酯7%-9%、氨基酸4%-8%，所述的氨基酸为赖氨酸、精氨酸、组氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、色氨酸中的一种或数种混合。本发明能大幅减少细胞在冷冻和复温过程中的损坏。

但是上述技术方案中提供的一种人体精液及卵巢组织冷冻保护液在实际运用时，可能会使细胞脱水或过度吸水导致破裂，损伤组织活性，无法为冷冻组织提供能量，也没有修复损伤的效果。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺陷，本发明的实施例提供一种生物组织冷冻保护液，通过在传统冷冻保护液的基础上加入水合氯醛提供麻醉作用，微晶纤维素能够稀释冷冻液，使冷冻液在冷冻组织细胞时缓慢冷冻，避免细胞冰晶损伤，低聚果糖和沙棘萃取原液提供营养成分，维持组织细胞活性，提供组织所需矿物质和微量元素，并提供维生素等成分，修复受损细胞，有效杀灭细菌，通过碱性螺旋藻营养液调节保护液PH值，氯化钠溶液与氯化钙溶液混合液调节保护液渗透压，有利于维持细胞脱水平衡，避免细胞溶液损伤，以解决背景技术中所提出问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种生物组织冷冻保护液，其中所使用的配方组分按重量计包括：去离子水50-65份、乙二醇14-20份、丙三醇6-14份、乙酰胺15-23份、氨基酸5-11份、水合氯醛1-7份、微晶纤维素3-10份、低聚果糖8-10份和沙棘萃取原液4-12份，所述配方中还包括有酸碱调节剂和渗透压调节剂。

优选的，所述配方组分按重量计包括：去离子水55-60份、乙二醇15-19份、丙三醇8-12份、乙酰胺17-21份、氨基酸6-10份、水合氯醛2-6份、微晶纤维素4-8份、低聚果糖8-10份和沙棘萃取原液5-9份，所述配方中还包括有酸碱调节剂和渗透压调节剂。

优选的，所述氨基酸为甘氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸和半胱氨酸中的一种或数种混合。

优选的，所述酸碱调节剂设置为碱性螺旋藻营养液，所述螺旋藻营养液的添加标准为保护液PH值为7.2-7.4。

优选的，所述酸碱调节剂设置为的氯化钠溶液与氯化钙溶液混合液，所述氯化钠溶液与氯化钙溶液的添加比例设置为10:1-1.4，所述氯化钠溶液添加标准为氯化钠在保护液中含量为0.9%。

一种生物组织冷冻保护液的制备方法，具体操作步骤为：

步骤一：准备去离子水、乙二醇、丙三醇、乙酰胺、氨基酸、水合氯醛、微晶纤维素、低聚果糖、沙棘萃取原液、碱性螺旋藻营养液、氯化钠溶液和氯化钙溶液，备用；

步骤二：按比例取乙二醇、丙三醇、乙酰胺、氨基酸、水合氯醛、微晶纤维素、低聚果糖和沙棘萃取原液，倒入带有适量去离子水的容器内混合搅拌至溶解，制成保护液基液；

步骤三：在保护液基液中加入碱性螺旋藻营养液、氯化钠溶液和氯化钙溶液，不间断搅拌均匀，得到保护液半成品；

步骤四：将步骤三中制备的保护液半成品加入离心搅拌机中离心搅拌均质处理，并过滤出杂质，取上清液，得到保护液成品；

步骤五：对保护液成品进行分装并密封处理。

优选的，所述步骤三中分多次少量加入碱性螺旋藻营养液、氯化钠溶液和氯化钙溶液，并间断性测量混合溶液PH值和氯化钠含量。

本发明的技术效果和优点：

1、通过在传统冷冻保护液的基础上加入水合氯醛提供麻醉作用，微晶纤维素能够稀释冷冻液，使冷冻液在冷冻组织细胞时缓慢冷冻，避免细胞冰晶损伤，低聚果糖和沙棘萃取原液提供营养成分，维持组织细胞活性，提供组织所需矿物质和微量元素，并提供维生素等成分，修复受损细胞，有效杀灭细菌，通过碱性螺旋藻营养液调节保护液PH值，氯化钠溶液与氯化钙溶液混合液调节保护液渗透压，有利于维持细胞脱水平衡，避免细胞溶液损伤；

2、通过该生产工艺制备生物组织冷冻保护液，工艺简单，生产速度快，能够均质保护液成分，避免出现溶液中溶质差异导致的细胞损伤，提高细胞冷冻的效果。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

本发明提供了一种生物组织冷冻保护液，所述配方组分按重量计包括：去离子水55份、乙二醇15份、丙三醇8份、乙酰胺17份、氨基酸6份、水合氯醛2份、微晶纤维素4份、低聚果糖8份和沙棘萃取原液5份，所述配方中还包括有酸碱调节剂和渗透压调节剂；

进一步的，所述氨基酸为甘氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸和半胱氨酸中的一种或数种混合；

进一步的，所述酸碱调节剂设置为碱性螺旋藻营养液，所述螺旋藻营养液的添加标准为保护液PH值为7.2；

进一步的，所述酸碱调节剂设置为的氯化钠溶液与氯化钙溶液混合液，所述氯化钠溶液与氯化钙溶液的添加比例设置为10:1，所述氯化钠溶液添加标准为氯化钠在保护液中含量为0.9%。

一种生物组织冷冻保护液的制备方法，具体操作步骤为：

步骤三：在保护液基液中加入碱性螺旋藻营养液、氯化钠溶液和氯化钙溶液，不间断搅拌均匀，分多次少量加入碱性螺旋藻营养液、氯化钠溶液和氯化钙溶液，并间断性测量混合溶液PH值和氯化钠含量，得到保护液半成品；

步骤五：对保护液成品进行分装并密封处理。

本实施例中制备的冷冻保护液外观质量清透，无明显杂质，纯度高，本实施例中抽取了进行了10次组织细胞冷冻试验，检测组织细胞冷冻状况并对冷冻过的细胞解冻检测活性，结果显示：细胞冷冻损坏率为35.7%，冷冻细胞失水率为12.5%，细胞外观饱满，无明显褶皱，一周后对组织细胞融化后活率为60.3%。

实施例2：

本发明提供了一种生物组织冷冻保护液，所述配方组分按重量计包括：去离子水57份、乙二醇16份、丙三醇9份、乙酰胺19份、氨基酸8份、水合氯醛4份、微晶纤维素5份、低聚果糖9份和沙棘萃取原液6份，所述配方中还包括有酸碱调节剂和渗透压调节剂；

进一步的，所述酸碱调节剂设置为碱性螺旋藻营养液，所述螺旋藻营养液的添加标准为保护液PH值为7.3；

进一步的，所述酸碱调节剂设置为的氯化钠溶液与氯化钙溶液混合液，所述氯化钠溶液与氯化钙溶液的添加比例设置为10:1.2，所述氯化钠溶液添加标准为氯化钠在保护液中含量为0.9%。

一种生物组织冷冻保护液的制备方法，具体操作步骤为：

步骤五：对保护液成品进行分装并密封处理。

对比实施例1，本实施例中制备的冷冻保护液外观质量清透，无明显杂质，纯度高，本实施例中抽取了进行了10次组织细胞冷冻试验，检测组织细胞冷冻状况并对冷冻过的细胞解冻检测活性，结果显示：细胞冷冻损坏率为30.2%，冷冻细胞失水率为10.8%，细胞外观饱满，无明显褶皱，一周后对组织细胞融化后活率为65.7%。

实施例3：

本发明提供了一种生物组织冷冻保护液，所述配方组分按重量计包括：去离子水58份、乙二醇18份、丙三醇10份、乙酰胺20份、氨基酸8份、水合氯醛5份、微晶纤维素6份、低聚果糖9份和沙棘萃取原液8份，所述配方中还包括有酸碱调节剂和渗透压调节剂；

一种生物组织冷冻保护液的制备方法，具体操作步骤为：

步骤五：对保护液成品进行分装并密封处理。

对比实施例1和2，本实施例中制备的冷冻保护液外观质量清透，无明显杂质，纯度高，本实施例中抽取了进行了10次组织细胞冷冻试验，检测组织细胞冷冻状况并对冷冻过的细胞解冻检测活性，结果显示：细胞冷冻损坏率为25.8%，冷冻细胞失水率为10.3%，细胞外观饱满，无明显褶皱，一周后对组织细胞融化后活率为78.1%。

实施例4：

本发明提供了一种生物组织冷冻保护液，所述配方组分按重量计包括：去离子水60份、乙二醇19份、丙三醇12份、乙酰胺21份、氨基酸10份、水合氯醛6份、微晶纤维素8份、低聚果糖10份和沙棘萃取原液9份，所述配方中还包括有酸碱调节剂和渗透压调节剂；

进一步的，所述酸碱调节剂设置为碱性螺旋藻营养液，所述螺旋藻营养液的添加标准为保护液PH值为7.4；

进一步的，所述酸碱调节剂设置为的氯化钠溶液与氯化钙溶液混合液，所述氯化钠溶液与氯化钙溶液的添加比例设置为10:1.4，所述氯化钠溶液添加标准为氯化钠在保护液中含量为0.9%。

一种生物组织冷冻保护液的制备方法，具体操作步骤为：

步骤五：对保护液成品进行分装并密封处理。

对比实施例1-3，本实施例中制备的冷冻保护液外观质量清透，无明显杂质，纯度高，本实施例中抽取了进行了10次组织细胞冷冻试验，检测组织细胞冷冻状况并对冷冻过的细胞解冻检测活性，结果显示：细胞冷冻损坏率为26.3%，冷冻细胞失水率为11.9%，细胞外观饱满，无明显褶皱，一周后对组织细胞融化后活率为63.9%。

根据实施例1-4得出下表：

由上表可知，实施例3中原材料比例适中，配方比例最为适宜，制备出的生物组织冷冻保护液在对细胞冷冻处理过程中损伤细胞最少，融化后细胞活率保持最高水平，能够大大提高生物组织活性，另外，在传统冷冻保护液的基础上加入水合氯醛提供麻醉作用，微晶纤维素能够稀释冷冻液，使冷冻液在冷冻组织细胞时缓慢冷冻，避免细胞冰晶损伤，通过加入低聚果糖和沙棘萃取原液提供营养成分，维持组织细胞活性，提供组织所需矿物质和微量元素，并提供维生素等成分，修复受损细胞，还能够有效杀灭细菌，避免细胞腐化，通过碱性螺旋藻营养液调节保护液PH值，氯化钠溶液与氯化钙溶液混合液调节保护液渗透压，有利于维持细胞脱水平衡，避免细胞溶液损伤。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种生物组织冷冻保护液，其特征在于：其中所使用的配方组分按重量计包括：去离子水50-65份、乙二醇14-20份、丙三醇6-14份、乙酰胺15-23份、氨基酸5-11份、水合氯醛1-7份、微晶纤维素3-10份、低聚果糖8-10份和沙棘萃取原液4-12份，所述配方中还包括有酸碱调节剂和渗透压调节剂。

2.根据权利要求1所述的一种生物组织冷冻保护液，其特征在于：所述配方组分按重量计包括：去离子水55-60份、乙二醇15-19份、丙三醇8-12份、乙酰胺17-21份、氨基酸6-10份、水合氯醛2-6份、微晶纤维素4-8份、低聚果糖8-10份和沙棘萃取原液5-9份，所述配方中还包括有酸碱调节剂和渗透压调节剂。

3.根据权利要求1所述的一种生物组织冷冻保护液，其特征在于：所述氨基酸为甘氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸和半胱氨酸中的一种或数种混合。

4.根据权利要求1所述的一种生物组织冷冻保护液，其特征在于：所述酸碱调节剂设置为碱性螺旋藻营养液，所述螺旋藻营养液的添加标准为保护液PH值为7.2-7.4。

5.根据权利要求1所述的一种生物组织冷冻保护液，其特征在于：所述酸碱调节剂设置为的氯化钠溶液与氯化钙溶液混合液，所述氯化钠溶液与氯化钙溶液的添加比例设置为10:1-1.4，所述氯化钠溶液添加标准为氯化钠在保护液中含量为0.9%。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的一种生物组织冷冻保护液的制备方法，其特征在于：具体操作步骤为：

步骤五：对保护液成品进行分装并密封处理。

7.根据权利要求6所述的一种生物组织冷冻保护液，其特征在于：所述步骤三中分多次少量加入碱性螺旋藻营养液、氯化钠溶液和氯化钙溶液，并间断性测量混合溶液PH值和氯化钠含量。