JP7396678B2 - 恒常性を示す生体模倣システムを模倣するための血液及び尿回路が組み込まれた新規微小流体デバイス - Google Patents
恒常性を示す生体模倣システムを模倣するための血液及び尿回路が組み込まれた新規微小流体デバイス Download PDFInfo
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Description
[1]1つ以上の細胞培養コンパートメントを有する第1回路と、濾過ユニット及び再吸収ユニットを含む第2回路と、を含み、両回路は濾過ユニット及び再吸収ユニットを介して互いに連結されている、微小流体デバイス。
[2][1]に記載の微小流体デバイスであって、濾過ユニットは、分子のサイズ及び電荷に基づき、第1回路から第2回路へ分子を選択的に通過させる濾過障壁を含む、微小流体デバイス。
[3][2]に記載の微小流体デバイスであって、濾過障壁は、機械的又は生物学的障壁、好ましくは、有足細胞を含む生物学的障壁である、微小流体デバイス。
[4][1]~[3]のいずれか一つに記載の微小流体デバイスであって、再吸収ユニットは、第2回路からの流体を第1回路に再吸収させることを可能にする障壁を含む、微小流体デバイス。
[5][4]に記載の微小流体デバイスであって、再吸収障壁は、生物学的障壁、好ましくは、腎尿細管細胞を含む生物学的障壁である、微小流体デバイス。
[6][1]~[5]のいずれか一つに記載の微小流体デバイスであって、第1回路の細胞培養コンパートメントの少なくとも1つは、肝臓機能を模倣する臓器相当物を含み、第1回路の細胞培養コンパートメントの少なくとも1つは、腸機能を模倣する臓器相当物を含む、微小流体デバイス。
[7][1]~[6]のいずれか一つに記載の微小流体デバイスの、分析試験、診断、研究、標的検証、毒性試験、組織工学、組織生産、創薬スクリーニング及び/又は薬物動態-薬力学解析における使用。
[8][1]~[6]のいずれか一つに記載の微小流体デバイスを利用する生体模倣システムを動作させる方法。
[9][8]に記載の方法であって、胃腸管の上皮細胞を含み、腸機能を模倣する臓器相当物又は組織を含む細胞培養コンパートメントを介して生体模倣システムに栄養液を選択的に添加することを更に含む、方法。
[10][1]~[6]のいずれか一つに記載の微小流体デバイスを利用する生体模倣システムにおいて分析物を検出する方法であって、供試サンプルを第1回路の細胞培養コンパートメントに添加することを含み、好ましくは、細胞培養コンパートメントは、胃腸管、皮膚又は気道の上皮細胞を含む組織を含む、方法。
[11]1つ以上の細胞培養コンパートメントを有する第1回路と、濾過ユニット及び再吸収ユニットを含む第2回路と、を含む生体模倣システムを動作させることを含む、恒常性を模倣する方法であって、両回路は濾過ユニット及び再吸収ユニットを介して互いに連結されている、方法。
[12][11]に記載の方法であって、栄養液を生体模倣システムに、胃腸管、皮膚又は気道の上皮細胞を含む細胞培養コンパートメントを介して選択的に添加することを含み、好ましくは、上皮細胞は、胃腸管の、好ましくは小腸の上皮細胞である、方法。
[13]請求項[1]~[6]のいずれか一項に記載の微小流体デバイスに細胞を播種することを含む、細胞を培養及び/又は維持する方法。
[14]請求項[1]~[6]のいずれか一項に記載の微小流体デバイス及び使用説明書を含む、生体模倣システムを動作させるためのキット。
[15]請求項[1]~[6]のいずれか一項に記載の微小流体デバイスを含む、ADME(吸収、分布、代謝、排泄)試験、又はADMET(吸収、分布、代謝、排泄、毒性)試験。
全ての臓器相当物について、同一性、機能性及び生存力を決定するために免疫組織化学的試験を実施した(図6~9)。
一般に、細孔サイズは製造プロセスにより数ナノメートルからマイクロメートルまで調整することが可能であり、それにより、標的の化学及び生物学的分子を濾過、供給量調節及び分離することが可能となると共に、細胞培養コンパートメント及び微小流体流路網内の臓器相当物の間に流体を流動させることも可能になる。様々な実施形態において、多孔質膜は、上に記載した多孔質膜である。したがって、多孔質膜は、合成又は生物学的多孔質膜とすることができる。様々な実施形態において、前記多孔質膜は、コラーゲン、フィブリン又は細胞外マトリックス(脱細胞化臓器マトリックスを含む)のいずれかから作製することができるが、これらに限定されるものではない。様々な実施形態において、多孔質膜は、Transwell(登録商標)インサートと同一の性質を示す。様々な実施形態において、多孔質膜は、細胞により再吸収可能である。他の様々な実施形態において、多孔質膜はポリカーボネート製である。他の様々な好ましい実施形態において、多孔質膜はポリ(ジメチルシロキサン(PDMS)製多孔質膜である。
貯留コンパートメントは、栄養液をシステムに添加するために使用することができ、これが、培地貯留コンパートメントとも称される理由である。したがって、貯留器コンパートメントは、サンプル採取並びに供試サンプルの供給及び添加の3種の機能を果たすことができるが、臓器相当物を保持する細胞培養コンパートメントの役割は果たさない。
様々な実施形態において、臓器機能を模倣する臓器相当物又は組織は、初臓器組織、例えば、初代肝臓組織又は初代腸組織である。好ましくは、初代臓器組織は、各臓器の上皮細胞、即ち、例えば、胃腸管、皮膚又は気道の上皮細胞を含む。
様々な実施形態において、臓器機能を模倣する組織は、各臓器の上皮細胞、即ち、例えば、胃腸管、皮膚又は気道の上皮細胞を含む組織とすることができる。他の様々な実施形態において、臓器機能を模倣する組織は、市販の細胞株から得られ得る細胞等の、細胞株の細胞を含む組織とすることができる。
他の様々な実施形態において、臓器機能を模倣する組織は、誘導多能性幹細胞(iPSC)由来の細胞を含む組織である。具体的には、細胞は、単一(即ち、同一)ドナーiPSCに由来する(即ち、分化した)ものとすることができ、該iPSCは、元々は、単一種の体細胞から得られた(即ち、再プログラム化された)ものである。例えば、細胞は、単一の(即ち、同一の)iPSCに由来する(即ち、分化した)ものであり、該iPSCは、例えば、皮膚体細胞、白血球、腎細胞、脂肪細胞等から得られた(即ち、再プログラム化された)ものである。
微小流体デバイスが別個の培地貯留器又はサンプル採取貯留器を含む場合、これは、好ましくは、主微小流路構造内に配置される、即ち、分岐微小流路構造内に配置されない(図1に示す「血液回路」の配置図に従うが、これに限定されるものではない)。
更に、微小流体デバイスがマイクロポンプを含む場合、マイクロポンプは、好ましくは、主微小流路構造内に配置される、即ち、分岐微小流路構造内に配置されない(図1に示す「血液回路」の配置図に従うが、これに限定されるものではない)。
様々な好ましい実施形態において、第2回路は、分岐網ではなく、非分岐回路又は循環系である。「回路」及び「循環系」という語は、本明細書においては互換的に使用することができる。
他の好ましい実施形態において、iPSC由来腸相当物、具体的には、iPSC由来腸細胞のオルガノイドを含む少なくとも1つの細胞培養コンパートメントは、線維芽細胞及び内皮細胞、より好ましくはiPSC由来線維芽細胞及びiPSC由来内皮細胞、又はiPSC由来線維芽細胞及び初代微小血管内皮細胞を更に含む。初代微小血管内皮細胞又はiPSC由来内皮細胞は、好ましくは細胞培養コンパートメントの側底側に播種される。
更に、iPSC由来神経相当物を含む少なくとも1つの細胞培養コンパートメントは、好ましくは、iPSC由来神経スフェロイドを含む。より好ましくは、iPSC由来神経相当物、具体的にはiPSC由来神経スフェロイドを含む少なくとも1つの細胞培養コンパートメントは、バイオプリントされた血液脳関門を含む。より具体的には、iPSC由来神経相当物、具体的にはiPSC由来神経スフェロイドを含む少なくとも1つの細胞培養コンパートメントは、神経スフェロイドの下側にバイオプリントされた内皮細胞、好ましくはiPSC由来内皮細胞で富化されている。
更に、iPSC由来肝臓相当物を含む少なくとも1つの細胞培養コンパートメントは、好ましくは、iPSC由来肝実質細胞のスフェロイドを含む。より好ましくは、iPSC由来肝臓相当物、具体的には、iPSC由来肝実質細胞のスフェロイドを含む少なくとも1つの細胞培養コンパートメントは、線維芽細胞、好ましくはiPSC由来線維芽細胞を更に含む。好ましい実施形態において、iPSC由来肝臓相当物は、iPSC由来肝実質細胞のスフェロイドを、iPSC由来線維芽細胞と共に、それぞれの細胞培養コンパートメントに配置することにより達成される。
様々な実施形態において、RPTECは、腎近位尿細管上皮細胞株を含む。
更に、iPSC由来神経相当物を含む少なくとも1つの細胞培養コンパートメントは、好ましくは、iPSC由来神経スフェロイドを含む。より好ましくは、iPSC由来神経相当物、具体的には、iPSC由来神経スフェロイドを含む少なくとも1つの細胞培養コンパートメントは、バイオプリントされた血液脳関門を含む。より具体的には、iPSC由来神経相当物、具体的には、iPSC由来神経スフェロイドを含む少なくとも1つの細胞培養コンパートメントは、神経スフェロイドの下側にバイオプリントされた内皮細胞、好ましくはiPSC由来内皮細胞で富化されている。
様々な実施形態において、RPTECは、腎近位尿細管上皮細胞株を含む。
他の好ましい実施形態において、iPSC由来腸相当物、具体的には、iPSC由来腸細胞のオルガノイドを含む少なくとも1つの細胞培養コンパートメントは、線維芽細胞及び内皮細胞、より好ましくはiPSC由来線維芽細胞及びiPSC由来内皮細胞、又はiPSC由来線維芽細胞および初代微小血管内皮細胞を更に含む。初代微小血管内皮細胞又はiPSC由来内皮細胞は、好ましくは、細胞培養コンパートメントの側底側に播種される。
更に、iPSC由来神経相当物を含む少なくとも1つの細胞培養コンパートメントは、好ましくは、iPSC由来神経スフェロイドを含む。より好ましくは、iPSC由来神経相当物、具体的には、iPSC由来神経スフェロイドを含む少なくとも1つの細胞培養コンパートメントは、バイオプリントされた血液脳関門を含む。より具体的には、iPSC由来神経相当物、具体的には、iPSC由来神経スフェロイドを含む少なくとも1つの細胞培養コンパートメントは、細胞培養コンパートメントの側底側に播種された内皮細胞、好ましくはiPSC由来内皮細胞で富化されている。
更に、iPSC由来肝臓相当物を含む少なくとも1つの細胞培養コンパートメントは、好ましくは、iPSC由来肝実質細胞のスフェロイドを含む。より好ましくは、iPSC由来肝臓相当物、具体的には、iPSC由来肝実質細胞のスフェロイドを含む少なくとも1つの細胞培養コンパートメントは、線維芽細胞、好ましくはiPSC由来線維芽細胞を更に含む。好ましい実施形態において、iPSC由来肝臓相当物は、iPSC由来肝実質細胞のスフェロイドをiPSC由来線維芽細胞と共にそれぞれの細胞培養コンパートメントに配置することにより達成される。
更に、初代神経組織は、好ましくは、初代神経細胞を含む。更なる他の好ましい実施形態において、初代神経組織、具体的には初代神経細胞を含む最小1つの細胞培養コンパートメントは、バイオプリントされた血液脳関門を含む。より具体的には、初代神経組織、具体的には初代神経細胞を含む少なくとも1つの細胞培養コンパートメントは、細胞培養コンパートメントの側底側に播種されているか又は神経スフェロイドの下側にバイオプリントされているかのいずれかとすることができる内皮細胞で富化されている。
具体的には、創薬プロセスにおいて、in vitroADMEプロファイリング(又はスクリーニング)を行うことにより、新規分子物質を選択するための基準が得られ、新薬候補の選択並びに後期前臨床及び臨床開発に必要な、所望の薬物代謝、薬物動態又は安全性プロファイルを有する化合物が導かれる。薬剤(試験物質)のADME(T)プロファイル(又は特性)は、新薬開発者が規制当局の承認を受けるために必要な安全性及び有効性のデータを理解させるためのものである。
生体模倣システムを動作させる方法において、培養時間は数週間又は数ヵ月間続く可能性さえあり、疾患モデリング及び反復投与による物質曝露が可能となる。
様々な実施形態において、供試サンプルは、皮膚相当物及び/又は気道相当物、より具体的には肺相当物を含む細胞培養コンパートメントを介して生体模倣システムに選択的に添加される。
他の様々な実施形態において、供試サンプルは、生体模倣システムに、臓器相当物を含む細胞培養コンパートメントとは異なるキャビティを介して選択的に添加される。この種のキャビティは、血液回路及び/又は尿回路の「培地貯留器」とすることができる。本明細書の他の箇所に記載するように、この種の「培地貯留器」は、微小流体システムからサンプル又は培養物上清を採取する役割のみを果たす「サンプル採取貯留器」若しくは「サンプル採取チャンバ/コンパートメント」用である、及び/又は微小流体システムに供試サンプルを添加する役割のみを果たす「サンプル貯留器」若しくは「サンプルチャンバ/コンパートメント」用である。
様々な実施形態において、供試サンプルは液体供試サンプルであり、好ましくは、胃腸管相当物、具体的には腸相当物、より具体的には小腸相当物を含む細胞培養コンパートメントを介して生体模倣システムに添加される。様々な実施形態において、供試サンプルは、クリーム等の化粧品又は消費者製品であり、これは、好ましくは、皮膚相当物を含む細胞培養コンパートメントを介して生体模倣システムに添加される。
本開示による分析物を検出する方法は、血液回路及び/又は尿回路の「培地貯留器」からサンプルを採取することを含むことができる。本明細書の他の箇所に記載するように、この種の「培地貯留器」は、微小流体システムからサンプル又は培養物上清を採取する役割を果たす「サンプル採取貯留器」若しくは「サンプル採取チャンバ/コンパートメント」用とすることができ、及び/又は供試サンプルを微小流体システムに添加する役割を果たすが、臓器相当物用細胞培養コンパートメントとしての役割を果たさない「サンプル貯留器」若しくは「サンプル採取チャンバ/コンパートメント」用とすることができる。
本開示による分析物を検出する方法は、微小流体システムからサンプル採取チャンバを介して採取したサンプルを、代謝物、好ましくは毒性代謝物の有無に関し分析することを更に含むことができる。本開示による分析物を検出する方法は、具体的には、生体模倣システムに供試サンプルとして添加した薬剤の代謝物を検出することが可能である。
本開示による分析物を検出する方法は、第1回路及び/又は第2回路の流体の流れの中の分析物を検出することを更に含むことができる。
分析物を検出する方法の好ましい実施形態において、供試サンプルは、栄養液が添加される細胞培養コンパートメントと同一又は異なる第1回路の細胞培養コンパートメントに添加又は堆積される。
様々な実施形態において、好ましくはiPSC由来腸細胞のオルガノイドである腸相当物は、上述の細胞外マトリックスに混合されている(incorporated)か又は埋め込まれている。
様々な実施形態において、腸相当物は、上述の細胞外マトリックスに混合されているか又は埋め込まれている。
更に、上に記載したように、iPSC由来腸相当物は、好ましくは、iPSC由来腸細胞のオルガノイドである。同様に、細胞外マトリックスの層は、好ましくは、細胞外マトリックスのゲルを基体とする層、より好ましくは、基底膜様細胞外マトリックス抽出物の層(典型的には、組織細胞外環境様)である。基底膜様細胞外マトリックス抽出物は、ゼラチン質タンパク質混合物を含むことができる。好ましくは、基底膜様細胞外マトリックスはMatrigel(登録商標)基底膜マトリックス(Corning)である。
本開示の様々な実施形態において、神経スフェロイド若しくはオルガノイドの下側にバイオプリントされた、又は神経相当物の側底側、特に神経相当物を含む細胞培養コンパートメントの側底側に播種された内皮細胞は、具体的には、チップで2週間培養した後に20~78W×cm2のTEERを示す。
ヒトの生理機能の制約を縮小することによりチップ設計を達成した。寸法データのみならず流動特性も考慮した。配置図は、次に示す臓器相当物:腸、肝臓、腎臓(糸球体及び尿細管に分離)及び神経組織(図1)を組み込むためのキャビティを収容した2つの回路(「血液」及び「尿」と称する)を含む。前者の3種の組織は、いわゆるADMEプロファイル(吸着、分布、代謝、排泄)を得るために使用する。後者はこのプロファイルを補足する追加の組織である。したがって、このチップは、ADME-Nチップと称される。各回路の1つの貯留コンパートメントにより、上清をサンプル採取することが可能になる(培地貯留器1及び2)。培地の灌流は、組み込まれた2つ(各回路に1つずつ)の空気圧マイクロポンプにより、微小流体網を通じて行われる。回路は2つの腎臓コンパートメントが重複しており、ポリカーボネート製の多孔質膜で分離されている。
腸相当物は、24ウェル自立型細胞培養インサートをそれぞれのキャビティ(細胞培養コンパートメント)に配置することにより達成した。インサートは、市販の腸モデル(Epilntestinal(登録商標)、MatTek)を収容したもの、又はiPSC由来線維芽細胞及びiPSC由来内皮細胞も含むMatrigelに埋め込まれたiPSC由来腸細胞のオルガノイドを収容したもののいずれかとした。iPSC由来腸相当物モデル上には、初代微小血管内皮細胞又はiPSC由来内皮細胞を、24ウェル自立型細胞培養インサートの側底側に播種した。インサートの頂端側を使用して、栄養液(B.BraunのNutriflex(登録商標)peri)を毎日供給した。頂端側は、上清を合計250pL収容するものとした。
血液脳関門を有する神経相当物は、iPSC由来神経スフェロイドを収容した96ウェル吊下型細胞培養インサートから構成されるものとし、96ウェル吊下型細胞培養インサートの側底側に播種された、又は神経スフェロイドの下側にバイオプリントされた、iPSC由来内皮細胞で富化したものとした。インサートの頂端側は75pLの量を収容するものとした。
肝臓相当物は市販の肝臓モデル(InSpheroの3D InSight(商標)Human Liver Microtissues XL)又はiPSC由来線維芽細胞を含むiPSC由来肝実質細胞のスフェロイドのいずれかをそれぞれのキャビティに配置することにより達成した。前者は、それぞれ3000個の初代肝実質細胞を含む50個のスフェロイドを1つのチップに配置した。後者は、それぞれ50000個の細胞を含む20個のスフェロイドを1つのチップに配置した。
腎臓コンパートメントには、腎近位尿細管上皮細胞株(RPTEC)又はiPSC由来腎細胞のいずれかを播種した。
使用したiPSC由来細胞の分化プロトコルは、表1に列挙した様々な論文のプロトコルを適合させた。
・iPSC肝臓相当物
・iPSC腸相当物
・印刷された血液脳関門を含むiPSC神経相当物
・RPTEC腎臓
腸相当物のインサートは、iPSC由来線維芽細胞及びiPSC由来内皮細胞も含むMatrigelにiPSC由来腸細胞のオルガノイドを埋め込んだものを含む。iPSC由来腸相当物モデル上には、24ウェル自立型細胞培養インサートの側底側に初代微小血管内皮細胞又はiPSC由来内皮細胞を播種する。
血液脳関門を含む神経相当物は、iPSC由来神経スフェロイドを収容した細胞培養インサートから構成されるものとし、神経スフェロイドの下側をバイオプリントされたiPSC由来内皮細胞で富化した。
肝臓相当物は、iPSC由来線維芽細胞を含むiPSC由来肝実質細胞のスフェロイドをそれぞれのキャビティに配置することにより達成する。それぞれ50000個の細胞を含む20個のスフェロイドを1つのチップ上に配置する(肝実質細胞:線維芽細胞比24:1)。
腎臓コンパートメントに腎近位尿細管上皮細胞株(RPTEC)を播種する。
・初代肝臓組織
・初代小腸
・印刷された血液脳関門を有するiPSC神経相当物
・RPTEC腎臓
腸相当物のインサートは市販の腸モデル(Epilntestinal(登録商標)、MatTek)を含む。
血液脳関門を有する神経相当物は、iPSC由来神経スフェロイドを収容した細胞培養インサートから構成されるものとし、神経スフェロイドの下側をバイオプリントされたiPSC由来内皮細胞で富化する。
肝臓相当物は市販の肝臓モデル(InSpheroの3D InSight(商標)Human Liver Microtissues XL)をそれぞれのキャビティに配置することにより実現する。それぞれ3000個の初代肝実質細胞を含む50個のスフェロイドを1つのチップに配置する。
腎臓コンパートメントには腎近位尿細管上皮細胞株(RPTEC)を播種する。
・iPSC肝臓相当物
・iPSC腸相当物
・血液脳関門を有するiPSC神経相当物
・iPSC腎相当物
腸相当物のインサートは、iPSC由来線維芽細胞及びiPSC由来内皮細胞も含むMatrigelに埋め込まれたiPSC由来腸細胞のオルガノイドを収容するものとする。iPSC由来腸相当物モデル上には、24ウェル自立型細胞培養インサートの側底側に、初代微小血管内皮細胞又はiPSC由来内皮細胞を播種する。
血液脳関門を有する神経相当物は、iPSC由来神経スフェロイドを収容する細胞培養インサートから構成されるものとし、細胞培養インサートの側底側に播種されたiPSC由来内皮細胞で富化する。
肝臓相当物は、iPSC由来線維芽細胞を含むiPSC由来肝実質細胞のスフェロイドをそれぞれのキャビティに配置することにより達成する。それぞれ50000個の細胞を含む20個のスフェロイドを1つのチップに配置する(肝実質細胞:線維芽細胞比24:1)。
腎臓コンパートメントにはiPSC由来腎細胞を播種する。
チップは恒常性を有していた。このことは、グルコース及びLDHの濃度が一定であることにより示された(図3)。グルコース濃度が一定であったことは、利用可能なグルコースの消費が一定であり、能動的に調節されることを示唆している。グルコース濃度は全てのコンパートメントで等しい濃度に到達した。腸相当物の頂端側のみからの供給でも「血液」及び「尿」回路の両方の必要を満たすのに十分であった。同様に、LDH活性は、実験全体を通じて比較的一定であることが示された。グルコースと比較して、LDH濃度は各コンパートメントで異なっていた。腸相当物及び腎相当物のバリア機能は、3つ全てのコンパートメント(即ち、血液回路->培地貯留器1;尿回路->培地貯留器2;及び腸コンパートメント)でLDH濃度が異なることにより示される。したがって、このバリアにより、横断する物質が区別される。他の物質を保持しながら、グルコースが能動的又は受動的に透過されることは、チップシステムの部分集合間で実際的な相互作用があることを示唆している。
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Claims (12)
- 微小流体デバイスであって、当該微小流体デバイスが、
(i)腸相当物を含む細胞培養コンパートメント、神経相当物を含む細胞培養コンパートメント、及び肝臓相当物を含む細胞培養コンパートメントを有する血液回路と、
(ii)有足細胞を含む生物学的障壁を含む濾過ユニット及び腎尿細管細胞を含む生物学的障壁を含む再吸収ユニットを有する尿回路と、
(iii)システムに栄養液を添加する機能を有する貯留コンパートメントと
を含み、
前記血液回路及び前記尿回路は、前記濾過ユニット及び前記再吸収ユニットを介して互いに連結され、前記濾過ユニットは、分子のサイズ及び電荷に基づき、前記血液回路から前記尿回路へ前記分子を選択的に通過させ、前記再吸収ユニットは、前記尿回路からの流体を前記血液回路に再吸収させ、
前記腸相当物を含む細胞培養コンパートメントにおいて栄養液が供給され、
前記細胞培養コンパートメントが微小流体網により相互に接続されている
ことを特徴とする微小流体デバイス。 - 毒性試験、創薬スクリーニング及び/又は薬物動態-薬力学解析における、請求項1に記載の微小流体デバイスの使用。
- 請求項1に記載の微小流体デバイスを動作させる方法であって、前記腸相当物を含む細胞培養コンパートメントを介して、前記微小流体デバイスに栄養液を選択的に添加するステップを備えることを特徴とする方法。
- 請求項1に記載の微小流体デバイスを用いて分析物を検出する方法であって、供試サンプルを前記血液回路の細胞培養コンパートメントに添加するステップを備えることを特徴とする方法。
- 請求項4に記載の方法において、前記細胞培養コンパートメントは、胃腸管、皮膚又は気道の上皮細胞を含む組織を含むことを特徴とする方法。
- 請求項1に記載の微小流体デバイスを動作させるステップを備える、恒常性を模倣する方法。
- 請求項6に記載の方法において、胃腸管、皮膚又は気道の上皮細胞を含む細胞培養コンパートメントを介して、前記微小流体デバイスに栄養液を選択的に添加するステップを備えることを特徴とする方法。
- 請求項7に記載の方法において、前記上皮細胞は、胃腸管の上皮細胞であることを特徴とする方法。
- 請求項8に記載の方法において、前記胃腸管の上皮細胞は、小腸の上皮細胞であることを特徴とする方法。
- 請求項1に記載の微小流体デバイスに細胞を播種するステップを備える、細胞を培養及び/又は維持する方法。
- 請求項1に記載の微小流体デバイス及び使用説明書を含む、キット。
- 請求項1に記載の微小流体デバイスを含む、ADME(吸収、分布、代謝、排泄)試験又はADMET(吸収、分布、代謝、排泄、毒性)試験。
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