CN110025612A - 白杨素在制备治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染性肺炎药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种白杨素在制备治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染性肺炎药物中的应用,白杨素,又称白杨黄素,化学式为C15H10O4,化学名为5,7‑氢黄酮,5,7‑二羟基黄酮,是从紫葳科植物木蝴蝶中分离得到的一种具有广泛药理活性的黄酮类化合物。药理学研究表明,白杨素具有多种药理活性,如抗血脂、抗炎、以及抗动脉粥样硬化等作用。白杨素能够应用在制备治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染性肺炎药物中,白杨素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染性肺炎具有较好的保护效果。本发明的有益效果:本发明通过人肺上皮细胞侵袭试验以及小鼠金黄色葡萄球菌肺炎模型,证实了白杨素对金黄色葡萄球菌感染性肺炎的保护作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种白杨素在制备治疗感染性肺炎药物中的应用,特别涉及一种白杨素在制备治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染性肺炎药物中的应用。
背景技术
金黄色葡萄球菌是一种重要的病原菌,常常导致成人和儿童急性化脓性肺炎。在临床中一般采用苯唑西林、氯唑西林、甲氧西林或万古霉素等抗生素进行治疗。但是在抗生素的选择压力下,细菌出现耐药性甚至多重耐药性,对抗生素的敏感性不断下降。目前,大约50%的金黄色葡萄球菌肺炎分离株被归类为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),使得金黄色葡萄球菌感染性肺炎的治疗面临无药可治的局面,使其成为儿童、老年人和免疫缺陷患者死亡的重要原因。因此,寻找安全、有效的新药显得尤为重要和紧迫。
发明内容
本发明的目的是为了解决金黄色葡萄球菌出现耐药性甚至多重耐药性,对抗生素的敏感性不断下降,从而导致金黄色葡萄球菌感染性肺炎的治疗面临无药可治的问题而提供的一种白杨素在制备治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染性肺炎药物中的应用。
白杨素,又称白杨黄素,化学式为C15H10O4,化学名为5,7-氢黄酮,5,7- 二羟基黄酮,是从紫葳科植物木蝴蝶中分离得到的一种具有广泛药理活性的黄酮类化合物。药理学研究表明,白杨素具有多种药理活性,如抗血脂、抗炎、以及抗动脉粥样硬化等作用。
白杨素的分子式如下:
白杨素能够应用在制备治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染性肺炎药物中,白杨素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染性肺炎具有较好的保护效果。
本发明可将白杨素和药学上可接受的辅料制备成可接受的剂型包括片剂或注射剂或粉针剂。
本发明的有益效果:
本发明与用抗生素治疗相比较,使用白杨素治疗具有无耐药性,治愈率高的优点。本发明通过人肺上皮细胞侵袭试验以及小鼠金黄色葡萄球菌肺炎模型,证实了白杨素对金黄色葡萄球菌感染性肺炎的保护作用。
附图说明
附图1:为本发明实施例1中,白杨素对人肺上皮细胞A549的细胞毒性实验结果示意图。
附图2:为本发明实施例2中,应用的不同浓度白杨素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌侵袭人肺上皮细胞A549的保护实验结果示意图。
附图3:为实施例3中,白杨素对金黄色葡萄球菌感染性肺炎的肺组织保护作用病理结果示意图
附图4:为实施例3中,白杨素治疗对小鼠耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染性肺炎死亡率的影响实验结果示意图。
具体实施方式
请参阅图1至图4所示:
实施例1、白杨素对人肺上皮细胞A549的细胞毒性实验:
MTT,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(商品名:噻唑蓝),是一种检验细胞存活能力和生长率的常用试剂。为了确定白杨素对细胞生长存活的影响,本实验采用MTT法测定白杨素对人肺上皮细胞A549的细胞毒性。
1.1培养人肺上皮细胞A549至对数生长期,胰酶消化后重悬于DMEM/高葡萄糖培养基(含10%胎牛血清)中,调整细胞悬液浓度,按每孔加入150μL 细胞悬液(6×103个细胞)接种到96孔细胞培养板中。将细胞培养板置于37℃,含5%CO2的细胞培养箱中。
1.2细胞贴壁后,加入不同浓度的白杨素(32μg/mL,64μg/mL,128μg/mL 和256μg/mL),每个浓度设3个重复,于37℃,含5%CO2培养箱中继续培养 72小时,对照组加入相同体积的DMSO(二甲基亚砜)。
1.3每孔加入20μLMTT溶液(5mg/mL,即0.5%MTT),继续培养4小时。
1.4吸去孔内培养液,每孔加入150μLDMSO后置摇床上低速振荡15分钟,充分溶解MTT甲瓒结晶物。用酶标仪测量各组在490nm波长下的吸光度,判定药物对细胞存活的影响。
结果如图1所示,不同浓度的白杨素与人肺上皮细胞A549作用后,细胞的存活率无明显差异,表明白杨素对A549细胞无毒性。
实施例2、白杨素抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对人肺上皮细胞A549的侵袭实验:
2.1培养人肺上皮细胞A549至对数生长期,胰酶消化后重悬于DMEM/高葡萄糖培养基(含10%胎牛血清)中,用DMEM调整细胞悬液浓度至4×104个细胞/mL,然后取500μL细胞悬液加入到24孔细胞培养板中(含细胞爬片)。将细胞培养板置于细胞培养箱中,于37℃,5%CO2条件下培养过夜。
2.2培养金黄色葡萄球菌至对数生长期,按1:100接种到含有终浓度为 64μg/mL和128μg/mL白杨素的TSA培养基中,继续培养至吸光度为 OD600nm=1.0后备用。
2.3从各药物浓度处理组分别吸取500μL金黄色葡萄球菌悬液(吸光度为 OD600nm=1.0),加到2.1中制备的24孔细胞培养板中,每组3个重复,置于37℃, 5%CO2培养箱中孵育2小时。
2.4孵育后用每孔用无菌的PBS冲洗3次,加入1mL含有300μg/mL庆大霉素的DMEM/高葡萄糖培养基,置于37℃,5%CO2培养箱中孵育30分钟,清除未进入细胞的金黄色葡萄球菌。
2.5每孔用无菌的PBS冲洗3次,用无菌蒸馏水中裂解细胞爬片上的A549 细胞,收集细胞裂解液,涂布于TSA琼脂培养板,12小时后计数CFU。
结果如附图2所示,白杨素能够显著减少金黄色葡萄球菌对人肺上皮细胞侵袭,该作用呈现剂量依赖性。
实施例3、白杨素对小鼠金黄色葡萄球菌肺炎的实验治疗学研究:
3.1建立小鼠耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染性肺炎模型
从琼脂糖TSA平板上挑取金黄色葡萄球菌MRSA菌株,接种于TSA液体培养基中,于37℃,200rpm振荡培养过夜。次日,取50μL菌液传代到5mL新鲜TSA培养基中,继续培养至对数期,5000rpm,离心10分钟后收集细菌沉淀,用无菌PBS洗涤2次,调节菌液浓度至3.3×1010CFU/mL,备用。
选取6-8周龄,体重8-22g的雄性SPF级C57BL/6小鼠,适应性饲养5 天后用于构建MRSA感染性肺炎小鼠模型。对于小鼠肺炎致死率实验,将小鼠随机分为未感染组、感染对照组,50mg/kg药物治疗组,每组10只。乙醚麻醉后,感染对照组及药物处理组小鼠均通过滴鼻接种60μL(约为2.0×109CFU)制备好的MRSA菌液,未感染组小鼠滴鼻接种30μL无菌生理盐水,接种后将小鼠直立30秒以保证菌液充分吸收。
对于小鼠肺组织病理学观察实验,将小鼠随机分为未感染组、感染对照组, 50mg/kg药物治疗组,每组10只。乙醚麻醉后,感染对照组及药物处理组小鼠均通过滴鼻接种30μL(约为1.0×109CFU)制备好的MRSA菌液,未感染组小鼠滴鼻接种30μL无菌生理盐水,接种后将小鼠直立30秒,使之自然吸入。然后将小鼠放置平躺,待其自然苏醒。
3.2白杨素对小鼠肺脏组织的保护作用
对于小鼠肺组织病理学观察实验组小鼠,感染后2小时开始给药,每12小时给药一次。药物治疗组皮下注射50mg/kg的白杨素,未感染组和感染对照组注射等体积生理盐水。给药24小时后,颈椎脱臼处死小鼠,于超净台内无菌取小鼠左肺,观察肺脏整体的病理变化并采集图片。之后将肺脏用10%福尔马林溶液固定,进行石蜡包埋、切片、HE染色后观察肺脏病理组织学变化,并进行图像采集。
肺部病理学组织切片结果表明(附图3),未感染组肺组织结构完整,肺泡边缘整齐,肺泡腔内无异常;感染组小鼠接受注射生理盐水处理后,肺组织显着充血,并且肺泡沟中的有大量炎性细胞积聚。白杨素治疗组,用白杨素治疗后,肺组织充血较轻,肺泡腔的炎症细胞浸润明显减少,肺泡结构较完整,表明肺部炎症得到缓解。
3.3白杨素对小鼠耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染性肺炎的保护率实验
对于小鼠肺炎致死率实验组小鼠,感染后2小时后给药,药物处理组分别皮下注射50mg/kg的白杨素,未感染组和感染对照组小鼠皮下注射等量生理盐水,每12小时给药一次。每隔12小时计录96小时内给药小鼠的存活情况。
结果表明(附图4),白杨素处理可以显著提高小鼠金黄色葡萄球菌肺炎的生存率(P<0.05)。
Claims (2)
1.一种白杨素在制备治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染性肺炎药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的一种白杨素在制备治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染性肺炎药物中的应用,其特征在于:所述的白杨素和药学上可接受的辅料制备成可接受的剂型包括片剂或注射剂或粉针剂。
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