CN110029160B - 一种基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒及其用途 - Google Patents

一种基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒及其用途，所述试剂盒包括血浆lncRNA组合物的上下游引物；血浆lncRNA组合物由2个血浆中差异表达的血浆lncRNA组成，分别为uc.48+和NR_105053，扩增uc.48+的引物序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，扩增NR_105053的引物序列分别如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。本发明的试剂盒判断肺结核病是否治愈的灵敏度为65.00％，特异度为95.65％，并具有较高的准确性，且操作简便，效率高，样本状态受限小，为肺结核病的疗效评价提供了一种新的评估方法。

Description

一种基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒及其 用途
技术领域
本发明属于疾病疗效评价领域，特别涉及一种基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒及其用途。
背景技术
肺结核病是结核分枝杆菌引起的慢性肺部感染性疾病，是我国传染病防治的重点对象，流行形势十分严峻。然而，在当前肺结核病防治形势严峻的情况下，却缺乏准确评价疾病治疗效果的标准。因此，出院病人中约有30％并没未完全治愈，这无疑增加了肺结核病的扩散风险。而且，这些久治不愈的患者容易复发，甚至发展为耐药肺结核病。同时，还有一部分实际上已经治愈的病人，因为疗效评价的不准确而过度治疗，导致抗结核药物相关的肝、肾等器官损害加重，甚至死亡。
目前，临床医生主要依据患者是否接受了规范的抗结核治疗，结合X光、CT扫描、痰培养检查，来判断患者是否治愈。X光、CT扫描是对肺结核病进行疗效评价的影像学手段，若影像学结果提示肺部结核特征性病理改变好转或消失，则认为肺结核病可能治愈。但X光、CT扫描需要依赖医生的主观判断，评价结果受医生阅片水平和临床经验的影响。痰培养检查对于肺结核病患者的痰液进行细菌培养，若经过培养有结核杆菌生长则认为肺结核病未治愈，若无结核杆菌生长则认为肺结核病治愈。痰培养受其检出阈值的限制，痰中未检测结核杆菌，并不代表结核杆菌被完全清除，特异性仅为57.8％。并且，痰培养耗时太长，需4-8周。因此，迫切需要研究新的、评价肺结核病疗效的特异性标志物，建立一种稳定、准确的肺结核病疗效评价的新方法。lncRNA(Long non-coding RNA，长链非编码RNA)在多种生物过程和疾病中，发挥了重要的调控作用，能够作为疾病的候选检测标志物，用于疾病的分子诊断和预后预测。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提出一种基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒及其用途，该试剂盒可以高效、准确的对肺结核病患者进行疗效评价，判断其是够治愈，特异性强、敏感性高。
基于上述目的，本发明提供的一种基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒，包括血浆lncRNA组合物的上下游引物；
其中，所述血浆lncRNA组合物由2个差异表达的血浆lncRNA组成，分别为uc.48+和NR_105053，扩增uc.48+和NR_105053的引物序列分别如下所示：
uc.48+的上游引物序列为：5'-AGATAGAGACTCTCTCCTTGTG-3’，其为SEQ ID NO:1序列；
uc.48+的下游引物序列为：5'-CAGTTAACACTGTATGTAATTAGG-3’，其为SEQ ID NO:2序列；
NR_105053的上游引物序列为：5'-CATAGTAGGTGCTTGCATGTTG-3’，其为SEQ ID NO:3序列；
NR_105053的下游引物序列为：5'-AATGCTGGTTGCTTTGTGC-3’，其为SEQ ID NO:4序列。
本发明筛选出2个血浆lncRNA作为肺结核病治疗效果判定的分子标志物，这2个血浆lncRNA分别为uc.48+和NR_105053，这2个血浆lncRNA在未用药肺结核病患者、治愈肺结核病患者和健康对照者血浆中均有显著性差异表达，可以作为肺结核病治疗效果判定的分子标志物，将uc.48+和NR_105053组合使用用于评价肺结核病治疗效果，是一种特异性强、敏感性高的肺结核病治疗效果评价方法，对肺结核病治疗效果的评价具有重要的意义。
在本发明的一些实施例中，上述试剂盒还包括内参的上下游引物，内参为18S，扩增内参18S的引物序列为：
内参18S的上游引物序列为：5'-CGGCTACCACATCCAAGGAA-3’，其为SEQ ID NO:5序列；
内参18S的下游引物序列为：5'-GCTGGAATTACCGCGGCT-3’，其为SEQ ID NO:6序列。
上述引物序列并不限于此，本领域技术人员通过测试与修改，对上述引物序列进行碱基的替换和修饰，同样可以检测到待测血浆样本中uc.48+和NR_105053两个lncRNA分子的表达量，也在本发明的保护范围内。
在本发明中，uc.48+的序列为：
tttttttttacctaaatgcaaactggatgaggatccatgtgatgaaagtgatggcggtggcgtaagtgaatgtcctggagtttggcttggcagaggcatgcctattggacttggagaggaggaaaatcccagactattgtaaaatggttgccctatgggtgctaggctgctactagatcttttgtacaagtcagagctagtagatagagactctctccttgtggcactactacttgcagaactgccaactgaagaagaaataaaaaaaaccctaattacatacagtgttaactgaata，其为SEQ ID NO:7序列；
NR_105053的序列为：
ggggaaggctcagaagctccaaggtttcattgacacagcctggagacccagctctgtcactcaactctacatagccttcacccagagcctgacagtgtatatgaacaagaggctgtgcctggtgagtgcttctgccactttctccaggatgacagctgtggactcctgccacatccaacacccccttgctgctccccaccgccctccttggcacccaggtggctgatctcctatggtcttgctggcttctctaccttgtatgctgagggcgggcccagcctgccccagctcagggtctgcacatagtaggtgcttgcatgttgcctgctaaactgacagccctgtaaccatgtcagcacaaagcaaccagcattttgggtgcatctgcagttaaaataaaccactgaggtcatg，其为SEQ ID NO:8序列。
本发明基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒的原理为：
本发明运用MedCalc软件计算单个血浆lncRNA中的uc.48+和NR_105053鉴别治愈肺结核病的ROC曲线，包括曲线下面积(Area Under Curve，AUC)、灵敏度、特异度，结果显示血浆uc.48+、NR_105053的AUC分别是0.818、0.693，灵敏度分别是70.00％、55.00％，特异度分别是90.91％、86.36％。其疗效评价能力有进一步提升的空间。
采用Logistic回归模型计算血浆uc.48+和NR_105053组合物评价肺结核病是否治愈的ROC曲线(Receiver Operating Characteristic Curve，受试者工作特征曲线)，通过数据计算和分析，构建出uc.48+和NR_105053组合物的Logistic回归模型的回归方程：
Logit(P)＝1.3998-11919.8902(uc.48+相对表达量)-1148.7031(NR_105053相对表达量)，uc.48+和NR_105053组合物的AUC为0.811(95％Confidence Interval＝0.661-0.915)。uc.48+和NR_105053组合物评价肺结核病是否治愈，灵敏度为65.00％、特异度为95.50％，特异度更高，效果更好，说明uc.48+和NR_105053组合物可用于制备肺结核病疗效评价的试剂盒。
在本发明的一些实施例中，上述试剂盒还包括RNA提取缓冲液、总RNA反转录反应液和qPCR(Real-time Quantitative PCR，实时荧光定量PCR)反应液。
在本发明的一些实施例中，所述RNA提取缓冲液包括：
Figure BDA0002021185550000041
Lysis Reagent、氯仿、无水乙醇、乙酸铵和ddH2O；
所述总RNA反转录反应液包括：PrimeScriptTM RT Master Mix和ddH2O；所述qPCR反应液包括：
Figure BDA0002021185550000042
Premix Ex TaqTM(Tli RnaseH Plus)、50×ROX Reference Dye和ddH2O。
在本发明的一些实施例中，还包括768well-Array Tape(768孔阵列反应带)。
基于相同的发明构思，本发明还提供了上述基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
(1)采集外周血、离心、吸上清液；
(2)将所得上清液用RNA提取缓冲液提取总RNA；
(3)在总RNA反转录反应液加入总RNA，反转录得到cDNA模板；
(4)在qPCR反应液中加入cDNA模板、上游引物和下游引物，得到混合液，并将混合液加入768孔阵列反应带中进行qPCR定量反应；
(5)计算2个lncRNA的相对表达量，带入Logistic模型回归方程，经计算后评价肺结核病治疗效果。
上述基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒的使用方法的基本思路为：通过uc.48+和NR_105053的相对表达量，建立逻辑回归公式，并通过逻辑回归公式得出最佳临界点，任何落入本发明思路下的技术方案均在本发明的保护范围内。
在本发明的一些实施例中，所述Logistic模型回归方程为：
Logit(P)＝1.3998-11919.8902(uc.48+相对表达量)-1148.7031(NR_105053相对表达量)。
在本发明的一些实施例中，获得Logit(p)值，以0.6218为临界点，判定肺结核病治疗效果。
若Logit(p)值大于或等于0.6218，则认为该患者肺结核病已经治愈，若Logit(p)值小于0.6218，则认为肺结核病尚未治愈。
上述Logistic模型回归方程是优选的，采用该Logistic模型回归方程能够非常准确地评价肺结核病疗效，但这并不会限制本发明的保护范围，本领域技术人员对于公式中的常数(1.3998)，系数(11919.8902、1148.7031)进行修改，并随之产生最佳临界点Logit(P)值(0.6218)的改变，虽然评价肺结核病疗效的准确性会发生变化，但是仍然可以达到比较准确评价肺结核病疗效的目的，仍然落入本发明的思路下，因此也在本发明的保护范围内。
本发明还提供了上述基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒的使用方法，具体包括以下步骤：
(1)使用EDTA抗凝采血管采集外周血、离心、吸取上清液；
(2)提取血浆总RNA
将所得上清液用RNA提取缓冲液提取总RNA，超微量分光光度计检测OD值，计算总RNA浓度；
(3)总RNA反转录为cDNA
以反应体系的总体积为20μL计算，首先加入PrimeScriptTM RT Master Mix 4μL，然后加入相应体积的总RNA溶液(按照浓度将500ng总RNA换算成体积)，最后加入ddH2O，将反应体系的总体积补齐至20μL。将上述反转录反应体系混匀并短暂离心后，于反应条件：37℃反应15分钟，85℃变性5秒，得到cDNA模板。
(4)qPCR定量检测
以反应体系的总体积为1.6μL计算，向体系中加入0.72μL
Figure BDA0002021185550000051
Pre mix ExTaqTM(Tli RnaseH Plus)(2×)，0.016μL ROX Reference Dye(50×)，0.032μL上游引物(10μM)，0.032μL下游引物(10μM)，0.4μL cDNA模板，0.4μL ddH2O。以上混合液由IntelliQube全自动PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应)反应仪，自动加入768well-Array Tape(768孔阵列反应带)中，反应条件为：95℃预变性30秒；95℃变性5秒，60℃退火延伸30秒，45个循环。同时，IntelliQube全自动PCR反应仪记录目的lncRNA及内参的CT值。
上游引物为SEQ ID NO:1所示的uc.48+的上游引物、SEQ ID NO:3所示的NR_105053的上游引物或SEQ ID NO:5所示的内参18S的上游引物；
下游引物为SEQ ID NO:2所示的uc.48+的下游引物、SEQ ID NO:4所示的NR_105053的下游引物或SEQ ID NO:6所示的内参18S的下游引物。
(5)计算样本中2个lncRNA的相对表达量，带入Logistic模型回归方程，经计算后评价肺结核病治疗效果。
Logit(P)＝1.3998-11919.8902(uc.48+相对表达量)-1148.7031(NR_105053相对表达量)。
获得Logit(P)值，以0.6218为临界点，若Logit(P)值大于或等于0.6218，判断为该患者肺结核病已经治愈，小于0.6218，则判断为该患者肺结核病尚未治愈。
基于相同的发明构思，本发明还提供了上述基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒在制备肺结核病疗效评价试剂中的用途。
从上面所述可以看出，本发明提供的基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒采用血浆lncRNA组合物的方式评价肺结核病患者的治疗效果，具有较高的敏感性和特异性，且操作简便，效率高，样本状态受限小，优于目前临床所采用的痰培养，为肺结核病的疗效评价提供了一种新的评估方法。
附图说明
图1为本发明实施例健康对照者、未用药、治愈肺结核病患者血浆中uc.48+的表达水平比较示意图；
图2为本发明实施例健康对照者、未用药、治愈肺结核病患者血浆中NR_105053的表达水平示意图；
图3为本发明实施例血浆uc.48+，NR_105053和组合物的ROC曲线示意图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本发明进一步详细说明。
实施例1：基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒的组成
在本实施例中，基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒，包括血浆lncRNA组合物的上下游引物、内参的上下游引物、RNA提取缓冲液、总RNA反转录反应液、qPCR反应液和768well-Array Tape(768孔阵列反应带)；
其中，所述血浆lncRNA组合物由2个差异表达的血浆lncRNA组成，分别为uc.48+和NR_105053，扩增uc.48+和NR_105053的引物序列分别如下所示：
uc.48+的上游引物序列为：5'-AGATAGAGACTCTCTCCTTGTG-3’，其为SEQ ID NO:1序列；
uc.48+的下游引物序列为：5'-CAGTTAACACTGTATGTAATTAGG-3’，其为SEQ ID NO:2序列；
NR_105053的上游引物序列为：5'-CATAGTAGGTGCTTGCATGTTG-3’，其为SEQ ID NO:3序列；
NR_105053的下游引物序列为：5'-AATGCTGGTTGCTTTGTGC-3’，其为SEQ ID NO:4序列；
内参18S的上游引物序列为：5'-CGGCTACCACATCCAAGGAA-3’，其为SEQ ID NO:5序列；
内参18S的下游引物序列为：5'-GCTGGAATTACCGCGGCT-3’，其为SEQ ID NO:6序列。
所述RNA提取缓冲液包括：
Figure BDA0002021185550000074
Lysis Reagent、氯仿、无水乙醇、乙酸铵和ddH2O；
Figure BDA0002021185550000071
Lysis Reagent购自Qiagen公司；
所述总RNA反转录反应液包括：PrimeScriptTM RT Master Mix和ddH2O；所述qPCR反应液包括：
Figure BDA0002021185550000072
Premix Ex TaqTM(Tli RnaseH Plus)(2×)、ROX Reference Dye(50×)和ddH2O。
总RNA反转录反应液中的PrimeScriptTM RT Master Mix、qPCR反应液中的
Figure BDA0002021185550000073
Premix Ex TaqTM(Tli RnaseH Plus)(2×)和ROX Reference Dye(50×)试剂购自TaKaRa宝生物公司。
768 well-Array Tape(768孔阵列反应带)购自LGC公司。
实施例2：肺结核病疗效评价试剂盒Logistic回归模型建立
采用肺结核病疗效评价试剂盒分别检测健康对照者、未用药肺结核病患者、治愈肺结核病患者血浆中uc.48+和NR_105053的表达水平。
(1)样本收集：
健康对照者25例、未用药肺结核病患者22例、治愈肺结核病患者20例。所有人员均为晨起空腹采血，抽取3.0mL外周血至一次性EDTA抗凝真空采血管中，抽血后4小时内于4℃，3000g条件下离心10分钟，吸取上层血浆，分装后于-80℃冻存。
(2)提取血浆样本中的总RNA
在400μL血浆样本中加入2000μL Qiagen裂解液剧烈震荡混匀，静置5分钟；加入400μL氯仿，震荡混匀，静置5分钟；12000rpm，4℃，15分钟离心后取上清液，加入与上清液等体积的异丙醇，同时加入35μL乙酸铵；混合液于-20℃冰箱静置2小时，然后12000rpm，4℃，离心40分钟；弃去上清液，加入1000μL的75％乙醇混匀，12000rpm，4℃，离心10分钟，重复该步骤两次；弃去乙醇溶液，干燥试管，加入20μL的ddH2O，55℃水浴10分钟，使总RNA充分溶解。
(3)总RNA反转录合成cDNA
以反应体系的总体积为20μL计算，首先加入PrimeScriptTM RT Master Mix 4μL，然后加入相应体积的的总RNA溶液(按照浓度将500ng总RNA换算成体积)，最后加入ddH2O，将反应体系的总体积补齐至20μL。将上述反转录反应体系混匀并短暂离心后，于反应条件：37℃反应15分钟，85℃变性5秒，得到cDNA模板，放置于-20℃保存。
(4)qPCR(实时荧光定量PCR)定量检测：
反应体系的总体积为1.6μL，0.72μL
Figure BDA0002021185550000081
Pre mix Ex TaqTM(Tli RnaseHPlus)(2×)，0.016μL ROX Reference Dye(50×)，0.032μL上游引物(10μM)，0.032μL下游引物(10μM)，0.4μL cDNA模板，0.4μL ddH2O。以上混合液由IntelliQube全自动PCR反应仪，自动加入768well-Array Tape(768孔阵列反应带)中，反应条件为：95℃预变性30秒；95℃变性5秒，60℃退火延伸30秒，45个循环。同时，IntelliQube全自动PCR(聚合酶链式反应)反应仪记录目的lncRNA及内参的CT值。
(5)数据处理与统计分析：
根据样本lncRNA的CT值，取平均值换算各样本中lncRNA相对表达量。lncRNA的相对表达量为2-△CT，△CT＝CT lncRNA-CT18S。实验设立阴性对照和重复实验，阴性对照反应体系中加ddH2O，所有qPCR均做2次重复。
统计分析：采用GraphPad Prism5软件中Nonparametric Mann-Whitney test进行统计(P<0.05时，具有显著性差异，P<0.01时，具有极显著性差异)，差异表达的lncRNA数据处理结果以平均值±标准误表示，绘制含误差线的散点图，参见图1-图2。
由图1-图2可知，uc.48+和NR_105053在未用药肺结核病患者、治愈肺结核病患者和健康对照者血浆中均有显著性差异表达，可以作为肺结核病治疗效果判定的分子标志物。
运用MedCalc软件计算单个血浆标志物uc.48+和NR_105053评价肺结核病疗效的ROC曲线，包括灵敏度、特异性和曲线下面积(AUC)，结果显示血浆uc.48+和NR_105053的AUC分别是0.818、0.693，灵敏度分别是70.00％、55.00％，特异度分别是90.91％、86.36％。通过将单个血浆标志物进行组合，其疗效评价能力有进一步提升的空间。
采用Logistic回归模型计算血浆uc.48+和NR_105053组合物评价肺结核病疗效的ROC曲线，通过数据计算和分析，构建出uc.48+和NR_105053组合物的Logistic回归模型的回归方程：
Logit(P)＝1.3998-11919.8902(uc.48+相对表达量)-1148.7031(NR_105053相对表达量)。
uc.48+和NR_105053组合物的ROC曲线的曲线下面积(AUC)为0.811(95％CI：0.661-0.915)，参见图3。取Logit(P)值等于0.6218为临界点判断肺结核病是否治愈，此时灵敏度为65.00％、特异度为95.50％。说明该模型相比单个血浆lncRNA评价肺结核病疗效，具有更高的特异度，uc.48+和NR_105053组合物可用于制备活动性肺结核病的疗效评价试剂盒。
实施例3：肺结核病疗效评价试剂盒检测效果的验证及应用
取经过抗结核治疗后，需要判断是否治愈的患者血浆，样本收集及检测方法同实施例2所述。
检测后，将各lncRNA相对表达量带入公式，得到Logit(P)值。若该值大于或等于0.6218，则认为该患者肺结核病已经治愈，若该值小于0.6218，则认为肺结核病尚未治愈。
以Logit(P)值等于0.6218为临界点时，该方法评价肺结核病是否治愈，其灵敏度为65.00％、特异度为95.65％。
可见，本发明基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒具有以下优点：
(1)本发明采用特异性的血浆lncRNA组合物，对肺结核病是否治愈进行鉴别，该检测技术先进、所需样本少、适用性广，组合物的构建方法设计精确，合理可行。
(2)传统的痰培养方法检测需要时间长(4-8周)，分辨能力差，特异性低，且安全性差，需特定实验室内完成。而本试剂盒操作简便、快捷，仅需4-5小时，且该试剂盒是一种基于血浆lncRNA水平的检测，安全有效，检测难度小。
(3)本发明对判断肺结核病患者是否治愈，其灵敏度为65.00％，特异度为95.65％，具有较高的准确性，可实现对肺结核病是否治愈的评估，为肺结核病的疗效评价提供了一项新的、客观的方法。
所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本公开的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本发明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。因此，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Figure BDA0002021185550000111
Figure BDA0002021185550000121
序列表
<110> 李继承
<120> 一种基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒及其用途
<130> FI190161
<160> 8
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> uc.48+的上游引物序列
<400> 1
agatagagac tctctccttg tg 22
<210> 2
<211> 24
<212> DNA
<213> uc.48+的上游引物序列
<400> 2
cagttaacac tgtatgtaat tagg 24
<210> 3
<211> 22
<212> DNA
<213> NR_105053的上游引物序列
<400> 3
catagtaggt gcttgcatgt tg 22
<210> 4
<211> 19
<212> DNA
<213> NR_105053的下游引物序列
<400> 4
aatgctggtt gctttgtgc 19
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 内参18S的上游引物序列
<400> 5
cggctaccac atccaaggaa 20
<210> 6
<211> 18
<212> DNA
<213> 内参18S的下游引物序列
<400> 6
gctggaatta ccgcggct 18
<210> 7
<211> 298
<212> RNA
<213> uc.48+的序列
<400> 7
ttttttttta cctaaatgca aactggatga ggatccatgt gatgaaagtg atggcggtgg 60
cgtaagtgaa tgtcctggag tttggcttgg cagaggcatg cctattggac ttggagagga 120
ggaaaatccc agactattgt aaaatggttg ccctatgggt gctaggctgc tactagatct 180
tttgtacaag tcagagctag tagatagaga ctctctcctt gtggcactac tacttgcaga 240
actgccaact gaagaagaaa taaaaaaaac cctaattaca tacagtgtta actgaata 298
<210> 8
<211> 414
<212> RNA
<213> NR_105053的序列
<400> 8
ggggaaggct cagaagctcc aaggtttcat tgacacagcc tggagaccca gctctgtcac 60
tcaactctac atagccttca cccagagcct gacagtgtat atgaacaaga ggctgtgcct 120
ggtgagtgct tctgccactt tctccaggat gacagctgtg gactcctgcc acatccaaca 180
cccccttgct gctccccacc gccctccttg gcacccaggt ggctgatctc ctatggtctt 240
gctggcttct ctaccttgta tgctgagggc gggcccagcc tgccccagct cagggtctgc 300
acatagtagg tgcttgcatg ttgcctgcta aactgacagc cctgtaacca tgtcagcaca 360
aagcaaccag cattttgggt gcatctgcag ttaaaataaa ccactgaggt catg 414

Claims (6)

1.一种基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒，其特征在于，包括血浆lncRNA组合物的上下游引物；
其中，所述血浆lncRNA组合物由2个差异表达的血浆lncRNA组成，分别为uc.48+和NR_105053，扩增uc.48+和NR_105053的引物序列分别如下所示：
uc.48+的上游引物序列为：5'-AGATAGAGACTCTCTCCTTGTG-3’，其为SEQ ID NO:1序列；
uc.48+的下游引物序列为：5'-CAGTTAACACTGTATGTAATTAGG-3’，其为SEQ ID NO:2序列；
NR_105053的上游引物序列为：5'-CATAGTAGGTGCTTGCATGTTG-3’，其为SEQ ID NO:3序列；
NR_105053的下游引物序列为：5'-AATGCTGGTTGCTTTGTGC-3’，其为SEQ ID NO:4序列。
2.根据权利要求1所述的基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒，其特征在于，还包括内参的上下游引物，内参为18S，扩增内参18S的引物序列为：
内参18S的上游引物序列为：5'-CGGCTACCACATCCAAGGAA-3’，其为SEQ ID NO:5序列；
内参18S的下游引物序列为：5'-GCTGGAATTACCGCGGCT-3’，其为SEQ ID NO:6序列。
3.根据权利要求1所述的基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒，其特征在于，还包括RNA提取缓冲液、总RNA反转录反应液和qPCR反应液。
4.根据权利要求3所述的基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒，其特征在于，所述RNA提取缓冲液包括：
Figure FDA0003757797040000011
Lysis Reagent、氯仿、无水乙醇、乙酸铵和ddH2O；
所述总RNA反转录反应液包括：PrimeScript TM RT MasterMix和ddH2O；
所述qPCR反应液包括：
Figure FDA0003757797040000012
Premix Ex TaqTM、50×ROX Reference Dye和ddH2O。
5.根据权利要求1所述的基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒，其特征在于，还包括768孔阵列反应带。
6.权利要求1-5任一项所述的基于血浆lncRNA组合物的肺结核病疗效评价试剂盒在制备肺结核病疗效评价试剂中的用途。
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