CN110108866A - 一种测定药物分布的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种测定药物分布的方法,其包括以下步骤:1)测定药物的血液/水、脂肪/水、蛋白质/水分配系数;2)建立药物在各个组织吸收和分布的体外模型式,所述体外模型式为:PCt=vlPl+vpPp+vwPw,通过体外模型式可以得出药物在人体各个组织(器官)浓度/血药浓度的分配系数。本发明所提供的测定药物分布的方法,具有操作简单、方便,且其还能同时预测一个药物在人体多个器官(心、脑、肝、肾、肺、肌肉、脂肪)中的吸收和分布情况,为更加简便、快捷地进行药物分布的研究提供了新的方向。
Description
技术领域
本发明属于新药设计和药物动力学研究开发领域,具体涉及一种测定药物分布的方法。
背景技术
新型药物的研究和开发需耗费大量的资金,从设计,再到合成,再到药效的检测以及活体实验,也是极为耗费时间的过程,而设计合成的药物往往因为其吸收(absorption,A)、分布(distribution,D)、代谢(metabolism,M)、排泄(excretion,E)(以下简称ADME)性质没有得到充分研究调查的因素而最终被淘汰。彻底的表征和深入药物ADME性质的研究能有效地支持药物的开发和研究过程,使得药物的生产更安全,开发新药更高效。
在药物实验和研究过程中,时常会发现某种分子在治疗某种疾病,比如癌症,或者感染性疾病方面有着显著功效。尽管如此,但实际上失败率却非常的高,仅有12%的分子能够通过实验和测试进入诊所和市场。在药效检测过程中,为了优化功效,排除其他影响,使足够的药物能够送达到预期的目标部位。而事实上,关键点在于提高临床实验的成功率和效率。
为了实现这一目标,我们可以1)直接测量作用部位的药物浓度(而这在人体中通常是不切实际的),2)假定药物在作用的部位和血液达到平衡状态,3)用非临床的吸收,分布,代谢和排泄(ADME)的数据来推导和估计,或者4)采用机械的数学模型来表征,并预测在组织中的药物结合点,药物作用时间-过程,以及药理受体复合物特征。
在过去给药途径多是静脉注射,而这既不方便也不便宜。随着医疗水平和科技的提升,给药途径也向非静脉方式转变,比如吸入和肠胃外给药(皮下和肌肉内)。为了最大限度地发挥这些方法的研发利用,我们必须更好的了解药物分子治疗疾病背后的机制和决定因素;即使对于常用的药物,我们精确地估计人类生物的利用度和吸收动力学的能力仍然很差。
例如蛋白质药物,从天然的蛋白质治疗剂(例如细胞激素,抗体),通过设计生产出更新颖和复杂的结构,包括聚乙二醇(PEG)缀合的蛋白质或肽,融合蛋白,已经发展并得出相关的特性,而这也对药物的稳定性,分解代谢等方面提出了新的挑战,这些特征能够影响药物的药代动力学(PK)。正是认识到所面临的挑战,通过监管机构也意识到了确定药物的ADME特性的潜在价值。
随着药物领域的不断发展,无论是和药物的多样性还是相似性,弄清楚药物分子的ADME特性,理解并研究其特性,这对设计新的化合物分子,还有药物的开发和利用都是至关重要的。
所以,药物开发过程应该是一个理性的过场,需要一个早期的评估以及后期的临床实验,前期的假设也许会相当满意,但是到后期的临床实验中却往往因为在体内达不到预期药代动力学效果而被淘汰。因此,在前期的工作中,提早验证药物的ADME特性将会提高开发研制的准确性和成功率。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此,本发明的主要目的在于建立一种测定药物在器官中的吸收和分布比Hansch方程更准确,且能同时预测一个化合物在人体多个器官(心、脑、肝、肾、肺、肌肉、脂肪)中的吸收和分布的方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
一种测定药物分布的方法,其包括以下步骤:
1)测定药物的血液/水、脂肪/水、蛋白质/水分配系数;
2)建立药物在各个组织吸收和分布的体外模型式,所述体外模型式为:
PCt=Ct/Cb
=[(ClVl+CpVp+CwVw)/Vt]/Cb
=(Vl/Vt)(Cl/Cb)+(Vp/Vt)(Cp/Cb)+(Vw/Vt)(Cw/Cb)
其中Cl、Cp和Cw分别是药物在某组织的脂肪、蛋白质和血液中的浓度,Vl、Vp和Vw分别是某个组织中脂肪、蛋白质和水中的体积;
体积分数vi=Vi/Vt(i=l,p,w)
分配系数Pj=Cj/Cb(j=l,p,w)
因此PCt=vlPl+vpPp+vwPw;通过所述体外模型式可以计算出药物在人体各个组织(器官)浓度/血药浓度的分配系数。
优选地,其中所述药物的脂肪/水分配系数测定方法为:
配置一定浓度的药物溶液,用紫外光度计测吸光度,通过药物-PBS溶液标准吸收方程算出药物的初始浓度Cl(1)(μg/mL);将猪脂肪取出后待其融化,用差量法称取Ml(g)猪脂肪放在透析袋中,用透析夹封口;取体积VlmL的药物溶液于保鲜袋,将猪脂肪的透析袋完全浸泡在药物溶液中,封口;每隔半小时测取一次药物溶液作为样品,标记并测定其吸光度,直至吸光度下降到最小值,最小吸光度对应的的浓度为达到透析平衡后的溶液浓度Cl(2)(μg/mL);
被脂肪吸收的药物的质量Wl=Cl(1)×Vl-Cl(2)×Vl
药物在脂肪相中的浓度Cl=Wl×ρl/Ml(ρl可以通过排水体积法测得)
药物的脂肪/水分配系数Pl=Cl/Cl(2)
优选地,其中所述药物的蛋白质/水分配系数的测定方法为:
配置一定浓度的药物溶液,用紫外光度计测吸光度,通过药物-PBS溶液标准吸收方程算出药物的初始浓度Cp(1)(μg/mL);称取Mp(g)蛋白质放在透析袋,用透析夹封口;取体积VpmL的药物溶液于保鲜袋中,将蛋白质的透析袋完全浸泡在药物溶液中,封口,在4摄氏度下保存;每隔半小时取一次药物溶液作为样品,标记并测定其吸光度,直至吸光度下降到最小值,小吸光度对应的的浓度为达到透析平衡后的溶液浓度Cp(2)(μg/mL);
被蛋白质吸收的药物的质量Wp=Cp(1)×Vp-Cp(2)×Vp
药物在蛋白质中的浓度Cp=Wp×ρp/MP(ρp可以通过排水体积法测得)
药物的蛋白质/水分配系数Pp=Cp/Cp(2);
优选地,其中所述脂肪通过如下方式获得:
将猪肉切成小块,置于冰箱冷冻室中待用;将索氏提取器洗净干燥,取适量脱脂棉置于索氏提取器管底,注意将底部的管口严密覆盖,再加入少量石油醚润湿,用玻璃棒将脱脂棉压实,再把切好的猪肉放入索氏提取器内,注意最高高度不得超过细管高度;取洁净干燥的500mL蒸馏烧瓶,加入石油醚至烧瓶2/3,然后加入一枚磁子,连接索氏提取器和球型冷凝管,用铁架台固定,用油浴锅在95摄氏度加热,接通冷凝水,打开磁力搅拌器,持续抽提10小时左右;取下冷凝管和索氏提取器,将猪肉倒掉,重新用脱脂棉垫底,加入新的猪肉,然后重复上述步骤抽提猪脂肪;重复4~5次后取下索氏提取器和冷凝管,关闭油浴锅和冷凝水,加入100mL二次水清洗提取液,反复三次;然后取出磁子,用分液漏斗分液,留下有机相与锥形瓶中(溶液量大,可分多次分液,置于多个锥形瓶中);再加入无水硫酸钠干燥有机相,干燥半小时后过滤,将滤液收集于蒸馏烧瓶中,连接旋转蒸发仪,设定稳定45摄氏度,除尽石油醚;所得猪脂肪密封并放入冰箱冷冻室待用;
优选地,其中所述蛋白质通过如下方式获得:
取一个2000mL大烧杯,用二次水清洗干净;取一定量的牛血清白蛋白放入透析袋中,上下用透析夹夹紧封口,注意蛋白质加入量不宜过多,至少留出1/5的空间,以免清洗后续过程中吸水涨破透析袋;将装好的蛋白质透析袋放入干净的大烧杯中,一次可放入多个透析袋,往大烧杯中加入大量的二次水,使透析袋被水完全淹没,并且将烧杯用保鲜膜封口,放在4摄氏度冷藏;在时间点24小时,36小时,48小时测一次紫外(透析过程中前24小时要每隔2小时换一次水,后面每隔5小时换一次水),知道紫外检测不出吸光度,说明已通过透析清除了牛血清白蛋白中的小分子杂质;
将蛋白质从透析袋中倒入清洁干燥的200mL烧杯中,置于干燥箱中干燥,设置温度为37摄氏度;直到蛋白质彻底干燥,用刮刀将黏在杯壁上的蛋白质刮下放在锥形瓶中,把锥形瓶封口并放在4摄氏度下冷藏保存。
与现有技术相比,本发明至少具有以下优点:
本发明所提供的测定药物分布的方法,其发明构思为:人体的大部分组织和器官主要是由脂肪、蛋白质和水组成,药物在各个器官吸收和分布的不同主要由该器官所含脂肪、蛋白质和水的量的不同所决定,与他们在哪个组织器官无关;因此我们认为药物在人体各器官的含量可以看成是药物在这三种组织成分中分布量之和;只要在体外测定出一个药物在脂肪/血液(血浆)、蛋白质/血液(血浆)、水/血液(血浆)的分配系数,使用体外模型式,每个组织的组织浓度/血药浓度就可以用以上这三个值,分别乘以脂肪、蛋白质和水在该组织中的质量分数,然后求和来获得;该测定方法具有操作简单、方便,且其还能同时预测一个药物在人体多个器官(心、脑、肝、肾、肺、肌肉、脂肪)中的吸收和分布情况,为更加简便、快捷地进行药物分布的研究提供了新的方向。
附图说明
图1为茶碱的浓度-吸收曲线;
图2为烟酸的浓度-吸收曲线;
图3为诺氟沙星的浓度-吸收曲线;
图4为氟哌啶醇的浓度-吸收曲线;
图5为以候选药物的logPCt(exp)对logPCt(cal)作线性回归曲线。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详述,以下实施例只是描述性的,不是限定性的,不能以此限定本发明的保护范围。
除非另外说明,本文中所有的百分比、份数、比值等均是按重量计。
本文的材料、方法和实施例均是示例性的,并且除非特别说明,不应理解为限制性的
本实施例用于说明本发明的一个基本实现方法,即在通过该测定药物的方法所得的理论值与实验结果进行对比,以确定该方法对药物的分布和吸收有较好的测定能力。
本发明的发明构思为:人体的大部分组织和器官主要是由脂肪、蛋白质和水组成,药物在各个器官吸收和分布的不同主要由该器官所含脂肪、蛋白质和水的量的不同所决定,与他们在哪个组织器官无关;因此我们认为药物在人体各器官的含量可以看成是药物在这三种组织成分中分布量之和;只要在体外测定出一个药物在脂肪/血液(血浆)、蛋白质/血液(血浆)、水/血液(血浆)的分配系数,使用体外模型式,每个组织的组织浓度/血药浓度就可以用以上这三个值,分别乘以脂肪、蛋白质和水在该组织中的质量分数,然后求和来获得;且通过进行对照实验,尝试在不同条件下进行试验,测定不同条件下药物分布达到平衡时的药物溶液浓度,并判断该条件对药物分布的影响;
1、实验仪器与药品、试剂
1.1、实验仪器
紫外-可见分光光度仪型号:UV-2450(日本岛津公司);超声波清洁仪器型号:KQ-50B(昆山市超声仪器公司);干燥箱;索氏提取器(上磨口45/50,下磨口24);球型冷凝器(45/50,高度365mm);纤维透析袋(MwCO 500 1mMwCO 8000 5m);加热磁力搅拌器;微量石英比色皿;旋转蒸发仪;分析天平;烧杯若干;磁子若干;结晶皿若干;透析夹若干;保险密封袋(5号);夹子若干。
1.2、药品试剂
药品名 | 纯度 | 生产商 |
茶碱 | 生化试剂 | 伊诺凯 |
烟酸 | 分析纯 | 伊诺凯 |
诺氟沙星 | 分析纯 | 伊诺凯 |
氟哌啶醇 | 分析纯 | 伊诺凯 |
磷酸氢二钠 | 分析纯 | 北京化工厂 |
磷酸二氢钠 | 分析纯 | 北京化工厂 |
石油醚 | 分析纯 | |
水 | 二次水 | |
牛血清白蛋白 | 生化试剂 | 北京博扬宏达科技公司 |
猪脂肪 | 北师大教工合作社 |
2、实现本发明的目的的具体技术方案为,包括如下步骤:
2.1、根据已知的人体器官(组织)的质量分数,将其换算成体积分数;
表1器官组成与质量分数(wlwpww分别对应器官(组织)中的脂肪、蛋白质、水的质量分数)
组织(tissue) | w<sub>l</sub> | w<sub>p</sub> | w<sub>w</sub> |
肾脏(Kidney) | 0.050 | 0.170 | 0.770 |
脑(Brain) | 0.107 | 0.079 | 0.790 |
肌肉(Muscle) | 0.020 | 0.170 | 0.790 |
肺(Lung) | 0.010 | 0.177 | 0.780 |
肝脏(Liver) | 0.070 | 0.180 | 0.720 |
脂肪(Fat) | 0.800 | 0.050 | 0.150 |
心脏(Heart) | 0.100 | 0.167 | 0.727 |
根据人体脂肪密度和蛋白质密度的范围,选择脂肪密度0.8g/ml,蛋白质1.1g/ml,假设每个器官质量为10g,总体积=Vl+Vp+Vw,根据表1,可求得各器官的体积分数,见表2:
表2器官组成与体积分数
组织(tissue) | v<sub>l</sub> | v<sub>p</sub> | v<sub>w</sub> |
肾脏(Kidney) | 0.0633 | 0.1566 | 0.7801 |
脑(Brain) | 0.1343 | 0.0721 | 0.7935 |
肌肉(Muscle) | 0.0258 | 0.1594 | 0.8148 |
肺(Lung) | 0.0131 | 0.1688 | 0.8181 |
肝脏(Liver) | 0.0901 | 0.1685 | 0.7414 |
脂肪(Fat) | 0.8365 | 0.0380 | 0.1255 |
心脏(Heart) | 0.1245 | 0.1512 | 0.7242 |
2、测定药物的血液/水、脂肪/水、蛋白质/水分配系数;
2.1、药物的血液/水分配系数的测定
在本发明中,采用水代替血液(血浆)作为初步的测量实验,即Pw为1。
2.2、药物的脂肪/水分配系数的测定
2.2.1、脂肪的提取
将猪肉切成小块,置于冰箱冷冻室中待用。将索氏提取器洗净干燥,取适量脱脂棉置于索氏提取器管底,注意将底部的管口严密覆盖,再加入少量石油醚润湿,用玻璃棒将脱脂棉压实,再把切好的猪肉放入索氏提取器内,注意最高高度不得超过细管高度。取洁净干燥的500mL蒸馏烧瓶,加入石油醚至烧瓶2/3,然后加入一枚磁子,连接索氏提取器和球型冷凝管,用铁架台固定,用油浴锅在95摄氏度加热,接通冷凝水,打开磁力搅拌器,持续抽提10小时左右。取下冷凝管和索氏提取器,将猪肉倒掉,重新用脱脂棉垫底,加入新的猪肉,然后重复上述步骤抽提猪脂肪。重复4~5次后取下索氏提取器和冷凝管,关闭油浴锅和冷凝水,加入100mL二次水清洗提取液,反复三次。然后取出磁子,用分液漏斗分液,留下有机相与锥形瓶中(溶液量大,可分多次分液,置于多个锥形瓶中)。再加入无水硫酸钠干燥有机相,干燥半小时后过滤,将滤液收集于蒸馏烧瓶中,连接旋转蒸发仪,设定稳定45摄氏度,除尽石油醚。所得猪脂肪密封并放入冰箱冷冻室待用。
2.2.2、测定药物的油/水分配系数
配置一定浓度的药物溶液,用紫外光度计测吸光度,通过药物-PBS溶液标准吸收方程算出药物的初始浓度Cl(1)(μg/mL)。将猪脂肪取出后待其融化,用差量法称取Ml(g)猪脂肪放在透析袋中,用透析夹封口。取体积VlmL的药物溶液于5号保鲜袋,将猪脂肪的透析袋完全浸泡浸泡在药物溶液中,封口。每隔半小时测取一次药物溶液作为样品,标记并测定其吸光度,直至吸光度下降到最小值,最小吸光度对应的的浓度为达到透析平衡后的溶液浓度Cl(2)(μg/mL)。
被脂肪吸收的药物的质量Wl=Cl(1)×Vl-Cl(2)×Vl
药物在油相中的浓度Cl=Wl×ρl/Ml(ρl可以通过排水体积法测得)
药物的脂肪/水分配系数Pl=Cl/Cl(2)
2.3、药物的蛋白质/水分配系数的测定
2.3.1、蛋白质的处理
取一个2000mL大烧杯,用二次水清洗干净。取一定量的牛血清白蛋白放入透析袋(MwCO 500)中,上下用透析夹夹紧封口,注意蛋白质加入量不宜过多,至少留出1/5的空间,以免清洗后续过程中吸水涨破透析袋。将装好的蛋白质透析袋放入干净的大烧杯中,一次可放入多个透析袋,往大烧杯中加入大量的二次水,使透析袋被水完全淹没,并且将烧杯用保鲜膜封口,放在4摄氏度冷藏。在时间点24小时,36小时,48小时测一次紫外(透析过程中前24小时要每隔2小时换一次水,后面每隔5小时换一次水),知道紫外检测不出吸光度,说明已通过透析清除了牛血清白蛋白中的小分子杂质。
将蛋白质从透析袋中倒入清洁干燥的200mL烧杯中,置于干燥箱中干燥,设置温度为37摄氏度。直到蛋白质彻底干燥,用刮刀将黏在杯壁上的蛋白质刮下放在锥形瓶中,把锥形瓶封口并放在4摄氏度下冷藏保存。
2.3.2、药物的蛋白质/水分配系数测定
配置一定浓度的药物水溶液,用紫外光度计测吸光度,通过药物-PBS溶液标准吸收方程算出药物的初始浓度Cp(1)(μg/mL)。称取Mp(g)蛋白质放在透析袋,用透析夹封口。取体积VpmL的药物溶液于5号保鲜袋中,将蛋白质的透析袋完全浸泡在药物溶液中,封口,在4摄氏度下保存。每隔半小时取一次药物溶液作为样品,标记并测定其吸光度,直至吸光度下降到最小值,小吸光度对应的的浓度为达到透析平衡后的溶液浓度Cp(2)(μg/mL)。
被蛋白质吸收的药物的质量Wp=Cp(1)×Vp-Cp(2)×Vp
药物在蛋白质中的浓度Cp=Wp×ρp/MP(ρp可以通过排水体积法测得)
药物的蛋白质/水分配系数Pp=Cp/Cp(2)
3、采用药物分布的体外模型式:
PCt=Ct/Cb
=[(ClVl+CpVp+CwVw)/Vt]/Cb
=(Vl/Vt)(Cl/Cb)+(Vp/Vt)(Cp/Cb)+(Vw/Vt)(Cw/Cb)
其中Cl、Cp和Cw分别是药物在某组织的脂肪、蛋白质和血液中的浓度,Vl、Vp和Vw分别是某个组织中脂肪、蛋白质和水中的体积;
体积分数vi=Vi/Vt(i=l,p,w)
分配系数Pj=Cj/Cb(j=l,p,w)
因此PCt=vlPl+vpPp+vwPw,通过PCt=vlPl+vpPp+vwPw计算预测药物分布百分数;
下面用表格和图来验证利用上述方法进行预测的准确性。
本申请中以药物茶碱、烟酸、诺氟沙星以及氟哌啶醇为例对本发明的技术方案作进一步详细说明,以验证通过该测定药物分布的方法所得的理论值与实验结果进行对比,确定该测定药物分布的方法对药物的分布和吸收有较好的测定能力。
1、标准曲线的绘制
准确称量Na2HPO4·12H2O35.814g,NaH2PO4·2H2O7.800g,分别定容至1000mL和500mL,再以8:2的体积比混合均匀,得到pH=7.4的PBS缓冲溶液,用pH试纸检测其pH大致范围。
用分析天平精密称取被测药物10mg,用PH=7.4的PBS缓冲液定容至100ml,制成100μg/ml的标准液,然后稀释成10ml的5、15、20、30、40、50μg/ml的溶液,用紫外分光光度计测吸光度,以浓度对吸光度进行线性回归,建立标准吸收曲线方程。
2、候选药物-PBS溶液标准吸收曲线的绘制
表3候选药物茶碱、烟酸、诺氟沙星、氟哌啶醇标准溶液浓度梯度与吸光度
根据表3测定的-PBS标准溶液浓度梯度与吸光度,分别绘制候选药物茶碱、烟酸、诺氟沙星、氟哌啶醇的浓度-吸光度曲线,如图1-图4所示;由图1-图4可知,候选药物茶碱、烟酸、诺氟沙星、氟哌啶醇在该范围内浓度与吸光度A的线性相关良好,可作为标准曲线用于计算。
3、药物的血液/水分配系数的测定
在本实施中,采用水代替血液(血浆)作为初步的测量实验,即Pw为1。
4、候选药物的脂肪/水分配系数的测定
通过透析平衡法,得到茶碱、烟酸、诺氟沙星的药物-PBS溶液的油/水分配系数的数据及结果如表4所示:
表4透析平衡法测定候选药物的脂肪/水分配系数
5、药物的蛋白质/水分配系数测定
通过透析平衡法,得到茶碱、烟酸、诺氟沙星的药物-PBS溶液的蛋白质/水分配系数的数据及结果如表5所示:
表5透析平衡法测定候选药物的蛋白质/水分配系数
6、将上述候选药物的脂肪/水分配系数、蛋白质/水分配系数,以及各个器官的体积分数代入药物分布的体外模型式PCt=vlPl+vpPp+vwPw,计算候选药物的器官浓度/血药浓度的分配系数如表6所示:
表6茶碱、烟酸、诺氟沙星、氟哌啶醇的logPCt(cal)与logPCt(exp)
根据表5所得茶碱、烟酸、诺氟沙星、氟哌啶醇的logPCt(cal)与logPCt(exp)的数据,以logPCt(exp)对logPCt(cal)作线性回归,如图5所示,logPCt(cal)与logPCt(exp)线性相关性较良好,说明该体外分布模型可行。
本申请所提供的药物分布的体外模型的建立方法,通过平衡透析法测定候选药物(茶碱、烟酸、诺氟沙星、氟哌啶醇)的脂肪/水、蛋白质/水的分配系数,再通过药物分布的体外模型式PCt=VlPl+VpPp+VwPw,计算候选药物在人体各个组织(器官)浓度/血药浓度的分配系数。从结果来看,计算结果logPCt(cal)与logPCt(exp)的线性相关程度较高,表明实验结果和理论值线性相关性较好,说明该体外模型对药物的分布和吸收有较好的测定能力。即只需通过实验测定出相应药物的脂/水分配系数和蛋白质/水分配系数,对于一定的器官,药物的器官浓度/血药浓度的分配系数,就可以通过这个药物分布的体外模型较为准确地测定出来。
本发明所提供的药物分布的体外模型的建立方法操作较为简单、方便,为更加简便、快捷地进行药物分布的研究提供了新的方向,经过遴选和改进,该模型有望成为可以普遍推广使用方便的筛选技术。
以上,仅为本发明较佳的具体实施方式,但发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,可轻易想到的变化或替换,都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此,本发明的保护范围应该以权利要求书的保护范围为准。
Claims (5)
1.一种测定药物分布的方法,其特征在于,其包括以下步骤:
1)测定药物的血液/水、脂肪/水、蛋白质/水分配系数;
2)建立药物在各个组织吸收和分布的体外模型式,所述体外模型式为:
PCt=Ct/Cb
=[(ClVl+CpVp+CwVw)/Vt]/Cb
=(Vl/Vt)(Cl/Cb)+(Vp/Vt)(Cp/Cb)+(Vw/Vt)(Cw/Cb)
其中Cl、Cp和Cw分别是药物在某组织的脂肪、蛋白质和血液中的浓度,Vl、Vp和Vw分别是某个组织中脂肪、蛋白质和水中的体积;
体积分数vi=Vi/Vt(i=l,p,w)
分配系数Pj=Cj/Cb(j=l,p,w)
因此PCt=vlPl+vpPp+vwPw,通过所述体外模型式可以计算出药物在人体各个组织(器官)浓度/血药浓度的分配系数。
2.根据权利要求1所述的测定药物分布的方法,其特征在于,所述药物的脂肪/水分配系数测定方法为:
配置一定浓度的药物溶液,用紫外光度计测吸光度,通过药物-PBS溶液标准吸收方程算出药物的初始浓度Cl(1)(μg/mL);将猪脂肪取出后待其融化,用差量法称取Ml(g)猪脂肪放在透析袋中,用透析夹封口;取体积VlmL的药物溶液于保鲜袋,将猪脂肪的透析袋完全浸泡在药物溶液中,封口;每隔半小时测取一次药物溶液作为样品,标记并测定其吸光度,直至吸光度下降到最小值,最小吸光度对应的的浓度为达到透析平衡后的溶液浓度Cl(2)(μg/mL);
被脂肪吸收的药物的质量Wl=Cl(1)×Vl-Cl(2)×Vl
药物在脂肪相中的浓度Cl=Wl×ρl/Ml(ρl可以通过排水体积法测得)
药物的脂肪/水分配系数Pl=Cl/Cl(2)。
3.根据权利要求1所述的测定药物分布的方法,,其特征在于,所述药物的蛋白质/水分配系数的测定方法为:
配置一定浓度的药物溶液,用紫外光度计测吸光度,通过药物-PBS溶液标准吸收方程算出药物的初始浓度Cp(1)(μg/mL);称取Mp(g)蛋白质放在透析袋,用透析夹封口;取体积VpmL的药物溶液于保鲜袋中,将蛋白质的透析袋完全浸泡在药物溶液中,封口,在4摄氏度下保存;每隔半小时取一次药物溶液作为样品,标记并测定其吸光度,直至吸光度下降到最小值,小吸光度对应的的浓度为达到透析平衡后的溶液浓度Cp(2)(μg/mL);
被蛋白质吸收的药物的质量Wp=Cp(1)×Vp-Cp(2)×Vp
药物在蛋白质中的浓度Cp=Wp×ρp/MP(ρp可以通过排水体积法测得)
药物的蛋白质/水分配系数Pp=Cp/Cp(2)。
4.根据权利要求2所述的测定药物分布的方法,其特征在于,所述脂肪通过如下方式获得:
将猪肉切成小块,置于冰箱冷冻室中待用;将索氏提取器洗净干燥,取适量脱脂棉置于索氏提取器管底,注意将底部的管口严密覆盖,再加入少量石油醚润湿,用玻璃棒将脱脂棉压实,再把切好的猪肉放入索氏提取器内,注意最高高度不得超过细管高度;取洁净干燥的500mL蒸馏烧瓶,加入石油醚至烧瓶2/3,然后加入一枚磁子,连接索氏提取器和球型冷凝管,用铁架台固定,用油浴锅在95摄氏度加热,接通冷凝水,打开磁力搅拌器,持续抽提10小时左右;取下冷凝管和索氏提取器,将猪肉倒掉,重新用脱脂棉垫底,加入新的猪肉,然后重复上述步骤抽提猪脂肪;重复4~5次后取下索氏提取器和冷凝管,关闭油浴锅和冷凝水,加入100mL二次水清洗提取液,反复三次;然后取出磁子,用分液漏斗分液,留下有机相与锥形瓶中(溶液量大,可分多次分液,置于多个锥形瓶中);再加入无水硫酸钠干燥有机相,干燥半小时后过滤,将滤液收集于蒸馏烧瓶中,连接旋转蒸发仪,设定稳定45摄氏度,除尽石油醚;所得猪脂肪密封并放入冰箱冷冻室待用。
5.根据权利要求3所述的测定药物分布的方法,其特征在于,所述蛋白质通过如下方式获得:
取一个2000mL大烧杯,用二次水清洗干净;取一定量的牛血清白蛋白放入透析袋中,上下用透析夹夹紧封口,注意蛋白质加入量不宜过多,至少留出1/5的空间,以免清洗后续过程中吸水涨破透析袋;将装好的蛋白质透析袋放入干净的大烧杯中,一次可放入多个透析袋,往大烧杯中加入大量的二次水,使透析袋被水完全淹没,并且将烧杯用保鲜膜封口,放在4摄氏度冷藏;在时间点24小时,36小时,48小时测一次紫外(透析过程中前24小时要每隔2小时换一次水,后面每隔5小时换一次水),知道紫外检测不出吸光度,说明已通过透析清除了牛血清白蛋白中的小分子杂质;
将蛋白质从透析袋中倒入清洁干燥的200mL烧杯中,置于干燥箱中干燥,设置温度为37摄氏度;直到蛋白质彻底干燥,用刮刀将黏在杯壁上的蛋白质刮下放在锥形瓶中,把锥形瓶封口并放在4摄氏度下冷藏保存。
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