CN110652508B - 白杨素在制备猪链球菌溶血素抑制剂中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及白杨素在制备猪链球菌溶血素抑制剂中的应用，公开了白杨素的一种新的医用用途，可以抑制猪链球菌溶血素活性并体内外抑制猪链球菌的致病力；本发明与用抗生素治疗相比较，使用白杨素治疗具有无耐药性，治愈率高的优点；有效抑制猪链球菌溶血素活性，降低猪链球菌对宿主细胞J774细胞的损伤作用；可通过抑制猪链球菌溶血素成孔活性而降低猪链球菌致病力；是一种新型、毒性小和选择压力小的抗猪链球菌感染药物。

Description

白杨素在制备猪链球菌溶血素抑制剂中的应用
技术领域
本发明公开了白杨素在制备猪链球菌溶血素抑制剂中的应用，公开了白杨素的一种新的医用用途，属于医药技术领域。
背景技术
白杨素主要存在于紫葳科植物木蝴蝶【Oroxylum indicum(L.)Vent.】的种子、茎皮，松科植物山白松（Pinus mon-ticola Dougl.）的心木，芒松（P.aristata Engelm.）的心木等。在蜂胶中含量较高。白杨素具有抗氧化、抗肿瘤、抗癌、抗病毒、抗高血压、抗糖尿病、抗菌、抗过敏等广泛药理生理活性。
猪链球菌是临床上重要的人兽共患病原菌，可导致患者中毒性休克综合征和链球菌脑膜炎综合征等症状，对公共健康造成严重的威胁。猪链球菌的致病力与其毒力因子密切相关，其中猪链球菌分泌的溶血素可使得病原菌逃逸宿主免疫系统攻击以及突破血脑屏障而引起脑膜炎，甚至是死亡。因此溶血素是猪链球菌感染抗毒力药物研发的潜在靶标。近年来由于抗生素的滥用以及其不可避免地易诱导耐药性的发生和发展，因此迫切需要寻求新型、毒性小和选择压力小的抗感染药物。
发明内容
本发明公开了白杨素在制备猪链球菌溶血素抑制剂中的应用，提供了白杨素在抑制猪链球菌溶血素活性并体内外抑制猪链球菌的致病力的新的医用用途。
本发明涉及的白杨素，其分子结构如下：
Figure 880245DEST_PATH_IMAGE001
分子式：C15H10O4 ；分子量：254.24。
本发明公开了白杨素抑制猪链球菌溶血素的溶血活性，用于在制备猪链球菌溶血素抑制剂。
本发明公开了白杨素抑制猪链球菌对J774细胞介导的细胞毒性作用。
本发明公开了白杨素对猪链球菌介导的小鼠感染具有较好的治疗作用，用于制备治疗猪链球菌感染药物。
所述的猪链球菌感染是指由链球菌属细菌引起的细菌性感染，其中细菌性感染是指由猪链球菌引起的感染。
所述的白杨素药物为药学上可接受的载体，如注射液、胶囊、片剂或粉针剂等。
本发明的积极效果在于：
公开了白杨素的一种新的医用用途，可以抑制猪链球菌溶血素活性并体内外抑制猪链球菌的致病力；本发明与用抗生素治疗相比较，使用白杨素治疗具有无耐药性，治愈率高的优点；有效抑制猪链球菌溶血素活性，降低猪链球菌对宿主细胞J774细胞的损伤作用；可通过抑制猪链球菌溶血素成孔活性而降低猪链球菌致病力；是一种新型、毒性小和选择压力小的抗猪链球菌感染药物。
附图说明
图1为白杨素对猪链球菌生长的影响曲线图（注：0，2，4，8和16，分别代表猪链球菌与0 μg/mL，2μg/mL，4μg/mL，8μg/mL和16μg/mL的白杨素共培养）；
图2为白杨素对猪链球菌在小鼠肝脾内菌落定植的影响曲线图（注：Liver：肝脏；Spleen：脾脏；Control：无白杨素治疗组；Chrysin：白杨素治疗组）。
具体实施方式
下面通过溶血实验、对J774细胞的保护作用实验以及对小鼠猪链球菌感染的治疗作用实验证实了白杨素可抑制猪链球菌溶血素活性及在猪链球菌感染的治疗作用：
实验例1
1. 溶血试验
纯化的猪链球菌溶血素于96孔板中作连续的二倍稀释，每个孔中加入107个兔红细胞，于37℃中孵育30分钟后离心。使红细胞溶解的最高稀释倍数视为溶血滴度（Hemolysis titre）。不加白杨素和加入不同浓度白杨素后猪链球菌溶血素的溶血滴度如表1。
表1. 白杨素对猪链球菌溶血素溶血活性的抑制作用
Figure 610435DEST_PATH_IMAGE002
结论：猪链球菌溶血素溶血滴度随着白杨素浓度的增加逐步下降，呈现明显的剂量依赖性作用，表明白杨素是一种有效的猪链球菌溶血素抑制剂。
生长曲线试验
将过夜培养的猪链球菌扩培至新鲜培养基中生长至OD600=0.3，均匀分装至五个锥形瓶，分别加入0、2、4、8和16 μg/ml的白杨素，于37℃，180r/min的摇床中孵育，每隔一个小时测定一次OD600的吸光值并记录结果。结果如图1所示，白杨素对猪链球菌的生长无任何影响，表明白杨素对猪链球菌生长无影响，但可有效抑制猪链球菌溶血素活性。
白杨素对J774细胞的保护作用
J774细胞铺板于96孔板中（20000个/孔），培养（DMEM完全培养基，37℃，5% CO2）24小时，每孔分别加入猪链球菌（细菌：细胞=100:1）并加入不同梯度药物的白杨素，继续培养5小时，离心（1000rpm，10min）取上清，检测上清中乳酸脱氢酶的活性以检测细胞的的存活率。结果（参见表2）表明白杨素显著抑制猪链球菌对J774细胞介导的细胞毒性作用，且这一作用呈现浓度依赖性。
表2. 白杨素抑制猪链球菌对J774细胞介导的细胞毒性作用
Figure 390172DEST_PATH_IMAGE003
结论：表明白杨素可有效抑制猪链球菌对宿主细胞介导的细胞毒作用，且这一作用于白杨素抑制猪链球菌溶血素作用类似，表明白杨素有效抑制猪链球菌溶血素活性，降低猪链球菌对宿主细胞J774细胞的损伤作用。
小鼠猪链球菌感染的实验治疗学研究
1）保护率试验
BALB/c小鼠（雄性，18-22g）经腹腔注射200 μl（1010 CFU/ml）猪链球菌悬液后2小时分别皮下注射100、50和25 mg/kg（100 μl）的白杨素，每6小时给药一次。不给药对照组给与100 μl的生理盐水，每组30只小鼠。按给药方案给药后，分别记录小鼠感染猪链球菌24h，48 h，72 h后的死亡率。结果表明（表3），经白杨素给药治疗后，显著降低小鼠猪链球菌感染的死亡率（P＜0.05），这一结果表明白杨素通过抑制猪链球菌溶血素活性而降低猪链球菌的致病力。
表3. 白杨素降低小鼠猪链球菌感染的死亡率
Figure 847698DEST_PATH_IMAGE004
2）菌落定植试验
BALB/c小鼠（雄性，18-22g）经腹腔注射200 μl（108 CFU/ml）猪链球菌悬液后2小时分别皮下注射50 mg/kg（100 μl）的白杨素，每6小时给药一次，并设置溶剂对照组。按给药方案给药48 h后，取小鼠的肝脏和脾脏进行匀浆稀释后涂布于LB琼脂板上，于37℃中静置孵育16 h后计算菌落定植数。结果表明（图2），经白杨素给药治疗后，显著降低猪链球菌在小鼠脾脏和肝脏内的菌落定植水平（P＜0.01），这一结果进一步表明，白杨素可通过抑制猪链球菌溶血素成孔活性而降低猪链球菌致病力。

Claims (2)

1.白杨素在制备猪链球菌溶血素抑制剂中的用途。
2.白杨素在制备治疗猪链球菌感染药物中的用途，所述的猪链球菌感染是指由链球菌属细菌引起的细菌性感染，其中细菌性感染是指由猪链球菌引起的感染。
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