CN108169145A - 一种测定血清补体C1q的试剂盒及其制备使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种测定血清补体C1q的试剂盒，涉及医学及生物化学技术领域，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，试剂R1包括：Tris缓冲液、NaCl、PEG‑8000、抗类风湿因子抗体、吐温‑100，溶剂为纯化水；试剂R2包括：Tris缓冲液、NaCl、PEG‑8000、海藻糖、甘油、吐温‑100、C1q抗体，溶剂为纯化水。本发明还公开了一种测定血清补体C1q的试剂盒的制备和使用方法。本发明相比现有技术的优点在于：采用本发明试剂盒测定血清补体C1q，操作简单、精度高、定量能力好、耗时短，能批量快速进行。

Description

一种测定血清补体C1q的试剂盒及其制备使用方法
技术领域
本发明涉及医学及生物化学技术领域，尤其涉及一种适用于全自动生化分析的测定血清补体C1q的试剂盒及其制备使用方法。
背景技术
补体C1q是补体系统C1的第一组成成份，是一个巨分子量糖蛋白，一个Clq分子由18个多肽链成，化学组成为胶原性蛋白分子量：410KD。现有技术中采用免疫扩散法和ELISA双抗体夹心技术测定补体C1q浓度，但这两种方法均操作繁琐、精度低、定量能力差，且耗时长、不能快速批量检测。
因此，目前急需一种操作简单、精度高、定量能力好、耗时短，能批量快速测定血清补体C1q的试剂盒及其制备使用方法。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种操作简单、精度高、定量能力好、耗时短，能批量快速测定血清补体C1q的试剂盒及其制备使用方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：一种测定血清补体C1q的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
其溶剂为纯化水；
试剂R2：
其溶剂为纯化水。
作为本发明的优选方式之一，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
其溶剂为纯化水；
试剂R2：
其溶剂为纯化水。
作为本发明的优选方式之一，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
其溶剂为纯化水；
试剂R2：
其溶剂为纯化水。
作为本发明的优选方式之一，所述试剂R1的pH值为7.0-8.5。
作为本发明的优选方式之一，所述试剂R2的pH值为7.0-8.5。
一种测定血清补体C1q的试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
(1)配制试剂R1
a.按照试剂R1的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀后，配制成R1缓冲液；
b.按照试剂R1的组分含量，将NaCl、PEG-8000、抗类风湿因子抗体和吐温-100溶于制得的R1缓冲液中，搅拌均匀并调节pH值，得试剂R1；
(2)配制试剂R2
a.按照试剂R2的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀后，配制成R2缓冲液；
b.按照试剂R2的组分含量，将NaCl、PEG-8000、海藻糖、甘油、吐温-100和C1q抗体溶于制得的R2缓冲液中，搅拌均匀并调节pH值，得试剂R2。
一种测定血清补体C1q的试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
(1)将待测样品与试剂R1混合，37℃孵育5min；
(2)用全自动生化分析仪测定其吸光度A1；
(3)与试剂R2混合，反应5min；
(4)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A2；
(5)根据吸光度变化值计算出样本中的补体C1q的浓度。
作为本发明的优选方式之一，所述步骤(1)和步骤(3)中，试剂R1和试剂R2按照体积比4:1混合。
作为本发明的优选方式之一，所述步骤(2)和步骤(4)中，在主波长340nm、副波长700nm处用全自动生化分析仪测定其吸光度。
作为本发明的优选方式之一，所述步骤(5)中，吸光度变化值为ΔA，即ΔA＝A2-A1。
作为本发明的优选方式之一，所述步骤(5)中，按照以下公式计算血清中补体C1q的浓度：
血清中补体C1q浓度＝(△A样本/△A校准品)*校准品浓度。
本发明相比现有技术的优点在于：
(1)采用本发明试剂盒测定血清补体C1q，操作简单、精度高、定量能力好、耗时短，能批量快速进行；
(2)本发明试剂R2中的海藻糖有助于提高补体C1q抗体的稳定性；
(3)本发明试剂R2中的甘油可增加抗原抗体反应复合物的悬浮稳定，防止积聚下沉；
(4)本发明试剂R2中的吐温-100乳化作用较强，对形成的复合物有一定的保护和分散作用；
(5)本发明试剂R1中添加有抗类风湿因子抗体，该抗类风湿因子抗体的加入可在试剂R1与样本的孵育阶段除去类风湿因子等具有相似结构功能的杂蛋白的干扰，进一步提高本发明试剂盒的检测准确性。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例的一种测定血清补体C1q的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1(pH 7.0)：
其溶剂为纯化水；
试剂R2(pH 7.0)：
其溶剂为纯化水。
实施例2
本实施例的一种测定血清补体C1q的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1(pH 8.5)：
其溶剂为纯化水；
试剂R2(pH 8.5)：
其溶剂为纯化水。
实施例3
本实施例的一种测定血清补体C1q的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1(pH 8.0)：
其溶剂为纯化水；
试剂R2(pH 8.0)：
其溶剂为纯化水。
实施例4
本实施例的一种测定血清补体C1q的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1(pH 7.5)：
其溶剂为纯化水；
试剂R2(pH 7.5)：
其溶剂为纯化水。
实施例5
本实施例的一种制备上述实施例中测定血清补体C1q的试剂盒的方法，包括如下步骤：
(1)配制试剂R1
a.按照试剂R1的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀后，配制成R1缓冲液；
b.按照试剂R1的组分含量，将NaCl、PEG-8000、抗类风湿因子抗体和吐温-100溶于制得的R1缓冲液中，搅拌均匀并调节pH值，得试剂R1；
(2)配制试剂R2
a.按照试剂R2的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀后，配制成R2缓冲液；
b.按照试剂R2的组分含量，将NaCl、PEG-8000、海藻糖、甘油、吐温-100和C1q抗体溶于制得的R2缓冲液中，搅拌均匀并调节pH值，得试剂R2。
实施例6
本实施例的一种使用上述实施例中测定血清补体C1q的试剂盒的方法，包括如下步骤：
(1)将4uL待测样品与240uL试剂R1混合，37℃孵育5min；
(2)用全自动生化分析仪在主波长340nm、副波长700nm处测定其吸光度A1；
(3)与60uL试剂R2混合，反应5min；
(4)用全自动生化分析仪在主波长340nm、副波长700nm处测定反应后的吸光度A2；
(5)根据吸光度变化值ΔA＝A2-A1和以下公式计算出样本中的补体C1q的浓度：
血清中补体C1q浓度＝(△A样本/△A校准品)*校准品浓度。
本实施例采用两点终点法，反应方向为正反应，从开始到结束仅需10min，操作简单、精度高、定量能力好、耗时短。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种测定血清补体C1q的试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
试剂R2：
2.根据权利要求1所述的测定血清补体C1q的试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
试剂R2：
3.根据权利要求1所述的测定血清补体C1q的试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
试剂R2：
4.根据权利要求1-3任一项所述的测定血清补体C1q的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的pH值为7.0-8.5。
5.根据权利要求1-3任一项所述的测定血清补体C1q的试剂盒，其特征在于，所述试剂R2的pH值为7.0-8.5。
6.一种制备如权利要求1-5任一项所述的测定血清补体C1q的试剂盒的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)配制试剂R1
a.按照试剂R1的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀后，配制成R1缓冲液；
b.按照试剂R1的组分含量，将NaCl、PEG-8000、抗类风湿因子抗体和吐温-100溶于制得的R1缓冲液中，搅拌均匀并调节pH值，得试剂R1；
(2)配制试剂R2
a.按照试剂R2的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀后，配制成R2缓冲液；
b.按照试剂R2的组分含量，将NaCl、PEG-8000、海藻糖、甘油、吐温-100和C1q抗体溶于制得的R2缓冲液中，搅拌均匀并调节pH值，得试剂R2。
7.一种使用如权利要求1-5任一项所述的测定血清补体C1q的试剂盒的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将待测样品与试剂R1混合，37℃孵育5min；
(2)用全自动生化分析仪测定其吸光度A1；
(3)与试剂R2混合，反应5min；
(4)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A2；
(5)根据吸光度变化值计算出样本中的补体C1q的浓度。
8.根据权利要求7所述的测定血清补体C1q的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(1)和步骤(3)中，试剂R1和试剂R2按照体积比4:1混合。
9.根据权利要求7所述的测定血清补体C1q的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(2)和步骤(4)中，在主波长340nm、副波长700nm处用全自动生化分析仪测定其吸光度。
10.根据权利要求9所述的测定血清补体C1q的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(5)中，吸光度变化值为ΔA，即ΔA＝A2-A1。
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