CN110161135A - 续断标准汤剂的制备方法及其检测方法 - Google Patents

续断标准汤剂的制备方法及其检测方法 Download PDF

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CN110161135A CN201810357340.8A CN201810357340A CN110161135A CN 110161135 A CN110161135 A CN 110161135A CN 201810357340 A CN201810357340 A CN 201810357340A CN 110161135 A CN110161135 A CN 110161135A
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Abstract

本发明涉及中药现代化领域，具体涉及一种续断标准汤剂的制备方法及检测方法。本发明提供了一种续断标准汤剂的制备方法，包含下述步骤：取续断药材，加水煎煮，过滤得到滤液；将滤液浓缩干燥，然后进行冻干，所述冻干分成三个阶段：a.预冻：预冻温度为‑50℃～‑45℃；b.一次干燥：干燥温度为‑20℃～0℃；c.二次干燥：干燥温度为5～25℃，得到续断标准汤剂，所述续断标准汤剂的出膏率为32.30‑59.98％，经过6个月加速稳定性试验，含量相对稳定，水分含量相对稳定，耐吸潮，未产生杂质成分；本发明提供川续断皂苷VI的质量含量及转移率、特征图谱的检测方法，专属性好，重复性良好，稳定性良好，为中药配方颗粒的质量提供标准，实现了中药配方颗粒的质量控制和有效监督。

Description

续断标准汤剂的制备方法及其检测方法
技术领域
本发明涉及中药现代化领域，具体涉及一种续断标准汤剂的制备方法及其检测方法。
背景技术
中药材续断为川续断科植物川续断Dipsacus asperWall.ex Henry的干燥根，又名和尚头，因能"续折接骨"而得名，其性温，味苦、辛，有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏的功效，可用于治疗腰膝酸软、风湿痹痛、崩漏、胎漏、跌扑损伤的病症。
标准汤剂又称标准煎液，是一种传统的临床广泛使用的用药形式，标准汤剂系遵循中医药理论，按照临床汤剂煎煮方法规范化煎煮，固液分离，经适当浓缩制备或经适宜方法干燥制得，作为衡量中药配方颗粒是否与临床汤剂基本一致的标准参照物。
由于标准汤剂是连接传统中药饮片和现代中药制剂的“桥梁”，为控制中药终端产品的质量提供了参照物，为标化中药不同用药形式，确保质量的均一性、疗效的一致性提供了参照物，为评价不同厂家产品质量的一致性提供了参照物，因此，中药标准汤剂质量标准的制定将为所有源于饮片的水煎剂的终产品的质量标准的制定提供基础。
目前，现有技术中控制续断配方颗粒质量的方法主要为高效液相色谱分析法测定川续断皂苷VI的含量、生物碱类成分的薄层鉴别，对其质量的控制不够全面，不能从整体上反映续断标准汤剂的质量，进而不能对续断配方颗粒的质量控制提供参考。
发明内容
为此，本发明针对上述问题提供了一种续断标准汤剂的制备方法及其检测方法，以对中药配方颗粒的质量控制与标准研究进行规范，实现中药配方颗粒整体的质量控制和有效监督，并可为续断配方颗粒的质量控制提供参考。
本发明提供了一种续断标准汤剂的制备方法，其包含下述步骤：
(1)取续断药材，加水煎煮，过滤得到滤液；
(2)将步骤(1)中滤液浓缩干燥，然后进行冻干，所述冻干分成三个阶段：a.预冻：预冻温度为-50℃～-45℃；b.一次干燥：干燥温度为-20℃～0℃；c.二次干燥：干燥温度为5～25℃，得到续断标准汤剂。
本发明提供了一种上述续断标准汤剂质量含量及转移率的检测方法，其包含下述步骤：
(1)参照物溶液的制备：
称取川续断皂苷VI适量，加甲醇制成溶液；
(2)供试品溶液的制备：
取续断标准汤剂适量，加入溶剂进行提取；
(3)高效液相色谱分析
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为水，流动相B为乙腈，吸取对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪进行分析。
本发明提供了一种上述续断标准汤剂的特征图谱的检测方法，其包含下述步骤：
(1)参照物溶液的制备：
称取马钱苷酸对照品、绿原酸对照品、咖啡酸对照品、马钱苷对照品、当药苷对照品、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品、川续断皂苷VI对照品，加甲醇制成溶液；
(2)供试品溶液的制备：
取续断标准汤剂，加入溶剂进行提取；
(3)超高效液相色谱分析
吸取对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以水相为流动相B进行梯度洗脱，得到续断标准汤剂的特征图谱。
具体来说，本发明提出了如下技术方案。
本发明提供了一种续断标准汤剂的制备方法，其包含下述步骤：
(1)取续断药材，加水煎煮，过滤得到滤液；
(2)将步骤(1)中滤液浓缩干燥，然后进行冻干，所述冻干分成三个阶段：a.预冻：预冻温度为-50℃～-45℃；b.一次干燥：干燥温度为-20℃～0℃；c.二次干燥：干燥温度为5～25℃，得到续断标准汤剂。
优选的，对于所述的制备方法，其中，在步骤(1)中，所述加水煎煮次数为1～3次。
优选的，对于所述的制备方法，其中，所述煎煮次数为2次，第一次煎煮加9～10倍量的水，优选为10倍量的水，第二次煎煮加6～8倍量的水，优选为7倍量的水。
优选的，对于所述的制备方法，其中，第一次煎煮时间为30～60min，优选为30min，第二次煎煮时间为20～40min，优选为20min。
优选的，对于所述的制备方法，其中，在步骤(1)中，所述过滤采用100～300目筛网进行过滤，优选为300目筛网进行过滤。
优选的，对于所述的制备方法，其中，在步骤(2)中，预冻时间为3-6小时，优选为3小时；一次干燥时间为10-14小时，优选为12小时；二次干燥时间为5～7小时，优选为7小时。
优选的，对于所述的制备方法，其中，在步骤(2)中，所述滤液浓缩干燥的干燥温度为50～65℃。
优选的，对于所述的制备方法，其中，所述续断标准汤剂的出膏率为32.30～59.98％。
本发明提供了一种所述续断标准汤剂质量含量及转移率的检测方法，其包含下述步骤：
(1)参照物溶液的制备：
称取川续断皂苷VI，加甲醇制成溶液；
(2)供试品溶液的制备：
取续断标准汤剂，加入溶剂进行提取；
(3)高效液相色谱分析
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为水，流动相B为乙腈，吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪进行分析。
优选的，对于所述的检测方法，其中，步骤(2)中，所述溶剂选自于水、稀乙醇、75％乙醇、乙醇、50％甲醇、75％甲醇和甲醇中的一种，优选为75％甲醇。
优选的，对于所述的检测方法，其中，步骤(2)中，所述提取采用回流、溶解或超声中的一种进行提取，优选为超声提取。
优选的，对于所述的检测方法，其中，步骤(2)中，所述提取的提取时间15-45min，优选为30min。
优选的，对于所述的检测方法，其中，步骤(3)中，所述水：乙腈的体积比为65-75：35-25，优选为70:30。
优选的，对于所述的检测方法，其中，按干燥品计，所述川续断皂苷VI的质量含量为7.07～13.13％。
优选的，对于所述的检测方法，其中，所述川续断皂苷VI的转移率为47.42～88.06％。
本发明提供了一种续断标准汤剂的特征图谱的检测方法，其包含下述步骤：
(1)参照物溶液的制备：
分别称取马钱苷酸、绿原酸、咖啡酸、马钱苷、当药苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及川续断皂苷VI对照品，加甲醇制成溶液；
(2)供试品溶液的制备：
取续断标准汤剂，加入溶剂进行提取；
(3)超高效液相色谱分析
吸取对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以水相为流动相B进行梯度洗脱，得到续断标准汤剂的特征图谱。
优选的，对于所述的检测方法，其中，步骤(2)中，所述溶剂选自于水、95％乙醇、75％乙醇、稀乙醇、甲醇、75％甲醇、50％甲醇中的一种，优选为水。
优选的，对于所述的检测方法，其中，步骤(2)中，所述提取采用回流提取、超声提取或溶解提取中的一种，优选为溶解提取。
优选的，对于所述的检测方法，其中，步骤(3)中，所述水相选自于水、0.1％的磷酸水溶液或者0.05％的磷酸水溶液，优选为0.05％的磷酸水溶液。
优选的，对于所述的检测方法，所述特征图谱不少于11个，优选的，所述特征图谱不少于14个。
优选的，对于所述的检测方法，其中，以川续断皂苷VI峰对应的峰作为S峰，各特征峰与S峰的相对保留时间在规定值的±10％之内。
优选的，对于所述的检测方法，其中，在所述14个特征峰中，有8个特征峰指认为：马钱苷酸、绿原酸、咖啡酸、马钱苷、当药苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及川续断皂苷VI。
本发明所取得的有益效果：
1、本发明为中药配方颗粒的质量提供了一个标准，实现了中药配方颗粒整体的质量控制和有效监督。
2、本发明采用续断药材制备续断标准汤剂，所述续断标准汤剂的出膏率为32.30～59.98％，出膏率较高，经过6个月加速稳定性试验，川续断皂苷含量、水分含量相对稳定、特征图谱相对保留时间及相对峰面积相对稳定，耐吸潮，未产生杂质成分，将所制备得到的续断标准汤剂进行高效液相色谱及超高效液相色谱分析，所述方法专属性好，重复性良好，稳定性好。
3、本发明建立的特征图谱方法，采用超高相液相色谱，具有简便、稳定、精密度高及重现性好等特点，而且所得标准汤剂指纹图谱的峰多，峰型好，易于鉴别，准确可靠。
4、本发明建立的特征图谱方法，方法简单省时，环保，对一批制剂的分析仅用27min，能大大缩短检测分析时间，提高生产效率，使得大样本抽样检测，实时监控产品的质量成为可能；此外，在有机溶剂使用方面，现有的常规方法需消耗有机溶剂约2L，而本发明仅需其十分之一，大大减少了溶剂的消耗，更加节能环保。
附图说明
图1-1为实施例一续断标准汤剂质量含量和转移率的检测方法中流动相乙腈与水的体积比为35:65的高效液相色谱图；
图1-2为实施例一续断标准汤剂质量含量和转移率的检测方法中流动相乙腈与水的体积比为25:75的高效液相色谱图；
图1-3为实施例一续断标准汤剂质量含量和转移率的检测方法中流动相乙腈与水的体积比为30:70的高效液相色谱图，其中，图中的20.160是川续断皂苷VI的保留时间；
图2为实施例一续断标准汤剂质量含量和转移率的检测方法中不同提取溶剂的高效液相色谱对比图，其中，图中的21.022是川续断皂苷VI的保留时间；
图3为实施例一续断标准汤剂质量含量和转移率的检测方法中不同提取方式的高效液相色谱对比图，其中，图中的21.165是川续断皂苷VI的保留时间；
图4为实施例一续断标准汤剂质量含量和转移率的检测方法中不同提取时间的高效液相色谱对比图，其中，图中的20.278是川续断皂苷VI的保留时间；
图5为实施例一续断标准汤剂的川续断皂苷VI的质量含量谱图；
图6为实施例一续断标准汤剂质量含量和转移率的检测方法中专属性考察的高效液相色谱对比图；
图7是实施例一续断标准汤剂质量含量和转移率的检测方法中不同流速的高效液相色谱对比图，其中，图中的20.741是川续断皂苷VI的保留时间；
图8是实施例一续断标准汤剂质量含量和转移率的检测方法中不同柱温的高效液相色谱对比图，其中，图中的18.598是川续断皂苷VI的保留时间；
图9是实施例一续断标准汤剂质量含量和转移率的检测方法中不同色谱柱的高效液相色谱对比图，其中，图中的17.173是川续断皂苷VI的保留时间；
图10-1为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液的续断标准汤剂的超高效液相色谱图；
图10-2为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中流动相为乙腈-水的续断标准汤剂的超高效液相色谱图；
图10-3为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中流动相为乙腈-0.05磷酸水溶液的续断标准汤剂的超高效液相色谱图；
图10-4为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中流动相为乙腈-0.05磷酸水溶液的马钱苷酸对照品超高效液相色谱图；
图10-5为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中流动相为乙腈-0.05磷酸水溶液的绿原酸对照品超高效液相色谱图；
图10-6为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中流动相为乙腈-0.05磷酸水溶液的咖啡酸对照品超高效液相色谱图；
图10-7为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中流动相为乙腈-0.05磷酸水溶液的马钱苷对照品超高效液相色谱图；
图10-8为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中流动相为乙腈-0.05磷酸水溶液的当药苷对照品超高效液相色谱图；
图10-9为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中流动相为乙腈-0.05磷酸水溶液的3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品超高效液相色谱图；
图10-10为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中流动相为乙腈-0.05磷酸水溶液的4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品超高效液相色谱图；
图10-11为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中流动相为乙腈-0.05磷酸水溶液的川续断皂苷对照品超高效液相色谱图；
图11-1为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中提取溶剂为水的超高效液相色谱图；
图11-2为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中提取溶剂为稀乙醇的超高效液相色谱图；
图11-3为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中提取溶剂为75％乙醇的超高效液相色谱图；
图11-4为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中提取溶剂为95％乙醇的超高效液相色谱图；
图11-5为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中提取溶剂为50％甲醇的超高效液相色谱图；
图11-6为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中提取溶剂为75％甲醇的超高效液相色谱图；
图11-7为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中提取溶剂为甲醇的超高效液相色谱图；
图12-1为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中提取方式为超声的超高效液相色谱图；
图12-2为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中提取方式为回流的超高效液相色谱图；
图12-3为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中提取方式为直接溶解的超高效液相色谱图；
图13为实施例一所制备得到的续断标准汤剂特征图谱示意图；
图14-1为实施例一样品编号为1特征图谱的检测方法中精密度实验的超高效液相色谱图；
图14-2为实施例一样品编号为2特征图谱的检测方法中精密度实验的超高效液相色谱图；
图14-3为实施例一样品编号为3特征图谱的检测方法中精密度实验的超高效液相色谱图；
图14-4为实施例一样品编号为4特征图谱的检测方法中精密度实验的超高效液相色谱图；
图14-5为实施例一样品编号为5特征图谱的检测方法中精密度实验的超高效液相色谱图；
图14-6为实施例一样品编号为6特征图谱的检测方法中精密度实验的超高效液相色谱图；
图15-1为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中0小时下稳定性实验的超高效液相色谱图；
图15-2为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中2小时下稳定性实验的超高效液相色谱图；
图15-3为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中4小时下稳定性实验的超高效液相色谱图；
图15-4为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中6小时下稳定性实验的超高效液相色谱图；
图15-5为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中8小时下稳定性实验的超高效液相色谱图；
图15-6为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中10小时下稳定性实验的超高效液相色谱图；
图16-1为实施例一样品编号为1的特征图谱的检测方法中重复性实验的超高效液相色谱图；
图16-2为实施例一样品编号为2的特征图谱的检测方法中重复性实验的超高效液相色谱图；
图16-3为实施例一样品编号为3的特征图谱的检测方法中重复性实验的超高效液相色谱图；
图16-4为实施例一样品编号为4的特征图谱的检测方法中重复性实验的超高效液相色谱图；
图16-5为实施例一样品编号为5的特征图谱的检测方法中重复性实验的超高效液相色谱图；
图16-6为实施例一样品编号为6的特征图谱的检测方法中重复性实验的超高效液相色谱图；
图17-1为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中色谱柱为Acquity UPLCBEH C18的超高效液相色谱图；
图17-2为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中色谱柱为Acquity UPLCT3的超高效液相色谱图；
图17-3为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中色谱柱为Hypersil GOLD的超高效液相色谱图；
图18-1为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中柱温为25℃的超高效液相色谱图；
图18-2为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中柱温为30℃的超高效液相色谱图；
图18-3为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中柱温为35℃的超高效液相色谱图；
图19-1为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中流速为0.25ml/min的超高效液相色谱图；
图19-2为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中流速为0.30ml/min的超高效液相色谱图；
图19-3为实施例一续断标准汤剂特征图谱的检测方法中流速为0.35ml/min的超高效液相色谱图；
图20-1为实施例一中加速稳定性试验的续断标准汤剂加速0个月所对应的谱图；
图20-2为实施例一中加速稳定性试验的续断标准汤剂加速1个月所对应的谱图；
图20-3为实施例一中加速稳定性试验的续断标准汤剂加速2个月所对应的谱图；
图20-4为实施例一中加速稳定性试验的续断标准汤剂加速3个月所对应的谱图；
图20-5为实施例一中加速稳定性试验的续断标准汤剂加速6个月所对应的谱图；
图21为实施例二续断标准汤剂中川续断皂苷VI的质量含量的谱图；
图22为实施例二续断标准汤剂的特征图谱示意图；
图23为实施例三续断标准汤剂中川续断皂苷VI的质量含量的谱图；
图24为实施例三续断标准汤剂的特征图谱示意图；
图25为实施例四续断标准汤剂中川续断皂苷VI的质量含量的谱图；
图26为实施例四续断标准汤剂的特征图谱示意图。
具体实施方式
术语“稀乙醇”是采用《中国药典一部》中附录XVB试液进行制备，即取乙醇529ml，加水稀释至1000ml，即得。本液在20℃时含C2H5OH应为49.5％～50.5％(ml/ml)。
如上所述，本发明提供了一种续断标准汤剂的制备方法，其包含下述步骤：
(1)取续断药材，加水煎煮，过滤得到滤液；
(2)将步骤(1)中滤液浓缩干燥，然后进行冻干，所述冻干分成三个阶段：a.预冻：预冻温度为-50℃～-45℃；b.一次干燥：干燥温度为-20℃～0℃；c.二次干燥：干燥温度为5～25℃，得到续断标准汤剂。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，在步骤(1)中，续断药材在加水之前，需要进行洗净、润透及切片操作，在加水之后煎煮之前，进行浸泡，浸泡时间为30min。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，在步骤(1)中，所述过滤是趁热过滤，所述过滤采用100～300目筛网进行过滤，优选为300目进行过滤。
优选的，所述筛网为泰勒筛网(美国泰勒公司)或滤布(新乡中新化工有限责任公司)。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，在步骤(2)中，将滤液进行减压浓缩，在温度为50-65℃下进行浓缩，浓缩至密度为1.03～1.04g/ml，调节固含量为13-14％。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，在步骤(2)中，预冻时间为3-6小时，优选为3小时；一次干燥时间为10-14小时，优选为12小时；二次干燥时间为5～7小时，优选为7小时。
在本发明优选的一种具体实施方式中，所述续断标准汤剂的水分质量含量为2-6％，优选为2.6-5.1％。
本发明提供了一种所述续断标准汤剂含量及转移率的检测方法，其包含下述步骤：
(1)参照物溶液的制备：
称取川续断皂苷VI，加甲醇制成溶液；
(2)供试品溶液的制备：
取续断标准汤剂，加入溶剂进行提取；
(3)高效液相色谱分析
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为水，流动相B为乙腈，吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪进行分析。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述流动相A与流动相B的体积比为65-75：35-25，优选为70:30。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述参照物溶液的制备方法为：取川续断皂苷VI适量，精密测定，加甲醇制成每1ml含1.5mg的溶液，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
所述供试品溶液的制备方法为：取续断标准汤剂1.0g，研细，精密称定0.1g，置具塞锥形瓶中，精密加入溶剂50ml，密塞，称定重量，采用回流或溶解或超声方式进行提取，优选为超声进行提取，放冷，再称定重量，用溶剂补足减失重量，摇匀，过滤得到滤液。
在本发明优选的一种具体实施方式中，进行川续断皂苷VI的质量含量及转移率的高效液相分析方法检测时，本发明可以采用0.9-1.1ml/min的流速进行检测，优选为1.0ml/min的流速进行检测。
在本发明优选的一种具体实施方式中，在进行川续断皂苷VI的质量含量及转移率的高效液相色谱分析方法检测时，本发明可以采用25-35℃的柱温进行检测，优选为30℃下进行检测。
在本发明较优选的一种具体实施方式中，在进行川续断皂苷VI的质量含量及转移率的高效液相色谱分析方法检测时，本发明可以采用Innertsil ODS-HL、Agilent TC-C18(2)或Waters XelectHSS T3进行检测，优选采用Innertsil ODS-HL进行检测。
本发明提供了一种续断标准汤剂的特征图谱的检测方法，其包含下述步骤：
(1)参照物溶液的制备：
分别称取马钱苷酸、绿原酸、咖啡酸、马钱苷、当药苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及川续断皂苷VI对照品，加甲醇制成溶液；
(2)供试品溶液的制备：
取续断标准汤剂，加入溶剂进行提取；
(3)超高效液相色谱进行分析
吸取对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以水相为流动相B进行梯度洗脱，得到续断标准汤剂的特征图谱。
在本发明优选的一种具体实施方式中，所述参照物溶液的制备方法为：分别称取马钱苷酸、绿原酸、咖啡酸、马钱苷、当药苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及川续断皂苷VI对照品，精密测定，加甲醇制成每1ml含0.1mg相应对照品的溶液，即得。
所述供试品溶液的制备方法为：取续断标准汤剂2.0g，研细，精密称定0.45g，放入50ml容量瓶中，加入溶剂，采用回流或溶解或超声方式进行提取，优选为溶解进行提取，再称定重量，用溶剂补足减失重量，摇匀，过滤得到滤液。
在本发明优选的一种具体实施方式中，流动相A为乙腈，流动相B为水相进行梯度洗脱，所述水相选自于水、0.1％的磷酸水溶液或0.05％的磷酸水溶液，优选为0.05％的磷酸水溶液，其中，在0～22min内，流动相A为7→40，流动相B为93→60；22～23min内，流动相A为40→70，流动相B为60→30；23～24min内，流动相A为70→30，流动相B为30→70；24～25min内，流动相A为30→95，流动相B为70→5，25～27min内，流动相A为95→95，流动相B为5→5。
在本发明优选的一种具体实施方式中，进行特征图谱的测定时，本发明可以采用Acquity UPLC BEH C18、Acquity UPLC T3或Hypersil GOLD进行测定。
在本发明优选的一种具体实施方式中，进行特征图谱的测定时，本发明可以采用0.25-0.35ml/min的流速，优选为0.35ml/min的流速进行检测。
在本发明优选的一种具体实施方式中，在进行特征图谱的测定时，本发明可以采用1-5μl的进样量，优选为1μl的进样量进行检测。
在本发明优选的一种具体实施方式中，在进行特征图谱的测定时，本发明可以采用20-35℃的柱温进行检测，优选柱温为30℃进行检测。
下面通过实施例对本发明所述的续断标准汤剂的制备方法及其检测方法作进一步说明。实施例所用的试剂，未特殊说明的，均为常规的试剂，其中，实施例所用到的原料信息及实验设备的信息分别如表1和表2所示：
表1本发明所用到的原料信息
表2本发明所用的实验设备的信息
设备 型号 生产厂家
机械式分体煎药壶 YMW 潮州市港钿工艺制作厂
旋转蒸发仪 Bμchi-R100 瑞士步琦有限公司
旋转蒸发仪 YRE-501 巩义市予华仪器有限责任公司
循环水真空泵 SHZ-DⅢ 巩义市予华仪器有限责任公司
低温冷却液循环水泵 DLSB-5/20 郑州长城科工贸有限公司
冻干机 TRL-0.5 大连双瑞科技有限公司
电子天平 HLD-30002 杭州友恒称重仪器有限公司
数控超声波清洗仪 KQ-500DA 昆山市超声仪器有限公司
超高效液相色谱仪 VANQUISH 赛默飞
电子天平 AL104/ML204 梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司
高效液相色谱仪 WatersACQUITY/HClass 沃特世科技有限公司
电热鼓风干燥箱 101-2A 上海恒科学仪器有限公司
高效液相色谱仪 Agilent1100 美国安捷伦科技公司
电子天平 HLD-30002 杭州友恒称重仪器有限公司
电子天平 S225D 赛多利斯科学仪器(北京)有限公司
数显恒温水浴锅 HH-4/HH-6 常州普天仪器制造有限公司
实施例一
1.续断标准汤剂的制备方法
(1)取续断饮片100g，加水煎煮两次，第一煎加10倍量的水，浸泡30min后开始煎煮，开武火(500W)，待煮沸后，调为文火(200W)煎煮30min，趁热用300目滤布过滤，滤液水浴冷却，第二煎加7倍量的水，开武火(500W)，待煮沸后，调为文火(200W)煎煮20min，趁热用300目滤布进行过滤，合并两次滤液；
(2)将滤液转移至旋转蒸发仪中浓缩(水浴温度：65℃，真空度为-0.08～-0.09MPa)，浓缩至密度为1.03g/ml，调节固含量至13％，然后转移至真空冷冻干燥机中，先进行预冻，预冻温度为-45℃，预冻时间为3h，然后进行一次干燥，干燥温度依次为-20℃，-10℃，0℃，干燥时间分别为7h，2h，3h，接着进行二次干燥，干燥温度依次为5℃，15℃，25℃，干燥时间分别为2h，2h，3h，取出，得到续断标准汤剂，所述续断的出膏率按公式出膏率＝5ml浓缩液蒸干后固体质量*浓缩液总质量/(5ml浓缩液质量*饮片投料量)*100％，经计算，得出膏率为59.98％，所述续断标准汤剂的水分质量含量按照下述公式进行计算：水分质量含量＝水份重/样品重*100％，得到续断标准汤剂的水分质量含量为2.6％。
2.续断标准汤剂的川续断皂苷VI的质量含量及转移率的测定方法
其中，川续断皂苷VI的质量含量＝样品峰面积*对照品浓度*样品定容体积50ml/(对照品峰面积*标准汤剂取样量0.1g*(1-标汤水分))*100％；
川续断皂苷VI的转移率＝干燥标准汤剂川续断皂苷VI的总量*标准汤剂质量*(1-标准汤剂水分)/(干燥饮片川续断皂苷VI总量*饮片投料量*(1-饮片水分))*100％。
2.1对检测方法的条件的优化
(1)对照品溶液的制备
取川续断皂苷VI对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含1.5mg的溶液，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
(2)供试品溶液的制备
取实施例一中的样品1.0g，研细，精密称定0.1g，置具塞锥形瓶中，精密加入溶剂50ml，密塞，称定重量，进行提取处理一段时间，放冷，再称定重量，用有机溶剂补足减失重量，摇匀，滤过，取滤液，即得。
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水-乙腈为流动相，分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，进行测定，检测波长为212nm，理论塔板数按补川续断皂苷VI峰计算应不低于3000。
下面对检测方法中的实验条件进行考察：
A.流动相体积比例的考察
选择乙腈与水比例为35:65、25:75、30:70时样品的出峰情况，结果如图1-1至1-3所示。
从图1-1可以看出，当乙腈与水的体积比为35:65时，标准汤剂中川续断皂苷VI的分离效果较差，而当乙腈与水的体积比为25:75时，川续断皂苷VI在90min内则没有出峰，见图1-2，而乙腈与水的体积比为30:70，峰型较好，分离效果较好，见图1-3，因此选择乙腈与水的体积比为30:70。
B.供试品溶液的制备
Ⅰ不同提取溶剂的考察
取实施例一制备得到的续断标准汤剂1.0g，研细，精密称定0.1g，平行2份，置具塞锥形瓶中，精密加入水、稀乙醇、75％乙醇、乙醇、50％甲醇、75％甲醇、甲醇各50ml，密塞，称定重量，分别超声(功率250W，频率50kHz)处理30分钟，放冷，再称定重量，用相应的溶剂补足减失的重量，摇匀、滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取各供试液20μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，得川续断皂苷VI的含量，结果见表3及图2。
表3不同提取溶剂的考察
从表3及图2可以看出，续断标准汤剂中川续断皂苷VI在50％甲醇及75％甲醇中的含量最高，而在稀乙醇、75％乙醇及甲醇中含量相近，在纯水、乙醇中含量较低，且峰形不好；最后综合考虑确定提取溶剂为75％甲醇。
Ⅱ不同提取方式的考察
取实施例一制备得到的续断标准汤剂1.0g，研细，精密称定0.1g，平行2份，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，密塞，称定重量，分别超声(功率250W，频率50kHz)处理30分钟、加热回流30分钟、直接振摇溶解，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀、滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取各供试液20μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，得川续断皂苷VI含量，结果见表4及图3。
表4不同提取方式的考察
从表4和图3可以看出，采用超声的方法进行提取时，川续断皂苷VI的含量为7.59，而采用回流的方法进行提取时，川续断皂苷VI的含量为7.75％，虽然采用回流方法川续断皂苷VI的含量较高，但考虑到实际操作的简便性，采用超声的方法进行提取。
Ⅲ不同提取时间的考察
取实施例一制备得到的续断标准汤剂约0.1g，平行2份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，密塞，称定重量，分别超声(功率250W，频率50kHz)处理15分钟、30分钟、45分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀、滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取各供试液10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，得川续断皂苷VI含量，结果见表5及图4。
表5不同提取时间的考察
从表5及图4可以看出，采用超声处理不同时间，川续断皂苷VI的含量差别不大，按照一般的操作习惯，确定提取时间为30min。
采用上述进行优化的条件进行检测，其谱图如图5所示，根据川续断皂苷VI的质量含量及转移率公式，得到川续断皂苷VI的质量含量为13.13％，川续断皂苷VI的转移率为88.06％。
2.2对检测方法的方法学的考察
a.专属性的考察
精密吸取续断标准汤剂供试品溶液、川续断皂苷VI对照品溶液与甲醇(阴性对照)各20μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，结果见图6。
从图6可以看出，该分析方法能正确检测川续断皂苷VI，不受提取溶剂的干扰。
b.重复性试验
取实施例一制备得到的续断标准汤剂，平行6份，每份进样2针，分别制成样品供试液，分别进样20μl，测定川续断皂苷VI面积值，计算其含量及RSD，结果见表6。
表6重复性试验
从表6可以看出，川续断皂苷VI的含量较稳定，重复性(RSD％＝0.50％)良好。
c.稳定性试验
取实施例一制备得到的续断标准汤剂1份，制备成供试品溶液，按时间点进样20μl，测定峰面积值，计算其RSD，考察24小时内的稳定性，结果见表7。
表7样品的稳定性试验测定结果
从表7可以看出，川续断皂苷VI的含量在24小时内较稳定，即样品供试液在24小时内稳定性良好(RSD为0.67％)。
d.流速的考察
取实施例一制备得到的续断标准汤剂样品1份，制备供试品溶液，考察0.9ml/min、1.0ml/min、1.1ml/min三个流速，结果如表8及图7所示。
表8不同流速的考察
从表8及图7可以看出，三种流速下色谱峰分离效果均较好。当流速为1.0ml/min时分析所需时间适中，因此本实验选择流速为1.0ml/min。
e.不同柱温的考察
取实施例一制备得到的续断标准汤剂样品1份，制备供试品溶液，考察25℃、30℃、35℃三个温度的分离效果，结果如表9及图8所示。
表9不同柱温的考察
序号 柱温(℃) 含量/％ RSD％
1 25 7.11
2 30 7.00 0.95
3 35 6.99
从表9及图8可以看出，在三种柱温下色谱峰分离效果均较好。柱温为30℃时分析所需时间适中，考虑到色谱柱的耐受性，本实验选择柱温为30℃。
f.不同色谱柱的考察
取实施例一制备得到的续断标准汤剂样品1份，制备供试品溶液，分别采用Innertsil ODS-HL(岛津，250×4.6mm，5μm)、Agilent TC-C18(2)(安捷伦，250×4.6mm，5μm)、Waters Xelect HSS T3(沃特世，250×4.6mm，5μm)三种色谱柱，对续断标准汤剂样品进行分析。结果如表10及图9。
表10不同色谱柱的考察
序号 不同色谱柱 含量/％ RSD％
1 InnertsilODS-HL 8.05
2 AgilentTC-C18(2) 7.82 1.94
3 WatersXelectHSST3 7.76
从表10及图9可以看出，三种不同型号色谱柱的分离效果均较好，保留时间适中，本实验采用Inertsil色谱柱。
3.续断标准汤剂的特征图谱的检测方法
3.1对检测方法的条件的优化
(1)参照品溶液的制备
取马钱苷酸对照品、绿原酸对照品、咖啡酸对照品、马钱苷对照品、当药苷对照品、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品、川续断皂苷VI对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg相应对照品的溶液，即得。
(2)供试品溶液的制备
取续断标准汤剂2.0g，研细，精密称定0.45g，放入50ml的容量瓶中，加入溶剂，进行提取处理一段时间，静置、定容、摇匀，滤过，取续滤液，即得。
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入液相色谱仪，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以水相为流动相B按照下表的浓度进行梯度洗脱，检测波长为220nm，进行测定，理论板数按川续断皂苷计算应不低于3000。
时间/min A％ B％
0-22 7→40 93→60
22-23 40→70 60→30
23-24 70→30 30→70
24-25 30→95 70→5
25-27 95→95 5→5
首先对检测方法的工艺条件进行优化，如下：
1)流动相体系的考察
以马钱苷酸对照品、绿原酸对照品、咖啡酸对照品、马钱苷对照品、当药苷对照品、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品、川续断皂苷VI对照品和实施例一制备得到的续断标准汤剂为样品，分别对乙腈-0.1％磷酸、乙腈-0.05％磷酸、乙腈-水进行对比考察，如图10-1至10-11所示。
从图10-1至10-2可知，使用流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液及乙腈-水的流动相时，续断标准汤剂的峰的信息不好，且峰型不好；而当流动相为乙腈-0.05％磷酸水溶液时，续断标准汤剂的峰的信息好，峰型很好，图10-4至图10-11是对照品的超高效液相色谱图，因此，选择乙腈-0.05％磷酸水溶液作为流动相。
2)供试品提取溶剂的考察
取续断标准汤剂适量，研细。取约2.0g，精密称定，分别加入水、95％乙醇、75％乙醇、稀乙醇、甲醇、75％甲醇、50％甲醇到50ml容量瓶中，超声处理30分钟，静置、定容，摇匀，滤过，取续滤液作为供试液，进行超高效液相色谱分析，如图11-1至7所示。
从图11-1至7可以看出，以水提取的样品峰信息多，色谱峰型较好，且各峰的响应值较好，故选取水作为提取溶剂。
3)供试品溶液提取方式的考察
取实施例一制备得到的续断标准汤剂约2.0g，精密称定，加入水于50ml容量瓶中，溶解，定容，摇匀，滤过，取续滤液作为供试液。
取实施例一制备得到的续断标准汤剂适量，研细。取约2.0g，精密称定，加入水50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试液。
取实施例一制备得到的续断标准汤剂约2.0g，精密称定，加入水50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试液。
将上述三种供试液注入超高效液相色谱仪进行分析，其结果如图12-1至12-3所示。
从图12-1至12-3可以看出，采用溶解、超声、回流三种提取方式中溶解峰信息多、色谱峰型较好，因此选择溶解作为供试液提取方式。
采用上述优化的工艺条件对续断标准汤剂进行特征图谱的测定，结果如图13所示。
由图13可以看出，续断药材的特征图谱中应有14个特征峰，以川续断皂苷VI峰对应的峰14作为S峰，各特征峰与S峰的相对保留时间应在规定值的±10％之内。规定值为：0.174(峰1)、0.212(峰2)、0.235(峰3)、0.261(峰4)、0.291(峰5)、0.312(峰6)、0.339(峰7)、0.360(峰8)、0.366(峰9)、0.604(峰10)、0.627(峰11)、0.670(峰12)、0.744(峰13)、1.000(峰S)。
并且，在所述14个特征峰中，有8个特征峰指认为：马钱苷酸、绿原酸、咖啡酸、马钱苷、当药苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及川续断皂苷VI，相对保留时间分别为：0.235(峰3)、0.291(峰5)、0.339(峰7)、0.360(峰8)、0.366(峰9)、0.627(峰11)、0.670(峰12)和1.000。
3.2对检测方法的方法学考察
ⅰ精密度考察
取实施例一制备得到的续断标准汤剂，制备成供试液，进样6次，每次1μl，考察特征峰相对保留时间和相对峰面积的一致性，结果见表11、图14-1至图14-6。
表11精密度实验结果(相对保留时间)
从表11、图14-1至图14-6可以看出，对于精密度实验的相对保留时间，其RSD＜0.4％，说明仪器精密度良好。
ⅱ稳定性考察
取实施例一制备得到的续断标准汤剂共6份，按供试品溶液制备方法制备成供试液，进样1μl分析，考察特征峰相对保留时间和相对峰面积的一致性，结果见表12、图15-1及图15-6。
表12稳定性实验结果(相对保留时间)
编号 0h 2h 4h 6h 8h 10h 平均值 RSD％
峰1 0.1725 0.1733 0.1720 0.1720 0.1718 0.1722 0.1723 0.32
峰2 0.2095 0.2104 0.2090 0.2088 0.2090 0.2092 0.2093 0.28
峰3 0.2329 0.2338 0.2325 0.2323 0.2327 0.2328 0.2328 0.22
峰4 0.2595 0.2602 0.2587 0.2588 0.2589 0.2592 0.2592 0.22
峰5 0.2899 0.2903 0.2891 0.2890 0.2890 0.2895 0.2895 0.19
峰6 0.3116 0.3117 0.3105 0.3104 0.3105 0.3108 0.3109 0.19
峰7 0.3420 0.3421 0.3413 0.3411 0.3411 0.3413 0.3415 0.13
峰8 0.3645 0.3646 0.3636 0.3633 0.3630 0.3634 0.3637 0.18
峰9 0.3717 0.3715 0.3705 0.3704 0.3676 0.3707 0.3704 0.40
峰10 0.6035 0.6036 0.6034 0.6030 0.6032 0.6029 0.6033 0.05
峰11 0.6265 0.6267 0.6263 0.6260 0.6262 0.6260 0.6263 0.04
峰12 0.6694 0.6697 0.6693 0.6691 0.6692 0.6690 0.6693 0.04
峰13 0.7437 0.7439 0.7435 0.7433 0.7436 0.7432 0.7435 0.03
峰14(S) 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 0.00
从表12、图15-1及图15-6可以看出，对于稳定性实验的保留时间，其RSD＜0.4％，说明样品在10小时内稳定性良好。
ⅲ重复性考察
取实施例一制备得到的续断标准汤剂，按供试品溶液制备方法制备成供试液，共测定24小时，分别进样1μl，考察特征峰相对保留时间和相对峰面积的一致性，结果见表13、图16-1及图16-6。
表13重复性实验结果(相对保留时间)
从表13、图16-1至图16-6可以看出，各特征峰的相对保留时间RSD均小于0.3％，说明该方法的保留时间重复性良好。
ⅳ.不同色谱柱的考察
考察三种不同填料的色谱柱AcquityUPLC BEH C18(Waters，250×4.6mm，5μm)、AcquityUPLC T3(Waters，250×4.6mm，5μm)、Hypersil GOLD(Shisedo，250×4.6mm，5μm)的分离效果，结果如图17-1至图17-3所示。
从图17-1至17-3可以看出，三种色谱柱的分离效果差别不大，可知色谱柱对物质的分离影响不大。
ⅴ.不同柱温的考察
在根据上述实验条件的基础上，分别对柱温为25℃、30℃、35℃时的分离效果进行考察，结果如图18-1至图18-3所示。
从图18-1至图18-3可以看出，柱温30℃时分离效果较好，因此选择较适宜的30℃为分离柱温。
ⅵ.不同流速的考察
在根据上述实验条件基础上，分别对流速为0.25ml/min、0.30ml/min、0.35ml/min时进行了考察，如图19-1至图19-3所示。
从图19-1至图19-3可以看出，流速0.35ml/min时，分离效果好，因此选择0.35ml/min作为较适宜的流速。
4续断标准汤剂的加速稳定性试验
将实施例1所得到的续断标准汤剂进行加速稳定实验。
加速稳定性试验条件：40℃±2℃、相对湿度75％±5％。结果如表14-1、表14-2、表14-3、图20-1至图20-6。
表14-1标汤稳定性实验结果(相对保留时间)
编号 0 1 2 3 6 平均值 RSD
峰1 0.1773 0.1778 0.1764 0.1767 0.1760 0.1768 0.40
峰2 0.2155 0.2165 0.2153 0.2154 0.2147 0.2155 0.31
峰3 0.2397 0.2406 0.2393 0.2397 0.2389 0.2396 0.27
峰4 0.2651 0.2662 0.2650 0.2652 0.2645 0.2652 0.24
峰5 0.2945 0.2954 0.2944 0.2944 0.2938 0.2945 0.20
峰6 0.3154 0.3162 0.3152 0.3152 0.3145 0.3153 0.20
峰7 0.3448 0.3456 0.3445 0.3445 0.3439 0.3447 0.18
峰8 0.3663 0.3674 0.3661 0.3660 0.3654 0.3662 0.20
峰9 0.3712 0.3722 0.3710 0.3709 0.3703 0.3711 0.18
峰10 0.6062 0.6068 0.6060 0.6056 0.6058 0.6061 0.08
峰11 0.6294 0.6298 0.6290 0.6286 0.6288 0.6291 0.08
峰12 0.6726 0.6773 0.6720 0.6717 0.6719 0.6731 0.07
峰13 0.7352 0.7453 0.7349 0.7347 0.7351 0.7370 0.63
峰14 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 0.00
表14-2标汤稳定性实验结果(相对峰面积)
表14-3加速稳定性试验结果(含量及水分)
时间 川续断皂苷VI含量/％ 水分/％
0 7.17 3.38
1月 7.20 3.29
2月 7.11 3.46
3月 7.12 3.35
6月 7.16 3.33
从结果如表14-1、表14-2、14-3、图20-1至图20-6可以看出，相对峰面积和相对保留时间相对稳定，水分、质量含量相对稳定稳定，耐吸潮，未产生杂质成分。
实施例二
1.续断标准汤剂的制备方法
(1)取续断饮片100g，加水煎煮两次，第一煎加10倍量的水，浸泡30min后开始煎煮，开武火(500W)，待煮沸后，调为文火(200W)煎煮30min，趁热用300目滤布过滤，第二煎加7倍量的水，开武火(500W)，待煮沸后，调为文火(200W)煎煮20min，趁热用300目滤布进行过滤，合并两次滤液；
(2)将滤液转移至旋转蒸发仪中浓缩(水浴温度：50℃，真空度为-0.08～-0.09MPa)，浓缩至密度为1.04g/ml，调节固含量至14％，然后转移至真空冷冻干燥机中，先进行预冻，预冻温度为-50℃，预冻时间为5h，然后进行一次干燥，干燥温度依次为-20℃，-10℃，0℃，干燥时间分别为7h，3h，4h，接着进行二次干燥，干燥温度依次为5℃，15℃，25℃，干燥时间分别为2h，2h，3h，取出，得到续断标准汤剂，所述续断的出膏率按实施例一中的公式进行计算，得到出膏率为56.72％，所述续断标准汤剂的水分质量含量按照实施例一的公式进行计算，得出续断标准汤剂的水分质量含量为5.1％。
2.续断标准汤剂的川续断皂苷VI的质量含量及转移率的检测方法
按照实施例一所述的检测方法对川续断皂苷VI的质量含量及转移率进行测定，其含量谱图如图21所示，按照实施例一中的质量含量及转移率的计算公式，其结果为：川续断皂苷VI的质量含量为11.97％，转移率为83.61％。
3.续断标准汤剂的特征图谱的测定方法
按照实施例一所述的检测方法测定续断标准汤剂的特征图谱，其相对保留时间和相对峰面积如表15所示，特征图谱如图22所示。
表15续断标准汤剂的相对保留时间和相对峰面积
从表15及图22可以看出，所述续断标准汤剂的特征图谱包含14个特征峰，各个峰的相对保留时间分别为：0.1783(峰1)，0.2165(峰2)，0.2409(峰3)，0.2664(峰4)，0.2956(峰5)，0.3165(峰6)，0.3457(峰7),0.3680(峰8)，0.3727(峰9)，0.6065(峰10)，0.6294(峰11)，0.6724(峰12)，0.7457(峰13)，1.000(峰14)。
并且，在所述14个特征峰中，有8个特征峰指认为：马钱苷酸、绿原酸、咖啡酸、马钱苷、当药苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及川续断皂苷VI，相对保留时间分别为：0.2409(峰3)、0.2956(峰5)、0.3457(峰7)、0.3680(峰8)、0.3727(峰9)、0.6294(峰11)、0.6724(峰12)和1.000。
实施例三
1.续断标准汤剂的制备方法
(1)取续断饮片100g，加水煎煮两次，第一煎加9倍量的水，浸泡30min后开始煎煮，开武火(500W)，待煮沸后，调为文火(200W)煎煮60min，趁热用100目滤布过滤，第二煎加6倍量的水，开武火(500W)，待煮沸后，调为文火(200W)煎煮40min，趁热用100目滤布进行过滤，合并两次滤液；
(2)将滤液转移至旋转蒸发仪中浓缩(水浴温度：65℃，真空度为-0.08～-0.09MPa)，浓缩至密度为1.03g/ml，调节固含量至14％，然后转移至真空冷冻干燥机中，先进行预冻，预冻温度为-45℃，预冻时间为6h，然后进行一次干燥，干燥温度依次为-20℃，-10℃，0℃，干燥时间分别为5h，2h，3h，接着进行二次干燥，干燥温度依次为5℃，15℃，25℃，干燥时间分别为2h，2h，1h，取出，得到续断标准汤剂，所述续断标准汤剂的出膏率按实施例一中的公式进行计算，得到出膏率为32.30％，所述续断标准汤剂的水分质量含量按照实施例一的公式进行计算，得出续断标准汤剂的水分质量含量为4.3％。
2.续断标准汤剂的川续断皂苷VI的质量含量及转移率的检测方法
按照实施例一所述的检测方法对川续断皂苷VI的质量含量及转移率进行测定，其含量谱图如图23所示，按照实施例一所述的质量含量及转移率的计算公式进行计算，其结果为：川续断皂苷的质量含量为7.07％，转移率为47.42％。
3.续断标准汤剂的特征图谱的测定方法
按照实施例一所述的检测方法测定续断标准汤剂的特征图谱，其相对保留时间和相对峰面积如表16所示，特征图谱如图24所示。
表16续断标准汤剂的相对保留时间和相对峰面积
从表16及图24可以看出，所述续断标准汤剂中包含14个特征峰，各个峰的相对保留时间分别为：0.1776(峰1)，0.2158(峰2)，0.2398(峰3)，0.2653(峰4)，0.2946(峰5)，0.3155(峰6)，0.3448(峰7),0.3666(峰8)，0.3714(峰9)，0.6053(峰10)，0.6248(峰11)，0.6715(峰12)，0.7458(峰13)，1.000(峰14)。
并且，在所述14个特征峰中，有8个特征峰指认为：马钱苷酸、绿原酸、咖啡酸、马钱苷、当药苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及川续断皂苷VI，相对保留时间分别为：0.2398(峰3)、0.2946(峰5)、0.3448(峰7)、0.3666(峰8)、0.3714(峰9)、0.6248(峰11)、0.6715(峰12)和1.000。
实施例四
1.续断标准汤剂的制备方法
(1)取续断饮片100g，加水煎煮两次，第一煎加9.5倍量的水，浸泡30min后开始煎煮，开武火(500W)，待煮沸后，调为文火(200W)煎煮30min，趁热用200目滤布过滤，第二煎加8倍量的水，开武火(500W)，待煮沸后，调为文火(200W)煎煮30min，趁热用200目滤布进行过滤，合并两次滤液；
(2)将滤液转移至旋转蒸发仪中浓缩(水浴温度：65℃，真空度为-0.08～-0.09MPa)，浓缩至密度为1.04g/ml，调节固含量至13％，然后转移至真空冷冻干燥机中，先进行预冻，预冻温度为-45℃，预冻时间为4h，然后进行一次干燥，干燥温度依次为-20℃，-10℃，0℃，干燥时间分别为7h，2h，3h，接着进行二次干燥，干燥温度依次为5℃，15℃，25℃，干燥时间分别为2h，2h，3h，取出，得到续断标准汤剂，所述续断标准汤剂的出膏率按实施例一的公式进行计算，得出膏率为51.37％，所述续断标准汤剂的水分质量含量按照实施例一的公式进行计算，得出续断标准汤剂的水分质量含量为3.5％。
2.续断标准汤剂的川续断皂苷VI的质量含量及转移率的检测方法
按照实施例一所述的检测方法对川续断皂苷VI的质量含量及转移率进行测定，其含量谱图如图25所示，按照实施例一所述的质量含量及转移率的计算公式进行计算，其结果为：川续断皂苷VI的质量含量为11.33％，转移率为80.01％。
3.续断标准汤剂的特征图谱的测定方法
按照实施例一所述的检测方法测定续断标准汤剂的特征图谱，其相对保留时间和相对峰面积如表17所示，特征图谱如图26所示。
表17续断标准汤剂的相对保留时间和相对峰面积
从表17及图26可以看出，以川续断皂苷VI峰对应的峰14作为S峰，各个峰的相对保留时间为：0.1773(峰1)，0.2155(峰2)，0.2397(峰3),0.2652(峰4)，0.2946(峰5),0.3155(峰6),0.3448(峰7),0.3663(峰8)，0.3712(峰9)，0.6062(峰10)，0.6294(峰11)，0.6727(峰12)，0.7455(峰13)、1.0000(峰14)。
并且，在所述14个特征峰中，有8个特征峰指认为：马钱苷酸、绿原酸、咖啡酸、马钱苷、当药苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及川续断皂苷VI，相对保留时间分别为：0.2397(峰3)、0.2946(峰5)、0.3448(峰7)、0.3663(峰8)、0.3712(峰9)、0.6294(峰11)、0.6727(峰12)和1.000。
对比例一
1.续断标准汤剂的制备方法
采用与实施例一相同的方法制备续断标准汤剂，其区别仅在于对比例一采用常规的冷冻干燥进行处理，得到续断标准汤剂，所述续断标准汤剂的出膏率为45.82％，所述续断标准汤剂的水分质量含量按照实施例一的公式进行计算，得出续断标准汤剂的水分质量含量为70-90％，说明该方法的冷冻干燥工艺不能有效去除水分。
2.续断标准汤剂的川续断皂苷的质量含量及转移率的检测方法
按照实施例一所述的检测方法对川续断皂苷VI的质量含量及转移率进行测定。其结果为：川续断皂苷VI的质量含量为10.3％，转移率为70.36％。
3.续断标准汤剂的特征图谱的测定方法
按照实施例一所述的检测方法测定续断标准汤剂的特征图谱，其包含14个，分别为0.173(峰1)、0.212(峰2)、0.235(峰3)、0.261(峰4)、0.291(峰5)、0.312(峰6)、0.339(峰7)、0.360(峰8)、0.366(峰9)、0.604(峰10)、0.627(峰11)、0.670(峰12)、0.744(峰13)、1.000(峰S)。
并且，在所述14个特征峰中，有8个特征峰指认为：马钱苷酸、绿原酸、咖啡酸、马钱苷、当药苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及川续断皂苷VI，相对保留时间分别为：0.235(峰3)、0.291(峰5)、0.339(峰7)、0.360(峰8)、0.366(峰9)、0.627(峰11)、0.670(峰12)和1.000。
4.续断标准汤剂的稳定性
续断标准汤剂在5℃保存7天，发霉，不能进行下一步试验。
实施例二至实施例四所得到的续断标准汤剂在进行加速稳定试验时，在6个月内含量相对稳定，水分含量相对稳定，耐吸潮，且未产生杂质成分，在进行川续断皂苷VI的质量含量及转移率的检测时，方法精密度高，重复性，能稳定性存在，进行续断标准汤剂的特征图谱的检测时，所述方法精密度高，重复性好，能够稳定性存在。
将本发明的实施例一与对比例一进行对比可以看出，使用现有技术中常规的方法进行冷冻，不能有效地去除标准汤剂的水分，且所得的续断标准汤剂在5℃保存7天就发霉，不能进行下一步的实验。
综上所述，本发明采用将续断加水煎煮，进行过滤得到滤液，将滤液进行浓缩干燥，接着进行冻干，冻干分成三个阶段：a.预冻：预冻温度为-50℃～-45℃；b.一次干燥：干燥温度为-20℃～0℃；c.二次干燥：干燥温度为5～25℃，得到续断标准汤剂，所得到的续断标准汤剂的出膏率为32.30-59.98％，出膏率较高，在进行加速稳定性实验时，经过6个月，含量相对稳定，水分含量稳定，耐吸潮，未产生杂质成分。将所制备得到的续断标准汤剂使用高效液相色谱分析进行川续断皂苷VI的质量含量及转移率的检测，其结果为：川续断皂苷VI的质量含量为7.07-13.13％，川续断皂苷VI的转移率为47.42-88.06％，并且采用所述的检测方法精密度高，重复性好，在24小时内样品供试品溶液的稳定性良好。
本发明采用超高效液相色谱法测定续断标准汤剂的特征图谱，所述续断标准汤剂中包含14个特征峰。采用所述的检测方法精密度高，重复性较好，稳定性良好。
以上所述，仅是本发明实施的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡在本发明的精神和原则之内所做的修改、等同替换和改进等，均需要包含在本发明的保护范围之内。

Claims (22)

1.一种续断标准汤剂的制备方法，其包含下述步骤：
(1)取续断药材，加水煎煮，过滤得到滤液；
(2)将步骤(1)中滤液浓缩干燥，然后进行冻干，所述冻干分成三个阶段：a.预冻：预冻温度为-50℃～-45℃；b.一次干燥：干燥温度为-20℃～0℃；c.二次干燥：干燥温度为5～25℃，得到续断标准汤剂。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，在步骤(1)中，所述加水煎煮次数为1～3次。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其中，所述煎煮次数为2次，第一次煎煮加9～10倍量的水，优选为10倍量的水，第二次煎煮加6～8倍量的水，优选为7倍量的水。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其中，第一次煎煮时间为30～60min，优选为30min，第二次煎煮时间为20～40min，优选为20min。
5.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，其中，在步骤(1)中，所述过滤采用100～300目筛网进行过滤，优选为300目筛网进行过滤。
6.根据权利要求1-5任一项所述的制备方法，其中，在步骤(2)中，预冻时间为3-6小时，优选为3小时；一次干燥时间为10-14小时，优选为12小时；二次干燥时间为5～7小时，优选为7小时。
7.根据权利要求1-6任一项所述的制备方法，其中，在步骤(2)中，所述滤液浓缩干燥的干燥温度为50～65℃。
8.根据权利要求1-7任一项所述的制备方法，其中，所述续断标准汤剂的出膏率为32.30～59.98％。
9.权利要求1-8任一项所述续断标准汤剂质量含量及转移率的检测方法，其包含下述步骤：
(1)参照物溶液的制备：
称取川续断皂苷VI，加甲醇制成溶液；
(2)供试品溶液的制备：
取续断标准汤剂，加入溶剂进行提取；
(3)高效液相色谱分析
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为水，流动相B为乙腈，吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪进行分析。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其中，步骤(2)中，所述溶剂选自于水、稀乙醇、75％乙醇、乙醇、50％甲醇、75％甲醇和甲醇中的一种，优选为75％甲醇。
11.根据权利要求9或10所述的检测方法，其中，步骤(2)中，所述提取采用回流、溶解或超声中的一种进行提取，优选为超声提取。
12.根据权利要求11所述的检测方法，其中，步骤(2)中，所述提取的提取时间15-45min，优选为30min。
13.根据权利要求9-12任一项所述的检测方法，其中，步骤(3)中，所述水：乙腈的体积比为65-75：35-25，优选为70:30。
14.根据权利要求9-13任一项所述的检测方法，其中，按干燥品计，所述川续断皂苷VI的质量含量为7.07～13.13％。
15.根据权利要求9-13任一项所述的检测方法，其中，所述川续断皂苷VI的转移率为47.42～88.06％。
16.权利要求1-8任一项所述方法制备得到的续断标准汤剂的特征图谱的检测方法，其包含下述步骤：
(1)参照物溶液的制备：
分别称取马钱苷酸、绿原酸、咖啡酸、马钱苷、当药苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及川续断皂苷VI对照品，加甲醇制成溶液；
(2)供试品溶液的制备：
取续断标准汤剂，加入溶剂进行提取；
(3)超高效液相色谱分析
吸取对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以水相为流动相B进行梯度洗脱，得到续断标准汤剂的特征图谱。
17.根据权利要求16所述的检测方法，其中，步骤(2)中，所述溶剂选自于水、95％乙醇、75％乙醇、稀乙醇、甲醇、75％甲醇、50％甲醇中的一种，优选为水。
18.根据权利要求16或17所述的检测方法，其中，步骤(2)中，所述提取采用回流提取、超声提取或溶解提取中的一种，优选为溶解提取。
19.根据权利要求16-18任一项所述的检测方法，其中，步骤(3)中，所述水相选自于水、0.1％的磷酸水溶液或者0.05％的磷酸水溶液，优选为0.05％的磷酸水溶液。
20.根据权利要求16-18任一项所述的检测方法，其中，所述特征谱图的特征峰不少于11，优选的，所述特征峰不少于14个。
21.根据权利要求20所述的检测方法，其中，以川续断皂苷VI峰对应的峰作为S峰，各特征峰与S峰的相对保留时间在规定值的±10％之内。
22.根据权利要求21所述的检测方法，其中，在所述14个特征峰中，有8个特征峰指认为：马钱苷酸、绿原酸、咖啡酸、马钱苷、当药苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及川续断皂苷VI。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113456698A (zh) * 2021-05-18 2021-10-01 国药集团同济堂（贵州）制药有限公司 一种荭草汤剂及其制备方法和含量、特征图谱检测方法
CN114515301A (zh) * 2020-11-19 2022-05-20 国药集团同济堂（贵州）制药有限公司 一种沙苑子标准汤剂及制备方法和检测方法
CN115414440A (zh) * 2022-09-26 2022-12-02 东阿阿胶股份有限公司 一种两地汤水提液、两地汤水提膏、两地汤制剂及其制备方法、两地汤制剂的质量控制标准

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101919886A (zh) * 2010-09-01 2010-12-22 江苏省中医药研究院 续断药材质量控制的检测鉴定方法
CN102343027A (zh) * 2011-10-18 2012-02-08 贵州同济堂制药有限公司 一种仙灵骨葆提取物，含其制剂及其制备方法
CN103083521A (zh) * 2013-02-20 2013-05-08 贵州同济堂制药有限公司 一种仙灵骨葆的提取方法、分离提取物及制剂
CN103301391A (zh) * 2012-03-09 2013-09-18 刘炼武 一种治疗女性不孕症的中药及其制备方法
CN104208173A (zh) * 2013-05-29 2014-12-17 纳米及先进材料研发院有限公司 中草药组合物、纳米乳剂和经皮贴剂、及其制备和用于治疗创伤性损伤的用途

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101919886A (zh) * 2010-09-01 2010-12-22 江苏省中医药研究院 续断药材质量控制的检测鉴定方法
CN102343027A (zh) * 2011-10-18 2012-02-08 贵州同济堂制药有限公司 一种仙灵骨葆提取物，含其制剂及其制备方法
CN103301391A (zh) * 2012-03-09 2013-09-18 刘炼武 一种治疗女性不孕症的中药及其制备方法
CN103083521A (zh) * 2013-02-20 2013-05-08 贵州同济堂制药有限公司 一种仙灵骨葆的提取方法、分离提取物及制剂
CN104208173A (zh) * 2013-05-29 2014-12-17 纳米及先进材料研发院有限公司 中草药组合物、纳米乳剂和经皮贴剂、及其制备和用于治疗创伤性损伤的用途

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KWACK, SEUNG JUN 等: "Analysis and Stability Test of the Extracts from Dipsaci Radix, Leonuri Herba and Cyperi Rhizoma for Toxicity Study", 《KOREAN JOURNAL OF PHARMACOGNOSY》 *
刘京晶: "续断生药学研究", 《中国博士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *
蔡津生 等: "《中国食药用菌工程学》", 31 January 2015, 上海科学技术文献出版社 *
陶益 等: "续断酒炙前后化学成分的UPLC-Q-TOF/MS比较研究", 《中国中药杂志》 *
高乐: "续断"标准煎液"工艺优选及配方颗粒质量研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114515301A (zh) * 2020-11-19 2022-05-20 国药集团同济堂（贵州）制药有限公司 一种沙苑子标准汤剂及制备方法和检测方法
CN114515301B (zh) * 2020-11-19 2024-03-29 国药集团同济堂（贵州）制药有限公司 一种沙苑子标准汤剂及制备方法和检测方法
CN113456698A (zh) * 2021-05-18 2021-10-01 国药集团同济堂（贵州）制药有限公司 一种荭草汤剂及其制备方法和含量、特征图谱检测方法
CN115414440A (zh) * 2022-09-26 2022-12-02 东阿阿胶股份有限公司 一种两地汤水提液、两地汤水提膏、两地汤制剂及其制备方法、两地汤制剂的质量控制标准
CN115414440B (zh) * 2022-09-26 2024-05-24 东阿阿胶股份有限公司 一种两地汤水提液、两地汤水提膏、两地汤制剂及其制备方法、两地汤制剂的质量控制标准

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