CN110139660A - 用于制备抗肿瘤剂的组合物以及用于制备基于所述组合物的抗肿瘤剂的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药理学，并且涉及用于制备抗肿瘤剂的组合物，所述组合物是二价铂盐和alloferon肽的络合物，并且涉及含有所述络合物的药物组合物。本发明可以用于制备在肿瘤学中使用的制剂。本发明的技术结果是可以使用所述组合物作为不同类型的注射用制剂或冻干粉制剂的基础，所述组合物具有抗肿瘤效力和降低的毒性。所述技术结果通过以下事实实现：要求保护的用于制备含有alloferon肽的注射用溶液形式或冻干粉形式的抗肿瘤剂的组合物，其特征在于，二价铂与alloferon寡肽的络合化合物用作活性成分。用于制备基于上述组合物的抗肿瘤剂的方法的特征在于，将alloferon肽逐渐引入在0.9％的氯化钠中的顺铂的溶液中，然后将所述溶液混合15分钟，之后将所述溶液通过具有0.2mcm的孔的过滤器过滤灭菌，然后倒入安瓿瓶中并密封。可以以冻干粉的形式制备制剂，其中甘露醇作为填料。

Description

用于制备抗肿瘤剂的组合物以及用于制备基于所述组合物的 抗肿瘤剂的方法

技术领域

本发明涉及药理学，涉及用于制备抗肿瘤剂的组合物，所述组合物是二价铂盐和alloferon肽的络合物，并且涉及包含所述络合物的药物组合物。

背景技术

所述药物组合物可以用于制备肿瘤产品。寻找新的抗肿瘤活性产品是现代生物物理学、分子生物学、化学和医学的主要焦点之一。基于金属络合物的产品(其中基于铂的络合物是最有名的)在已知的抗肿瘤活性产品中具有特殊的地位。

铂络合物在抗癌化疗中的应用是本领域技术人员众所周知的。然而，主要用于此目的的是二价铂(即铂(II))。通常用于癌症治疗的含铂产品包括顺铂、卡铂、奥沙利铂等。但是，这些化合物证明不是在治疗任何类型的肿瘤中都是有用的；此外，某些类型的癌症细胞可以表现出对这些药物的抗性。所述含铂产品的一个主要缺点是它们的特征在于高的神经毒性、耳毒性、肾毒性、骨髓抑制，并产生大量的不良副作用。

铂产品特点在于广谱的抗肿瘤活性。顺式-二氨二氯铂(DDP)对以下各种来源的肿瘤有活性：自发的肿瘤、接种的肿瘤、病毒诱导的肿瘤和化学致癌物诱导的肿瘤。DDP的主要缺点是其高毒性导致肾脏疾病、骨髓疾病和胃肠道疾病(Biologicheskiye aspektykoordinatsionnoy khimii(“配位化学的生物学方面”)，由K.B.Yatsimirskyi.Kyiv.Naukova dumka编辑，1979，第149-180页)。

铂(II)络合化合物的抗肿瘤活性归因于导致肿瘤细胞凋亡的、与DNA的含氮碱基(主要是鸟嘌呤)的强键(bods)的形成。已知到目前为止在细胞中并未接收全部量的施用产品。该产品的大部分由血流经肾脏地、主要是完整的或以毒鼠强络合物的形式排出。由于该原因，排泄系统受铂药物副作用的影响最大。

DDP产品(以商品名顺铂销售)以相当高的剂量使用，因此增加了与基于铂的产品的毒性相关的不良作用的可能性。

动物中的各种铂络合物的研究和DDP及其类似物中的一些类似物的临床试验揭示了各种铂络合物的生物学特性：抗肿瘤活性和副作用。已经证明，络合物的分子结构的微小变化可以导致其生物学活性的显著变化。络合化合物的结构与其抗肿瘤活性之间存在的联系促使着寻找高活性和低毒性的含铂产品。

就在发现(DDP的)抗肿瘤作用后，全世界许多实验室对其结构类似物进行了研究。尽管事实是这些类似物对细胞结构的作用的分子机制仍然远未被理解，但已经取得了一些成功：溶解度提高、毒性降低、细胞渗透性改善等。不幸的是，所发现的药物中的极少药物在治疗指数(活性与毒性比)方面超过DDP。

两种方法主要用于开发新的基于DDP的抗肿瘤产品：1.通过向分子中引入各种取代基(通常引入取代基以取代一个或两个氯原子)的该分子的化学修饰，2.使DDP与另一种化合物络合，包括与具有其自身生物学活性的化合物络合。

通过使用第一种方法，已经开发出进入临床实践的抗肿瘤药物，例如：卡铂(顺式-二氨(1.1-环丁烷二羧酸)铂)、奥沙利铂([(1R,2R)-1,2-环己烷二氨-N,N’][草酸(2)-O,O’]铂)。

通过将吡啶环引入DDP分子中，已经产生了吡铂(Pyriplatin)产品。通过将大尺寸的吡啶环引入DDP，Stephen J.Lippard等人制备了菲铂(Phenantriplatin)产品，该产品在几种细胞的研究中表现出的功效优于顺铂的功效。

通过使顺铂与胆汁酸缩合，Enzo Bartoli，Beniamino Palmieri和AlessandroMedici(专利WO/2003/095470，Platinum complexes having antitumoractivity)已经制备了具有较低毒性且对睾丸肿瘤和卵巢肿瘤有效的药物。

一个写作小组已经开发了S-马拉他胺(环戊胺)铂(П)(专利RU 2128042，Antitumor Agent，Cheltsov-Bebutov，P.A.等人)，发现对几种对顺铂有抗性的肿瘤有效。铂被熟知的是其形成配位络合物的倾向。因此，用于产生含铂的抗肿瘤产品的另一种方法是用各种配体固定其中所含的铂以形成络合物。配体可以具有各种性质：具有低分子量或高分子量、惰性化合物或生物活性化合物。

描述了铂与腐殖酸的络合物：RF专利2182482，Sposob polucheniyaantirakovogo sredstva(“用于制备抗癌剂的方法”)和RF 2178702，Trofimov，V.A；Shipov，V.P.；Pigarev,E.S.，Popov，A.I.；Ivanov，V.N.的Antirakovoye sredstvo(“抗癌剂”)；以及Shipov，V.P.，Pigarev，E.S.，Fedoros，E.I.，Trofimova，N.P.的RF专利No.2368379，Protivoopukholevoye sredstvo(“抗肿瘤剂”)。

发明人在上述专利中使用的铂化合物包括顺铂、四氯铂酸钾和其它铂化合物，同时使用木质酸的铵盐作为腐殖质。该发明允许降低产品的毒性，同时提高产品的癌症治疗功效。

还应该注意，用作配体的腐殖酸具有其自身的生物学活性：抗氧化、抗炎症、抗病毒和免疫调节。

根据已知的授予Volchenkova，I.I.，Maidanevich，N.N.，Budarin，L.I.，Shalimov，S.A.，Trokhimenko，E.P.，Keisevich,L.V.的专利SU 1813089A3，Sposobpolucheniya soedineniya platiny(II)s DNK,obladayushchego protivoopukholevoyaktivnostiyu(“用于使用抗肿瘤活性DNA制备铂(II)化合物的方法”，将含有DNA和氯化钠的水溶液与DDP水溶液混合。

该方法允许产生特点是高的抗肿瘤活性和明显的免疫调节作用的药剂。该工作在O.S.Sokyrko等人的专利WO 2010074662A1，Protivoopukholevoye sredstvo，sposob egopolucheniya i sposob ego stabilizatsii(“抗肿瘤剂，用于制备该抗肿瘤剂的方法，以及用于使该抗肿瘤剂稳定的方法”)中进一步开发。

在Ekimova，A.A.，Alekseeva，G.M.，Karavayeva，A.V.的著作Kompleksnyesoedineniya platiny s dipeptidami:biologicheskaya aktivnost(“铂和二肽的络合化合物：生物活性”)，Farmatsia，2014年第6期第52-54页中，制备并描述了由顺式-二氨二氯铂和二肽组成的双核络合物，该二肽例如D，L-丙氨酰-D,L-丙氨酸(Ala-Ala)，D,L-丙氨酰-甘氨酸(Ala-Gly)D,L-丙氨酰-L-亮氨酸(Ala-Leu)，D,L-丙氨酰-L-正亮氨酸(Ala-nLeu)。将二肽引入铂配位层允许通过将化合物靶向递送至肿瘤细胞来改变抗肿瘤效果的范围并降低健康毒性。

与包含上述基于铂的产品的细胞抑制剂一起，来自干扰素组的重组蛋白也用于癌症治疗中作为抗肿瘤免疫激活剂和肿瘤细胞增殖抑制剂。干扰素用于治疗多发性骨髓瘤(Zee等人，J.Clin.Oncol.，1998，16，8，第2834-2839页)、霍奇金病(Aviles等人，Leuk.Lymphoma，1998，30，5-6，第651-656页)、骨髓性白血病(Gilbert，Cancer，1998，83，6，第1205-13页)。出于相同目的，在癌症治疗中使用干扰素诱导剂，例如Neovir、环干扰素(Cycloferon)等。

Alloferon肽是具有高抗病毒活性的寡肽，也属于干扰素诱导剂的类别。

“Allokin-α，用于皮下注射用溶液的冻干粉，1mg”(РN002829/01)，已经在alloferon肽的基础上制备了抗病毒药物。Allokin-α有效治疗由致癌人乳头瘤病毒引起的慢性乳头瘤病毒感染的患者；作为慢性1型和2型疱疹累及(herpes recidivicus)的治疗的联合治疗的一部分；作为治疗中度(黄疸)急性乙型肝炎的治疗的联合疗法的一部分。众所周知，乳头瘤病毒和疱疹病毒是致癌的。有证据表明，alloferon肽具有基于激活抗肿瘤免疫机制(即干扰素和自然杀伤细胞)的抗肿瘤特性，(Chernysh等人，Proceedings ofNational Academy of Science，2002，99，第12628-12632页)。高络合活性是alloferon肽家族肽的特性。已经研究了alloferon-1及其类似物与大量过渡金属的络合物，该过渡金属包括铜(M.Kuczer等人，J.Inorganic Biochemistry，111，2012，40-49)、镍等。还已知(M.Kuczer等人，Inorganic Chemistry，2013，52，5951-5961)，这种络合物可以是生物活性的。如授予Kiselev，O.I.，Ershov，F.I.的专利RU 2470031(Biologicheski aktivnyepeptidnye kompleksy(“生物活性肽络合物”))所示，由alloferon肽络合物产生的干扰素α诱导水平显著高于alloferon肽和环干扰素建立的诱导水平。

最接近的类似解决方案是“ALLOFERONS-IMMUNOMODULATORY PEPTIDES”(专利RU2172322，公布于2001年08月20日)，描述了具有通式I的新化合物：X1-His-Gly-X2-His-Gly-Val-Х3或其药学上可接受的盐、或醚、或酰胺，其中，X1不存在或含有至少1个氨基酸，X2含有至少1个氨基酸或是肽键；X3不存在或含有至少1个氨基酸，其中，所述氨基酸选自以下组：脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸或杂环氨基酸。该化合物刺激人免疫系统的抗病毒活性、抗微生物活性和抗肿瘤活性。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于制备抗肿瘤产品的组合物，该组合物将基于铂的化合物的抗肿瘤功效与具有干扰素诱导活性的物质的抗肿瘤功效相结合。这种组合可以允许降低铂的浓度，从而提供了降低的产品毒性。

本发明的技术结果是可以在组合物的基础上制备具有抗肿瘤效果和低毒性的各种类型的注射用产品或冻干粉。

所述技术结果通过提供一种用于制备注射用溶液或冻干粉形式的抗肿瘤剂的组合物来实现，所述组合物含有alloferon肽，其特征在于，使用二价铂与alloferon寡肽的络合化合物作为活性成分。优选地，顺式-二氨二氯铂用作铂盐。

一种用于基于上述组合物制备抗肿瘤剂的方法，其特征在于，将alloferon肽逐渐加入0.05％浓度的顺铂溶液中，将所得到的溶液搅拌15分钟，然后通过孔径为0.2微米的过滤器过滤灭菌，然后装入安瓿瓶。

优选地，形成DDP浓度为0.01％至0.05％且alloferon肽浓度为0.05％至0.1％的溶液。

具体实施方式

已知具有高抗病毒活性的细胞因子样肽家族(即alloferon肽)(RU 2172322，Chernysh,S.I.，Kim Su In，Bekker,G.P.，Makhaldiani,N.B.，Hoffmann，J.,Bulet,P.，Alloferony–immunomoduliruyushchie peptidy(“alloferon肽–免疫调节肽”))。alloferon肽通过诱导内源性干扰素产生和通过激活自然杀伤细胞系统起作用。

从基础化学中已知，铂具有形成络合化合物的强烈倾向。

上述目的通过提供一种有效成分是二价铂和alloferon肽的络合化合物的抗肿瘤药品来实现的。由于铂(II)盐和alloferon肽的抗肿瘤特性的组合，该药品具有低毒性和更高的功效。

本产品可以是注射用溶液、或冻干粉。

基于要求保护的组合物制备各种产品的以下实施例证明了可以实现本发明的目的。

实施例1.

ALF：DDP摩尔比为1:1。

将5mg的量的干燥顺式-二氨二氯铂加入到含有10ml的0.9％氯化钠溶液的烧杯中。搅拌溶液直至盐完全溶解。然后将10mg的量的alloferon肽加入溶液中。将溶液搅拌15分钟，然后通过孔径为0.2微米的过滤器过滤灭菌，然后分配到每个2ml的量的安瓿瓶中，并将安瓿瓶真空密封。所得到的溶液的DDP浓度为0.5mg/ml(0.05％)，alloferon肽浓度为1.0mg/ml(0.10％)。

实施例2.

ALF：DDP摩尔比为1:2。

将5mg的量的干燥顺式-二氨二氯铂加入到含有10ml的0.9％氯化钠溶液的烧杯中。搅拌溶液直至盐完全溶解。然后将5mg的量的alloferon肽加入溶液中。将溶液搅拌15分钟，然后通过孔径为0.2微米的过滤器过滤灭菌，然后分配到每个量为2ml的安瓿瓶中，并将安瓿瓶真空密封。所得到的溶液的DDP浓度为0.5mg/ml(0.05％)，alloferon肽浓度为0.5mg/ml(0.05％)。

实施例3.

ALF：DDP摩尔比为1:1。

将5mg的量的干燥顺式-二氨二氯铂加入到含有10ml的0.9％氯化钠溶液的烧杯中。搅拌溶液直至盐完全溶解。然后将40mg的量的甘露醇和10mg的量的alloferon肽依次加入到溶液中。将溶液搅拌15分钟，然后通过孔径为0.2微米的过滤器过滤灭菌，然后以每个2ml的量分配到FI-5或4D小瓶中。将小瓶置于冷冻干燥室中并在标准条件下干燥。完成该过程后，用塞子封闭小瓶并用铝盖密封。

所得到的溶液的DDP浓度为0.5mg/ml(0.05％)，alloferon肽浓度为1.0mg/ml(0.10％)。

实施例4.

ALF：DDP摩尔比为1:2。

将5mg的量的干燥顺式-二氨二氯铂加入到含有10ml的0.9％氯化钠溶液的烧杯中。搅拌溶液直至盐完全溶解。然后将40mg的量的甘露醇和5mg的量的alloferon肽依次加入到溶液中。进一步的操作按照实施例3。所得到的溶液的DDP浓度为0.5mg/ml(0.05％)，alloferon肽浓度为0.5mg/ml(0.05％)。

实施例5.抗肿瘤活性检测

已经在基于顺铂-梯瓦(Teva)(含有0.5mg/ml的铂的市售药物)制备的实施例产品上证明了本发明的功效。

在对比研究中使用了三种材料：

-安慰剂(0.9％的氯化钠溶液)

-参考产品顺铂-梯瓦(产品1)

-实施例1中描述的产品(产品2)。

在接种的实体艾氏肿瘤模型上检测抗肿瘤活性。待接种的实体艾氏癌症的小鼠品系获自联邦公共机构-彼得罗夫肿瘤科学研究所的菌株库。

在该研究中使用重18g至20g的雄性和雌性远交小鼠。将动物保持在自然光照条件下，自由地获取标准饲料和水。以0.2ml体积10⁷个细胞的量皮下接种肿瘤。将动物随机分组。形成三个组进行实验：

-第1组(n＝10只)。用生理盐水(安慰剂)处理动物。

-第2组(n＝9只)。用1号产品处理动物。

-第3组(n＝9只)。用2号产品处理动物。

在实验的第13天、第16天、第22天和第25天测量肿瘤结的长度和宽度。肿瘤体积由下式计算：

其中，а是结的较大线性大小，b是结的较小线性大小。在以每只小鼠0.2ml的量接种后第3天、第6天、第9天、第13天、第16天和第20天，在肿瘤细胞注射区域皮下施用产品和安慰剂。

在研究中的药剂的抗肿瘤活性是通过使用在实验肿瘤学中所采用的方法比较肿瘤生长动力学来评价的(由E.D.Goldberg，A.B.Syrkin M.编辑的Metodicheskiyerekomendatsii po doklinicheskomu izucheniyu sredstv,obladayushchikhsposobnostyu ingibirovat’protsess metastazirovaniya i povyshat’effektivnosttsitostaticheskoy terapii zlokachestvennykh opukholei(“能够抑制转移和提高恶性肿瘤的细胞抑制治疗功效的药剂临床前研究指南”)，1992)。

从小白鼠中肿瘤大小的研究中获得的数据显示在下面的表1、表2和表3中，并且显示在附图中。

表1.小白鼠中的肿瘤(艾氏癌)生长动力学(安慰剂组)

表2.小白鼠中的肿瘤(艾氏癌)生长动力学(产品1)

表3.小白鼠中的肿瘤(艾氏癌)生长动力学(产品2)

附图显示了小白鼠中的接种艾氏癌在化学产品处理下的生长动力学。因此，1号产品(顺铂)和2号产品显示出抗肿瘤特性。发现基于2号组合物的产品(其中使用二价铂与alloferon寡肽的络合化合物作为活性成分)比顺铂基本上(三倍)更有效。

Claims (5)

1.一种用于制备注射用溶液形式或冻干粉形式的抗肿瘤剂的组合物，所述组合物含有alloferon肽，其特征在于，使用二价铂与alloferon寡肽的络合化合物。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中，顺式-二氨二氯铂用作铂盐。

3.一种用于制备基于权利要求1或2的抗肿瘤剂的方法，其特征在于，将alloferon肽逐渐加入浓度为0.05％的顺铂溶液中，将所得到的溶液搅拌15分钟，然后将所述溶液通过孔径为0.2微米的过滤器过滤灭菌，然后装入安瓿瓶中。

4.一种用于制备基于权利要求1或2的抗肿瘤剂的方法，其特征在于，将alloferon肽逐渐加入浓度为0.05％的顺铂溶液中，将所得到的溶液搅拌15分钟，然后将所述溶液通过孔径为0.2微米的过滤器过滤灭菌，然后倒入小瓶中，冻干并密封。

5.根据权利要求3所述的方法，其中，形成的溶液具有0.01％至0.05％的DDP浓度以及0.05％至0.1％的alloferon肽浓度。