CN109971865A - 一种与凡纳滨对虾体重性状显著相关的snp标记和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于水产动物分子标记辅助育种领域,具体涉及一种与凡纳滨对虾体重性状显著相关的新型SNP标记及应用。用于扩增该SNP标记的引物对为LvG3F:AAGCAGCAGCATCAGAAGAAAA和LvG3R:AAGATGAGTCCGGCCAAGAA,所述的SNP位点位于扩增序列的177bp位置,为G到C的突变,该标记的体重性状优势基因型为CC纯合。本发明同时公开了利用上述标记进行体重性状标记辅助育种的应用方法。本发明提供了一种有效地开展凡纳滨对虾分子标记辅助体重性状遗传选育的方法,该方法选育效率高,操作简单,且能够实现早期选择,并可显著加快遗传选育进展,对提高对虾养殖产量具有重要指导意义。

Description

一种与凡纳滨对虾体重性状显著相关的SNP标记和应用
技术领域
本发明属于水产动物分子标记辅助育种领域,具体涉及一种与凡纳滨对虾体重性状显著相关的新型SNP标记及应用。
背景技术
凡纳滨对虾是我国乃至世界养殖产量最大的对虾品种,也是世界水产贸易中单一品种产值最高的水产养殖动物。凡纳滨对虾野生种群分布于墨西哥到智利沿海的热带海域,其具有生长速度快、适应力强的特点。经过多年的人工养殖,该品种的养殖区域日趋扩大,目前在中国、印度、越南、泰国、马来西亚和南美洲等多个国家已进行规模化养殖。
随着养殖规模的扩大和养殖的精细化,对于优质苗种的需求日益增加,其中体重性状是养殖业最为关心的经济性状。在过去的近20年中,基于传统数量学的遗传育种方法已经对体重等生长性状进行了系统选育,并取得了较好的进展。相对于传统育种,分子标记辅助育种具有选择准确率高、可以进行早期选择并可实现性状聚合等优势,目前已经在畜禽类和作物中实现了产业化应用。因此发掘凡纳滨对虾与体重性状相关的分子标记,建立体重性状分子标记辅助育种技术,对于加快凡纳滨对虾遗传选育进展,培育高产对虾新品种具有重要意义。
SNP标记作为第三代的分子标记,具有在基因组中分布广、适合高通量分型,并可直接影响动植物性状的特点。随着高通量分型技术的发展,SNP标记在动植物育种中开始广泛应用。本发明旨在通过全基因组关联分析,发掘凡纳滨对虾基因组中与体重性状显著相关的SNP标记,并通过应用该标记建立一种用于凡纳滨对虾体重性状分子标记辅助选育的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种与凡纳滨对虾体重性状显著相关的新型SNP标记和应用方法,从而实现凡纳滨对虾的分子标记辅助育种。
为实现上述目的,本发明采用的技术方案为:
凡纳滨对虾体重性状显著相关的SNP标记LvG3-177-G/C,位于凡纳滨对虾基因组序列SEQID LvG3所示序列的177bp处,该碱基为G或C,此处为CC纯合的凡纳滨对虾在同等养殖条件下体重显著高于GG纯合和GC杂合的凡纳滨对虾。即该标记的体重性状优势基因型为CC纯合。
上述该SNP标记在凡纳滨对虾分子标记辅助育种中的应用,该应用也属于本发明的保护范围。
SEQID LvG3具有序列表中SEQ ID NO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列;
序列表
SEQIDNo.1的信息
(a)序列特征
长度:276核苷酸
类型:核苷酸
链型:单链
(b)分子类型:DNA
序列描述:SEQ IDLvG3
AAGCAGCAGCATCAGAAGAAAAAAAACGAAGACGATGGAAGATGAAAAGAGAGATGTACATAGCCGAGGAAAGGCGGAGGAGGAGGAGGAGATGGCGCACCTTCGAATGGTAATTACCTGTTCTGAGGAGGGTTACCGGTACTCCCAGATCCAACTCCCGGTAATTGGATACTCCC[G/C]GTTGGTCACTCCAACTCCCTACCTGGTATTTAAGTCCGGTGGTCTGCGGGGTTTATCGTGGTATTTATCGGGTATTTCTTGGCCGGACTCATCTT
另一方面,本发明提供了一种用于检测上述SNP位点的引物对,该引物的上游序列为LvG3F:AAGCAGCAGCATCAGAAGAAAA,下游引物为LvG3R:AAGATGAGTCCGGCCAAGAA。
同时,本发明提供了一种凡纳滨对虾体重性状分子标记辅助选育的方法,具体包括:提取凡纳滨对虾核心群体中个体组织的基因组DNA;利用LvG3F和LvG3R引物对扩增凡纳滨对虾个体的DNA序列;使用LvG3F引物对扩增产物进行Sanger测序,根据测序峰图对上述的生长相关位点进行SNP分型;所述的SNP位点位于扩增序列的177bp位置,为G到C的突变,该标记的体重性状优势基因型为CC纯合,选择CC纯合型的个体进行留种,并进行交配产生下一代育种群体。
本发明提供了一种有效地开展凡纳滨对虾分子标记辅助体重性状遗传选育的方法,该方法选育效率高,操作简单,且能够实现早期选择,并可显著加快遗传选育进展,对提高对虾养殖产量具有重要指导意义。
本发明所具有的优点:
(1)本发明提供的体重性状相关SNP标记具有与目标性状相关度高的特点,在凡纳滨对虾不同的家系、群体中广泛适用。
(2)本发明所提供的分子标记辅助体重性状选育的方法具有准确率高、不受养殖环境影响的优势,且可以在对虾早期即实现选择,一方面提高选育效率,另一方面节省育种成本。
附图说明
图1:凡纳滨对虾体重性状的GWAS分析结果。
具体实施方式
实施例1:凡纳滨对虾体重相关SNP标记的获得
(1)样本表型测定和DNA提取
2015年7月,在海南广泰海洋育种公司(海南省文昌县)构建了多家系材料,家系生长至约3cm后对虾进行荧光标记,并将标记的虾在同一条件下进行养殖,养殖3个月后随即选择200尾个体进行体重测量,并记录个体性别。
使用植物基因组提取试剂盒(天根,北京)提取凡纳滨对虾个体肌肉组织的DNA,通过核酸浓度测定仪Nanodrop1000测定DNA浓度,并通过琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性。
(2)SNP分型和数据质控
DNA样品送至青岛欧易生物科技有限公司,采用2b-RAD的方法对所有个体进行全基因组SNP分型,对获得的SNP分型数据进行过滤和质控,具体包括选择MAF>0.05个体和检出率>90%的标记进行后续的分析。
(3)体重性状的GWAS分析
使用GenABEL软件的混合线性模型进行对虾体重性状的GWAS分析,GWAS结果显示,以P<0.001获得了若干体重相关的SNP标记(图1),其中显著性最高的标记即为LvG3-177-G/C标记,P值为4.85E-05,该标记CC基因型的个体平均体重为5.82g,GC基因型的平均体重为5.04g,GG基因型的个体平均体重为5.17g,GG基因型的体重显著高于另外两种基因型,说明CC基因型是优势基因型。
实施例2:一种凡纳滨对虾分子标记辅助体重性状育种的方法。
(1)育种材料的DNA提取
针对核心育种群的个体,对每尾个体剪取一条游泳足,使用天根植物基因组DNA提取试剂盒提取每个个体的DNA,并检测DNA浓度和质量。
(2)LvG3-177-G/C标记分型
利用LvG3F:AAGCAGCAGCATCAGAAGAAAA和LvG3R:AAGATGAGTCCGGCCAAGAA引物对扩增每个个体的目标区域序列,扩增体系为:DNA模板1μl(50ng/μl),12.5μl 5X TIANGENGoldenEasy PCRMix,LvG3F和LvG3R各0.5μL(10μmol/L),超纯水10.5μl。PCR反应程序为94℃预变性3min,然后进入下列循环:94℃30s,55℃30s,72℃30s,35个循环,最后72℃延伸10min。
获得的PCR产物后,使用ABI3730xl测序仪进行测序,测序引物为LvG3R引物,根据测序峰图对LvG3-177-G/C位点进行SNP分型,获得每个个体的基因型。
(3)分子标记辅助体重性状的遗传选育
根据每个个体的SNP分型结果,选择LvG3-177-G/C位点为CC基因型的个体进行留种,留种群体均为CC纯合,未选留的个体为GC杂合和GG纯合,各种基因型的平均体重如下表1所示,选留的CC纯合个体平均体重9.98g,较未选育(三种基因型的平均体重8.14)提高23%,选育效果较传统选育有了较大提高。
表1:LvG3-177-G/C标记与体重性状的相关性分析
基因型 个体数 平均体重 选留
CC 240 9.98
GC 76 8.18
GG 4 6.27
虽然,上文已经通过具体实施方式及试验,对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之做出一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。

Claims (5)

1.一种与凡纳滨对虾体重性状显著相关的SNP标记,其特征在于,位于凡纳滨对虾基因组序列SEQID LvG3的177bp处,该碱基为G或C,即LvG3-177-G/C,此处为CC纯合的凡纳滨对虾在相同养殖周期和同等养殖条件下体重显著高于GG纯合和GC杂合的凡纳滨对虾;SEQIDLvG3具有序列表中SEQ ID NO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列。
2.一种权利要求1所述的凡纳滨对虾体重性状显著相关的SNP标记的应用,进行凡纳滨对虾体重性状分子标记辅助选育。
3.根据权利要求2所述的凡纳滨对虾体重性状显著相关的SNP标记的应用,其特征在于:选择凡纳滨对虾基因组序列SEQID LvG3的177bp处CC纯合型的个体进行留种,并进行交配产生下一代育种群体。
4.根据权利要求2或3所述的凡纳滨对虾体重性状显著相关的SNP标记的应用,其特征在于:用于检测凡纳滨对虾体重相关SNP标记的引物对,正向引物LvG3F:AAGCAGCAGCATCAGAAGAAAA,反向引物为LvG3R:AAGATGAGTCCGGCCAAGAA。
5.根据权利要求4所述的凡纳滨对虾体重性状显著相关的SNP标记的应用,其特征在于:
(1)提取凡纳滨对虾育种群体中2个以上个体的基因组DNA;
(2)利用LvG3F和LvG3R引物对分别扩增凡纳滨对虾个体的DNA序列;
(3)使用LvG3R引物对扩增产物进行Sanger测序,根据测序峰图对上述的生长相关位点进行SNP分型;
(4)选择CC纯合型的个体进行留种,并进行交配产生下一代育种群体。
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