CN110101722B - 一种复合益生菌菌剂用于制备治疗溃疡性结肠炎产品的用途 - Google Patents

一种复合益生菌菌剂用于制备治疗溃疡性结肠炎产品的用途 Download PDF

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Abstract

本申请提供一种复合益生菌菌剂用于制备治疗溃疡性结肠炎产品的用途。所述复合益生菌菌剂包含4株益生乳酸菌株，分别为干酪乳杆菌Zhang、动物双歧杆菌V9、植物乳杆菌P‑8和植物乳杆菌C2，这些益生菌均具有良好的耐酸性、人工胃肠液耐受性及胆盐耐受性，并且不携带耐药性质粒，所含4株益生菌菌株均具有较高的安全性。所述复合益生菌菌剂还包含益生元，所述益生元能够与益生菌协同增效，确保益生菌的益生功能。本申请提供的复合益生菌菌剂对溃疡性结肠炎具有显著疗效，能够调节肠道菌群的益生功能从而使肠道菌群健康化，采用本申请提供的复合益生菌菌剂作为治疗溃疡性结肠炎的辅助药物具有治疗简单、缓解率高、无毒副作用等特点。

Description

一种复合益生菌菌剂用于制备治疗溃疡性结肠炎产品的用途
技术领域
本申请属于生物制剂领域，特别涉及一种复合益生菌菌剂用于制备治疗溃疡性结肠炎产品的用途。
背景技术
溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)是一种病因及发病机制尚不明确的肠道慢性非特异性炎性疾病，是炎症性肠病(Inflammatory bowel disease，IBD)中的一个亚型，其发病率在全球范围内逐年升高。溃疡性结肠炎主要表现为结肠黏膜病变，多以溃疡为主，病变部位多发生在直肠和乙状结肠，甚则累及整个结肠。目前认为UC是由遗传因素、免疫功能紊乱、肠道屏障功能障碍和肠道微生态改变等多因素所致。
传统治疗溃疡性结肠炎的方法为口服抗生素类药物，而抗生素类药物对肠道内的菌群选择性低，在肠道内致病菌被杀死的同时，肠道内的益生菌也会被大量地杀死，进而破坏患者肠道菌群的平衡，导致溃疡性结肠炎的缓解率较低。
发明内容
本申请的目的是提供一种复合益生菌菌剂用于制备治疗溃疡性结肠炎产品的用途以及所述复合益生菌菌剂用于辅助治疗治疗溃疡性结肠炎的用途。所述复合益生菌菌剂包含4株益生乳酸菌株，分别为干酪乳杆菌Zhang、动物双歧杆菌V9、植物乳杆菌P-8和植物乳杆菌C2，这些益生菌均具有良好的耐酸性、人工胃肠液耐受性及胆盐耐受性，并且不携带耐药性质粒，所含4株益生菌菌株均具有较高的安全性。所述复合益生菌菌剂还包含益生元，所述益生元能够与益生菌协同增效，确保益生菌的益生功能。本申请提供的复合益生菌菌剂对溃疡性结肠炎(UC)具有显著疗效，能够调节肠道菌群的益生功能从而使肠道菌群健康化，采用本申请提供的复合益生菌菌剂作为治疗溃疡性结肠炎的辅助药物具有治疗简单、缓解率高、无毒副作用等特点。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
一种复合益生菌菌剂用于制备治疗溃疡性结肠炎产品的用途，所述复合益生菌菌剂包含有4株益生菌菌株，分别为干酪乳杆菌Zhang(Lactobacillus casei Zhang)、动物双歧杆菌V9(Bifidobacterium animalis V9)、植物乳杆菌P-8(Lactobacillus plantarumP-8)和植物乳杆菌C2(Lactobacillus plantarum C2)，所述4株益生菌均在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心(国家专利局指定专利微生物保藏中心)，保藏地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，干酪乳杆菌Zhang(Lactobacillus caseiZhang)的保藏号为CGMCC No.5469，动物双歧杆菌V9(Bifidobacterium animalis V9)的保藏号为CGMCC No.5470，植物乳杆菌P-8(Lactobacillus plantarum P-8)的保藏号为CGMCCNo.6312，植物乳杆菌C2(Lactobacillus plantarum C2)的保藏号为CGMCC No.14532。
在本申请中所述干酪乳杆菌Zhang、动物双歧杆菌V9和植物乳杆菌P-8均为现有技术中公开的菌种，如，中国专利CN 103893214 A公开了干酪乳杆菌Zhang、动物双歧杆菌V9和植物乳杆菌P-8。
本申请提供复合益生菌菌剂包括以下重量比的组分：
Figure BDA0002088443900000021
其中，基于1kg计为1重量份。
基于复合益生菌菌剂的总重量，所述复合益生菌菌剂中，干酪乳杆菌Zhang的活菌数量≥3.0×109CFU/g，动物双歧杆菌V9的活菌数量≥4.0×109CFU/g，植物乳杆菌P-8的活菌数量≥3.0×109CFU/g，植物乳杆菌C2≥3.0×109CFU/g。
本申请提供的复合益生菌菌剂具有较高的活菌数含量，能够很好的保证复合益生菌菌剂发挥益生功效。所述四种益生菌能够利用益生元作为代谢底物，在肠道粘膜大量增殖，形成肠道保护屏障，从而调节肠道菌群，使肠道菌群健康化，改善人体机能。
所述益生元包括低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、低聚乳糖、低聚壳聚糖、大豆低聚糖、抗性糊精、菊粉和/或聚葡萄糖等，优选为低聚木糖和/或L-阿拉伯糖。
所述果蔬粉包括蓝莓粉、草莓粉、蔓越莓粉、樱桃粉、苹果粉、香蕉粉、木瓜粉、芒果粉、火龙果粉、南瓜粉、胡萝卜粉、葡萄粉、石榴粉、哈密瓜粉、枸杞粉、红枣粉和/或猕猴桃粉等。
本发明提供的用于治疗溃疡性结肠炎的复合益生菌菌剂具有能够有效治疗溃疡性结肠炎(UC)，并且能够调节肠道菌群，使肠道菌群健康化的益生特点。
本发明使用多种高活菌数的益生菌菌粉及益生元、果蔬粉为原料，将不同特性的营养物质进行优化复配组合，使服用者能够同时摄入益生菌和富含益菌因子的益生元，如可溶性膳食纤维低聚木糖、L-阿拉伯糖、抗性糊精等，益生菌和益生元协同增效，使有益菌大量增殖，从而提高外源性益生菌在肠道内膜上的定植率和存活率，改善肠道菌群平衡系统，提高人体免疫力，促进机体修复各项机能，进而起到治疗溃疡性结肠炎，使肠道菌群健康化，调节肠道菌群，解决了单纯使用抗生素类药物疗效差，缓解率低等问题，具有广阔的市场前景。
本申请提供的所述复合益生菌菌剂用于制备治疗溃疡性结肠炎产品的用途，所述复合益生菌菌剂与药学可接受的辅料组合，制成用于治疗溃疡性结肠炎的药物。
在一种可实现的方式中，所述复合益生菌菌剂的用量为每日(1～5)g，优选为每日2g。
本申请还提供所述复合益生菌菌剂用于辅助治疗溃疡性结肠炎的用途。
在一种可实现的方式中，所述复合益生菌菌剂与抗生素配合使用，优选与抗生素配合使用，例如，与美沙拉嗪(艾迪莎)配合使用，作为美沙拉嗪的辅助用药，用量为每日(1～5)g，优选为每日2g。
在一种可实现的方式中，所述复合益生菌菌剂溶解于温水或者牛奶中的服用，饭后口服，1次/日。
附图说明
图1示出复合益生菌菌剂对UC患者IBD相关症状积分的影响；
图2A表示治疗前后患者的血沉(ESR)值；
图2B表示治疗前后后患者C-反应蛋白(CRP)的含量；
图3A示出健康志愿者与治疗前的UC患者Chao1指数比较结果；
图3B示出健康志愿者略与治疗前的UC患者肠道中观测到的物种数比较结果；
图3C示出健康志愿者与治疗前后UC患者肠道的香农多样性指数比较结果；
图3D示出健康志愿者与治疗前后的UC患者肠道的辛普森多样性指数比较结果；
图4A示为基于Bray Curtis距离的主坐标分析，健康志愿者与不同治疗方法治疗前后UC患者肠道菌群β多样性差异比较结果；
图4B示为基于非加权Unrfiac距离的主坐标分析，健康志愿者与不同治疗方法治疗前后UC患者肠道菌群β多样性差异比较结果；
图4C示为基于加权Unrfiac距离的主坐标分析，健康志愿者与不同治疗方法治疗前后UC患者肠道菌群β多样性差异比较结果。
具体实施方式
下面通过对本发明进行详细说明，本发明的特点和优点将随着这些说明而变得更为清楚、明确。
以下详述本发明。
尽管目前UC的发病机制不明确，但研究表明，UC的发病与肠道菌群有关。当肠道菌群失调时，肠道内致病菌大量繁殖并破坏了肠道黏膜屏障，同时致病菌分泌的肠毒素进一步增加了肠道通透性，使得大量的细菌及代谢产物透过肠道屏障进入机体，影响了肠道免疫，最终导致了UC的发病。
本申请人相关研究发现与健康人相比，IBD患者肠道中包括柔嫩梭菌(Faecalibacterium)等有益菌的数量减少，而有害菌的数量有所升高。
本申请提供一种复合益生菌菌剂用于制备治疗溃疡性结肠炎产品的用途，所述复合益生菌菌剂包括以下重量比的组分：
Figure BDA0002088443900000031
其中，基于1kg计为1重量份。
基于所述复合益生菌菌剂的总重量，在所述复合益生菌菌剂中，干酪乳杆菌Zhang的活菌数量≥3.0×109CFU/g，动物双歧杆菌V9的活菌数量≥4.0×109CFU/g，植物乳杆菌P-8的活菌数量≥3.0×109CFU/g，植物乳杆菌C2≥3.0×109CFU/g。
在一种可实现的方式中，所述干酪乳杆菌Zhang、动物双歧杆菌V9、植物乳杆菌P-8和植物乳杆菌C2的活菌数之比为干酪乳杆菌Zhang的活菌数:动物双歧杆菌V9的活菌数:植物乳杆菌P-8的活菌数:植物乳杆菌C2的活菌数＝(0.5～2):(0.5～2):(0.5～2):(0.5～2)，优选为3:4:3:3。
干酪乳杆菌Zhang(Lactobacillus casei Zhang)是一株分离自内蒙古大草原自然发酵酸马奶的益生性能优异的益生菌，其能够在人和动物肠道内定植，拮抗肠道致病菌、调节肠道菌群，从而提高机体免疫力及抗氧化能力，并且能够降低肠道细菌内毒素的含量，从而降低肿瘤和结肠癌发生风险以及干预修复肠道病症常用药-雷帕霉素造成的肠道损伤和炎症。
乳双歧杆菌V9(Bifidobacterium animalis V9)是一株分离自健康蒙古族儿童肠道的益生性能优异的益生菌，其能够在人和动物肠道内定植，并具有拮抗肠道致病菌、调节肠道菌群、提高腹泻康复率、有效治疗腹泻等益生特性。该菌株在临床治疗便秘、急性腹泻和慢性腹泻有效率分别为95.3％、95.4％和89.9％。
植物乳杆菌P-8(Lactobacillus plantarum P-8)是一株分离自内蒙古大草原自然发酵酸牛乳的具有一定抑菌特性的益生菌，其具有改善脂质代谢、降低血脂、提高机体抗氧化能力及免疫力、抑制腐败真菌生长、延长发酵乳制品货架期等益生特性。
植物乳杆菌C2(Lactobacillus plantarum C2)是从四川省自然发酵的泡菜中分离筛选出的一株具有优良益生特性的益生菌，具快速产酸的特性，在肠道内能够产生大量4-羟基苯乳酸，而4-羟基苯乳酸能够抑制大肠杆菌等致病菌和霉菌的生长及繁殖。
本发明人发现，所述干酪乳杆菌Zhang、动物双歧杆菌V9和植物乳杆菌P-8能够调节肠道菌群，拮抗肠道致病菌，而植物乳杆菌C2所产生4-羟基苯乳酸能够抑制大肠杆菌等致病菌和霉菌的生长及繁殖，从而协同前述三株菌调节肠道菌群。
进一步地，当干酪乳杆菌Zhang的活菌数:动物双歧杆菌V9的活菌数:植物乳杆菌P-8的活菌数:植物乳杆菌C2的活菌数约为(0.5～2):(0.5～2):(0.5～2):(0.5～2)，优选为3:4:3:3时，四株益生菌的协同作用显著。
在一种可实现的方式中，所述复合益生菌菌剂中各菌株可以为含有活菌的菌粉，也可以为含有活菌的菌液。基于使用便捷性的考虑，优选使用含有活菌的菌粉。
在本实施例中，所述复合益生菌菌剂中各菌株可以使用现有技术中任意一种制备含有活菌菌粉或者含有活菌菌液的方法来制备。
例如，所述含有活菌的菌粉通过包括以下步骤的方法制备：
步骤1，制备含有活菌的菌液；
步骤2，将步骤1制备的菌液制成含有活菌的菌粉。
进一步地，所述制备含有活菌的菌液通过包括以下步骤的方法制备：
步骤1-1，将待制备的菌体与水、小分子糖、酵母粉混合；
步骤1-2，将步骤1-1制备的体系与抗氧化剂混合；
步骤1-3，将步骤1-2制备的体系与多孔淀粉混合；
步骤1-4，将步骤1-3制备的体系与蛋白质混合，调节体系pH，恒温处理；
步骤1-5，将步骤1-4制备的体系与共价交联包埋剂混合。
其中，所述小分子糖选自蔗糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、果糖、低聚果糖、低聚半乳糖中的一种或者多种，优选为蔗糖。
所述抗氧化剂选自L-半胱氨酸盐、抗坏血酸钠、海藻酸钠和阿拉伯胶中的一种或者多种，优选为L-半胱氨酸盐，优选为L-半胱氨酸盐、胱氨酸和过氧化氢酶的组合物。
所述蛋白质选自脱脂乳粉、大豆蛋白粉、脱盐乳清粉中的一种或者多种，优选为脱脂乳粉。
所述共价交联包埋剂为包括0.5wt％～1wt％凝乳酶以及0.3wt％～1.0wt％谷丙酰胺转氨酶的水溶液。
再如，所述将菌液制备成含有活菌的菌粉通过包括以下步骤的方法制备：
步骤2-1，将菌液与水、小分子糖、蛋白质和除氧剂混合，搅拌，制得上机液；
步骤2-2，使步骤2-1制备的上机液在10min内温度降至-45℃～-50℃，保温；
步骤2-3，将步骤2-2制备的体系置于-20℃环境中，在真空条件下按照程序升温进行冻干。
其中，所述小分子糖选自蔗糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、果糖、低聚果糖、低聚半乳糖中的一种或者多种，优选为蔗糖、葡萄糖和乳糖等重量比的组合物。
所述蛋白质选自脱脂乳粉、大豆蛋白粉、脱盐乳清粉、酵母粉中的一种或者多种，优选为脱脂乳粉与酵母粉的组合物。
所述除氧剂选自L-半胱氨酸盐、抗坏血酸钠、海藻酸钠和阿拉伯胶中的一种或者多种，优选为L-半胱氨酸盐。
在一种可实现的方式中，复合益生菌菌剂中所述益生元包括低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、低聚乳糖、低聚壳聚糖、大豆低聚糖、抗性糊精、菊粉和/或聚葡萄糖等，优选为低聚木糖和/或L-阿拉伯糖。
本实施例中所述低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、低聚乳糖、低聚壳聚糖、大豆低聚糖、抗性糊精、菊粉和聚葡萄糖均为可商购的产品。
低聚木糖又称木寡糖，主要是由一个木糖分子以β-1、4糖苷键键结合而成的低聚糖。
本申请人发现，低聚木糖能够显著增殖肠道有益菌，对肠道内的有益菌，尤其是对动物双歧杆菌V9和植物乳杆菌P-8的增殖效果明显，能够使动物双歧杆菌V9和植物乳杆菌P-8有效地在肠道内大量定植，维护肠道免疫系统，并且能够辅助降血糖，提高人体免疫力，促进营养物质的吸收。在增殖肠道有益菌的同时，低聚木糖还能促进肠道蠕动，平衡肠道水分，促进肠道健康。
在一种可实现的方式中，所述果蔬粉包括蓝莓粉、草莓粉、蔓越莓粉、樱桃粉、苹果粉、香蕉粉、木瓜粉、芒果粉、火龙果粉、南瓜粉、胡萝卜粉、葡萄粉、石榴粉、哈密瓜粉、枸杞粉、红枣粉和/或猕猴桃粉等。
在本实施例中，所述蓝莓粉、草莓粉、蔓越莓粉、樱桃粉、苹果粉、香蕉粉、木瓜粉、芒果粉、火龙果粉、南瓜粉、胡萝卜粉、葡萄粉、石榴粉、哈密瓜粉、枸杞粉、红枣粉和猕猴桃粉等均为现有技术中常用的果蔬粉。本申请使用上述果蔬粉对复合益生菌菌剂进行调味，增加复合益生菌菌剂的适口性。
本申请提供的所述复合益生菌菌剂用于制备治疗溃疡性结肠炎产品的用途，所述复合益生菌菌剂与药学可接受的辅料组合，制成用于治疗溃疡性结肠炎的药物。
本申请还提供所述复合益生菌菌剂用于辅助治疗溃疡性结肠炎的用途，优选与抗生素配合使用，例如，与美沙拉嗪(艾迪莎)配合使用，作为美沙拉嗪的辅助用药，用量为每日(1～5)g，优选为每日2g。
在一种可实现的方式中，所述复合益生菌菌剂溶解于温水或者牛奶中的服用，饭后口服，1次/日。
实施例
实施例1复合益生菌菌剂的制备
下面以干酪乳杆菌Zhang(Lactobacillus casei Zhang)为例说明菌粉的制备。
(1)菌种活化和培养
将冷冻保存的干酪乳杆菌Zhang(Lactobacillus casei Zhang)接种于MRS液体培养基中，在温度37℃下培养20h，如此传代培养3次得到活化菌种；
其中，MRS液体培养基按如下配比制备：10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、2g柠檬酸三钠、1mL吐温80、0.2g硫酸镁、0.05g硫酸锰加入1000mL蒸馏水，调节pH至6.5，121℃灭菌15min。
(2)高密度发酵
将活化好的干酪乳杆菌Zhang按照5％(v/v)的比例接种到存有经过灭菌的MRS培养基的发酵罐中，37℃恒温培养，初始pH＝6.5，通过流加中和剂25％(V/V)氨水控制体系恒pH5.5，发酵3小时后，再停止控制恒pH，继续进行发酵，当pH低于4.5时，再通过流加25％(V/V)氨水控制体系pH至5.5发酵5h，再进行自然发酵，如此循环控制20小时，至干酪乳杆菌Zhang活菌数达到1×1010CFU/mL以上，结束发酵。
(3)制备冻干菌粉
将(2)制备的干酪乳杆菌Zhang菌液与水、小分子糖、蛋白质和除氧剂混合，搅拌，制得上机液；使制得的上机液在10min内温度降至-45℃～-50℃，保温；将制得的体系置于-20℃环境中，在真空条件下按照程序升温进行冻干，制得干酪乳杆菌Zhang菌粉。
按照上述方法，制备动物双歧杆菌V9菌粉、植物乳杆菌P-8菌粉和植物乳杆菌C2菌粉。
称取所述干酪乳杆菌Zhang菌粉100g，动物双歧杆菌V9菌粉100g，植物乳杆菌P-8菌粉200g和植物乳杆菌C2菌粉300g，低聚木糖4000g，芒果粉1500g，进行混合制得复合益生菌菌剂，使得基于所述复合益生菌菌剂，干酪乳杆菌Zhang的活菌数量≥3.0×109CFU/g，动物双歧杆菌V9的活菌数量≥4.0×109CFU/g，植物乳杆菌P-8的活菌数量≥3.0×109CFU/g，植物乳杆菌C2≥3.0×109CFU/g。
下面通过试验例来进一步阐述本申请提供的用于治疗溃疡性结肠炎的复合益生菌菌剂在治疗溃疡性结肠炎(UC)，调节肠道菌群，使肠道菌群健康化方面的特点。这些试验例为本发明所述的临床疗效观察试验。
试验例
试验例1
本发明所述可以有效治疗溃疡性结肠炎，使肠道菌群健康化，同时改善胃肠症状、调节肠道菌群。
1.研究对象
选取在某医院消化内科门诊及住院部就诊，符合诊断和排除标准的28例轻中度UC患者作为研究对象，年龄18-60岁，性别不限。另选同期医院体检的15例健康志愿者作为对照组。排除标准：伴有其它消化道病变、心肝肾功能不全、恶性肿瘤、糖尿病、既往有腹部手术史者、妊娠或哺乳期妇女、试验前4周内曾服用影响本试验观察的药物(抗生素、微生态制剂)、自身免疫性疾病及不能按期复诊及随访者。
2.实验方法
将28例UC患者随机分为对照组和试验组，使用美沙拉嗪(艾迪莎)对其进行治疗。在美沙拉嗪治疗的同时，试验组将复合益生菌菌剂溶于温水或牛奶中(饭后口服，1袋/日，2g/袋)，而对照组将安慰剂溶于温水或牛奶中(饭后口服，1袋/日，2g/袋)，治疗90天。
3.观察指标
(1)IBD症状得分：治疗前以及治疗90天后，对以下症状进行评定打分：排便次数、便血、内镜发现和医师总体评价。按照表1的评分准则，对各项目进行打分。
表1 IBD相关症状积分表(分)
Figure BDA0002088443900000061
Figure BDA0002088443900000071
(2)血液指标测定：对治疗前后患者的血沉(ESR)和C-反应蛋白(CRP)的含量进行测定。
(3)肠道菌群测定：对28例UC患者治疗前后的肠粘膜样品和15例健康志愿者的肠粘膜样品进行PacBio SMRT三代测序，分析其菌群构成。
4.观测方法
比较对照组和试验组不同方法在排便次数、IBD症状得分、血液指标和肠道菌群方面差异。
5.治疗结果
对照组和试验组对UC患者治疗效果(即治疗前后IBD相关症状积分差异)比较，结果如图1所示。
由图1中可以明显可以看出，相较于服用安慰剂的对照组，服用复合益生菌菌剂的试验组有更明显的治疗效果。这表明服用复合益生菌菌剂对溃疡性结肠炎有一定的辅助治疗效果。
对照组和试验组对UC患者血液指标的改善情况如图2A和图2B所示，其中图2A表示治疗前后患者的血沉(ESR)值，图2B表示治疗前后后患者C-反应蛋白(CRP)的含量。
由图2A和图2B可以明显看出，相较于服用安慰剂的对照组，服用复合益生菌菌剂的实验组患者的血沉和C-反应蛋白指数下降更为明显。这表明相较于服用安慰剂的对照组，服用复合益生菌菌剂可以起到抑制炎症反应、降低炎症因子的作用。
图3A～图3D分别示出健康志愿者与采用不同治疗方法治疗前后UC患者肠道菌群α多样性差异比较。
图3A示出健康志愿者与治疗前的UC患者Chao1指数比较结果，由图3A可知，健康志愿者略低于治疗前的UC患者Chao1指数，而健康志愿者与采用不同治疗方法治疗前后UC患者肠道Chao1指数较为相似，试验组治疗后患者肠道菌群与健康志愿者较对照组更为相似。
图3B示出健康志愿者略与治疗前的UC患者肠道中观测到的物种数比较结果，由图3B可知，健康志愿者略低于治疗前的UC患者肠道中观测到的物种数，而健康志愿者与采用不同治疗方法治疗前后UC患者肠道观测到的物种数较为相似，试验组治疗后患者肠道菌群与健康志愿者较对照组更为相似。
图3C示出健康志愿者与治疗前后UC患者肠道的香农多样性指数比较结果，由图3C可知，健康志愿者与治疗前后UC患者肠道的香农多样性指数差异较小。
图3D示出健康志愿者与治疗前后的UC患者肠道的辛普森多样性指数比较结果，由图3D可知，健康志愿者与治疗前后的UC患者肠道的辛普森多样性指数差异较小。
从图3A～图3D中可以明显看出UC患者治疗前其肠道菌群丰度略高于正常志愿者，治疗后与正常志愿者肠道菌群相似，尤其是试验组治疗后患者肠道菌群与健康志愿者差异明显低于对照组。
图4A～图4C示出健康志愿者与不同治疗方法治疗前后UC患者肠道菌群β多样性差异比较结果。
图4A示为基于Bray Curtis距离的主坐标分析，结果显示出UC患者治疗前的肠道菌群与健康志愿者的肠道菌群存在一定差异，而UC患者治疗后的肠道菌群与健康志愿者肠道菌群较为相似。
图4B示为基于非加权Unrfiac距离的主坐标分析，结果显示出UC患者治疗前的肠道菌群与健康志愿者的肠道菌群存在一定差异，而UC患者治疗后的肠道菌群与健康志愿者肠道菌群较为相似。
图4C示为基于加权Unrfiac距离的主坐标分析，结果显示出UC患者治疗前的肠道菌群与健康志愿者的肠道菌群存在一定差异，而UC患者治疗后的肠道菌群与健康志愿者肠道菌群较为相似。
从图4A～图4C中可以明显看出UC患者治疗前的肠道菌群与健康志愿者的肠道菌群存在一定差异，而UC患者治疗后的肠道菌群与健康志愿者肠道菌群较为相似。而相较于对照组，服用复合益生菌菌剂的试验组患者的肠道菌群与健康志愿者肠道菌群更为相似。这表明服用复合益生菌菌剂对UC患者肠道菌群有一定的治疗作用，使得UC患者肠道菌群趋向于健康，即，服用复合益生菌菌剂可以起到有效治疗溃疡性结肠炎，同时还可以起到改善胃肠症状、调节肠道菌群的作用。
服用复合益生菌菌剂不仅可以对UC有更加明显的效果，还可以起到抑制炎症反应、降低炎症因子的作用。除此之外，服用复合益生菌菌剂可以使UC患者肠道菌群的α多样性与β多样性与健康志愿者肠道菌群更为接近。
对照组和试验组的缓解率分别为66.67％和86.67％，即，使用本申请提供的复合益生菌菌剂配合治疗，能够有效溃疡性结肠炎，缓解率显著提高。
综上所述，由益生乳酸菌干酪乳杆菌Zhang(Lactobacillus casei Zhang)、动物双歧杆菌V9(Bifidobacterium animalis V9)、植物乳杆菌P-8(Lactobacillus plantarumP-8)和植物乳杆菌C2复配的复合益生菌菌剂与抗生素配合使用对溃疡性结肠炎具有治疗效果，缓解率明显提高。
以上结合具体实施方式和范例性实例对本申请进行了详细说明，不过这些说明并不能理解为对本申请的限制。本领域技术人员理解，在不偏离本申请精神和范围的情况下，可以对本申请技术方案及其实施方式进行多种等价替换、修饰或改进，这些均落入本申请的范围内。本申请的保护范围以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种复合益生菌菌剂用于制备治疗溃疡性结肠炎产品的用途，其特征在于，所述复合益生菌菌剂由干酪乳杆菌Zhang，动物双歧杆菌V9，植物乳杆菌P-8、植物乳杆菌C2、益生元和果蔬粉制成，其中，干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）Zhang的保藏号为CGMCCNo.5469，动物双歧杆菌（Bifidobacterium animalis）V9的保藏号为CGMCC No.5470，植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）P-8的保藏号为CGMCC No.6312，植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）C2的保藏号为CGMCC No.14532。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，基于复合益生菌菌剂的总重量，在所述复合益生菌菌剂中，干酪乳杆菌Zhang的活菌数量≥3.0×109 CFU/g，动物双歧杆菌V9的活菌数量≥4.0×109 CFU/g，植物乳杆菌P-8的活菌数量≥3.0×109 CFU/g，植物乳杆菌C2的活菌数量≥3.0×109 CFU/g。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述干酪乳杆菌Zhang、动物双歧杆菌V9、植物乳杆菌P-8和植物乳杆菌C2的活菌数之比为干酪乳杆菌Zhang的活菌数:动物双歧杆菌V9的活菌数:植物乳杆菌P-8的活菌数:植物乳杆菌C2的活菌数=（0.5~2）:（0.5~2）:（0.5~2）:（0.5~2）。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述干酪乳杆菌Zhang、动物双歧杆菌V9、植物乳杆菌P-8和植物乳杆菌C2的活菌数之比为干酪乳杆菌Zhang的活菌数:动物双歧杆菌V9的活菌数:植物乳杆菌P-8的活菌数:植物乳杆菌C2的活菌数为3:4:3:3。
5.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述益生元包括低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、低聚乳糖、低聚壳聚糖、大豆低聚糖、菊粉和/或聚葡萄糖。
6.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述果蔬粉包括蓝莓粉、草莓粉、蔓越莓粉、樱桃粉、苹果粉、香蕉粉、木瓜粉、芒果粉、火龙果粉、南瓜粉、胡萝卜粉、葡萄粉、石榴粉、哈密瓜粉、枸杞粉、红枣粉和/或猕猴桃粉。
7.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述复合益生菌菌剂与抗生素配合使用。
8.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述复合益生菌菌剂的用量为每日1g~5g。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述复合益生菌菌剂的用量为每日2g。
10.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述复合益生菌菌剂溶解于温水或者牛奶中服用。
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