CN109553658B - Ang-(1-7)的氮杂多肽类似物、制备方法及应用 - Google Patents

Ang-(1-7)的氮杂多肽类似物、制备方法及应用 Download PDF

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CN109553658B CN201811525405.1A CN201811525405A CN109553658B CN 109553658 B CN109553658 B CN 109553658B CN 201811525405 A CN201811525405 A CN 201811525405A CN 109553658 B CN109553658 B CN 109553658B
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Abstract

本发明公开了Ang‑(1‑7)的氮杂多肽类似物、制备方法及应用，具有下列通式：A1‑A2‑A3‑A4‑A5‑A6‑A7其中，A1‑A7中至少有一个为氮杂氨基酸或氮杂氨基酸衍生物。本发明以新颖、绿色、高效的方法得到了上述通式的Ang‑(1‑7)的氮杂多肽类似物，通过醇为底物使用Mitsunobu反应对氮杂多肽侧链进行修饰避免了传统方法叔丁醇钾和卤代烃的使用，大大的拓宽了氮杂多肽底物的衍生化，经过初步活性测试，所述Ang‑(1‑7)氮杂多肽类似物具有较好的抗癌活性，具有潜在的药用价值。

Description

Ang-(1-7)的氮杂多肽类似物、制备方法及应用
技术领域
本发明属于化学和药学领域，具体涉及Ang-(1-7)的氮杂多肽类似物、制备方法及应用。
背景技术
氮杂肽是使用氨基脲作为氨基酸的替代物，并将其中一个或多个氨基酸残基上的α碳原子替换为氮原子(Proulx,C et al.Future Med Chem 2011,3,1139–64；Chingle,Ret al.Accounts Chem Res 2017.)。因为尿素的平面性加上肼上氮原子孤对电子的排斥作用，从而使氮杂多肽形成一个限制性的转角构象。并且氮杂肽表现出优异的代谢稳定性和生物活性，所以将氮杂多肽作为蛋白质受体和酶抑制剂的配体进行了探索(Ekici,
Figure BDA0001904319650000011
etal.J Med Chem 2004,47, 1889–1892；Zhang,J et al.,Angew.Chem.Int.Ed.Engl.2017,56,6284–6288)。因此，基于氮杂多肽的药物开发具有很大的潜力。
血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]是一种由7个氨基酸所组成的内源性多肽激素，其序列为 Asp1-Arg2-Val3-Tyr4-Ile5-His6-Pro7。Ang-(1-7)在肾素-血管紧张素系统(RAS)中起关键作用，并具有多种有益功能，如心脏保护作用，血管舒张，抗增殖和抗纤维化等。(Marcus,Y et al.Diabetes 2013,62,1121–1130；Passos-Silva etal.A.Clin.Sci.2013,124,443–56)因此 Ang-(1-7)被认为是治疗许多疾病的理想药物，并且一直在进行临床试验.(Rodgers,K et al. Cancer Chemoth Pharm 2006,57,559–568；Petty,W et al.Clin Cancer Res 2009,15,7398– 7404)与其他天然肽一样，Ang-(1-7)在体内通过包括血管紧张素转换酶在内的蛋白酶快速代谢，限制了其在药物开发中的应用。通过插入非天然氨基酸(Wester,A et al.Amino Acids 2017,49,1733–1742；Balingit,Pet al.Wound Repair Regen 2012,20,482–490.)或用硫醚进行环化(Kluskens,L etal.Pharmacol Exp Ther 2009,328,849–854.),Ang-(1-7)模拟物被证明具有增加的蛋白酶稳定性，从而提高其治疗潜力。
发明内容
本发明的目的在于提供一种Ang-(1-7)的氮杂多肽类似物及其制备方法。
本发明的另一个目的在于提供上述Ang-(1-7)的氮杂多肽类似物的用途。
为了实现上述的目的，本发明的技术方案如下：
本发明提供了一种Ang-(1-7)的氮杂多肽类似物，具有下列通式：
Al-A2-A3-A4-A5-A6-A7；
其中，
A1选自天冬氨酸、谷氨酸、非天然酸性氨基酸、氮杂氨基酸或其衍生物构成的组中；
A2选自精氨酸、组氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、非天然碱性氨基酸、氮杂氨基酸或其衍生物构成的组中；
A3选自缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、非天然烷基氨基酸、芳基氨基酸、氮杂氨基酸或其衍生物构成的组中；
A4选自酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、非天然芳基氨基酸、氮杂氨基酸或其衍生物构成的组中；
A5选自异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、非天然烷基氨基酸、非天然芳基氨基酸、氮杂氨基酸或其衍生物构成的组中；
A6选自组氨酸、精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、非天然碱性氨基酸、氮杂氨基酸或其衍生物构成的组中；
A7选自脯氨酸、丝氨酸、羟基脯氨酸、同型丝氨酸、氮杂氨基酸或其衍生物构成的组中；
其中，A1-A7中至少有一个为氮杂氨基酸或其衍生物。
作为优选，A1选自天冬氨酸、氮杂氨基酸或其衍生物，A2选自精氨酸、氮杂氨基酸或其衍生物，A3选自缬氨酸、氮杂氨基酸或其衍生物，A4选自酪氨酸、氮杂氨基酸或其衍生物，A5选自异亮氨酸、氮杂氨基酸或其衍生物，A6选自组氨酸、氮杂氨基酸或其衍生物， A7选自脯氨酸、氮杂氨基酸或其衍生物，其中，A1-A7中有一个为氮杂氨基酸或其衍生物，所述氮杂氨基酸衍生物的结构如下：
Figure BDA0001904319650000021
其中，R选自氢原子、烷基、芳基、杂芳基、芳基取代烷基、杂芳基取代烷基或环烷基取代烷基。
作为优选，所述氮杂氨基酸或其衍生物中的取代基R选自甲基、异丙基、苄基、环丙基甲基、4-羟基苄基、(R)-仲丁基。
本发明提供了一种上述Ang-(1-7)的氮杂多肽类似物的制备方法，制备路线如下：
Figure BDA0001904319650000031
制备方法包括如下步骤：
(1)制备寡肽固相树脂：通过标准的固相合成方法在将目标寡肽负载再wang树脂上；
(2)制备化合物Ⅲ：以单取代或多取代苄基腙Ⅰ为原料和DSC反应生成化合物Ⅱ，化合物Ⅱ与寡肽固相树脂反应生成化合物Ⅲ；
(3)制备化合物Ⅳ：化合物Ⅲ与目标醇进行Mitsunobu反应生成化合物Ⅳ；
(4)制备化合物Ⅴ：化合物Ⅳ进行胺解反应生成化合物Ⅴ；
(5)制备Ⅵ：化合物Ⅴ通过标准固相合成方法合成制备化合物Ⅵ。
本发明提供了上述Ang-(1-7)的氮杂多肽类似物的用途。
一种药物组合物，包含上述任一项Ang-(1-7)的氮杂多肽类似物、或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
优选的，上述药物组合物在制备抗癌药物中的应用。
本发明与现有技术相比具有以下有益效果：
(1)本发明提供了一种Ang-(1-7)的氮杂多肽类似物，经过初步测试发现，所述Ang- (1-7)的氮杂多肽类似物具有较好的蛋白水解抗性和较好的抗癌活性，具有潜在的药用价值。
(2)本发明以新颖、绿色、高效的方法得到了氮杂多肽类化合物，并通过醇为底物使用Mitsunobu反应对氮杂多肽侧链进行修饰避免了传统方法叔丁醇钾和卤代烃的的使用，大大的拓宽的氮杂多肽底物的衍生化。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
下述实施例中，部分物质的全称或相应的中文名称如下：
DSC：N，N'-二琥珀酰亚胺基碳酸酯
DIAD：偶氮二甲酸二异丙酯
DIEA：N,N-二异丙基乙胺
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
DCM：二氯甲烷
THF：四氢呋喃
MeOH：甲醇
BTC：三光气
实施例1：氮杂多肽类似物10a的制备
制备路线如下:
Figure BDA0001904319650000041
1.制备寡肽固相树脂：Wang树脂(负载量约为:0.96mmol/g，每肽的起始树脂量为:208mg)，通过标准的固相合成方法将NH2-Tyr(OtBu)-Ile-His(Trt)-Pro-OH负载在Wang 树脂。
2.制备缩氨基脲5:将DSC(205.4mg，0.8mmol)溶解在3.2mL DMF/DCM(1:1，v/v)中的溶液。然后将(E)-(2-硝基苄基)腙(132.2mg，0.8mmol)溶解在1mL DCM中后加入，然后在室温下搅拌2小时后将母液转移至负载了NH2-Tyr(OtBu)-Ile-His(Trt)-Pro的树脂中(～208 mg,0.2mmol)。然后加入DIEA(206.5μL，1.2mmol)并在摇床上振摇12小时。反应完全后，依次用DMF(3×10mL)，MeOH(3×10mL)，THF(3×10mL)和DCM(3×10mL)洗涤树脂。通过LC-MS分析树脂样品，显示完全偶联并且具有良好纯度。
3.制备6a:向圆底烧瓶中加入三苯基膦(524.6mg，2mmol)，THF(4ml)后冷却至0℃(冰浴)。冷却后加入DIAD(538.4μL，2mmol)将混合物搅拌10分钟，析出沉淀后将沉淀物和异丙醇(159.9μL，2mmol)依次加入到树脂5a中(～208mg，0.2mmol)。并在摇床上振摇5小时。反应完全后，依次用DMF(3×10mL)，THF(3×10mL)，MeOH(3×10mL)和DCM(3×10mL) 洗涤树脂。
4.制备7a:6a(～208mg，0.2mmol)在DCM中溶胀后抽干加入H2O(4mL)和DCM(4mL)并依次加入连二亚硫酸钠(696.4mg，4mmol)，碳酸钾(774.0mg，5.6mmol)和TBAHS(135.8mg，0.4mmol)室温下振摇2小时后依次用DMF(3×10mL)，THF(3×10mL)，MeOH(3×10mL) 和DCM(3×10mL)进行洗涤。
5.制备8a:将NH2OH.HCl(278.0mg，4mmol)和间苯二胺(432.6mg，4mmol)在EtOH溶液(5.3ml)溶清后转移至7a(～208mg，0.2mmol)，并在60℃下超声反应12小时。反应完全后将树脂用10％DIEA:DMF(3×10mL)，DCM-H2O(1:1，v/v)，DMF(3×10mL)，THF(3× 10mL)，MeOH(3×10mL)和DCM(3×10mL)。
6.制备9a:将Fmoc-Arg(Pbf)-OH(648.8mg，1mmol)加入6mL DCM中溶清后加入 BTC(99.1mg，0.33mmol)，随后在通风橱里面加入2,4,6-三甲基吡啶(684.0μL，4.6mmol)，搅拌5分钟进行预活化，然后转移至树脂8a中(～208mg，0.2mmol)，振摇12小时。反应完全后依次用DMF(3×10mL)，MeOH(3×10mL)，THF(3×10mL)和DCM(3×10mL)洗涤树脂。通过LC-MS分析样品若显示偶联不完全，则重复偶联12小时。
7.制备10a:通过标准固相合成方法合成制备化合物10a，随后通过制备型RP-HPLC纯化肽，并通过LC-MS确定产物纯度。使用PhenomenexAeris TM C18柱(孔径:
Figure BDA0001904319650000051
粒径:5μm；150×4.6mm)以0.8mL/min的流速和10-60％的洗脱梯度洗脱15分钟后测定粗肽的纯净，收率：1.1％，纯度：98％。
10a的高分辨质谱结果如下：HRMS m/z calcd for C40H62N13O11[M+H]+900.46863,found 900.46706。
实施例2：氮杂多肽类似物10b的制备
用10a的制备方法，将6a步骤中的异丙醇替换成甲醇，制备合成了10b，收率：8.4％，纯度：98％。
10b的高分辨质谱结果如下：HRMS m/z calcd for C38H58N13O11[M+H]+872.43733,found 872.44010。
实施例3：氮杂多肽类似物10c的制备
用10a的制备方法，将6a步骤中的异丙醇替换成苄醇，制备合成了10c，收率：1.8％，纯度：99％。
10c的高分辨质谱结果如下：HRMS m/z calcdfor C44H61N13O11[M+H]+948.46863,found 948.46939。
实施例4：氮杂多肽类似物10d的制备
用10a的制备方法，将6a步骤中的异丙醇替换成环丙基甲醇，制备合成了10d。收率： 3.2％，纯度：99％。
10d的高分辨质谱结果如下：HRMS m/zcalcdforC41H62N13O11[M+H]+912.46863。
实施例5：氮杂多肽类似物11a的制备
制备路线如下：
Figure BDA0001904319650000061
1.制备寡肽固相树脂：Wang树脂(负载量约为:0.96mmol/g，每肽的起始树脂量为:208mg)，通过标准的固相合成方法将NH2-Ile-His(Trt)-Pro-OH负载在Wang树脂上。
2.制备缩氨基脲5’a:将DSC(205.4mg，0.8mmol)溶解在3.2mL DMF/DCM(1:1，v/v)中的溶液。然后将(E)-(2-硝基苄基)腙(132.2mg，0.8mmol)溶解在1mL DCM中后加入，然后在室温下搅拌2小时后将母液转移至负载了NH2-Ile-His(Trt)-Pro-OH的树脂中(～208mg,0.2mmol)。然后加入DIEA(206.5μL，1.2mmol)并在摇床上振摇12小时。反应完全后，依次用DMF(3×10mL)，MeOH(3×10mL)，THF(3×10mL)和DCM(3×10mL)洗涤树脂。通过 LC-MS分析树脂样品，显示完全偶联并且具有良好纯度。
3.制备6’a:向圆底烧瓶中加入三苯基膦(524.6mg，2mmol)，THF(4ml)后冷却至0℃(冰浴)。冷却后加入DIAD(538.4μL，2mmol)将混合物搅拌10分钟，析出沉淀后将沉淀物和(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)苯基)甲醇(476.8mg，2mmol)依次加入到树脂5’a中 (～208mg，0.2mmol)。并在摇床上振摇5小时。反应完全后，依次用DMF(3×10mL)，THF(3 ×10mL)，MeOH(3×10mL)和DCM(3×10mL)洗涤树脂。
4.制备7’a:6’a(～208mg，0.2mmol)在DCM中溶胀后抽干加入H2O(4mL)和DCM(4mL)并依次加入连二亚硫酸钠(696.4mg，4mmol)，碳酸钾(774.0mg，5.6mmol)和 TBAHS(135.8mg，0.4mmol)室温下振摇2小时后依次用DMF(3×10mL)，THF(3×10mL)， MeOH(3×10mL)和DCM(3×10mL)进行洗涤。
5.制备8’a:将NH2OH.HCl(278.0mg，4mmol)和间苯二胺(432.6mg，4mmol)在EtOH溶液(5.3ml)溶清后转移至7’a(～208mg，0.2mmol)，并在60℃下超声反应12小时。反应完全后将树脂用10％DIEA:DMF(3×10mL)，DCM-H2O(1:1，v/v)，DMF(3×10mL)，THF(3× 10mL)，MeOH(3×10mL)和DCM(3×10mL)。
6.制备9’a:将Fmoc-Val-OH(339.4mg，1mmol)加入6mL DCM中溶清后加入 BTC(99.1mg，0.33mmol)，随后在通风橱里面加入2，4，6-三甲基吡啶(684.0μL，4.6mmol)，搅拌5分钟进行预活化，然后转移至树脂8’a中(～208mg，0.2mmol)，振摇12小时。反应完全后依次用DMF(3×10mL)，MeOH(3×10mL)，THF(3×10mL)和DCM(3×10mL)洗涤树脂。通过LC-MS分析样品若显示偶联不完全，则重复偶联12小时。
7.制备11a:通过标准固相合成方法制备化合物11 a，随后通过制备型RP-HPLC纯化肽，并通过LC-MS确定产物纯度。使用PhenomenexAeris TM C18柱(孔径:
Figure BDA0001904319650000071
粒径:5μm；150 ×4.6mm)以0.8mL/min的流速和10-60％的洗脱梯度洗脱15分钟后测定粗肽的纯净，收率：6.8％，纯度：95％。
11a的高分辨质谱结果如下：HRMS m/z calcdforC40H62N13O11[M+H]+900.46863,found 900.46869。
实施例6：氮杂多肽类似物11b的制备
用11a的制备方法，将6’a步骤中的4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)苯基)甲醇替换成甲醇，制备合成了11b，收率：7.7％，纯度：97％。
11b的高分辨质谱结果如下：HRMS m/z calcdfor C34H58N13O10[M+H]+808.44241,found 808.44373。
实施例7：氮杂多肽类似物11c的制备
用11a的制备方法，将6’a步骤中的4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)苯基)甲醇替换成苄醇，制备合成了11c，收率：7.6％，纯度：99％。
11c的高分辨质谱结果如下：HRMS m/z calcdfor C40H62N13O10[M+H]+884.47371,found 884.47509。
实施例8：氮杂多肽类似物11d的制备
用11a的制备方法，将6’a步骤中的4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)苯基)甲醇替换成环丙基甲醇，制备合成了11d，收率：1.3％，纯度：99％。
11d的高分辨质谱结果如下：HRMS m/z calcdfor C37H62N13O10[M+H]+848.47371,found 848.47498。
实施例9：氮杂多肽类似物12a的制备
Figure BDA0001904319650000081
1.制备寡肽固相树脂：Wang树脂(负载量约为:0.96mmol/g，每肽的起始树脂量为:208mg)，通过标准的固相合成方法将NH2-His(Trt)-Pro-OH负载在Wang树脂上。
2.制备5”a:将DSC(205.4mg，0.8mmol)溶解在3.2mL DMF/DCM(1:1，v/v)中的溶液。然后将(E)-(2-硝基苄基)腙(132.2mg，0.8mmol)溶解在1mL DCM中后加入，然后在室温下搅拌2小时后将母液转移至负载了NH2-His(Trt)-Pro-OH的树脂中(～208mg,0.2mmol)。然后加入DIEA(206.5μL，1.2mmol)并在摇床上振摇12小时。反应完全后，依次用DMF(3× 10mL)，MeOH(3×10mL)，THF(3×10mL)和DCM(3×10mL)洗涤树脂。通过LC-MS分析树脂样品，显示完全偶联并且具有良好纯度。
3.制备6”a:向圆底烧瓶中加入三苯基膦(524.6mg，2mmol)，THF(4ml)后冷却至0℃(冰浴)。冷却后加入DIAD(538.4μL，2mmol)将混合物搅拌10分钟，析出沉淀后将沉淀物和(R)-(-)-2-丁醇(183.7μL，2mmol)依次加入到树脂5”a中(～208mg，0.2mmol)。并在摇床上振摇5小时。反应完全后，依次用DMF(3×10mL)，THF(3×10mL)，MeOH(3×10mL)和 DCM(3×10mL)洗涤树脂。
4.制备7”a:6”a(～208mg，0.2mmol)在DCM中溶胀后抽干加入H2O(4mL)和DCM(4mL)并依次加入连二亚硫酸钠(696.4mg，4mmol)，碳酸钾(774.0mg，5.6mmol)和 TBAHS(135.8mg，0.4mmol)室温下振摇2小时后依次用DMF(3×10mL)，THF(3×10mL)， MeOH(3×10mL)和DCM(3×10mL)进行洗涤。
5.制备8”a:将NH2OH.HCl(278.0mg，4mmol)和间苯二胺(432.6mg，4mmol)在EtOH溶液(5.3ml)溶清后转移至7”a(～208mg，0.2mmol)，并在60℃下超声反应12小时。反应完全后将树脂用10％DIEA:DMF(3×10mL)，DCM-H2O(1:1，v/v)，DMF(3×10mL)，THF(3× 10mL)，MeOH(3×10mL)和DCM(3×10mL)。
6.制备9”a:将Fmoc-Tyr(OtBu)-OH(459.3mg，1mmol)加入6mL DCM中溶清后加入BTC(99.1mg，0.33mmol)，随后在通风橱里面加入2,4,6-三甲基吡啶(684.0μL，4.6mmol)，搅拌5分钟进行预活化，然后转移至树脂8”a中(～208mg，0.2mmol)，振摇12小时。反应完全后依次用DMF(3×10mL)，MeOH(3×10mL)，THF(3×10mL)和DCM(3×10mL)洗涤树脂。通过LC-MS分析样品若显示偶联不完全，则重复偶联12小时。
7.制备12a:通过标准固相合成方法制备化合物12a，随后通过制备型RP-HPLC纯化肽，并通过LC-MS确定产物纯度。使用PhenomenexAeris TM C18柱(孔径:
Figure BDA0001904319650000091
粒径:5μm；150 ×4.6mm)以0.8mL/min的流速和10-60％的洗脱梯度洗脱15分钟后测定粗肽的纯净，收率：2.1％，纯度：95％。
12a的高分辨质谱结果如下：HRMS m/z calcdforC40H62N13O11[M+H]+900.46863，found 900.46706。
实施例10：氮杂多肽类似物12b的制备
用12a的制备方法，将6”a步骤中的(R)-(-)-2-丁醇替换成甲醇，制备合成了12b，收率： 3.5％，纯度：95％。
12b的高分辨质谱结果如下：HRMS m/z calcdfor C37H56N13O11[M+H]+858.42168,found 858.42278。
实施例11：氮杂多肽类似物12c的制备
用12a的制备方法，将6”a步骤中的(R)-(-)-2-丁醇替换成苄醇，制备合成了12c，收率：1.1％，纯度：99％。
12c的高分辨质谱结果如下：HRMS m/z calcdfor C43H60N13O11[M+H]+934.45298,found 934.45619。
实施例12：氮杂多肽类似物12d的制备
用12a的制备方法，将6”a步骤中的(R)-(-)-2-丁醇替换成环丙基甲醇，制备合成了12d，收率：1.8％，纯度：96％。
12d的高分辨质谱结果如下：HRMS m/z calcdfor C40H59N13O11[M+H]+898.45298，found 898.45388。
实施例13：测定蛋白水解抗性
将血管紧张素Ang(1-7)或合成的氮杂多肽类似物加入猪肝脏(0.2μmol血管紧张素 /mg肝脏组织匀浆)、猪肾(0.2μmol血管紧张素/mg肾组织匀浆)、猪胰腺(0.2μmol血管紧张素/mg胰腺组织匀浆)的组织匀浆或者血浆(1μmol血管紧张素/ml)中，并于 37℃，pH7.4或pH5，孵育不同的时间，最长达30个小时。该反应通过100℃5分钟而终止。残余的完整血管紧张素的量通过RP-HPLC用C18柱、流动相梯度和214nm检测光测定。
结果显示，pH7.4时，引入氮杂氨基酸衍生物的Ang-(1-7)类似物在肝脏、肾、胰腺组织中具有更长的半衰期，引入氮杂氨基酸衍生物的Ang-(1-7)类似物具有更稳定的蛋白水解抗性。
实施例14：抗癌活性测试
为考察本发明新化合物的抗肿瘤活性，通过初步抗肿瘤药理试验进行肿瘤生长抑制活性评价。采用体外肿瘤细胞模型，MTT法进行活性筛选试验，(所涉及的试剂及材料均可通过公开渠道获得，这属于本领域的公知常识)试验操作步骤包括：
(1)细胞培养
人乳腺癌MCF-7细胞、人前列腺癌DU-145细胞、肺癌A549使用含10％胎牛血清的1640或DMEM培养。
(2)药物配制
所有化合物现配现用，最高浓度为10mM，化合物以DMSO配制完后置于室温，供次使用。给药时再根据所需浓度，用DMSO进行逐步稀释。
(3)MTT法
取对数生长期的所需细胞，调整为适当浓度后种入96孔培养板，每板100μL(约5000 个细胞)，并分别置于37℃、5％CO2的条件下孵育12h，给药前根据设定的终浓度，用DMSO 对最高浓度药物进行稀释配制，再将配好的药物依次加入培养板孔内，每孔10μL，使其终浓度分别为100μM、75μM、50μM、25μM、10μM，每个浓度均设3个复孔。阴性对照为等体积培养基、同时设相应浓度的DMSO溶剂对照。并且将给药后96孔板培养板分别置于 37℃、5％CO2的条件下孵育48h。
采用MTT法：在96孔细胞培养板的每孔中加入20μL的5.0mg/mL MTT，并置于37℃、5％CO2的条件下孵育4h，然后吸去培养液，并在每孔加入100μL DMSO,使用酶标仪检测各孔A570值，计算抑制率，使用SPSS软件计算抑制浓度IC50值。
实验结果显示，Ang-(1-7)的氮杂多肽类似物具有较好的抗癌活性，具有潜在药物用途。
表1 Ang-(1-7)的氮杂多肽类似物活性测试结果
Figure BDA0001904319650000101
Figure BDA0001904319650000111
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所有的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种Ang-(1-7)的氮杂多肽类似物，其特征在于，其结构为多肽Asp -Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro中的第3位氨基酸、第4位氨基酸、或第5位氨基酸中的任意一个氨基酸被氮杂氨基酸或其衍生物取代的多肽化合物，其中，所述氮杂氨基酸或其衍生物的结构如下：
Figure FDA0003764730110000011
其中，第3位氨基酸被取代时，R选自异丙基、甲基、苄基或环丙基甲基；第4位氨基酸被取代时，R选自甲基、苄基或环丙基甲基；第5位氨基酸被取代时，R选自(S)-仲丁基、甲基、苄基或环丙基甲基。
2.权利要求1所述的Ang-(1-7)的氮杂多肽类似物的制备方法，其特征在于，制备方法包括如下步骤：
(1)制备寡肽固相树脂：通过标准的固相合成方法将目标寡肽负载在wang树脂上；
(2)制备化合物Ⅲ：以化合物Ⅰ为原料和DSC反应生成化合物Ⅱ，化合物Ⅱ与寡肽固相树脂反应生成化合物Ⅲ；
(3)制备化合物Ⅳ：化合物Ⅲ与目标醇进行Mitsunobu反应生成化合物Ⅳ；
(4)制备化合物Ⅴ：化合物Ⅳ进行胺解反应生成化合物Ⅴ；
(5)制备Ⅵ：化合物Ⅴ通过标准固相合成方法合成制备化合物Ⅵ；
其中，化合物Ⅰ的结构为：
Figure FDA0003764730110000012
化合物Ⅱ的结构为：
Figure FDA0003764730110000013
化合物Ⅲ的结构为：
Figure FDA0003764730110000014
化合物Ⅳ的结构为：
Figure FDA0003764730110000015
化合物Ⅴ的结构为：
Figure FDA0003764730110000021
化合物Ⅵ的结构为：
Figure FDA0003764730110000022
其中，azaGly为氮杂甘氨酸；R为甲基、苄基、环丙基甲基、异丙基、(S)-仲丁基；AAm为Asp -Arg-、Asp -Arg-Val-、Asp -Arg-Val-Tyr-；AAn为-Tyr-Ile-His-Pro、-Ile-His-Pro、-His-Pro；
Figure FDA0003764730110000023
为多肽合成中的固相载体Wang树脂；R1为邻位硝基。
3.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1所述的氮杂多肽类似物、或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
4.权利要求3所述的药物组合物在制备抗乳腺癌、前列腺癌、肺癌药物中的应用。
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