CN110151779A - 一种治疗蛙类歪头病的组合物及其应用 - Google Patents

一种治疗蛙类歪头病的组合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种治疗蛙类歪头病的组合物及其应用。该组合物包括磺胺嘧啶、甲氧苄啶、盐酸多西环素、碳酸氢钠和无花果多糖。其拌饵喂食患歪头病蛙后，能够达到80％以上的治愈率。该内服物拌饵喂食已感染病原菌但未发病的蛙后，能够将发病率从90％降低到2.5％以下。本发明克服了传统兽医学对蛙类歪头病的临床用药偏见，发现了该病符合联合用药指征，揭示了现有药物疗效不佳的根源——不能有效突破血脑屏障，真正实现了蛙类歪头病的全身性治疗，从而有效提高该病的治愈率。

Description

一种治疗蛙类歪头病的组合物及其应用
技术领域
本发明涉及蛙类疾病防治技术领域，具体涉及一种治疗蛙类歪头病的组合物及其应用。
背景技术
蛙类歪头病是随着蛙类养殖产业扩张而爆发的一种细菌病，以头部歪斜、眼球白内障、运动失调为典型症状，该病致死率高、传播迅速、连年发生、传统用药效果不佳，严重威胁蛙类养殖业。据学者研究，米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingiamiricola)、脑膜炎败血伊丽莎白菌(Elizabethkingiameningoseptica)为引起该病最常见的病原菌。两种细菌性质相似，致病机理相似，致病症状相似，在鉴定上经常被混淆，甚至有学者认为导致青蛙患病的细菌仅有米尔伊丽莎白菌一种，“脑膜炎败血伊丽莎白菌”的鉴定结果为鉴定错误。
使用抗生素拌料投喂病蛙，是治疗该细菌感染的传统方法，如使用链霉素、庆大霉素、氟苯尼考等药物。在体外进行的药物敏感性测试中，这些药物常表现有效，但实践上，选择这些抗生素足量投喂给病蛙后，仍未能控制住该病。
此外，由于对蛙类歪头病病原分布、病原传播规律和病原细菌生理学上认识的不清楚，该病症的预防和治疗始终受限于“不主张轻症联合用药，以免培养出多重耐药的‘超级细菌’而危害人类健康”的兽医临床传统观点，始终停留在不鉴别细菌寄生位置而粗放选用体外敏感抗生素治疗的窠臼，而得不到良好的改善。
发明内容
本发明提供了一种治疗蛙类歪头病的组合物及其应用，基于自主发现的病原分布和传播规律，突破了兽医学传统用药观点上的局限，通过联合用药、合理用药以及内外结合的综合方式，有效解决了现有抗生素药物对蛙类歪头病治疗效果不佳的问题。
本发明采用的技术方案如下：
一种治疗蛙类歪头病的组合物，包括磺胺嘧啶、甲氧苄啶、盐酸多西环素、碳酸氢钠和无花果多糖。
进一步的，按被用药的蛙类的每千克体重计，所述磺胺嘧啶的含量为0.07～0.15g，所述盐酸多西环素的含量为0.013～0.03g，所述无花果多糖的含量为0.3～0.5g；所述甲氧苄啶和所述碳酸氢钠与所述磺胺嘧啶之间的质量比分别为1∶5和1∶1。
更进一步的，按被用药的蛙类的每千克体重计，所述磺胺嘧啶的含量为0.085～0.13g，所述盐酸多西环素的含量为0.017～0.025g，所述无花果多糖的含量为0.35～0.45g。
再进一步的，按被用药的蛙类的每千克体重计，所述磺胺嘧啶的含量为0.1g，所述盐酸多西环素的含量为0.02g，所述无花果多糖的含量为0.4g。
上述组合物的应用，即使用方法为，将所述组合物按每日两次的频率拌饵喂食发病蛙类，一般连续用药3～5天，首次用量加倍。更为具体的讲，用于拌药的饵料使用市面上常见的蛙类养殖用饵料即可，然后按用量称取内服物各组分后与饵料搅拌均匀一致用于蛙类饲养投喂。注意，组合物各组分的原料出现结块的情况时，应对结块的原料进行敲碎、研磨处理，以确保各原料粉末均能全部通过五号筛。
本技术方案所提供组合物治疗蛙类歪头病的简要机理如下：
由于脑部存在血脑屏障，所以脑部属于抗菌药物不易渗入的特殊部位，因此，属于全身细菌感染(包括脑部感染)的蛙类歪头病，区别于传统兽医学以及兽医用药认知，其应当是典型的应联合用药指征。
①磺胺嘧啶和甲氧苄啶
磺胺类药物是最早用于治疗全身性细菌感染的合成抗菌药，属于广谱抗菌药，对多数革兰阳性菌和阴性菌都有抑制作用。磺胺类药物化学结构和细菌合成叶酸的原料——对氨基苯甲酸(PABA)——结构类似，能与PABA竞争二氢叶酸合成酶，干扰病菌叶酸合成，从而抑制细菌生长繁殖。
本组方选用磺胺嘧啶(SD)和甲氧苄啶(TMP)的组合。磺胺嘧啶(SD)经口服后在肠道吸收，血浆蛋白结合率较低，易于透过血脑屏障(为血药的50％-80％)，在脑脊液中浓度较高，是脑部细菌感染的首选用药，适用于本病的治疗。经体外药敏试验测试，SD对本病病原的主流菌株敏感。甲氧苄啶(TMP)抗菌谱广，能选择性地抑制二氢叶酸还原酶，阻碍了敏感菌叶酸代谢和利用，当与SD合用时能从两个不同环节同时阻断叶酸代谢而起双重阻断作用，增强抗菌作用几倍甚至几十倍，甚至能使抑菌作用变为杀菌作用，可减少细菌耐药性的产生。TMP还可增强本组方中多西环素的抗菌效果。
在使用中，因为机体自身PABA与二氢叶酸合成酶的亲和力比磺胺类强5000-15000倍，故使用磺胺类药物必须有足够的剂量和疗程，首次使用可加倍量，以迅速提升血药浓度。当脑部或其他部位出现脓液和坏死组织，其中含有的大量PABA能减弱磺胺类的抑菌作用，此时与之配伍的多西环素将发挥主要的抗菌作用，但整体治疗效果将减退。
②盐酸多西环素
多西环素是四环素类抗生素，能可逆性地与细菌核糖体30S亚基结合，干扰tRNA与mRNA-核糖体复合体上的受体结合，阻止肽链延长而抑制细菌蛋白质的合成。多西环素对组织渗透能力强，分布广泛，容易进入细胞内，有显著的肝肠循环效应。多西环素具有较强的脂溶性，不仅更易于透过血脑屏障，还更容易被肾小管重吸收，维持较长时间的血药浓度。经体外药敏试验测试，本品对本病病原的主流菌株敏感。
③碳酸氢钠
碳酸氢钠(NaHCO3)，俗称小苏打。当机体尿液呈酸性时，磺胺的乙酰化物易在肾小管析出，造成肾脏损伤。尤其是SD容易在尿中析出结晶，同服等量碳酸氢钠能碱化尿液，减轻结晶尿对病蛙肾脏的损害。同时碳酸氢钠配制成的稀碱溶液能助溶磺胺类药物。
④无花果多糖
无花果多糖是多糖类物质，能通过包括增强白细胞吞噬能力在内的各种途径，有效增强水产动物的非特异性免疫力，经本技术方案前期反复试验摸索，按蛙类每千克体重0.3-0.5g投喂时均有效，蛙类每千克体重0.4g投喂时效果最佳。在使用无花果多糖作为前述四种组分之外的组合物组分的情况下，病蛙治愈率有进一步的提升，说明无花果多糖的使用也与前述四种内服物组分之间能够形成协同增效的作用。
本技术方案中所述组合物还可拌饵投喂开始发病养殖场未发病蛙，以发挥阻断细菌感染、降低发病率的功效。此时，所述组合物的用量(或含量)以及用药频率均不变。除上述区别外，所述组合物的使用方法与上述中所提及的使用方法基本无异。
基于上述整体方案，作为进一步优选的，当病蛙已经出现肝肾功能衰竭时，应当额外补充维生素K和维生素B来保护病蛙的肝肾功能。
作为补充的是，本技术方案所提供的组合物及其使用方法，对黑斑蛙、美国牛蛙、虎纹蛙和棘胸蛙有实质性的效果。按用药成分及机理的推导，该组合物对其他蛙类亦有效，但在使用前，应当做小批量用药试验，确认无毒表现后再行使用。同时，无论何种蛙类使用本技术方案所提供的组合物，用药后必须保证相对应的休药期，其中，磺胺嘧啶的休药期为500度日，多西环素类为750度日。此外，需要注意的是，由于蛙类歪头病通常属于外源性感染，因此用药期间还应当加强蛙场的消毒，以防止蛙类治愈后复发；同时各不同养殖区域的器械不可混用，以防止病情出现扩散。
一种基于上述治疗蛙类歪头病的组合物的应用，具体为：所述组合物适用于黑斑蛙、美国牛蛙、虎纹蛙和棘胸蛙。
综上所述，本发明相较于现有技术的有益效果是：
(1)本发明通过前期研究，明确了该疾病抗生素治疗效果不佳的原因——细菌在脑部生存，但药物难以杀灭。继而通过大量药物敏感性试验和动物试验，剔除了大量体外有效而体内治疗效果不佳的药物，筛选了能有效穿透病蛙血脑屏障的药物，并通过有效的药物间互配实现了组分之间协同增效的作用，解决了传统方案不能有效杀灭病蛙脑部细菌的问题，治疗有效率在85％以上。
(2)本发明克服了传统兽医临床上对蛙类歪头病的用药观点，认清了蛙类歪头病的用药指征，提出了联合足量用药的主张，与现有单用抗生素治疗方案比较，所提供的组方确实能有效穿透病蛙血脑屏障，抑制病蛙脑部和全身细菌感染，提升病蛙免疫力。
(3)本发明中所述组合物，还能够作为发病养殖场中未发病蛙的治疗药物使用，能够有效降低未发病蛙类患歪头病的风险，提高发病养殖场中蛙的总体存活率，从而切实保证养殖户的经济利益。
(4)本发明所提供的不单是药物组方，还包括足量用药、环境消毒、内服免疫刺激剂、坚持休药期的综合手段，能够最大限度压缩病原生存空间，降低细菌耐药性增加的可能性，避免了危害人体健康的药物残留。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体的实施例对本发明作进一步的详细说明。
需要首先说明的是，本技术方案所提供组合物中所提及的各组分，其均可选用相应的市售原料，因此，对于各组分的来源不再单独说明。但是，需要注意的是，由于不同厂家产品的组分有效含量不同，在使用过程中，应当按照本技术方案中所记载的有效用量换算使用。
实施例1
一种治疗蛙类歪头病的组合物，包括磺胺嘧啶、甲氧苄啶、盐酸多西环素、碳酸氢钠和无花果多糖。
按被用药的蛙类的每千克体重计，所述磺胺嘧啶的含量为0.07g，所述盐酸多西环素的含量为0.013g，所述无花果多糖的含量为0.3g；所述甲氧苄啶和所述碳酸氢钠与所述磺胺嘧啶之间的质量比分别为1∶5和1∶1。
实施例2
一种治疗蛙类歪头病的组合物，包括磺胺嘧啶、甲氧苄啶、盐酸多西环素、碳酸氢钠和无花果多糖。
按被用药的蛙类的每千克体重计，所述磺胺嘧啶的含量为0.15g，所述盐酸多西环素的含量为0.03g，所述无花果多糖的含量为0.5g；所述甲氧苄啶和所述碳酸氢钠与所述磺胺嘧啶之间的质量比分别为1∶5和1∶1。
实施例3
一种治疗蛙类歪头病的组合物，包括磺胺嘧啶、甲氧苄啶、盐酸多西环素、碳酸氢钠和无花果多糖。
按被用药的蛙类的每千克体重计，所述磺胺嘧啶的含量为0.085g，所述盐酸多西环素的含量为0.017g，所述无花果多糖的含量为0.35g；所述甲氧苄啶和所述碳酸氢钠与所述磺胺嘧啶之间的质量比分别为1∶5和1∶1。
实施例4
一种治疗蛙类歪头病的组合物，包括磺胺嘧啶、甲氧苄啶、盐酸多西环素、碳酸氢钠和无花果多糖。
按被用药的蛙类的每千克体重计，所述磺胺嘧啶的含量为0.13g，所述盐酸多西环素的含量为0.025g，所述无花果多糖的含量为0.45g；所述甲氧苄啶和所述碳酸氢钠与所述磺胺嘧啶之间的质量比分别为1∶5和1∶1。
实施例5
一种治疗蛙类歪头病的组合物，包括磺胺嘧啶、甲氧苄啶、盐酸多西环素、碳酸氢钠和无花果多糖。
按被用药的蛙类的每千克体重计，所述磺胺嘧啶的含量为0.1g，所述盐酸多西环素的含量为0.02g，所述无花果多糖的含量为0.4g；所述甲氧苄啶和所述碳酸氢钠与所述磺胺嘧啶之间的质量比分别为1∶5和1∶1。
实施例6
本实施例提供一种基于实施例1～5任一项所述治疗蛙类歪头病的组合物的应用方式，其具体为：将所述组合物按每日两次的频率拌饵喂食发病蛙类，连续用药3天。其中，饵料为任一常用蛙类饵料。
实施例7
本实施例提供一种基于实施例1～5任一项所述治疗蛙类歪头病的组合物的应用方式，其具体为：将所述组合物按每日两次的频率拌饵喂食发病蛙类，连续用药5天。其中，饵料为任一常用蛙类饵料。
实施例8
本实施例提供一种基于实施例1～5任一项所述治疗蛙类歪头病的组合物的应用方式，其具体为：将所述组合物按每日两次的频率拌饵喂食发病蛙类，连续用药4天。其中，饵料为任一常用蛙类饵料。
实施例9
本实施例提供一种基于实施例1～5任一项所述治疗蛙类歪头病的组合物的应用方式，其具体为：将所述内服物按每日两次的频率拌饵喂食发病蛙类，连续用药5天，首次用量加倍。其中，饵料为任一常用蛙类饵料。本实施例适用于蛙类病情严重爆发时使用。
实施例10
本实施例提供一种将基于实施例1～5任一项所述治疗蛙类歪头病的组合物应用于蛙类歪头病发病前降低发病率的应用方式，其具体为：蛙类养殖场发病后，将该组合物按治疗剂量、频率拌饵投喂给尚未发病的蛙，以阻断细菌感染、降低发病率。其中，饵料为任一常用蛙类饵料。
对比例
本对比例中，选取市面上常见的体外有效的抗生素，在单抗生素治疗方案的条件下，对所选取抗生素用于治疗蛙类歪头病时所显示出的效果进行展现。
本对比例的对比试验方案如下：
(1)疾病模型的准备
取市售人工养殖成年健康黑斑蛙，性别随机，喂给市售青蛙配合饲料，适应饲养7d。制备米尔伊丽莎白菌菌液，麦氏比浊法用PBS调整菌液浓度至5.0×108cfu/mL。将蛙轻柔抓出，对蛙体背部皮肤消毒后，将调整好浓度的菌液按0.2mL/只的剂量进行肌肉注射。将蛙放回养殖池，连续观察，一旦出现歪头、白内障、定向能力失常中的一项或几项症状即视为发病，选取其中食欲尚可的病蛙纳入实验组。本次造模中，共取520只发病并食欲尚可的黑斑蛙用于后续试验。
(2)筛选体内抗菌的最佳抗生素
选取在前期体外药物敏感性试验中表现为“中介”、“敏感”的药物，以及水产常用药物进行本次测试，共计12种。各受试药物按说明书配制后拌料投喂，无说明书的药物按药敏实验起效浓度投喂。将病蛙随机分为26组，每组20只，各分组用药情况见下表。用药期5d，每天投喂药饵两次，用药结束后观察14天，治疗试验期间每天用市售聚维酮碘给养殖环境消毒一次。
治疗效果判定标准如下：
①治愈：病蛙的歪头、白内障、定向能力失常症状完全消失，观察期内无复发。
②改善：病蛙的歪头、白内障、定向能力失常症状明显减轻，观察期内无加重。或病蛙的歪头、白内障、定向能力失常症状完全消失后在观察期内又复发，但未死亡。
③无效：病蛙的歪头、白内障、定向能力失常症状持续，在用药或观察期内死亡。
按实验结果计算治愈率、有效率和总体治愈率；公式如下：
——治愈率＝(本组治愈数量÷20)×100％；
——有效率＝(本组治愈数量+本组改善数量)÷20×100％；
——总体治愈率＝(本组治愈总数量÷本组实验动物数量)×100％。
(3)对比试验结果统计
单用抗生素治疗试验的分组和结果见下表：
从上表可以看出，有效率从高到低的药物依次是：复方新诺明(55.00％)、复方磺胺嘧啶(52.50％)、多西环素(47.50％)、利福平(22.50％)和氟苯尼考(2.50％)。复方新诺明和复方磺胺嘧啶一样，作为磺胺类药物，有较好的透过血脑屏障直达病灶的能力，但复方新诺明属于人药，故不能作为组方中的药物，复方磺胺嘧啶可以入选组方。多西环素效果良好，与其能透过血脑屏障的能力和良好的杀菌能力相关故也可入选。利福平也展现出了一定的治疗效果，这与其口服吸收完全、能广泛分布于全身体液(包含脑脊液)相关，但利福平有潜在致畸作用，在蛙类上安全应用的药学数据缺乏，临床上难以安全使用，且利福平属于人药，故不能进入组方。本实验结果证实了前期研究中的发现，治疗本疾病选药的首要考虑因素应是药物能突破血脑屏障抵达病灶。
下面对其他7种无效抗生素无效原因做药理学层面的分析：
①链霉素：内服难吸收，临床上主要通过肌肉注射给药。大部分以原形从粪便中排出。主要分布于细胞外液，易透入胸腔、腹腔。不易进入脑脊液，主要通过肾小球滤过排出。本试验选用了蛙养殖业者较易接受的口服途径给药，药物主要经过肠道排出，吸收不佳，全身病灶均难以达到有效杀菌浓度。
②阿奇霉素：口服吸收迅速，广泛分布于除脑脊液外的全身组织，但生物利用度受食物影响大，组织中消除缓慢，每天仅需给药一次。本试验采用拌料投喂的方式，干扰了药物的吸收利用，且药物不能抵达脑部病灶，造成治疗效果不佳。
③头孢噻呋：动物专用第三代头孢菌素，内服不吸收，肌内和皮下注射吸收迅速，体内分布广泛。但不能通过血脑屏障，且有一定肾毒性，可引起肠道菌群紊乱或二重感染。故药物不能抵达脑部病灶。
④硫酸新霉素：氨基糖苷类抗生素，全身用药有显著肾毒性和耳毒性，故仅限于口服或局部应用，但口服很少吸收(约3％)，长期口服较大剂量，肠粘膜有溃疡或炎症时仍可吸收相当量，特别在肾功能减退时血药浓度可显著增高。口服后大部分不经变化随粪便排出。故推测本实验中该药未能充分吸收而导致血药浓度不能达到有效杀菌浓度。
⑤甲砜霉素：氯霉素的甲砜衍生物，具有较强的免疫抑制作用(比氯霉素约强6倍)，可抑制免疫球蛋白合成和抗体的生成。口服用药一般不用于细菌性脑膜炎。推测其虽然有氯霉素的强大抗菌作用，但有免疫抑制功能，容易造成反复感染，故治疗失败。
⑥恩诺沙星：氟奎诺酮类，为动物专用药，除了中枢神经系统外，几乎所有的组织的药物浓度都高于血浆，这有利于全身感染和深部组织感染的治疗。对支原体有特效。代谢产物为环丙沙星，仍有强大抗菌作用。故药物不能抵达脑部病灶。
⑦诺氟沙星：又名氟哌酸，第三代喹诺酮类药。可影响幼龄动物骨骼发育。广泛分布各组织但未见于神经系统。故药物不能抵达脑部病灶。
综上分析可以发现，药物在体外能有效杀菌，但体内发挥作用不佳的主要原因是在既定条件下，药物难以抵达脑部病灶或浓度较低。在12种药物中，仅有5种在治疗实验中表现出了治疗作用，这和临床实际治疗中观察到的结果一致，反映了传统单用抗生素方案的局限性。传统上，兽医临床不主张轻症感染联合用药，以免培养出多重耐药的“超级细菌”危害人类健康，蛙类歪头病在之前归于此类，这建立在对本病病原分布、病原传播规律和病原细菌生理学认识不清的基础上，通过上述对比试验研究，明确证明了蛙类歪头病属于应联合用药指征，为后续联合用药组合物的设计和调整做出了清晰的指示。
试验例1
本试验例中，基于实施例1、2、5，对本发明中所提供的组合物的治疗效果进行展示。本试验例的试验方案如下：
(1)疾病模型的准备
取市售人工养殖成年健康黑斑蛙，性别随机，喂给市售青蛙配合饲料，适应饲养7d。制备米尔伊丽莎白菌菌液，麦氏比浊法用PBS调整菌液浓度至5.0×108cfu/mL。将蛙轻柔抓出，对蛙体背部皮肤消毒后，将调整好浓度的菌液按0.2mL/只的剂量进行肌肉注射。将蛙放回养殖池，连续观察，一旦出现歪头、白内障、定向能力失常中的一项或几项症状即视为发病，选取其中食欲尚可的病蛙纳入实验组。本次造模中，共取280只发病并食欲尚可的黑斑蛙用于后续试验。
(2)组合物单用化药成分方案、增加无花果多糖方案与单用组合物组分治疗效果比较
将病蛙随机分为14组，每组20只。其中，组合物化药成分+无花果多糖治疗组(简记为组合物化+无)3组(组1采用实施例5组方+实施例7方法，组2采用实施例1组方+实施例7方法，组3采用实施例2组方+实施例方法)，纯组合物化药成分治疗组(简记为组合物化)3组(组1采用实施例5的组方+实施例7方法，组2采用不含有无花果多糖的实施例1组方+实施例7方法，组3采用不含有无花果多糖的7方法)；复方磺胺嘧啶治疗组2组(仅使用复方磺胺嘧啶，1kg蛙体重，0.3g)，盐酸多西环素治疗组2组(仅使用盐酸多西环素，1kg蛙体重，0.02g)，无花果多糖组2组(仅使用无花果多糖，1kg蛙体重，0.4g)，无治疗组(不施加任何治疗)2组；用药期5d，每天投喂药饵两次，用药结束后观察14天，治疗试验期间每天用市售聚维酮碘给养殖环境消毒一次。
治疗效果判定标准如下：
①治愈：病蛙的歪头、白内障、定向能力失常症状完全消失，观察期内无复发。
②改善：病蛙的歪头、白内障、定向能力失常症状明显减轻，观察期内无加重。或病蛙的歪头、白内障、定向能力失常症状完全消失后在观察期内又复发，但未死亡。
③无效：病蛙的歪头、白内障、定向能力失常症状持续，在用药或观察期内死亡。
按实验结果计算治愈率、有效率和总体治愈率；公式如下：
——治愈率＝(本组治愈数量÷20)×100％；
——有效率＝(本组治愈数量+本组改善数量)÷20×100％；
——总体治愈率＝(本组治愈总数量÷本组实验动物数量)×100％。
(3)对比试验结果统计
治疗试验14各组结构如下：
从上述结构可以看出，组合物各成分均能表现出一定的治疗效果，总体治愈率在22.5％到57.5％之间，和前述单用抗生素测试效果相似，但按本发明配置成化药组合物并采用本发明应用方式使用后，发挥协同增效作用，总体治愈率达到80％；同时，在化药组合物的基础上增加无花果多糖后，总体治愈率进一步提升，从80％提升到91.67％。
试验例2
本试验例中，基于实施例5，对本发明中所提供的组合物对疾病潜伏期已感染病原菌但未发病蛙的治疗效果进行展示。本试验例的试验方案如下：
(1)疾病潜伏期动物模型的制备
取市售人工养殖成年健康黑斑蛙，性别随机，喂给市售青蛙配合饲料，适应饲养7d。制备米尔伊丽莎白菌菌液，麦氏比浊法用PBS调整菌液浓度至1.0×107cfu/mL。将蛙轻柔抓出，对蛙体背部皮肤消毒后，将调整好浓度的菌液按0.2mL/只的剂量进行肌肉注射。暂养4h后即可转入治疗试验。
(2)对动物模型的治疗试验
将病蛙随机分为4组，每组40只，编为2个治疗组和2个对照组。治疗组在4h时间到后，即首次投喂给按实施例5的组合物配置的药饵，用药期5d，每天投喂药饵两次，用药结束后观察14天。对照组不施加任何治疗，正常饲喂普通黑斑蛙配合饲料。治疗试验期间每天用市售聚维酮碘给养殖环境消毒一次。试验结束时，无菌剖检未出现任何症状的蛙，尝试从肝、脑中分离米尔伊丽莎白菌。
试验结束时，按照下列标准统计试验结果并计算发病率、死亡率。
①死亡：试验结束时，蛙已死亡。
②发病：试验结束时，蛙已出现歪头、白内障、定向能力失常症状中的一项或几项。
③带菌生存：未发病蛙肝、脑中均检出米尔伊丽莎白菌。
④不带菌生存：未发病蛙肝、脑中均未检出米尔伊丽莎白菌。
按实验结果计算发病率、死亡率、生存率、不带菌生存率，公式如下：
——发病率＝(本组发病数量÷本组总试验动物数)×100％；
——死亡率＝(本组死亡数量÷本组总试验动物数)×100％；
——生存率＝(带菌生存数量+不带菌生存数量)÷本组总试验动物数×100％；
——不带菌生存率＝(不带菌生存数量÷本组实验动物数量)×100％。
(3)治疗试验结果统计
指标/分组 对照组1 对照组2 试验组1 试验组2
死亡量 36 37 1 0
发病量 38 37 1 0
带菌生存量 2 3 2 2
不带菌生存量 0 0 37 38
发病率 95.00％ 92.50％ 2.50％ 0.00％
死亡率 90.00％ 92.50％ 2.50％ 0.00％
生存率 5.00％ 7.50％ 97.50％ 100.00％
不带菌生存率 0.00％ 0.00％ 92.50％ 95.00％
从上表可以看出，试验造模的发病率和死亡率均在90％以上，使用组合物干预后发病率从90％降低至2.5％以下，不带菌生存率从0提升到92.5％以上，证明了组合物在病原潜伏期应用可有效阻止绝大部分蛙类发病。
实施案例
本实施案例，基于实施例5，对本发明所提供的组合物及其应用的实际效果进行展示。
本实施案例具体为：四川省成都市新津县某美国牛蛙养殖户，2017年4月，当年引种的蛙发生歪头病，发病率30％，自配氟苯尼考治疗无效，日死亡量在100只左右，死亡率95％。嘱其淘汰完全不摄食病蛙、加强消毒，提供给基于实施例5组合物，按实施例7的应用要求服用。治疗5天后，发病停止，已发病青蛙85％恢复，仍有15％虽未死亡但歪头症状未得到恢复，推测与神经受损难以修复相关。
另，同样基于实施例5按照实施例7的应用要求，虎纹蛙和棘胸蛙养殖户也分别采用本发明的组合物对养殖过程中出现的歪头病进行实地治疗。经统计，两种蛙的综合治愈率均可达到85％及以上。因此，可以判断，除前述黑斑蛙、美国牛蛙外，本发明多提供的组合物以及应用方式同样能够有效适用于虎纹蛙和棘胸蛙歪头病的治疗。此外，还推测对其他蛙类有效。
以上所述实施例仅表达了本申请的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本申请保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请技术方案构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。

Claims (7)

1.一种治疗蛙类歪头病的组合物，其特征在于，包括磺胺嘧啶、甲氧苄啶、盐酸多西环素、碳酸氢钠和无花果多糖。
2.根据权利要求1所述的一种治疗蛙类歪头病的组合物，其特征在于：按被用药的蛙类的每千克体重计，所述磺胺嘧啶的含量为0.07～0.15g，所述盐酸多西环素的含量为0.013～0.03g，所述无花果多糖的含量为0.3～0.5g；所述甲氧苄啶和所述碳酸氢钠与所述磺胺嘧啶之间的质量比分别为1∶5和1∶1。
3.根据权利要求2所述的一种治疗蛙类歪头病的组合物，其特征在于：按被用药的蛙类的每千克体重计，所述磺胺嘧啶的含量为0.085～0.13g，所述盐酸多西环素的含量为0.017～0.025g，所述无花果多糖的含量为0.35～0.45g。
4.根据权利要求3所述的一种治疗蛙类歪头病的组合物，其特征在于：按被用药的蛙类的每千克体重计，所述磺胺嘧啶的含量为0.1g，所述盐酸多西环素的含量为0.02g，所述无花果多糖的含量为0.4g。
5.一种如权利要求1～4任一项所述的一种治疗蛙类歪头病的组合物的应用，其特征在于：所述组合物按每日两次的频率拌饵喂食发病蛙类。
6.一种如权利要求1～4任一项所述的一种治疗蛙类歪头病的组合物的应用，其特征在于：所述组合物可用作患歪头病的病蛙的治疗，或者可用作已感染但尚未发病的蛙的治疗。
7.一种如权利要求1～4任一项所述的一种治疗蛙类歪头病的组合物的应用，其特征在于：所述组合物适用于黑斑蛙、美国牛蛙、虎纹蛙和棘胸蛙。
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