CN110144375A - 一种鱼鳔肽及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种鱼鳔肽及其制备方法和应用，所述制备方法包括：先将鱼鳔加热进行蛋白变性，粉碎，再用胰糜蛋白酶进行酶解，然后酶灭活，最后分离得到所述鱼鳔肽。该制备方法不仅操作十分简单，在不需膜分离的前提下就能对鱼鳔肽的分子量做到精确控制，在收率大于85％的情况下能保证所得产品中活性较高且更易吸收的分子量小于1000Da的多肽含量超过85％，适合大规模工业生产；该制备方法普适性好；且制备过程全程无任何化学试剂的添加，安全性好，无毒副作用；制备得到的鱼鳔肽产品更易吸收、口感好，保留了低聚肽的生理活性，具有显著的抑制ACE活性和降血压效果。
Description
技术领域
本发明属于多肽制备技术领域，具体涉及一种鱼类活性肽及其制备方法和应用，尤其涉及一种鱼鳔肽及其制备方法和应用。
背景技术
我国自古就有食用鱼鳔的习惯，与燕窝、鱼翅齐名，是“八珍”之一，素有“海洋人参”之誉。现代中医认为鱼鳔胶性味甘、平、入肾经，有补益精血、滋养筋脉、养肝益肾、养血止血之功，适用于肾虚滑精、吐血、崩漏、腰膝酸软等，为高蛋白滋补佳品，可治疗消化性溃疡、肺结核、风湿性心脏病、再生障碍性贫血、脉管炎、神经衰弱及女子闭经、赤白带下、崩漏等。
鱼鳔中蛋白质含量大于80％，脂肪含量特别低，同时富含多种维生素及钙、铁、锌、硒等微量元素。是理想的高蛋白低脂肪的健康饮食。经常食用对人体具有多种保健效果。氨基酸分析结果显示，鱼鳔中富含甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸、谷氨酸、精氨酸、羟脯氨酸等16种氨基酸。
高血压病是一种以血压升高为主要临床表现而病因尚未明确的常见多发病，早期可能无症状或症状不明显，随着病程延长或血压明显的持续升高，逐渐会出现各种症状。高血压是引起心肌梗塞、动脉硬化、充血性心力衰竭和肾功能衰竭的主要原因，也是目前十分严重的社会公共卫生问题。血管紧张素转化酶(ACE)是一种催化血管紧张素I转化为血管紧张素II的酶，血管紧张素II的增多可使血压升高。ACE抑制剂可以有效抑制ACE的活性并增加缓激肽的活性，因此ACE也成为治疗高血压、心力衰竭、糖尿病合并高血压等疾病的理想靶点。
自1977年Cushman等根据ACE底物的化学结构推测出ACE活性部位的模型并在此基础上开发和设计了第一个化学合成血管紧张素转换酶I肽以来，其作用得到医学界的普遍认可，其治疗高血压的益处已被大家所接受，但其对肾脏的毒副作用以及其他一些副作用如低血压、干咳等使研究者开始寻找安全性高的ACE抑制剂。来源于食物蛋白质的降血压肽其降血压效果虽然不及化学合成的药物，但没有毒副作用，除了具有降血压功能以外往往还具有免疫调节、减肥、易消化和吸收等功能。
目前的研究结果普遍认为抗高血压肽对ACE的抑制活性与其分子量密切相关，分子量小则有利于其在体内的吸收利用，一般具有活性的抗高血压肽其分子量为1000Da以下。传统的控制多肽分子量的方法是首先将蛋白质进行酶解，再采用膜分离技术对不同分子量的多肽进行分离；一方面酶解过程可将蛋白质降解成为不同分子量的多肽，另一方面膜分离过程可根据选择不同类型的膜制备出低于截留分子量的多肽。
CN105821108A公开了一种混合酶解-膜过滤制备中华鳖降压肽的方法，该方法包括原料预处理、混合酶水解、灭酶、离心过滤、膜过滤、冻干等关键步骤。CN105248836A公开了基于二步酶解和酶膜反应制备低致敏性乳清蛋白粉的方法，该方法以乳清为底物，利用二步蛋白酶解技术水解乳清蛋白中的致敏位点，利用膜的选择性透过作用，分离获得分子量低于1kDa的无致敏位点的蛋白水解物。CN103045707A公开了一种连续酶解与二级膜过滤提纯制备大米蛋白活性多肽的方法，该方法以碱性蛋白酶和大米蛋白为主要原料进行酶解反应，通过超滤膜、纳滤膜和喷雾干燥等步骤制备大米蛋白活性多肽。类似的专利还包括：不补料酶解-膜分离耦合制备鱼鳞胶原蛋白抗氧化肽的方法(201010188410.5)；一种酶解与膜滤集成连续制取酪蛋白生物活性多肽的工艺(200310107554.3)；利用酶解与膜滤耦合技术连续制备窄分子量分布燕窝提取物的方法(200810061920.9)；一种酶解和膜分离制备免疫活性大豆肽的方法(201010523747.7)；利用酶膜反应器连续制备蚕蛹蛋白抗氧化肽的方法(201310137894.4)；一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法(201110112515.7)等。
固定化酶耦合膜分离技术主要采用柱式固定化酶反应器串联膜分离技术实现，或将酶直接固定在中空纤维膜上实现。相关的研究或综述报道包括：酶膜反应器及其工业应用研究(化工时刊，2004，18(1):13-17)；酶膜反应器及其应用(食品安全导刊，2014，11:76-78)；酶膜耦合法制备均一分子量胶原蛋白多肽(化学与生物工程，2017，34(2):25-32)；牛乳蛋白在膜反应器中的酶解(食品工业科技，2000，21(1):30-31)；酶膜反应器连续酶解花生蛋白的工艺研究(食品工业科技，2010，31(8):208-212)；动态膜分离式固定化酶反应器操作性能的研究(2000，16(4):337-342)等。
CN103980347A和CN103992385A公开的关于制备大黄鱼鱼鳔肽的方法也包括酶解、超滤和层析这几个步骤。
以上这些现有技术基于酶解并进一步膜分离的多肽制备过程中，都是通过膜分离来控制所得多肽的分子量范围，膜分离过程不可避免的要耗费大量的水，而且只能对膜截留范围内的产品实现分子量可控，目标产品的收率一般比较低。
发明内容
针对现有技术的不足，即针对现有技术中基于酶解和膜分离的分子量可控多肽制备方法中存在操作复杂，收率低下，废水量大的问题，以及鱼鳔酶解利用过程中存在的各种问题，本发明的目的在于提供一种鱼鳔肽及其制备方法和应用，该制备方法简单方便，且制备得到的鱼鳔肽分子量可控且收率高，同时还具有显著的降血压作用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
一方面，本发明提供一种鱼鳔肽的制备方法，所述制备方法包括：先将鱼鳔加热进行蛋白变性，粉碎，再用胰糜蛋白酶进行酶解，然后酶灭活，最后分离得到所述鱼鳔肽。
本发明所涉及的制备鱼鳔肽的方法突破了常规的先酶解再膜分离方法，而是先将鱼鳔进行加热使蛋白质变性，粉碎后用胰糜蛋白酶进行酶解，灭酶，分离即可得到鱼鳔肽，其中加热使鱼鳔中胶原蛋白的三螺旋稳定结构被破坏，同时能够去除鱼鳔特有的腥味，其中胰糜蛋白酶相较于其他蛋白酶类型对鱼鳔的酶解效果更强，能在短时间内及较少添加量的情况下将变性后的鱼鳔蛋白质水解成生物活性更强的分子量小于1000Da的低聚肽。
该方法不仅操作十分简单，在不需膜分离的前提下就能对鱼鳔肽的分子量做到精确控制，在收率大于85％的情况下能保证所得产品中活性较高且更易吸收的分子量小于1000Da的多肽含量超过85％，适合大规模工业生产；该制备方法普适性好，适用于所有新鲜鱼鳔和干鱼鳔的多肽制备；且制备过程全程无任何化学试剂的添加，安全性好，无毒副作用；制备得到的鱼鳔肽产品更易吸收、口感好，保留了低聚肽的生理活性，具有显著的抑制ACE活性和降血压效果，非常适合咀嚼和消化能力较弱的人群进行营养补充。
优选地，所述将鱼鳔加热进行蛋白变性的方法为：将鱼鳔用水煮沸0.5-10h使蛋白变性，例如0.5h、1h、2h、4h、5h、6h、7h、8h或10h等。
所述对鱼鳔进行煮沸加热的时间应控制在0.5-10h，若超过10h会因为美拉德反应的发生导致颜色变深，小于0.5h会因为加热时间不够而变性不完全，无法使最终获得的产品具有上述有益效果。
优选地，所述胰糜蛋白酶的使用量为每g底物使用2-100U，例如2U、10U、20U、40U、50U、60U、65U、70U、80U、90U或100U等。
使用本发明所述方法制备鱼鳔肽，胰糜蛋白酶的使用量很少，在每g底物使用2-100U的情况下，就能获得上述有益效果。特定选择2-100U，是因为酶添加量更少的话会因为酶解时间过长而导致细菌的滋生，酶添加量过多的话会导致过度水解，导致产品中的游离氨基酸含量过高，即无法使产品获得上述有益效果。
优选地，所述酶解的温度为40-60℃，例如40℃、45℃、50℃、55℃或60℃等，优选50-55℃。
优选地，所述酶解的时间为1-10h，例如1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h或10h等，优选3-5h。
优选地，所述酶解的pH值为6-8，例如pH＝6、pH＝6.5、pH＝7、pH＝7.5或pH＝8等。
将酶解温度、酶解时间和酶解的pH环境控制在上述数值范围内，才能使得制得的鱼鳔肽具有最佳的效果，即在收率大于85％的情况下所得产品中活性较高且更易吸收的分子量小于1000Da的多肽含量超过85％。
优选地，所述酶灭活的温度为80-100℃，例如80℃、85℃、88℃、90℃、92℃、95℃、98℃或100℃等。
优选地，所述酶灭活的时间为10-60min，例如10min、15min、20min、25min、30min、35min、40min、50min或60min等。
优选地，所述分离的方式为离心分离。
优选地，所述离心的速率为4000-6000r/min，例如4000r/min、4200r/min、4500r/min、4800r/min、5000r/min、5500r/min或6000r/min等。
优选地，所述离心的温度为10-50℃，例如10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃或50℃等。
优选地，所述离心的时间为5-30min，例如5min、10min、15min、20min、25min或30min等。
将分离步骤中的离心速率、离心温度、离心时间控制在上述数值范围内，也才能使得制得的鱼鳔肽具有最佳的效果，即在收率大于85％的情况下所得产品中活性较高且更易吸收的分子量小于1000Da的多肽含量超过85％。
优选地，所述将鱼鳔加热进行蛋白变性之前先进行除杂，具体操作为：取新鲜鱼鳔或干鱼鳔用清水清洗，去除尘土、血污等杂质。
优选地，所述分离得到鱼鳔肽后对其进行干燥。
优选地，所述干燥的方式为喷雾干燥。
所述干燥方式选择喷雾干燥的原因是喷雾干燥得到的本发明所述产品的流动性和溶解性最好，便于使用。
作为本发明的优选技术方案，所述制备方法具体包括如下步骤：
(1)取新鲜鱼鳔或干鱼鳔用清水清洗，去除尘土、血污等杂质；
(2)将步骤(1)得到的鱼鳔用水煮沸0.5-10h使蛋白变性；
(3)将步骤(2)得到的变性后的鱼鳔粉碎成鱼鳔浆液；
(4)将步骤(3)得到的鱼鳔浆液用每g底物2-100U的胰糜蛋白酶在40-60℃下进行酶解1-10h；
(5)将步骤(4)得到的酶解液在80-100℃下保持10-60min进行酶灭活；
(6)将步骤(5)得到的灭活液在10-50℃下以4000-6000r/min进行离心分离5-30min，取上清液；
(7)将步骤(6)得到的上清液进行喷雾干燥，得到所述鱼鳔肽。
另一方面，本发明提供一种如上所述的制备方法制备得到的鱼鳔肽，其特征在于，所述鱼鳔肽中分子量小于1000Da的多肽含量大于85％。
所述得到的鱼鳔肽产品易吸收、口感好，保留了低聚肽的生理活性，具有显著的抑制ACE活性和降血压效果，非常适合咀嚼和消化能力较弱的人群进行营养补充。
再一方面，本发明提供一种如上所述的制备方法在制备鱼鳔肽产品中的应用。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明所涉及的制备鱼鳔肽的方法突破了常规的先酶解再膜分离方法，而是先将鱼鳔进行加热使蛋白质变性，粉碎后用胰糜蛋白酶进行酶解，灭酶，分离即可得到鱼鳔肽，其中加热使鱼鳔中胶原蛋白的三螺旋稳定结构被破坏，同时能够去除鱼鳔特有的腥味，其中胰糜蛋白酶相较于其他蛋白酶类型对鱼鳔的酶解效果更强，能在短时间内及较少添加量的情况下将变性后的鱼鳔蛋白质水解成生物活性更强的分子量小于1000Da的低聚肽。
该方法不仅操作十分简单，在不需膜分离的前提下就能对鱼鳔肽的分子量做到精确控制，在收率大于85％的情况下能保证所得产品中活性较高且更易吸收的分子量小于1000Da的多肽含量超过85％，适合大规模工业生产；该制备方法普适性好，适用于所有新鲜鱼鳔和干鱼鳔的多肽制备；且制备过程全程无任何化学试剂的添加，安全性好，无毒副作用；制备得到的鱼鳔肽产品更易吸收、口感好，保留了低聚肽的生理活性，具有显著的抑制ACE活性和降血压效果，非常适合咀嚼和消化能力较弱的人群进行营养补充。
附图说明
图1是实施例1制得的鱼鳔低聚肽的凝胶过滤色谱图；
图2是实施例2制得的鱼鳔低聚肽的凝胶过滤色谱图；
图3是实施例3制得的鱼鳔低聚肽的凝胶过滤色谱图；
图4是实施例4制得的鱼鳔低聚肽的凝胶过滤色谱图；
图5是实施例5制得的鱼鳔低聚肽的凝胶过滤色谱图；
图6是实施例6制得的鱼鳔低聚肽的凝胶过滤色谱图；
图7是实施例7制得的鱼鳔低聚肽的凝胶过滤色谱图；
图8是对比例1制得的鱼鳔低聚肽的凝胶过滤色谱图；
图9是对比例2制得的鱼鳔低聚肽的凝胶过滤色谱图；
图10是对比例3制得的鱼鳔低聚肽的凝胶过滤色谱图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
本实施例提供一种鱼鳔低聚肽的制备方法，所述制备方法具体包括如下步骤：
(1)取新鲜的鲤鱼鱼鳔250g，剖开，除去血管和粘膜等，用清水清洗去除尘土、血污、油脂等杂质；
(2)将步骤(1)得到的鱼鳔放入锅中加入1000g水煮沸1h使蛋白变性，然后降至30℃；
(3)将步骤(2)得到的变性后的鱼鳔用组织捣碎机粉碎成鱼鳔浆液；
(4)在步骤(3)得到的鱼鳔浆液加入0.3g胰糜蛋白酶在50℃下水浴摇床中进行酶解3h；
(5)将步骤(4)得到的酶解液在100℃下保持30min进行酶灭活，然后降至30℃；
(6)将步骤(5)得到的灭活液在50℃下以5000r/min进行离心分离10min，取上清液；
(7)将步骤(6)得到的上清液进行喷雾干燥，得到所述鱼鳔低聚肽固体粉末。计算得到鱼鳔低聚肽固体粉末的产率为92％。
实施例2
本实施例提供一种鱼鳔低聚肽的制备方法，所述制备方法具体包括如下步骤：
(1)取干制的东南亚鲶鱼鱼鳔50g，用清水清洗去除尘土等杂质；
(2)将步骤(1)得到的鱼鳔放入锅中加入400g水煮沸1h使蛋白变性，然后降至30℃；
(3)将步骤(2)得到的变性后的鱼鳔用组织捣碎机粉碎成鱼鳔浆液；
(4)在步骤(3)得到的鱼鳔浆液加入0.25g胰糜蛋白酶在70℃下水浴摇床中进行酶解10h；
(5)将步骤(4)得到的酶解液在80℃下保持60min进行酶灭活，然后降至30℃；
(6)将步骤(5)得到的灭活液在40℃下以4000r/min进行离心分离5min，取上清液；
(7)将步骤(6)得到的上清液进行喷雾干燥，得到所述鱼鳔低聚肽固体粉末。计算得到鱼鳔低聚肽固体粉末的产率为90％。
实施例3
本实施例提供一种鱼鳔低聚肽的制备方法，所述制备方法具体包括如下步骤：
(1)取干制的黄花鱼鱼鳔50g，用清水清洗去除尘土等杂质；
(2)将步骤(1)得到的鱼鳔放入锅中加入800g水煮沸1h使蛋白变性，然后降至30℃；
(3)将步骤(2)得到的变性后的鱼鳔用组织捣碎机粉碎成鱼鳔浆液；
(4)在步骤(3)得到的鱼鳔浆液加入0.3g胰糜蛋白酶在60℃下水浴摇床中进行酶解1h；
(5)将步骤(4)得到的酶解液在100℃下保持10min进行酶灭活，然后降至30℃；
(6)将步骤(5)得到的灭活液在30℃下以6000r/min进行离心分离10min，取上清液；
(7)将步骤(6)得到的上清液进行喷雾干燥，得到所述鱼鳔低聚肽固体粉末。计算得到鱼鳔低聚肽固体粉末的产率为86％。
实施例4
本实施例提供一种鱼鳔低聚肽的制备方法，所述制备方法具体包括如下步骤：
(1)取新鲜的鳙鱼鱼鳔250g，剖开，除去血管和粘膜等，用清水清洗去除尘土、血污、油脂等杂质；
(2)将步骤(1)得到的鱼鳔放入锅中加入1500g水煮沸2h使蛋白变性，然后降至30℃；
(3)将步骤(2)得到的变性后的鱼鳔用组织捣碎机粉碎成鱼鳔浆液；
(4)在步骤(3)得到的鱼鳔浆液加入0.5g胰糜蛋白酶在50℃下水浴摇床中进行酶解4h；
(5)将步骤(4)得到的酶解液在100℃下保持50min进行酶灭活，然后降至30℃；
(6)将步骤(5)得到的灭活液在25℃下以6000r/min进行离心分离25min，取上清液；
(7)将步骤(6)得到的上清液进行喷雾干燥，得到所述鱼鳔低聚肽固体粉末。计算得到鱼鳔低聚肽固体粉末的产率为91％。
实施例5
本实施例提供一种鱼鳔低聚肽的制备方法，所述制备方法与实施例1的区别仅在于将“水煮沸1h使蛋白变性”替换为“水煮沸10h使蛋白变性”，其他均保持不变。计算得到鱼鳔低聚肽固体粉末的产率为89％。
实施例6
本实施例提供一种鱼鳔低聚肽的制备方法，所述制备方法与实施例1的区别仅在于将“水煮沸1h使蛋白变性”替换为“水煮沸12h使蛋白变性”，其他均保持不变。计算得到鱼鳔低聚肽固体粉末的产率为85％。
实施例7
本实施例提供一种鱼鳔低聚肽的制备方法，所述制备方法与实施例1的区别仅在于将“水煮沸1h使蛋白变性”替换为“水煮沸0.2h使蛋白变性”，其他均保持不变。计算得到鱼鳔低聚肽固体粉末的产率为70％。
对比例1
本对比例提供一种鱼鳔低聚肽的制备方法，所述制备方法与实施例2的区别仅在于将“胰糜蛋白酶”替换为“木瓜蛋白酶”，其他均保持不变。计算得到鱼鳔低聚肽固体粉末的产率为75％。
对比例2
本对比例提供一种鱼鳔低聚肽的制备方法，所述制备方法与实施例2的区别仅在于将“胰糜蛋白酶”替换为“胰蛋白酶”，其他均保持不变。计算得到鱼鳔低聚肽固体粉末的产率为82％。
对比例3
本对比例提供一种鱼鳔低聚肽的制备方法，所述制备方法与实施例2的区别仅在于不进行加热煮沸使蛋白质变性这一步骤，其他均保持不变。计算得到鱼鳔低聚肽固体粉末的产率为60％。
实施例8
对实施例1-7和对比例1-3制备得到的产品进行凝胶过滤色谱分析，其操作具体如下：采用TSK-GEL G2000SWXL色谱柱(300mm×7.8mm，5μm)、流动相为乙腈:水:三氟乙酸(45:55:0.1，V/V/V)、流速0.6mL/min、柱温30℃、进样体积10μL、检测波长220nm(实验测得分子量小于1000Da的多肽其保留时间超过17min)。
实施例1-7和对比例1-3的结果分别如图1-10所示，图1中：峰1、峰2、峰3的积分面积分别为395.124、1419.55、1257.62；图2中：峰1、峰2、峰3的积分面积分别为369.364、1205.74、942.163；图3中：峰1、峰2的积分面积分别为980.706、6689.2；图4中：峰1、峰2、峰3的积分面积分别为431.184、1604.9、1638.96；图5中：峰1、峰2、峰3的积分面积分别为441.548、1730.98、1650.28；图6中：峰1、峰2、峰3、峰4的积分面积分别为632.399、730.7、1644.1、2676.99；图7中：峰1、峰2、峰3、峰4的积分面积分别为1262.06、918.047、1416.61、1926.87；图8中：峰1、峰2的积分面积分别为2296.62、3732.59；图9中：峰1、峰2的积分面积分别为3878.27、5745.23；图10中：峰1、峰2的积分面积分别为4232.76、3630.28。
由图可以得到实施例1-7和对比例1-3制得产品中分子量小于1000Da的多肽含量，总结如下：
表1
| 组别 | 分子量小于1000Da的多肽含量 |
| 实施例1 | 87.2％ |
| 实施例2 | 85％ |
| 实施例3 | 87.2％ |
| 实施例4 | 88.2％ |
| 实施例5 | 88.3％ |
| 实施例6 | 76％ |
| 实施例7 | 60.5％ |
| 对比例1 | 61.9％ |
| 对比例2 | 59.7％ |
| 对比例3 | 46.2％％ |
表1数据说明：实施例1-5的数据结果表明，本发明所涉及的制备方法在不需膜分离的前提下就能对鱼鳔肽的分子量做到精确控制，在收率大于85％的情况下且能保证所得产品中活性较高且更易吸收的分子量小于1000Da的多肽含量超过85％；而从实施例6和实施例7的数据结果可知，水煮沸使蛋白变性的时间若不在0.5-10h范围内，将会使收率显著降低，产品中分子量小于1000Da的多肽含量也显著降低；而从对比例1和对比例2的数据结果可知，当使用其他类型的蛋白酶而非胰糜蛋白酶时，产品收率和产品中分子量小于1000Da的多肽含量也大大降低；从对比例3的数据结果可知，当不进行加热煮沸使蛋白质变性这一步骤时，产品收率和产品中分子量小于1000Da的多肽含量仅为60％和46.2％。
实施例9
采用以HHL为底物的分光光度计法测定实施例1-7和对比例1-3制备得到的产品的ACE抑制活性，其操作具体如下：用0.1mol/L硼酸缓冲液(pH值8.3，含有0.3mol/L NaCl)配制反应底物N-马脲酰组氨酰亮氨酸(N-hippury-histidyl-leucine,HHL,6.5mmol/L)和ACE(100U/L)。取上述各样品配制成溶液，与25μL ACE溶液混合并于振荡器中混匀，37℃水浴保温10分钟，然后加入40μL HHL溶液启动反应，37℃水浴继续保温30分钟，最后加入85μL1.0mol/L HCl溶液终止反应。反应液经0.45μm滤膜过滤后用于分光光度计分析测定反应中产生的HA的量。
结果如表2所示：
表2
表2数据说明：实施例1-5的数据结果表明，本发明所涉及的制备方法制备得到的多肽产品具有显著的抑制ACE的活性；而从实施例6和实施例7的数据结果可知，水煮沸使蛋白变性的时间若不在0.5-10h范围内，将会使抑制ACE的活性显著降低；而从对比例1和对比例2的数据结果可知，当使用其他类型的蛋白酶而非胰糜蛋白酶时，ACE抑制活性也大大降低；从对比例3的数据结果可知，当不进行加热煮沸使蛋白质变性这一步骤时，ACE抑制活性最低。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种鱼鳔肽及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
Claims (10)
1.一种鱼鳔肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：先将鱼鳔加热进行蛋白变性，粉碎，再用胰糜蛋白酶进行酶解，然后酶灭活，最后分离得到所述鱼鳔肽。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述将鱼鳔加热进行蛋白变性的方法为：将鱼鳔用水煮沸0.5-10h使蛋白变性。
3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述胰糜蛋白酶的使用量为每g底物使用2-100U。
4.如权利要求1-3中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述酶解的温度为40-60℃，优选50-55℃；
优选地，所述酶解的时间为1-10h，优选3-5h；
优选地，所述酶解的pH值为6-8。
5.如权利要求1-4中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述酶灭活的温度为80-100℃；
优选地，所述酶灭活的时间为10-60min。
6.如权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述分离的方式为离心分离；
优选地，所述离心的速率为4000-6000r/min；
优选地，所述离心的温度为10-50℃；
优选地，所述离心的时间为5-30min。
7.如权利要求1-6中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述将鱼鳔加热进行蛋白变性之前先进行除杂，具体操作为：取新鲜鱼鳔或干鱼鳔用清水清洗，去除尘土、血污杂质；
优选地，所述分离得到鱼鳔肽后对其进行干燥；
优选地，所述干燥的方式为喷雾干燥。
8.如权利要求1-7中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括如下步骤：
(1)取新鲜鱼鳔或干鱼鳔用清水清洗，去除尘土、血污杂质；
(2)将步骤(1)得到的鱼鳔用水煮沸0.5-10h使蛋白变性；
(3)将步骤(2)得到的变性后的鱼鳔粉碎成鱼鳔浆液；
(4)将步骤(3)得到的鱼鳔浆液用每g底物2-100U的胰糜蛋白酶在40-60℃下进行酶解1-10h；
(5)将步骤(4)得到的酶解液在80-100℃下保持10-60min进行酶灭活；
(6)将步骤(5)得到的灭活液在10-50℃下以4000-6000r/min进行离心分离5-30min，取上清液；
(7)将步骤(6)得到的上清液进行喷雾干燥，得到所述鱼鳔肽。
9.如权利要求1-8中任一项所述的制备方法制备得到的鱼鳔肽，其特征在于，所述鱼鳔肽中分子量小于1000Da的多肽含量大于85％。
10.如权利要求1-8中任一项所述的制备方法在制备鱼鳔肽产品中的应用。
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| CN201910476374.3A CN110144375A (zh) | 2019-06-03 | 2019-06-03 | 一种鱼鳔肽及其制备方法和应用 |
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|---|---|---|---|---|
| CN111528467A (zh) * | 2020-05-28 | 2020-08-14 | 大洲新燕(厦门)生物科技有限公司 | 一种鱼胶燕窝粥及其制备方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103980347A (zh) * | 2014-05-22 | 2014-08-13 | 浙江海洋学院 | 一种大黄鱼鱼鳔降压肽及其制备方法和用途 |
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 罗永康等: "《生物活性肽功能与制备》", 31 March 2019 * |
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