CN110220859A - 一种止血粉中吐温80残留量的检测方法 - Google Patents

一种止血粉中吐温80残留量的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种止血粉中吐温80残留量的检测方法，属于医药中化学物质残留检测技术领域。本发明一种止血粉中吐温80残留的检测方法，包括如下步骤：1)供试品溶液的制备；2)标准曲线溶液制备；3)测定方法：在波长320nm处测定处理后的供试品溶液和标准曲线溶液；4)结果计算，以吐温80系列浓度和相应的吸光值绘制标准曲线，计算供试品中吐温80的含量。本发明方法克服了现有检测方法准确性差、耗时费力、样品要求高的缺点，并且操作简便、准确性高。

Description

一种止血粉中吐温80残留量的检测方法
技术领域
本发明属于医药中化学物质残留检测技术领域，具体涉及一种止血粉中吐温80残留量的检测方法。
背景技术
吐温80(也叫聚山梨酯80)是失水山梨醇油酸单酯与环氧乙烷加合而成的非离子表面活性剂，具有很好的乳化和增溶作用，广泛用于医药、食品等行业。在止血粉生产过程中，使用吐温80作为乳化剂，将淀粉进行乳化，初步得到止血微球，是生产的关键工序。目前国内外对吐温80的安全性均进行了深入研究，对其在医药、食品等行业中的最高限量也做了相应的规定，但药典检测方法模糊、复杂，且标准曲线溶液制备粗糙，检测结果不够精确。
专利CN201410140478.4“一种快速测定血必净注射液中吐温80含量的方法”中采用近红外光谱法，适合于血必净注射液中吐温80含量的快速测定。建立所述血必净注射液标准品种吐温80的含量与近红外光谱图之间的校正模型，可以对血必净注射液在线取样，随时进行吐温80的测定，其作为快速检测手段，检测精度不高，只适合应用于生产过程检测，不适合作为产品检测方法。专利CN201410567353.X“一种中药血必净注射液中聚山梨酯80的含量检测方法”中，采用气相色谱检测方法，该方法精确度高，但检测时间长，供试品溶液制备方法要经过阵法回路等一系列操作，耗时费力。专利CN201110161063.1“检测水中残留微量吐温80的方法”提供了利用紫外分光光度计直接进行测定的方法，分析成本低、快捷，分析结果准确，但方法只适于检测水中吐温80的残留量，且要求水中无其他杂质，否则会影响实验结果。专利CN201710701256.9“一种中药注射剂中聚山梨酯80的含量测定”同样采用分光光度计进行测定，利用注射剂与硫氰钴铵溶液进行反应，经二氯甲烷萃取后，在特定波长下测定吸光值，改法适用于各种注射剂中聚山梨酯80的检测，但只适用于可溶解的液体样品，对于不容的止血粉样品，该法并不适用。
发明内容
针对现有药典及相关资料中的检测方法准确性差、耗时费力、样品要求高的缺点，本发明提供了一种止血粉中吐温80残留量的检测方法，该方法简便、准确性高。
为了达到上述目的，本发明的技术方案为：
一种止血粉中吐温80残留量的检测方法，步骤如下：
(1)硫氰钴铵溶液的配制：称取硝酸钴7.5g、硫氰酸铵50.0g，于250mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，于2-8℃保存；
(2)供试品处理方法：精密称取0.05-1.00g的供试品于离心管中，加入5～10mL无水乙醇，旋涡震荡5-60min；离心取上清液，并再次用1-2mL无水乙醇清洗后离心，合并上清液；将上清液加热浓缩至0.1mL，加2-10mL纯化水完全溶解；
本发明样品处理中的吐温80溶于乙醇，使用无水乙醇既能溶解止血粉中的吐温80残留，也能避免止血粉遇水吸涨后出现粘稠状，难以分离，而且乙醇毒性低、易挥发，减少浓缩难度。
(3)供试品溶液：将(2)中的溶解液全部转移至5-50mL容量瓶中，并用纯化水定容至刻度，即得供试品溶液；
(4)取供试品溶液3mL，与6mL二氯甲烷和9mL硫氰钴铵溶液混合，室温下震荡0.5-5小时，使上下两层溶液充分混合，静置30min；
(5)标准曲线溶液配制：精密量取适量吐温80标准品，用纯化水定容，摇匀，配制成1g/L的标准储备溶液；分别取适量标准储备溶液，配制成0～100μg/mL的系列标准溶液，分别取系列标准溶液3mL，与6mL二氯甲烷和9mL硫氰钴铵溶液混合，室温下用旋转摇床震荡1小时后，静置30min；
(6)在波长320nm处测定(4)和(5)中下层二氯甲烷液的吸光值，用二氯甲烷做空白对照，以吐温80系列浓度和相应的吸光值绘制标准曲线，计算供试品中吐温80含量。
药典中使用620nm波长进行检测，但这并不是吐温80-硫氰钴铵的最大吸收波长，存在较大的检验误差，在最大吸收波长320nm时，吸收最大、灵敏度更高，因此选择320nm波长作为检测波长。
在上述方案的基础上，所述步骤(2)中，供试品处理方法：精密称取0.1～0.2g的供试品于离心管中，加入5～10mL无水乙醇，旋涡震荡5-60min；离心取上清液，并再次用1～2mL无水乙醇清洗后离心，合并上清液；将上清液加热浓缩至0.1mL，加3～5mL纯化水完全溶解。
本发明检测止血粉中吐温80残留量方法的优点：
发明人曾尝试了多种溶剂进行实验，实际操作过程中发现，纯化水、甲醇等溶剂虽然能够溶解止血粉中的吐温80，但是纯化水会使止血粉产生溶胀作用，不易离心分离，且不易挥发浓缩；甲醇结果良好，但是危险性较高，不是最优选择。无水乙醇既能完全溶解止血粉中的吐温80，避免止血粉遇水吸涨难以分离其中残留物质的情况，且易挥发、毒性低，为最优溶剂。本发明供试品溶液在制备过程中均采用定容后使用，增加实验的准确性和可重复性；本发明选用振荡法使硫氰钴铵-吐温80配合物与二氯甲烷充分接触，既能保证反应充分，又节省时间。选择吐温80最大吸收波长，增加实验灵敏度，减少实验误差。
附图说明
图1吐温80的标准曲线，其中纵坐标为吸光值，横坐标为吐温80浓度。
具体实施方式
在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本发明。以下实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
实施例1
(1)硫氰钴铵溶液的配制：称取硝酸钴7.5g、硫氰酸铵50.0g，于250mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，于2-8℃保存。
(2)供试品处理方法：精密称取100mg供试品于离心管中，加入5mL无水乙醇，旋涡震荡；离心取上清液，并再次用1-2mL无水乙醇清洗后离心，合并上清液；将上清液加热浓缩至0.1mL左右，加3mL纯化水完全溶解。
(3)供试品溶液：将(2)中的溶解液全部转移至5mL容量瓶中，并用纯化水定容至刻度。
(4)取供试品溶液3mL，与6mL二氯甲烷和9mL硫氰钴铵溶液混合，室温下用旋转摇床震荡1小时后，静置30min。
(5)标准曲线溶液配制：精密量取适量吐温80标准品于容量瓶中，用纯化水定容，摇匀，配制成1g/L的标准储备溶液；分别取适量标准品储备溶液，配制0～100μg/mL的系列标准溶液，分别取系列标准溶液3mL，与6mL二氯甲烷和9mL硫氰钴铵溶液混合，室温下用旋转摇床震荡1小时后，静置30min。
(6)在波长320nm处测定(4)和(5)中下层二氯甲烷液的吸光值，用二氯甲烷做空白对照。以吐温80系列浓度和相应的吸光值绘制标准曲线，计算供试品中吐温80含量。
实施例2
(1)硫氰钴铵溶液的配制：称取硝酸钴7.5g、硫氰酸铵50.0g，于250mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，于2-8℃保存。
(2)供试品处理方法：精密称取100mg供试品于离心管中，加入5mL无水乙醇，旋涡震荡；离心取上清液，并再次用1-2mL无水乙醇清洗后离心，合并上清液；将上清液加热浓缩至0.1mL左右，加3mL纯化水完全溶解。
(3)供试品溶液：将(2)中的溶解液全部转移至5mL容量瓶中，并用纯化水定容至刻度。
(4)取供试品溶液3mL，与6mL二氯甲烷和9mL硫氰钴铵溶液混合，室温下用旋转摇床震荡2小时后，静置30min。
(5)标准曲线溶液配制：精密量取适量吐温80标准品于容量瓶中，用纯化水定容，摇匀，配制成1g/L的标准储备溶液；分别取适量标准品储备溶液，配制0～100μg/mL的系列标准溶液，分别取系列标准溶液3mL，与6mL二氯甲烷和9mL硫氰钴铵溶液混合，室温下用旋转摇床震荡1小时后，静置30min。
(6)在波长320nm处测定(4)和(5)中下层二氯甲烷液的吸光值，用二氯甲烷做空白对照。以吐温80系列浓度和相应的吸光值绘制标准曲线，计算供试品中吐温80含量。
实施例3
(1)硫氰钴铵溶液的配制：称取硝酸钴7.5g、硫氰酸铵50.0g，于250mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，于2-8℃保存。
(2)供试品处理方法：精密称取200mg供试品于离心管中，加入5mL无水乙醇，旋涡震荡；离心取上清液，并再次用1-2mL无水乙醇清洗后离心，合并上清液；将上清液加热浓缩至0.1mL左右，加3mL纯化水完全溶解。
(3)供试品溶液：将(2)中的溶解液全部转移至5mL容量瓶中，并用纯化水定容至刻度。
(4)取供试品溶液3mL，与6mL二氯甲烷和9mL硫氰钴铵溶液混合，室温下用旋转摇床震荡1小时后，静置30min。
(5)标准曲线溶液配制：精密量取适量吐温80标准品于容量瓶中，用纯化水定容，摇匀，配制成1g/L的标准储备溶液；分别取适量标准品储备溶液，配制0～100μg/mL的系列标准溶液，分别取系列标准溶液3mL，与6mL二氯甲烷和9mL硫氰钴铵溶液混合，室温下用旋转摇床震荡1小时后，静置30min。
(6)在波长320nm处测定(4)和(5)中下层二氯甲烷液的吸光值，用二氯甲烷做空白对照。以吐温80系列浓度和相应的吸光值绘制标准曲线，计算供试品中吐温80含量。
实施例4
(1)硫氰钴铵溶液的配制：称取硝酸钴7.5g、硫氰酸铵50.0g，于250mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，于2-8℃保存。
(2)供试品处理方法：精密称取200mg供试品于离心管中，加入10mL无水乙醇，旋涡震荡；离心取上清液，并再次用1-2mL无水乙醇清洗后离心，合并上清液；将上清液加热浓缩至0.1mL左右，加5mL纯化水完全溶解。
(3)供试品溶液：将(2)中的溶解液全部转移至10mL容量瓶中，并用纯化水定容至刻度。
(4)取供试品溶液3mL，与6mL二氯甲烷和9mL硫氰钴铵溶液混合，室温下用旋转摇床震荡1小时后，静置30min。
(5)标准曲线溶液配制：精密量取适量吐温80标准品于容量瓶中，用纯化水定容，摇匀，配制成1g/L的标准储备溶液；分别取适量标准品储备溶液，配制0～100μg/mL的系列标准溶液，分别取系列标准溶液3mL，与6mL二氯甲烷和9mL硫氰钴铵溶液混合，室温下用旋转摇床震荡1小时后，静置30min。
(6)在波长320nm处测定(4)和(5)中下层二氯甲烷液的吸光值，用二氯甲烷做空白对照。以吐温80系列浓度和相应的吸光值绘制标准曲线，计算供试品中吐温80含量。
实施例5
(1)硫氰钴铵溶液的配制：称取硝酸钴7.5g、硫氰酸铵50.0g，于250mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，于2-8℃保存。
(2)供试品处理方法：精密称取同一批次样品6份，每份100mg供试品于离心管中，加入5mL无水乙醇，旋涡震荡；离心取上清液，并再次用1-2mL无水乙醇清洗后离心，合并上清液；将上清液加热浓缩至0.1mL左右，加3mL纯化水完全溶解。
(3)供试品溶液：将(2)中的溶解液全部转移至5mL容量瓶中，并用纯化水定容至刻度。
(4)取供试品溶液3mL，与6mL二氯甲烷和9mL硫氰钴铵溶液混合，室温下用旋转摇床震荡1小时后，静置30min。
(5)标准曲线溶液配制：精密量取适量吐温80标准品于容量瓶中，用纯化水定容，摇匀，配制成1g/L的标准储备溶液；分别取适量标准品储备溶液，配制0～100μg/mL的系列标准溶液，分别取系列标准溶液3mL，与6mL二氯甲烷和9mL硫氰钴铵溶液混合，室温下用旋转摇床震荡1小时后，静置30min。
(6)在波长320nm处测定(4)和(5)中下层二氯甲烷液的吸光值，用二氯甲烷做空白对照。以吐温80系列浓度和相应的吸光值绘制标准曲线，计算供试品中吐温80含量。
表1实施例1～4测定的吐温80含量结果
项目 实施例1 实施例2 实施例3 实施例4
吐温80百分含量 0.0132％ 0.0131％ 0.0199％ 0.0201％
表2实施例5测定的吐温80含量结果
结论：根据上述结果可以判定，对于该止血粉加样量在不超过200mg时，其无水乙醇添加量为5mL、摇床震荡时间为1小时即可对供试品中的吐温80进行充分溶解并反应，加长震荡时间不会使检测结果发生变化；实施例5说明本发明重复性好，相对标准偏差为2.14％，该方法准确性高、可重复性强。
回收率：取已知吐温80残留量的供试品100mg于离心管中，分别向其中加入100μL标准储备溶液，按照本发明方法进行检测，用检测值和供试品吐温80含量差除以加入的标准储备液中吐温80的含量计算回收率。回收率在85-110％之间，结果说明该发明检测结果真实性好、准确度高、相对误差小。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (2)

1.一种止血粉中吐温80残留量的检测方法，其特征在于，步骤如下：
(1)硫氰钴铵溶液的配制：称取硝酸钴7.5g、硫氰酸铵50.0g，于250mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，于2-8℃保存；
(2)供试品处理方法：精密称取0.05-1.00g的供试品于离心管中，加入5～10mL无水乙醇，旋涡震荡5-60min；离心取上清液，并再次用1～2mL无水乙醇清洗后离心，合并上清液；将上清液加热浓缩至0.1mL，加2-10mL纯化水完全溶解；
(3)供试品溶液：将(2)中的溶解液全部转移至5-50mL容量瓶中，并用纯化水定容至刻度，即得供试品溶液；
(4)取供试品溶液3mL，与6mL二氯甲烷和9mL硫氰钴铵溶液混合，室温下震荡0.5-5小时，使上下两层溶液充分混合，静置30min；
(5)标准曲线溶液配制：精密量取适量吐温80标准品，用纯化水定容，摇匀，配制成1g/L的标准储备溶液；分别取适量标准储备溶液，配制成0～100μg/mL的系列标准溶液，分别取系列标准溶液3mL，与6mL二氯甲烷和9mL硫氰钴铵溶液混合，室温下用旋转摇床震荡1小时后，静置30min；
(6)在波长320nm处测定(4)和(5)中下层二氯甲烷液的吸光值，用二氯甲烷做空白对照，以吐温80系列浓度和相应的吸光值绘制标准曲线，计算供试品中吐温80含量。
2.根据权利要求1所述止血粉中吐温80残留量的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，供试品处理方法：精密称取0.1～0.2g的供试品于离心管中，加入5～10mL无水乙醇，旋涡震荡5-60min；离心取上清液，并再次用1～2mL无水乙醇清洗后离心，合并上清液；将上清液加热浓缩至0.1mL，加3～5mL纯化水完全溶解。
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