CN110161149A - 盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法 - Google Patents
盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种盐酸托烷司琼注射液中杂质a‑托品醇的检测方法，该方法开发了合适的升温程序和色谱条件，使α‑托品醇与盐酸托烷司琼、辅料、相关杂质能很好地分离，注射液中的辅料峰和其他杂质峰不干扰α‑托品醇的检测，从而使本发明的方法具有很强的专属性；本发明首先进行注射液的浓缩，再用甲醇稀释，采用直接进样法进样，增加了α‑托品醇在气相色谱仪中的响应度，提高了检测灵敏度，本发明可以检测到0.09μg/mL的α‑托品醇残留，为目前检测样品中的微量α‑托品醇残留检出提供了保障；本发明采用气相色谱法并按外标法计算α‑托品醇的含量，相比现有技术中常用的薄层色谱法极大的提高了杂质检测的定量能力，增加了药品质量的可控性。
Description
技术领域
本发明涉及化学品检测技术领域，具体指一种盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法。
背景技术
盐酸托烷司琼注射液是一种外周神经原及中枢神经系统5-羟色胺3(5-HT3)受体的强效、高选择性的竞争拮抗剂，主要通过选择性地阻断外周神经原的突触前5-HT3受体而抑制呕吐反射，同时，止吐作用也可能与其通过对中枢5-HT3受体的直接阻断而抑制最后区的迷走神经的刺激作用有关。
盐酸托烷司琼注射液的原研厂家为瑞士Sandoz，1992年首次在荷兰上市，商品名：Navoban，用于预防和治疗肿瘤放疗、化疗引起的恶心、呕吐，以及术后的恶心、呕吐。 1999年该产品首次在中国上市，商品名：欧必亭。
α-托品醇是合成盐酸托烷司琼原料药的重要片段，也是盐酸托烷司琼注射液的降解杂质，其降解过程如下：
根据上述分析，盐酸托烷司琼注射液中的α-托品醇有两条来源途径，既可能从盐酸托烷司琼原料药中带入，也可能由注射液本身降解产生。因此，盐酸托烷司琼注射液中杂质α-托品醇的检测显得尤为重要。
但是，α-托品醇本身无紫外吸收，无法用高效液相色谱法紫外检测器进行分析检测，同时由于盐酸托烷司琼注射液中辅料无机盐浓度较高，也无法用蒸发光散射检测器进行分析检测。《中国药典》2015年版和《欧洲药典》9.0均采用薄层色谱法对盐酸托烷司琼原料药中的杂质α-托品醇进行检测，药典中的方法存在方法灵敏度差、半定量检测、重现性差的缺点，更重要的是该方法供试品浓度高(40mg/ml)，仅适用于原料药的检测，而无法对确定浓度的注射液进行检测(盐酸托烷司琼注射液浓度为1mg/ml)。
而现有技术中其它检测盐酸托烷司琼注射液中α-托品醇的方法，普遍存在灵敏度差、半定量检测和重现性差的问题，尤其在灵敏度方面体现极为明显，现有检测方法对盐酸托烷司琼注射液中α-托品醇的检测限都很高。
因此，对于目前盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法，有待于做进一步改进。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供一种灵敏度高、检出限低的盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法，该方法为采用气相色谱法进行检测，其特征在于：包括以下步骤 (1)供试品溶液的配制：取盐酸托烷司琼注射液置于水浴上蒸干，用甲醇溶解转移至量瓶中并定容，制成含托烷司琼1mg/mL～10mg/mL的溶液；
(2)对照品溶液的配制：取α-托品醇对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成5μg/mL～50μg/mL的溶液；
(3)检测：分别取供试品溶液和对照品溶液，直接进样，采集色谱图；
色谱条件：
色谱柱：DB-WAX，30m×0.32mm×0.5μm；
柱温：程序升温至60～100℃保持3分钟，然后以每分钟10～20℃升温至200℃，保持5分钟；
载气：N2；
分流比：1:1～3:1；
流速：1.0ml/min～3.0ml/min；
进样口温度：200～240℃；
检测器：氢火焰离子化检测器，温度：240～260℃；
进样方式：直接进样；
进样量：1μl；
供试品溶液的色谱图中如有与α-托品醇保留时间相同的色谱峰，按外标法以峰面积计算，确定供试品中α-托品醇的含量；
(4)结果计算：
含量＝(CR/Cx)×(Ax/AR)，
式中：CR为对照品溶液的浓度，Cx为供试品溶液的浓度，AR为α-托品醇对照品的峰面积，Ax为供试品中α-托品醇的峰面积。
优选地，所述供试品溶液的浓度为1mg/mL。
优选地，所述对照品溶液的浓度为5μg/mL。
优选地，步骤(3)中，所述柱温的程序升温至80℃保持3分钟，然后以每分钟15℃升温至200℃，保持5分钟。
优选地，步骤(3)中，所述分流比3:1。
优选地，步骤(3)中，所述流速为1.5mL/min。
优选地，步骤(3)中，所述进样口温度为200℃。
优选地，步骤(3)中，所述检测器温度为250℃。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明开发了合适的升温程序和色谱条件，使α-托品醇与盐酸托烷司琼、辅料、相关杂质能很好地分离，注射液中的辅料峰和其他杂质峰不干扰α-托品醇的检测，从而使本发明的方法具有很强的专属性；针对目前水溶液无法直接进样的缺陷，本发明首先进行注射液的浓缩，再用甲醇稀释，保证处理后的样品能够采用直接进样法进样，从而增加α-托品醇在气相色谱仪中的响应度，提高检测灵敏度，本发明可以检测到0.09μg/mL的α-托品醇残留，相当于盐酸托烷司琼注射液浓度(1mg/mL)的0.009％，为目前检测样品中的微量α-托品醇残留检出提供了保障；本发明采用气相色谱法并按外标法计算α-托品醇的含量，相比现有技术中常用的薄层色谱法极大的提高了杂质检测的定量能力，增加了药品质量的可控性。
附图说明
图1为本发明实施例1中对照品溶液的色谱图；
图2为本发明实施例1中供试品溶液的色谱图；
图3为本发明验证试验中专属性试验空白溶液(甲醇)的色谱图；
图4为本发明验证试验中专属性试验空白辅料溶液的色谱图；
图5为本发明验证试验中专属性试验盐酸托烷司琼溶液的色谱图；
图6为本发明验证试验中专属性试验α-托品醇溶液的色谱图；
图7为本发明验证试验中检测限与定量限试验定量限溶液的色谱图；
图8为本发明验证试验中检测限与定量限试验检测限溶液的色谱图；
图9为本发明验证试验中线性和范围试验对照品溶液(0.3μg/ml)的色谱图；
图10为本发明验证试验中线性和范围试验对照品溶液(2.0μg/ml)的色谱图；
图11为本发明验证试验中线性和范围试验对照品溶液(4.0μg/ml)的色谱图；
图12为本发明验证试验中线性和范围试验对照品溶液(5.0μg/ml)的色谱图；
图13为本发明验证试验中线性和范围试验对照品溶液(7.5μg/ml)的色谱图；
图14为本发明验证试验中线性和范围试验对照品溶液(10.0μg/ml)的色谱图；
图15为本发明验证试验中线性和范围试验α-托品醇标准曲线；
图16为本发明验证试验中精密度试验加样供试品溶液的色谱图；
图17为本发明验证试验中精密度试验加样供试品溶液的色谱图；
图18为本发明验证试验中精密度试验加样供试品溶液的色谱图；
图19为本发明验证试验中精密度试验加样供试品溶液的色谱图；
图20为本发明验证试验中精密度试验加样供试品溶液的色谱图；
图21为本发明验证试验中精密度试验加样供试品溶液的色谱图；
图22为本发明验证试验中准确度试验加样(低浓度)供试品溶液的色谱图；
图23为本发明验证试验中准确度试验加样(低浓度)供试品溶液的色谱图；
图24为本发明验证试验中准确度试验加样(低浓度)供试品溶液的色谱图；
图25为本发明验证试验中准确度试验加样(中浓度)供试品溶液的色谱图；
图26为本发明验证试验中准确度试验加样(中浓度)供试品溶液的色谱图；
图27为本发明验证试验中准确度试验加样(中浓度)供试品溶液的色谱图；
图28为本发明验证试验中准确度试验加样(高浓度)供试品溶液的色谱图；
图29为本发明验证试验中准确度试验加样(高浓度)供试品溶液的色谱图；
图30为本发明验证试验中准确度试验加样(高浓度)供试品溶液的色谱图；
图31为本发明验证试验中溶液稳定性试验加样供试品溶液(0小时)的色谱图；
图32为本发明验证试验中溶液稳定性试验加样供试品溶液(2小时)的色谱图；
图33为本发明验证试验中溶液稳定性试验加样供试品溶液(4小时)的色谱图；
图34为本发明验证试验中溶液稳定性试验加样供试品溶液(6小时)的色谱图；
图35为本发明验证试验中溶液稳定性试验加样供试品溶液(8小时)的色谱图；
图36为本发明验证试验中溶液稳定性试验加样供试品溶液(24小时)的色谱图。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1：
本实施例盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法为采用气相色谱法进行检测，包括以下步骤：
供试品溶液的配制：取盐酸托烷司琼注射液置水浴上蒸干，用甲醇溶解转移至量瓶中并定容，制成含托烷司琼1mg/mL的溶液；
对照品溶液的配制：取α-托品醇对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成 5μg/mL的溶液；
分别取供试品溶液和对照品溶液，直接进样，采集色谱图；
供试品溶液的色谱图中如有与α-托品醇保留时间相同的色谱峰，按外标法以峰面积计算，确定供试品中α-托品醇的含量；
色谱条件：
色谱柱：聚乙二醇为固定液或极性相近的毛细管柱，本实施例选用DB-WAX， 30m×0.32mm×0.5μm；
柱温：80℃保持3分钟，然后以每分钟15℃升温至200℃，保持5分钟；
载气：N2；
分流比：3:1；
流速：1.5mL/min；
进样口温度：200℃；
检测器(FID)温度：250℃；
进样量：1μL。
图1为对照品溶液色谱图，其中12.070min为α-托品醇峰；图2为供试品溶液色谱图。根据供试品溶液中α-托品醇的峰面积确定其含量，检测结果为未检出。
实施例2：
本实施例盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法为采用气相色谱法进行检测，包括以下步骤：
供试品溶液的配制：取盐酸托烷司琼注射液置水浴上蒸干，用甲醇溶解转移至量瓶中并定容，制成含托烷司琼1mg/mL的溶液；
对照品溶液的配制：取α-托品醇对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成 5μg/mL的溶液；
分别取供试品溶液和对照品溶液，直接进样，采集色谱图；
供试品溶液的色谱图中如有与α-托品醇保留时间相同的色谱峰，按外标法以峰面积计算，确定供试品中α-托品醇的含量；
色谱条件：
色谱柱：聚乙二醇为固定液或极性相近的毛细管柱，推荐DB-WAX， 30m×0.32mm×0.5μm；
柱温：100℃保持3分钟，然后以每分钟10℃升温至200℃，保持5分钟；
载气：N2；
分流比：3:1；
流速：1.5mL/min；
进样口温度：200℃；
检测器(FID)温度：250℃；
进样量：1μL。
根据供试品溶液中α-托品醇的峰面积确定其含量，检测结果为未检出。
实施例3：
本实施例盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法为采用气相色谱法进行检测，包括以下步骤：
供试品溶液的配制：取盐酸托烷司琼注射液置水浴上蒸干，用甲醇溶解转移至量瓶中并定容，制成含托烷司琼1mg/mL的溶液；
对照品溶液的配制：取α-托品醇对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成 5μg/mL的溶液；
分别取供试品溶液和对照品溶液，直接进样，采集色谱图；
供试品溶液的色谱图中如有与α-托品醇保留时间相同的色谱峰，按外标法以峰面积计算，确定供试品中α-托品醇的含量；
色谱条件：
色谱柱：聚乙二醇为固定液或极性相近的毛细管柱，推荐DB-WAX， 30m×0.32mm×0.5μm；
柱温：60℃保持3分钟，然后以每分钟20℃升温至200℃，保持5分钟；
载气：N2；
分流比：3:1；
流速：1.5mL/min；
进样口温度：200℃；
检测器(FID)温度：250℃；
进样量：1μL。
根据供试品溶液中α-托品醇的峰面积确定其含量，检测结果为未检出。
实施例4：
本实施例盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法为采用气相色谱法进行检测，包括以下步骤：
供试品溶液的配制：取盐酸托烷司琼注射液置水浴上蒸干，用甲醇溶解转移至量瓶中并定容，制成含托烷司琼1mg/mL的溶液；
对照品溶液的配制：取α-托品醇对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成 5μg/mL的溶液；
分别取供试品溶液和对照品溶液，直接进样，采集色谱图；
供试品溶液的色谱图中如有与α-托品醇保留时间相同的色谱峰，按外标法以峰面积计算，确定供试品中α-托品醇的含量；
色谱条件：
色谱柱：聚乙二醇为固定液或极性相近的毛细管柱，推荐DB-WAX， 30m×0.32mm×0.5μm；
柱温：80℃保持3分钟，然后以每分钟15℃升温至200℃，保持5分钟；
载气：N2；
分流比：1:1；
流速：1.0mL/min；
进样口温度：200℃；
检测器(FID)温度：250℃；
进样量：1μL。
根据供试品溶液中α-托品醇的峰面积确定其含量，检测结果为未检出。
实施例5：
本实施例盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法为采用气相色谱法进行检测，包括以下步骤：
供试品溶液的配制：取盐酸托烷司琼注射液置水浴上蒸干，用甲醇溶解转移至量瓶中并定容，制成含托烷司琼1mg/mL的溶液；
对照品溶液的配制：取α-托品醇对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成 5μg/mL的溶液；
分别取供试品溶液和对照品溶液，直接进样，采集色谱图；
供试品溶液的色谱图中如有与α-托品醇保留时间相同的色谱峰，按外标法以峰面积计算，确定供试品中α-托品醇的含量；
色谱条件：
色谱柱：聚乙二醇为固定液或极性相近的毛细管柱，推荐DB-WAX， 30m×0.32mm×0.5μm；
柱温：80℃保持3分钟，然后以每分钟15℃升温至200℃，保持5分钟；
载气：N2；
分流比：3:1；
流速：3.0mL/min；
进样口温度：240℃；
检测器(FID)温度：250℃；
进样量：1μL。
根据供试品溶液中α-托品醇的峰面积确定其含量，检测结果为未检出。
实施例6：
本实施例盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法为采用气相色谱法进行检测，包括以下步骤：
供试品溶液的配制：取盐酸托烷司琼注射液置水浴上蒸干，用甲醇溶解转移至量瓶中并定容，制成含托烷司琼10mg/mL的溶液；
对照品溶液的配制：取α-托品醇对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成50μg/mL的溶液；
分别取供试品溶液和对照品溶液，直接进样，采集色谱图；
供试品溶液的色谱图中如有与α-托品醇保留时间相同的色谱峰，按外标法以峰面积计算，确定供试品中α-托品醇的含量；
色谱条件：
色谱柱：聚乙二醇为固定液或极性相近的毛细管柱，推荐DB-WAX，30m×0.32mm×0.5μm；
柱温：80℃保持3分钟，然后以每分钟15℃升温至200℃，保持5分钟；
载气：N2；
分流比：3:1；
流速：1.5mL/min；
进样口温度：200℃；
检测器(FID)温度：260℃；
进样量：1μL。
根据供试品溶液中α-托品醇的峰面积确定其含量，检测结果为未检出。
实施例7：
本实施例盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法为采用气相色谱法进行检测，包括以下步骤：
供试品溶液的配制：取盐酸托烷司琼注射液置水浴上蒸干，用甲醇溶解转移至量瓶中，加入α-托品醇制备成0.3μg/mL的α-托品醇溶液，定容，摇匀；
对照品溶液的配制：取α-托品醇对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成 5μg/mL的溶液；
分别取供试品溶液和对照品溶液，直接进样，采集色谱图；
供试品溶液的色谱图中如有与α-托品醇保留时间相同的色谱峰，按外标法以峰面积计算，确定供试品中α-托品醇的含量；
色谱条件：
色谱柱：聚乙二醇为固定液或极性相近的毛细管柱，本实施例选用DB-WAX， 30m×0.32mm×0.5μm；
柱温：80℃保持3分钟，然后以每分钟15℃升温至200℃，保持5分钟；
载气：N2；
分流比：3:1；
流速：1.5mL/min；
进样口温度：200℃；
检测器(FID)温度：250℃；
进样量：1μL。
根据供试品溶液中α-托品醇的峰面积确定其含量，检测结果表明，检测限为 0.09μg/mL。
为了确认本发明的检测方法的准确性及灵敏性，以方法学对本发明的检测方法进行验证试验：
以实施例1为例，分别从专属性、检测限与定量限、线性和范围、精密度、准确度、溶液稳定性方面进行了方法学验证，结果如下：
(1)专属性
取空白溶液(甲醇)、空白辅料、盐酸托烷司琼、α-托品醇定位溶液各进样1针。结果表明(图3～图6)，空白溶液、空白辅料、盐酸托烷司琼在α-托品醇出峰处无干扰。
专属性结果
(2)检测限与定量限
取α-托品醇对照品适量，精密称定，用稀释液溶解并稀释制成0.1mg/ml的溶液，再按逐级向下稀释。当信噪比不小于10时确定为定量限的浓度，当信噪比不小于3时确定为检测限浓度。
定量限、检测限结果
结果表明(图7、图8)，本方法定量限为0.31μg/ml，检测限为0.09μg/ml，方法灵敏度高。
(3)线性和范围
取α-托品醇对照品储备液，依次稀释成0.3μg/ml、2.0μg/ml、4.0μg/ml、5.0μg/ml、7.5μg/ml、10.0μg/ml浓度的溶液，依法检测，测得浓度线性关系。
由图9～图15可知，α-托品醇从定量限(0.3μg/ml)到10.0μg/ml(限度的200％) 浓度范围内，α-托品醇峰面积与浓度呈线性关系，线性相关系数R2为0.9993。
(4)精密度
取盐酸托烷司琼注射液，置于蒸发皿中在水浴上蒸干，用稀释液溶解并转移至量瓶中，加入α-托品醇储备液稀释至刻度并定容，摇匀。重复配制6份加样供试品溶液，依法测定结果。
精密度验证结果
结果表明(图16～图21)，6份重复性溶液，α-托品醇保留时间一致，且6份供试液含量的RSD符合要求(RSD≤10％)，证明本方法精密度良好。
(5)准确度
取α-托品醇储备液，分别加入供试品中，制成低、中、高三种加样浓度溶液，依法测定结果。
准确度验证结果
由试验结果(图22～图30)可知，在低、中、高浓度测试液中，α-托品醇的平均回收率为104.51％～110.84％，符合回收率要求(80％～120％)，该方法准确度良好。
(6)溶液稳定性
取加样供试品溶液放置24小时，分别在不同时间段取样检测，结果如下：
溶液稳定性验证结果
结果表明(图31～图36)，α-托品醇的对照品及加样供试品溶液在24小时内稳定。
Claims (8)
1.一种盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法，该方法为采用气相色谱法进行检测，其特征在于：包括以下步骤
(1)供试品溶液的配制：取盐酸托烷司琼注射液置于水浴上蒸干，用甲醇溶解转移至量瓶中并定容，制成含托烷司琼1mg/mL～10mg/mL的溶液；
(2)对照品溶液的配制：取α-托品醇对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成5μg/mL～50μg/mL的溶液；
(3)检测：分别取供试品溶液和对照品溶液，直接进样，采集色谱图；
色谱条件：
色谱柱：DB-WAX，30m×0.32mm×0.5μm；
柱温：程序升温至60～100℃保持3分钟，然后以每分钟10～20℃升温至200℃，保持5分钟；
载气：N2；
分流比：1:1～3:1；
流速：1.0ml/min～3.0ml/min；
进样口温度：200～240℃；
检测器：氢火焰离子化检测器，温度：240～260℃；
进样方式：直接进样；
进样量：1μl；
供试品溶液的色谱图中如有与α-托品醇保留时间相同的色谱峰，按外标法以峰面积计算，确定供试品中α-托品醇的含量；
(4)结果计算：
含量＝(CR/Cx)×(Ax/AR)，
式中：CR为对照品溶液的浓度，Cx为供试品溶液的浓度，AR为α-托品醇对照品的峰面积，Ax为供试品中α-托品醇的峰面积。
2.根据权利要求1所述的盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法，其特征在于：所述供试品溶液的浓度为1mg/mL。
3.根据权利要求1所述的盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法，其特征在于：所述对照品溶液的浓度为5μg/mL。
4.根据权利要求1所述的盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述柱温的程序升温至80℃保持3分钟，然后以每分钟15℃升温至200℃，保持5分钟。
5.根据权利要求1所述的盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述分流比3:1。
6.根据权利要求1所述的盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述流速为1.5mL/min。
7.根据权利要求1所述的盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述进样口温度为200℃。
8.根据权利要求1所述的盐酸托烷司琼注射液中杂质a-托品醇的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述检测器温度为250℃。
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