CN110041219B - 一种索马鲁肽侧链的液相合成方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种索马鲁肽侧链的液相合成方法，将二甘醇胺与X基反应，使得二甘醇胺氨基端受X基保护，然后与溴乙酸苄酯反应羧基端做成苄基保护，分别脱除苄基和X基，脱除基团的两种产物进行偶联后并脱除X基，再与Fmoc‑谷氨酸偶联后脱除Fmoc，最后与18‑(叔丁氧基)‑18氧代十八烷酸偶联后脱除苄基即得索马鲁肽侧链。本发明方法合成方法过程可行、可控、成本低、产率高，适合于大规模生产，最终制备获得索马鲁肽侧链，可以经过修饰为OSu酯后在液相中直接组装至索马鲁肽主链上。

Description

一种索马鲁肽侧链的液相合成方法
技术领域
本发明属于化学药物技术领域，具体涉及一种索马鲁肽侧链的液相合成方法。
背景技术
糖尿病(diabetes mellitus)是由胰岛素绝对或相对不足引起的以高血糖和其他并发症并存为特点的内分泌代谢常见病、多发病。中国糖尿病负担最重，患病人数已超过1.14亿人。胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)是一种重要的肠促胰岛素，相比传统糖尿病药物，它能够解决常规口服降糖药解决不了的β细胞凋亡这一难题。索马鲁肽(Semaglutide)被誉为全球最好的GLP-1激动剂，与人GLP-1有94％同源性，在降糖、减重、心血管系统获益以及安全性等方面表现出更大的优势。索马鲁肽将肽链第26位的赖氨酸位置连接上18碳脂肪二酸侧链，其可介导和促进索马鲁肽与白蛋白的强结合，降低肾清除率，相比C16侧链的利拉鲁肽，索马鲁肽侧链对白蛋白的亲和力增强了5～6倍，与白蛋白结合可以增大了本品的分子量，能够避免快速被肾脏清除并防止代谢性降解，延长体内半衰期。由于索马鲁肽的侧链可以看作是4个反应单元，工业上常用固相合成的方式偶联4次得到，再经过切割得到。但由于固相合成的原子经济性差，且侧链的原料相对较贵，因此，开发新的液相合成侧链的方法具有突出的实用价值和市场前景。
索马鲁肽侧链结构式见(Ⅰ)
Figure BDA0002054099290000011
关于索马鲁肽侧链合成的专利一共有三篇，分别是：[WO 2009022013]、[WO2009115469]、[WO 2009083549]，但均采用了固相合成Fmoc策略，将侧链看成是4个反应单元，在发明人了解的范围内，并没有发现该侧链的纯液相合成方法的报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种过程可行、可控、成本低、产率高，适合于大规模生产的索马鲁肽侧链的合成方法。
为了解决上述技术问题，本发明采取的技术方案如下：
一种索马鲁肽侧链的液相合成方法，包括如下步骤：
(1)将二甘醇胺与X基反应，使得二甘醇胺氨基端受X基保护，得到化合物3；
(2)将化合物3的羧基端做成苄基保护，得到化合物4；
(3)将化合物4脱除苄基得到化合物5；将化合物4脱除X基得到化合物6；
(4)将化合物5与化合物6偶联得到化合物7；
(5)将化合物7脱除X基得到化合物8；
(6)将化合物8与Fmoc-谷氨酸偶联得到化合物9；
(7)将化合物9脱除Fmoc得到化合物10；
(8)将化合物10与18-(叔丁氧基)-18氧代十八烷酸偶联得到化合物12；
(9)化合物12脱除苄基即得索马鲁肽侧链；
详细的合成路线如图1所示。
具体地，步骤(1)中，所述X基为Fmoc、Boc或Trt，优选为Trt、Boc，更优选为Boc；二甘醇胺与X基的反应在有机溶剂A中进行，所述有机溶剂A为乙酸乙酯、二氯甲烷(DCM)、四氢呋喃、甲苯、乙腈、DMF、二氯乙烷、氯仿中的任意一种或几种任意比例的混合物，优选为DCM。
步骤(2)中，所述做成苄基保护具体为将化合物3与溴乙酸苄酯在有机溶剂B中，加入无机碱加热反应；所述的有机溶剂B为乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、乙腈、DMF、二氯乙烷、氯仿中的任意一种或几种任意比例的混合物，优选为DMF；所述的无机碱为碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠或氢氧化钾，优选为碳酸钾；所述加热反应的温度为30-70℃，优选为40-60℃，最佳为50℃。
步骤(3)中：所述脱除苄基的方式为将化合物4与钯碳在有机溶剂C中于室温下加氢反应，所述的有机溶剂C为甲醇、乙醇、丙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、乙腈、二甲基甲酰胺、碳酸二甲酯中的一种或几种的混合物，优选为乙酸乙酯；所述的钯碳中的钯的质量百分含量占钯碳总质量的5％，钯的用量占所需还原的肽的摩尔量的1％-20％，优选为1％-15％，最佳为10％；所述脱除X基的方式为将化合物4溶于有机溶剂D中，并加入酸，室温下反应3-10h，减压蒸馏除去有机溶剂D，食盐水洗涤、干燥，层析柱提纯得到产物；所述的有机溶剂D为甲苯、二氯甲烷DCM、乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙酸丁酯、N-N二甲基甲酰胺中的一种或几种的混合，优选为DCM或乙酸乙酯，最佳为DCM；所述的酸为硫酸、盐酸、乙酸、甲酸或三氟乙酸TFA，优选为盐酸或三氟乙酸，优选为TFA，浓度为体积含量10-50％，优选为30％。
步骤(4)中，所述的化合物5与化合物6在有机溶剂E、缩合试剂和有机胺作用下进行偶联反应；所述的有机溶剂E为乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、乙腈、DMF、二氯乙烷、氯仿中的任意一种或几种任意比例的混合物，优选为乙酸乙酯；所述的缩合试剂为1-羟基苯并三氮唑(HOBt)，N，N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)、N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBop)或苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐(BOP)中的任意一种或几种的组合，优选为EDC·HCl，HOBt，DIC中的一种或几种，当HOBt和EDC·HCl混用时，优选的HOBt与EDC·HCl的摩尔比为1：0.5-2，更优选为1：0.9-1.1，最佳为1：1；所述偶联反应的温度为0-60℃，优选为10-40℃，最佳为30℃，反应时间为2.5-6h；反应产物经洗涤、干燥处理得到化合物7，洗涤的碱水为质量分数1％-15％的碳酸钾溶液，优选为5％的碳酸钾溶液。
步骤(5)中，所述脱除X基的方式为将化合物4溶于有机溶剂F中，并加入酸，室温下反应3-10h，减压蒸馏除去有机溶剂F，食盐水洗涤、干燥，层析柱提纯得到产物；所述的有机溶剂F为甲苯、二氯甲烷DCM、乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙酸丁酯、N-N二甲基甲酰胺中的一种或几种的混合，优选为DCM或乙酸乙酯，最佳为DCM；所述的酸为硫酸、盐酸、乙酸、甲酸或三氟乙酸TFA，优选为盐酸或三氟乙酸，优选为TFA，浓度为体积含量10-50％，优选为30％。
步骤(6)中，所述化合物8与Fmoc--谷氨酸在有机溶剂G、缩合试剂和有机胺作用下进行偶联反应；所述的有机溶剂G为乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、乙腈、DMF、二氯乙烷、氯仿中的任意一种或几种任意比例的混合物，优选为乙酸乙酯；所述的缩合试剂为1-羟基苯并三氮唑(HOBt)，N，N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)、N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBop)或苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐(BOP)中的任意一种或几种的组合，优选为EDC·HCl，HOBt，DIC中的一种或几种，当HOBt和EDC·HCl混用时，优选的HOBt与EDC·HCl的摩尔比为1：0.5-2，更优选为1：0.9-1.1，最佳为1：1；所述偶联反应的温度为0-60℃，优选为10-40℃，最佳为30℃，反应时间为2.5-6h。
步骤(7)中，所述脱除Fmoc的方式为取化合物9加入有机溶剂H中，冰浴下加入硫代苹果酸，而后加入有机碱，移至室温反应3-10h，用碱水洗涤有机相，而后蒸去有机溶剂H，得到化合物10；所述有机溶剂H为甲苯、氯仿、乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙酸丁酯、N-N二甲基甲酰胺中的一种或几种的混合物，优选为氯仿；所述有机碱DIEA、三乙胺、咪唑、DBU、吡啶或哌嗪，优选为DBU；所述有机碱与硫代苹果酸、化合物9的摩尔比例8：3：1；反应产物经洗涤、干燥处理得到10，洗涤的碱水为质量分数1％-15％的碳酸钾溶液，优选为5％的碳酸钾溶液。
步骤(8)中，所述化合物10与18-(叔丁氧基)-18氧代十八烷酸在有机溶剂I、缩合试剂和有机胺作用下进行偶联反应；所述的有机溶剂I为乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、乙腈、DMF、二氯乙烷、氯仿中的任意一种或几种任意比例的混合物，优选为乙酸乙酯；所述的缩合试剂为1-羟基苯并三氮唑(HOBt)，N，N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)、N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBop)或苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐(BOP)中的任意一种或几种的组合，优选为EDC·HCl，HOBt，DIC中的一种或几种，当HOBt和EDC·HCl混用时，优选的HOBt与EDC·HCl的摩尔比为1：0.5-2，更优选为1：0.9-1.1，最佳为1：1；所述偶联反应的温度为0-60℃，优选为10-40℃，最佳为30℃，反应时间为2.5-6h。
步骤(9)中，所述脱除苄基的方式为将化合物4与钯碳在有机溶剂J中与室温下加氢反应，所述的有机溶剂J为甲醇、乙醇、丙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、乙腈、二甲基甲酰胺、碳酸二甲酯中的一种或几种的混合物，优选为乙酸乙酯；所述的钯碳中的钯的质量百分含量占钯碳总质量的5％，钯的用量占所需还原的肽的摩尔量的1％-20％，优选为1％-15％，最佳为10％。
发明人在索马鲁肽侧链的液相合成过程中，尝试了很多种可能的方法，例如化合物3制备化合物4的过程中，发明人发现，NaH碱性太强，会使化合物3的醇羟基氢掉落后与溴乙酸苄酯发生酯交换，从而得不到正确产物4；以及向化合物4混合液加入LiOH水溶液，50℃反应得不到化合物5等。
本发明最终制备获得索马鲁肽侧链，可以经过修饰为OSu酯后在液相中直接组装至索马鲁肽主链上。
有益效果：
(1)本发明在整个生产过程中所用的试剂价格低廉；
(2)本发明在整个生产过程中可以采用玻璃设备，可以不用依赖大型设备，其生产费用较低；
(3)本发明生产工艺简单，反应过程易于控制，生产工艺的可重复性强；
(4)本发明合成方法过程可行、可控、成本低、产率高，适合于大规模生产。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明做更进一步的具体说明，本发明的上述和/或其他方面的优点将会变得更加清楚。
图1为本发明索马鲁肽侧链合成路线图；
图2为实施例1得到的索马鲁肽侧链的HPLC图；
图3为实施例1得到的索马鲁肽侧链的Mass图谱。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。
说明书附图所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容所能涵盖的范围内。同时，本说明书中所引用的如“上”、“下”、“前”、“后”、“中间”等用语，亦仅为便于叙述的明了，而非用以限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容下，当亦视为本发明可实施的范畴。
本发明采用的部分缩略语相对应的化学名称如下：
DBU：1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯
Glu：谷氨酸
DCM：二氯甲烷
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
TFA：三氟乙酸
Boc：叔丁氧羰基
tBu：叔丁基
Trt：三苯甲基
HOBt：1-羟基苯并三氮唑
EDC·HCl：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐
DIC：N，N’-二异丙基碳二亚胺
DCC:N，N’-二环己基碳二亚胺
PyBopP：六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷
BOP：苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐
DIEA:N-N二异丙基乙胺。
实施例1
按照图1所示的合成路线进行索马鲁肽侧链的液相合成：
a.化合物3的制备过程
将1.05g的化合物2(10mmol)溶于DCM 50ml溶液中，置于氮气保护的烧瓶内，待上述混合液降至0℃后，向上述溶液中小心地加入(Boc)2O(2.62g，12mmol)。将混合物搅拌12小时，然后将粗物质真空浓缩。使用快速柱色谱法纯化得无色油状物收率95％。
b.化合物4的制备过程：
将3.08g(9.5mmol)化合物3、8.6g(4eq)溴乙酸苄酯及2.75g(2.1eq)碳酸钾加入圆底烧瓶中，反应温度升至50℃，反应18h后，点板观察，反应较为完全；水洗，EA萃取2-3次，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，P:E＝6:1过柱，收集产物，收率85％。
c.化合物5的制备过程：
将1.412g(4mmol)化合物4溶于乙酸乙酯80mL中，至于三口烧瓶内，加入含水量为10％的钯碳(钯质量分数为5％)946mg(0.4mmol)，气球充氢气，置换瓶内空气的同时保持氢气氛围(约0.1M)，室温反应3h，抽滤掉钯碳，旋干得到化合物5，收率97％。
d.化合物6的制备过程
将1.412g(4mmol)化合物4至于，置于150ml单口烧瓶内，加入已配置好的体积分数为30％的TFA/DCM溶液60ml，反应6h。点板观察反应较为完全。减压蒸干反应溶剂，饱和NaHCO3洗涤，EA萃取，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，P:E＝10:1→P:E＝6:1过柱，收率85％。
e.化合物7的制备过程
将894mg化合物5(3.4mmol)与860mg化合物6(3.4mmol)溶于100mL乙酸乙酯中，加入缩合试剂HOBt(540mg，4mmol)，EDC·HCl(766mg，4mmol)，30℃反应3小时，反应完全后倒入250ml分液漏斗中，用5％的碳酸钾溶液洗涤3遍，饱和氯化钠洗涤2遍，干燥旋干后得化合物7，收率90％。
f.化合物8的制备过程
将1.5g化合物7(3mmol)置于50ml单口烧瓶内，加入已配置好的体积分数为30％的TFA/DCM溶液，反应6h。点板观察反应较为完全。减压蒸干反应溶剂，饱和NaHCO3洗涤，EA萃取，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，P:E＝10:1→P:E＝6:1过柱，收率75％。
g.化合物9的制备过程
将598mg化合物8(2.25mmol)与957mg的Fmoc-Glu(OtBu)-OH(2.25mmol)溶于100mlDCM中，加入缩合试剂HOBt(364mg，2.7mmol)，EDC·HCl(517mg，2.7mmol)，30℃反应3小时，反应完全后倒入150ml分液漏斗中，用5％的碳酸钾溶液洗涤3遍，饱和氯化钠洗涤2遍，干燥旋干后得化合物9，收率90％。
h.化合物10的制备过程
将1.63g化合物9(2.0mmol)溶于100ml氯仿中，冰浴下加入硫代苹果酸900mg(1.74mmol)，加入后搅拌5min撤走冰浴，加入2.43g DBU(16mmol)，室温反应5h，而后用5％碳酸钾洗涤，饱和食盐水洗涤、干燥，得化合物10，产率90％。
i：化合物12的制备过程
将1.05g化合物10(1.8mmol)与668mg的化合物11(1.8mmol)溶于100ml乙酸乙酯中，加入缩合试剂HOBt(270mg，2mmol)，EDC·HCl(383mg，2mmol)，30℃反应3小时，反应完全后倒入150ml分液漏斗中，用5％的碳酸钾溶液洗涤3遍，饱和氯化钠洗涤2遍，干燥旋干后得化合物12，产率90％。
j：化合物1的合成
将1.53g的化合物12(1.62mmol)溶于乙酸乙酯100mL中，至于三口烧瓶内，加入含水量为10％的钯碳(钯质量分数为5％)378mg(0.16mmol)，气球充氢气，置换瓶内空气的同时保持氢气氛围(约0.1M)，室温反应3h，抽滤掉钯碳，旋干得到化合物1，收率80％。
所得化合物1的HPLC谱图见图2，Mass谱图见图3，734.3为其[M-tBu*2+H]+的峰。
实施例2
a.化合物3的制备过程
将5mmol/ml的化合物2(1ml)溶于DCM溶液中，置于氮气保护的烧瓶内，待上述混合液降至0℃后，逐滴添加1eq的Et3N；20分钟后向上述混合液中缓慢滴加2mmol/ml的Trt-Cl(2.5ml)混合液，滴加完10分钟后移去冰浴；室温下搅拌，1h后点板观察，反应完全。水洗，DCM萃取2-3次，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，P:E＝5:1过柱，收集产物，收率85％。
b.化合物4的制备过程：
将694mg(2mmol)化合物3、1832mg(4eq)溴乙酸苄酯及580mg(2.1eq)碳酸钾加入圆底烧瓶中，反应温度升至50℃，反应18h后，点板观察，反应较为完全；水洗，EA萃取2-3次，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，P:E＝6:1过柱，收集产物，收率80％。
c.化合物5的制备过程：
将495mg(1mmol)化合物4溶于乙酸乙酯30mL中，至于三口烧瓶内，加入含水量为10％的钯碳(钯质量分数为5％)240mg(0.1mmol)，气球充氢气，置换瓶内空气的同时保持氢气氛围，室温反应3h，抽滤掉钯碳，旋干得到化合物5，收率97％。
d.化合物6的制备过程
将495mg(1mmol)化合物4至于，置于50mL单口烧瓶内，加入已配置好的体积分数为30％的TFA/DCM溶液，反应6h。点板观察反应较为完全。减压蒸干反应溶剂，饱和NaHCO3洗涤，EA萃取，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，P:E＝10:1→P:E＝6:1过柱，收率80％。
e.化合物7的制备过程
将324mg化合物5(0.8mmoL)与253mg化合物6(0.8mmol)溶于50mL乙酸乙酯中，加入缩合试剂HOBt(135mg，1mmol)，EDC·HCl(191.7mg，1mmol)，30℃反应3小时，反应完全后倒入150ml分液漏斗中，用5％的碳酸钾溶液洗涤3遍，饱和氯化钠洗涤2遍，干燥旋干后得化合物7，收率95％。
f.化合物8的制备过程
将486mg化合物7(0.76mmol)置于50ml单口烧瓶内，加入已配置好的体积分数为30％的TFA/DCM溶液，反应6h。点板观察反应较为完全。减压蒸干反应溶剂，饱和NaHCO3洗涤，EA萃取，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，P:E＝10:1→P:E＝6:1过柱，收率80％。
g.化合物9的制备过程
将241mg化合物8(0.61mmol)与259mg的Fmoc-Glu(OtBu)-OH(0.61mmol)溶于50mlDCM中，加入缩合试剂HOBt(135mg，1mmol)，EDC·HCl(191.7mg，1mmol)，30℃反应3小时，反应完全后倒入150ml分液漏斗中，用5％的碳酸钾溶液洗涤3遍，饱和氯化钠洗涤2遍，干燥旋干后得化合物9，收率95％。
h.化合物10的制备过程
将466mg化合物9(0.58mmol)溶于50ml氯仿中，冰浴下加入硫代苹果酸261mg(1.74mmol)，加入后搅拌5min撤走冰浴，加入706mg DBU(4.64mmol)，室温反应5h，而后用5％碳酸钾洗涤，饱和食盐水洗涤、干燥，得化合物10，产率90％。
i：化合物12的制备过程
将304mg化合物10(0.522mmol)与194mg的化合物11(0.522mmol)溶于50ml乙酸乙酯中，加入缩合试剂HOBt(81mg，0.6mmol)，EDC·HCl(115mg，0.6mmol)，30℃反应3小时，反应完全后倒入150ml分液漏斗中，用5％的碳酸钾溶液洗涤3遍，饱和氯化钠洗涤2遍，干燥旋干后得化合物12，产率95％。
j：化合物1的合成
将463mg的化合物12(0.49mmol)溶于乙酸乙酯30mL中，至于三口烧瓶内，加入含水量为10％的钯碳(钯质量分数为5％)120mg(0.049mmol)，气球充氢气，置换瓶内空气的同时保持氢气氛围，室温反应3h，抽滤掉钯碳，旋干得到化合物1，收率80％。
本发明提供了一种索马鲁肽侧链的液相合成方法的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。

Claims (10)

1.一种索马鲁肽侧链的液相合成方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将二甘醇胺与X基反应，使得二甘醇胺氨基端受X基保护，得到化合物3；
（2）将化合物3的羧基端做成苄基保护，得到化合物4；
（3）将化合物4脱除苄基得到化合物5；将化合物4脱除X基得到化合物6；
（4）将化合物5与化合物6偶联得到化合物7；
（5）将化合物7脱除X基得到化合物8；
（6）将化合物8与Fmoc-谷氨酸偶联得到化合物9；
（7）将化合物9脱除Fmoc得到化合物10；
（8）将化合物10与18-(叔丁氧基)-18氧代十八烷酸偶联得到化合物12；
（9）化合物12脱除苄基即得索马鲁肽侧链；
上述合成步骤以及各化合物的结构式如下：
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；
步骤（1）中，所述X基为Fmoc、Boc或Trt；二甘醇胺与X基的反应在有机溶剂A中进行；
步骤（2）中，所述做成苄基保护具体为将化合物3与溴乙酸苄酯在有机溶剂B中，加入无机碱加热反应；
步骤（4）中，所述的化合物5与化合物6在有机溶剂E、缩合试剂和有机胺作用下进行偶联反应；
步骤（6）中，所述化合物8与Fmoc-谷氨酸在有机溶剂G、缩合试剂和有机胺作用下进行偶联反应；
步骤（8）中，所述化合物10与18-(叔丁氧基)-18氧代十八烷酸在有机溶剂I、缩合试剂和有机胺作用下进行偶联反应。
2.根据权利要求1所述的液相合成方法，其特征在于，所述有机溶剂A为乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、乙腈、DMF、二氯乙烷、氯仿中的任意一种或几种任意比例的混合物。
3.根据权利要求1所述的液相合成方法，其特征在于，步骤（2）中，所述的有机溶剂B为乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、乙腈、DMF、二氯乙烷、氯仿中的任意一种或几种任意比例的混合物；所述的无机碱为碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠或氢氧化钾；所述加热反应的温度为30-70℃。
4.根据权利要求1所述的液相合成方法，其特征在于，步骤（3）中，所述脱除苄基的方式为将化合物4与钯碳在有机溶剂中于室温下加氢反应，所述的有机溶剂C为甲醇、乙醇、丙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、乙腈、二甲基甲酰胺、碳酸二甲酯中的一种或几种的混合物，所述的钯碳中的钯的质量百分含量占钯碳总质量的5%，钯的用量占所需还原的肽的摩尔量的1%-20%；
所述脱除X基的方式为将化合物4溶于有机溶剂D中，并加入酸，室温下反应3-10h，减压蒸馏除去有机溶剂D，食盐水洗涤、干燥，层析柱提纯得到产物；所述的有机溶剂D为甲苯、二氯甲烷、乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙酸丁酯、N-N二甲基甲酰胺中的一种或几种的混合；所述的酸为硫酸、盐酸、乙酸、甲酸或三氟乙酸，浓度为体积含量10-50%。
5.根据权利要求1所述的液相合成方法，其特征在于，步骤（4）中，所述的有机溶剂E为乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、乙腈、DMF、二氯乙烷、氯仿中的任意一种或几种任意比例的混合物；所述的缩合试剂为1-羟基苯并三氮唑，N，N’-二异丙基碳二亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、N，N’-二环己基碳二亚胺、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷或苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐中的任意一种或几种的组合；所述偶联反应的温度为0-60℃，反应时间为2.5-6h。
6.根据权利要求1所述的液相合成方法，其特征在于，步骤（5）中，所述脱除X基的方式为将化合物4溶于有机溶剂F中，并加入酸，室温下反应3-10h，减压蒸馏除去有机溶剂F，食盐水洗涤、干燥，层析柱提纯得到产物；所述的有机溶剂F为甲苯、二氯甲烷、乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙酸丁酯、N-N二甲基甲酰胺中的一种或几种的混合；所述的酸为硫酸、盐酸、乙酸、甲酸或三氟乙酸，浓度为体积含量10-50%。
7.根据权利要求1所述的液相合成方法，其特征在于，步骤（6）中，所述的有机溶剂G为乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、乙腈、DMF、二氯乙烷、氯仿中的任意一种或几种任意比例的混合物；所述的缩合试剂为1-羟基苯并三氮唑，N，N’-二异丙基碳二亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、N，N’-二环己基碳二亚胺、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷或苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐中的任意一种或几种的组合；所述偶联反应的温度为0-60℃，反应时间为2.5-6h。
8.根据权利要求1所述的液相合成方法，其特征在于，步骤（7）中，所述脱除Fmoc的方式为取化合物9加入有机溶剂H中，冰浴下加入硫代苹果酸，而后加入有机碱，移至室温反应3-10h，用碱水洗涤有机相，而后蒸去有机溶剂H，得到化合物10；所述有机溶剂H为甲苯、氯仿、乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙酸丁酯、N-N二甲基甲酰胺中的一种或几种的混合物；所述有机碱DIEA、三乙胺、咪唑、DBU、吡啶或哌嗪；所述有机碱与硫代苹果酸、化合物9的摩尔比例8：3：1。
9.根据权利要求1所述的液相合成方法，其特征在于，步骤（8）中，所述的有机溶剂I为乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、乙腈、DMF、二氯乙烷、氯仿中的任意一种或几种任意比例的混合物；所述的缩合试剂为1-羟基苯并三氮唑，N，N’-二异丙基碳二亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、N，N’-二环己基碳二亚胺、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷或苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐中的任意一种或几种的组合；所述偶联反应的温度为0-60℃，反应时间为2.5-6h。
10.根据权利要求1所述的液相合成方法，其特征在于，步骤（9）中，所述脱除苄基的方式为将化合物4与钯碳在有机溶剂J中与室温下加氢反应，所述的有机溶剂J为甲醇、乙醇、丙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、乙腈、二甲基甲酰胺、碳酸二甲酯中的一种或几种的混合物，所述的钯碳中的钯的质量百分含量占钯碳总质量的5%，钯的用量占所需还原的肽的摩尔量的1%-20%。
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