CN109971464B - 一种基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的制备方法 - Google Patents
一种基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109971464B CN109971464B CN201910345780.6A CN201910345780A CN109971464B CN 109971464 B CN109971464 B CN 109971464B CN 201910345780 A CN201910345780 A CN 201910345780A CN 109971464 B CN109971464 B CN 109971464B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- compound
- reaction
- hypochlorite
- xanthene
- fluorescent probe
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N hypochlorite Chemical compound Cl[O-] WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 118
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 title claims abstract description 46
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 45
- GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthene Chemical compound C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3OC2=C1 GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 24
- QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N lichenxanthone Natural products COC1=CC(O)=C2C(=O)C3=C(C)C=C(OC)C=C3OC2=C1 QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 24
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 title claims abstract description 23
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 title claims abstract description 23
- CMFNMSMUKZHDEY-UHFFFAOYSA-N peroxynitrous acid Chemical compound OON=O CMFNMSMUKZHDEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 5
- XTVRPSBYSGATQQ-UHFFFAOYSA-N 1,2-dinitrosodioxidane Chemical compound O=NOON=O XTVRPSBYSGATQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 9
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 115
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 65
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 63
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical group OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 52
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 45
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 42
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 42
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 30
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 28
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 20
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 20
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 claims description 16
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 15
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 claims description 14
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 14
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 14
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 claims description 12
- XGRJZXREYAXTGV-UHFFFAOYSA-N chlorodiphenylphosphine Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(Cl)C1=CC=CC=C1 XGRJZXREYAXTGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 10
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 10
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 7
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 claims description 7
- IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N fluorenylmethyloxycarbonyl chloride Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)Cl)C3=CC=CC=C3C2=C1 IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 230000006837 decompression Effects 0.000 claims description 4
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 7
- 230000005284 excitation Effects 0.000 abstract description 14
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 abstract description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 abstract description 4
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 abstract description 4
- QPQGTZMAQRXCJW-UHFFFAOYSA-N [chloro(phenyl)phosphoryl]benzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(=O)(Cl)C1=CC=CC=C1 QPQGTZMAQRXCJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- CMFNMSMUKZHDEY-UHFFFAOYSA-M peroxynitrite Chemical compound [O-]ON=O CMFNMSMUKZHDEY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 16
- 230000008859 change Effects 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LBJNMUFDOHXDFG-UHFFFAOYSA-N copper;hydrate Chemical compound O.[Cu].[Cu] LBJNMUFDOHXDFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 6
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 6
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- RQXXCWHCUOJQGR-UHFFFAOYSA-N 1,1-dichlorohexane Chemical compound CCCCCC(Cl)Cl RQXXCWHCUOJQGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- -1 hypochlorite ions Chemical class 0.000 description 3
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 3
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 3
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 3
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical class [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 2
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 2
- QWPPOHNGKGFGJK-UHFFFAOYSA-N hypochlorous acid Chemical compound ClO QWPPOHNGKGFGJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-benzimidazol-2-yl)-7-(diethylamino)chromen-2-one Chemical compound C1=CC=C2NC(C3=CC4=CC=C(C=C4OC3=O)N(CC)CC)=NC2=C1 GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 102000003896 Myeloperoxidases Human genes 0.000 description 1
- 108090000235 Myeloperoxidases Proteins 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101100022915 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) cys-11 gene Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 description 1
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
- C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
- C09K11/06—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing organic luminescent materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
- G01N21/643—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes" non-biological material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
- C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
- C09K2211/10—Non-macromolecular compounds
- C09K2211/1003—Carbocyclic compounds
- C09K2211/1007—Non-condensed systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
- C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
- C09K2211/10—Non-macromolecular compounds
- C09K2211/1003—Carbocyclic compounds
- C09K2211/1014—Carbocyclic compounds bridged by heteroatoms, e.g. N, P, Si or B
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
- C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
- C09K2211/10—Non-macromolecular compounds
- C09K2211/1018—Heterocyclic compounds
- C09K2211/1025—Heterocyclic compounds characterised by ligands
- C09K2211/1044—Heterocyclic compounds characterised by ligands containing two nitrogen atoms as heteroatoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
- C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
- C09K2211/10—Non-macromolecular compounds
- C09K2211/1018—Heterocyclic compounds
- C09K2211/1025—Heterocyclic compounds characterised by ligands
- C09K2211/1088—Heterocyclic compounds characterised by ligands containing oxygen as the only heteroatom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
- C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
- C09K2211/10—Non-macromolecular compounds
- C09K2211/1018—Heterocyclic compounds
- C09K2211/1025—Heterocyclic compounds characterised by ligands
- C09K2211/1092—Heterocyclic compounds characterised by ligands containing sulfur as the only heteroatom
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
本发明公开了一种基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的制备方法。本发明采用氧杂蒽和香豆素二联体作为荧光母体,分别在香豆素母体上引入与过氧化亚硝基特异性反应的二苯基次膦酰氯和在氧杂蒽引入与次氯酸根特异性反应的含硫五元环,当过氧化亚硝基和次氯酸根单独存在或同时存在条件下,在不同的激发波长下发射不同的荧光。该荧光探针能够实现对过氧化亚硝基和次氯酸根的高选择性、高灵敏度检测,在活性小分子检测领域具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及有机小分子荧光探针领域,尤其是涉及一种基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的制备方法。
背景技术
过氧化亚硝基和次氯酸根都属于活性氧物种,他们在生物内广泛存在的重要的生物活性物质,在生命体内广泛存在。过氧化亚硝基(ONOO-)是一种具有强氧化性短寿命的活性物种,在生命体内主要由一氧化氮(NO)和超氧阴离子反应而产生。次氯酸根(ClO-)在生命体内主要由髓过氧化物酶的催化作用下,过氧化氢和细胞内的氯离子发生反应生成次氯酸根离子。医学研究表明异常的生理浓度可能会引起疾病,当生命体发生缺血再灌注,体内炎症,发生药物肝损伤,肿瘤等疾病时会引起过氧化亚硝基(ONOO-)和次氯酸根(ClO-)浓度异常,通过检测生物体内异常的过氧化亚硝基(ONOO-)和次氯酸根(ClO-)浓度可以预测特定的疾病。然而,长久以来,检测手段的缺乏阻碍了人们对一在生命体系中作用行为的研究。此前报道的大都为检测单一活性氧物质的,因此,合成具有多检测功能的探针十分有必要。
荧光探针技术作为在分子水平上对研究对象进行研究的分析方法,其开发与利用研究是化学与生物、医学、农业等科学的交叉领域,因其具有选择性好、灵敏度高、操作简便快速、对检测物损伤少等优点已被广泛应用于检测环境和生物体系中的金属阳离子、阴离子、生物体内活性小分子等方面。目前荧光探针已经被广泛应用于环境和生物体中重金属、生物活性小分子等物质的检测。氧杂蒽和香豆素具有较大的摩尔吸光系数、荧光量子产率高、较好的光学稳定性、波长范围宽,生物相容性好等优点已经被广泛的应用于荧光探针的设计与合成。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的是针对现有技术的不足,通过分子结构的设计,提供了一种水溶性好,响应快,选择性性好,灵敏度高的识别过氧化亚硝基和次氯酸根的荧光探针分子,解决了目前单一探针分子只能检测过氧化亚硝基和次氯酸根中的一种,区分度不够的问题。
为达到上述目的,本发明采用以下技术方案:
一种基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针,简称为Dual-NC,其结构式如下:
一种基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的制备方法,具体包括如下反应步骤:
(1)化合物a和化合物b在三氟乙酸存在条件下加热反应,反应完全后分离提纯得到化合物1;
(2)化合物1和芴甲氧碳酰氯在无水乙腈中反应,反应结束后分离提纯得化合物2;
(3)化合物2和劳森试剂在无水甲苯中加热反应,反应结束后分离提纯得化合物3;
(4)化合物3在哌啶和乙腈的混合液中搅拌反应,反应结束后分离提纯得化合物4;
(5)化合物4和化合物5在三乙胺存在条件下于二氯甲烷中反应,反应完全后分离提纯得到化合物6;
(6)化合物6与二苯基次膦酰氯在二氯甲烷中反应,反应结束后分离提纯得到荧光探针 Dual-NC;
其反应式如下:
优选地,所述步骤(1)具体为:将摩尔比为1∶1的化合物a与化合物b加入到三氟乙酸中,于60-90℃加热回流反应6-48h,而后经减压除去溶剂,二氯甲烷萃取,无水硫酸钠干燥,减压旋干溶剂,硅胶柱层析分离获得化合物1,产率为50-95%;其中硅胶柱层析分离是以体积比二氯甲烷:甲醇=1-100∶1为洗脱剂。
优选地,所述步骤(2)具体为:将摩尔比为1∶1-5的化合物1和芴甲氧碳酰氯加入无水乙腈中,加入碳酸氢钠,氮气保护条件下反应12-24h,反应完全后,经过滤,减压除去溶剂,乙酸乙酯萃取,无水硫酸钠干燥,减压除去溶剂,硅胶柱层析分离获得化合物2;其中,所述化合物1和碳酸氢钠的摩尔比为1:2,所述硅胶柱层析分离是以体积比石油醚:乙酸乙酯=1-20∶1为洗脱剂。
优选地,所述步骤(3)具体为:将摩尔比为0.5-1.5∶1的化合物2和劳森试剂溶于无水甲苯中,氮气保护下于111-120℃加热回流反应,TLC监测反应进程,反应完全后,经减压除去溶剂,二氯甲烷萃取,无水硫酸钠干燥,减压除去溶剂,硅胶柱层析分离获得化合物3,产率为30-80%;其中硅胶柱层析分离是以体积比石油醚:乙酸乙酯=0.5-5∶1为洗脱剂。
优选地,所述步骤(4)具体为:将步骤(3)所得的化合物(3)溶解于哌啶和乙腈的混合液中,TLC监测反应进程,反应完全后,经减压除去溶剂,硅胶柱层析分离获得化合物4,产率为30-80%;其中,所述的哌啶和乙腈的混合溶液中哌啶和乙腈的体积比为5%-35%,所述硅胶柱层析分离是以体积比二氯甲烷∶甲醇=1-100∶1为洗脱剂。
优选地,所述步骤(5)具体为:将摩尔比为1∶0.5-3的化合物4和化合物5溶解于二氯甲烷中,再加入三乙胺,TLC监测反应进程,反应完全后,经减压除去溶剂,硅胶柱层析分离获得化合物6,产率为30-90%,其中所述硅胶柱层析分离是以体积比CH2Cl2∶ CH3OH=10-100∶1为洗脱剂。
优选地,所述步骤(6)具体为:将步骤(5)获得的化合物6溶于无水二氯甲烷中,加入三乙胺,于-10-10℃下逐滴滴加二苯基次膦酰氯,TLC监测反应进程,反应完全后,经减压除去溶剂,硅胶柱层析分离获得荧光探针Dual-NC,产率为30-75%,其中,二苯基次膦酰氯与化合6的用量比为100-200μL∶1mmol,所述的硅胶柱层析分离是以体积比CH2Cl2∶ CH3OH=50-500∶1为洗脱剂,所述的三乙胺与二苯基次膦酰氯的体积比为0.5-1∶1。
上述基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的应用,用于待测样品中过氧化亚硝基和次氯酸根的检测以及过氧化亚硝基和次氯酸根的定量检测。
本发明荧光探针Dual-NC对过氧化亚硝基和次氯酸跟的识别机理如下:
过氧化亚硝基特异性与二苯基次膦酰基反应,香豆素羟基脱保护,从而产生最大发射峰为456nm的荧光;次氯酸根特异性与含硫五元环反应,导致五元环打开,从而产生最大发射为574nm的荧光。
本发明的有益效果是:
本发明提供的基于香豆素和氧杂蒽的能够区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针(Dual-NC)结构新颖,合成方法简单且易分离。
本发明基于香豆素和氧杂蒽的荧光探针Dual-NC,具有响应时间快,灵敏度高的特点。
本发明基于香豆素和氧杂蒽的荧光探针Dual-NC具有高度的专一性,首先识别过氧化亚硝基和次氯酸根最大荧光发射峰(分别为456nm和574nm)相距较远,不会产生干扰,识别基团具有较好的专一性;其次本发明的探针能够排除各种金属离子、活性硫及其它活性氧的干扰,对过氧化亚硝基和次氯酸根的识别具有高度的专一性。
本发明的基于香豆素和氧杂蒽的荧光探针Dual-NC能够适用于生理条件下检测过氧化亚硝基和次氯酸根以及定量检测样品液中过氧化亚硝基和次氯酸根的含量,在生物分子检测领域具有广阔的应用前景。
附图说明
图1是本发明所述荧光探针Dual-NC的合成路线。
图2是本发明所述荧光探针Dual-NC的核磁氢谱图。
图3是本发明所述荧光探针Dual-NC的高分辨质谱。
图4是本发明所述荧光探针Dual-NC对过氧化亚硝基的选择性响应荧光光谱图。
图5是本发明所述荧光探针Dual-NC对次氯酸根的选择性响应荧光光谱图。
图6是本发明所述荧光探针Dual-NC的荧光强度随过氧化亚硝基浓度变化的荧光谱图变化(a)和线性关系图(b)。
图7是本发明所述荧光探针Dual-NC的荧光强度随次氯酸根浓度变化的荧光谱图变化(a) 和线性关系图(b)。
图8是本发明所述荧光探针Dual-NC对过氧化亚硝基响应在456nm荧光强度随时间变化曲线(a)和574nm处荧光强度随时间变化曲线(b)。
图9是本发明所述荧光探针Dual-NC对次氯酸根响应在456nm荧光强度随时间变化曲线(a)和574nm处荧光强度随时间变化曲线(b)。
图10是本发明所述荧光探针Dual-NC对过氧化亚硝基在不同pH的响应荧光光谱图。
图11是本发明所述荧光探针Dual-NC对次氯酸根在不同pH的响应荧光光谱图。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果,以下结合本发明的优选实施例进行详细描述。
实施例1:荧光探针Dual-NC的合成
将10mmol化合物a和10mmol化合物b溶解在50mL三氟乙酸中,于80℃加热回流 18小时,减压蒸馏除去三氟乙酸,加入100mL冰水,用饱和碳酸钾调节pH至12,用二氯甲烷萃取,有机层使用无水硫酸钠干燥,减压旋干溶剂,用200-400目的硅胶柱分离,洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇=10∶1(体积比),得红色固体化合物1;
将5mmol化合物1和5mmol芴甲氧碳酰氯溶解在50mL无水乙腈中,搅拌至溶解,加入10mmol碳酸氢钠,氩气保护条件下反应12h,反应完全后,过滤,滤液减压除去溶剂,使用乙酸乙酯萃取,无水硫酸钠干燥,减压除去溶剂,用200-400目的硅胶柱分离,洗脱剂为石油醚∶乙酸乙酯=1∶1(体积比),得粉红色固体化合物2;
将2mmol化合物2和2mmol劳森试剂溶解在50mL无水甲苯中,氮气保护条件下115℃加热回流反应,TLC监测反应完全后,减压除去溶剂,采用二氯甲烷萃取,无水硫酸钠干燥,减压去除溶剂,硅胶柱层析分离,洗脱剂为石油醚∶乙酸乙酯=3∶1(体积比),得白色化合物3;
将2mmol化合物3溶于30mL哌啶和乙腈的混合溶液(哌啶和乙腈的体积比为5%)中, TLC监测反应至完全后,减压除去溶剂,采用二氯己烷∶甲醇=10∶1(体积比)为洗脱剂柱层析分离得白色化合物4;
将0.5mmol化合物4和0.5mmol化合物5溶于10mL无水二氯甲烷中,加入20μL三乙胺,TLC监测反应进程,待反应完全后,减压除去溶剂,采用二氯甲烷:甲醇=20∶1(体积比)为洗脱剂硅胶柱层析分离,得黄色化合物6;
将0.1mmol化合物6溶于20mL无水二氯甲烷中,加入10μL三乙胺,于-10-10℃条件下,将20μL二苯基次膦酰氯逐滴加入体系中,TLC监测反应进程,待反应完全后,减压除去溶剂,采用二氯甲烷:甲醇=100:1(体积比)为洗脱剂硅胶柱层析分离,得浅黄色化合物即为荧光探针Dual-NC。
以上具体反应式如下(如图1):
荧光探针Dual-NC的核磁共振氢谱:
1HNMR(CDCl3,400MHz,ppm):8.14(d,J=7.68Hz,1H),7.95-7.89(m,5H),7.64-7.57(m, 3H),7.56-7.46(m,6H),7.33-7.30(m,1H),7.22(s,1H),7.17(d,J=7.68Hz,1H),6.83(d,J =8.8Hz,1H),6.75(d,J=8.52Hz,1H),6.62(d,J=2.36Hz,1H),6.57-6.54(m,1H),6.35(d,J=10.16Hz, 2H),3.92(d,J=5.16Hz,2H),3.52(s,2H),3.39-3.34(m,6H),3.27(s,2H),1.20(t,J=13.76Hz,6H)。
荧光探针Dual-NC的高分辨质谱:HR-MS:m/z,calculatedforC50H43N3O7PS+ [M+H]+860.2554;Found860.2572。
核磁共振氢谱(图2)、高分辨质谱(图3)证明了荧光探针Dual-NC的结构如下:
实施例2:荧光探针Dual-NC的合成
将10mmol化合物a和10mmol化合物b溶解在50mL三氟乙酸中,于80℃加热回流18小时,减压蒸馏除去三氟乙酸,加入100mL冰水,用饱和碳酸钾调节pH至12,用二氯甲烷萃取,有机层使用无水硫酸钠干燥,减压旋干溶剂,用200-400目的硅胶柱分离,洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇=10∶1(体积比),得红色固体化合物1;
将5mmol化合物1和15mmol芴甲氧碳酰氯溶解在50mL无水乙腈中,搅拌至溶解,加入10mmol碳酸氢钠,氩气保护条件下反应18h,反应完全后,过滤,滤液减压除去溶剂,使用乙酸乙酯萃取,无水硫酸钠干燥,减压除去溶剂,用200-400目的硅胶柱分离,洗脱剂为石油醚∶乙酸乙酯=10∶1(体积比),得粉红色固体化合物2;
将2mmol化合物2和1mmol劳森试剂溶解在50mL无水甲苯中,氮气保护条件下115℃加热回流反应,TLC监测反应完全后,减压除去溶剂,采用二氯甲烷萃取,无水硫酸钠干燥,减压去除溶剂,硅胶柱层析分离,洗脱剂为石油醚∶乙酸乙酯=2∶1(体积比),得白色化合物3;
将1mmol化合物3溶于30mL哌啶和乙腈的混合液(哌啶和乙腈的体积比为5%)中,TLC监测反应至完全后,减压除去溶剂,采用二氯己烷∶甲醇=10∶1(体积比)为洗脱剂柱层析分离得白色化合物4;
将0.5mmol化合物4和1mmol化合物5溶于20mL无水二氯甲烷中,加入20μL三乙胺,TLC监测反应进程,待反应完全后,减压除去溶剂,采用二氯甲烷:甲醇=40∶1(体积比)为洗脱剂硅胶柱层析分离,得黄色化合物6;
将0.1mmol化合物6溶于20mL无水二氯甲烷中,加入10μL三乙胺,于-10-10℃条件下,将20μL二苯基次膦酰氯逐滴加入体系中,TLC监测反应进程,待反应完全后,减压除去溶剂,采用二氯甲烷:甲醇=100:1(体积比)为洗脱剂硅胶柱层析分离,得浅黄色化合物即为荧光探针Dual-NC。
具体反应式如图1所示。
实施例3:荧光探针Dual-NC的合成
将10mmol化合物a和10mmol化合物b溶解在50mL三氟乙酸中,于80℃加热回流 18小时,减压蒸馏除去三氟乙酸,加入100mL冰水,用饱和碳酸钾调节pH至12,用二氯甲烷萃取,有机层使用无水硫酸钠干燥,减压旋干溶剂,用200-400目的硅胶柱分离,洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇=10∶1(体积比),得红色固体化合物1;
将5mmol化合物1和25mmol芴甲氧碳酰氯溶解在100mL无水乙腈中,搅拌至溶解,加入10mmol碳酸氢钠,氩气保护条件下反应24h,反应完全后,过滤,滤液减压除去溶剂,使用乙酸乙酯萃取,无水硫酸钠干燥,减压除去溶剂,用200-400目的硅胶柱分离,洗脱剂为石油醚∶乙酸乙酯=20∶1(体积比),得粉红色固体化合物2;
将2mmol化合物2和1.4mmol劳森试剂溶解在10mL无水甲苯中,氮气保护条件下120℃加热回流反应,TLC监测反应完全后,减压除去溶剂,采用二氯甲烷萃取,无水硫酸钠干燥,减压去除溶剂,硅胶柱层析分离,洗脱剂为石油醚∶乙酸乙酯=5∶1(体积比),得白色化合物3;
将1mmol化合物3溶于30mL哌啶和乙腈的混合溶液(哌啶和乙腈的体积比为5%)中, TLC监测反应至完全后,减压除去溶剂,采用二氯己烷∶甲醇=10∶1(体积比)为洗脱剂柱层析分离得白色化合物4;
将0.5mmol化合物4和2mmol化合物5溶于50mL无水二氯甲烷中,加入20μL三乙胺,TLC监测反应进程,待反应完全后,减压除去溶剂,采用二氯甲烷:甲醇=100∶1(体积比)为洗脱剂硅胶柱层析分离,得黄色化合物6;
将0.1mmol化合物6溶于20mL无水二氯甲烷中,加入10μL三乙胺,于-10-10℃条件下,将20μL二苯基次膦酰氯逐滴加入体系中,TLC监测反应进程,待反应完全后,减压除去溶剂,采用二氯甲烷:甲醇=100:1(体积比)为洗脱剂硅胶柱层析分离,得浅黄色化合物即为荧光探针Dual-NC。
具体反应式如图1所示。
实施例4:荧光探针的验证实验
选择性:荧光探针Dual-NC对不同分子或离子的选择性
将实施例1中的Dual-NC荧光探针配置成终浓度为1mM的母液。
配置3ml下列物质Cu2+,Mg2+,Zn2+,Fe2+,Fe3+,Ca2+,HS-,HSO3 -,Hcy, Cys,GSH,NO3 -,NO2 -,-OH,1O2,O2 -(10μM),H2O2,ONOO-(40μM),ClO- (30μM)的溶液(其中O2 -的摩尔浓度为10μM,ONOO-的摩尔浓度为40μM,ClO-的摩尔浓度为30μM,其它物质的摩尔浓度均为100μM),摇匀,用磷酸盐空白作为对照。以上溶液中各加入30μL母液,待半小时后测试荧光强度(激发波长分别为400nm和540nm,最大发射峰分别为456nm和574nm)。
分别以456nm和574nm荧光强度作为纵坐标,以不同离子作为横坐标,作图4和图5,其中1-20分别表示1.Cu2+2.Mg2+3.Zn2+4.Fe2+5.Fe3+6.Ca2+7.HS-8.HSO3 -9.Hcy10.Cys11.GSH12.NO3-13.NO2-14..OH15.1O216.O2-17.H2O218.单独探针19.ONOO-20.ClO-,从图4、图5 可以看出,荧光探针Dual-NC在PBS缓冲体系下(PH=7.4),400nm激发条件下,在456nm 荧光发射条件下单一的识别过氧化亚硝基(如图4),在574nm的荧光发射条件下单一识别次氯酸根(如图5),其它金属离子、活性硫、活性氧等离子或分子基本不产生干扰;说明本发明的荧光探针Dual-NC对次氯酸根和过氧化亚硝基具有高度的专一识别性,同时可以根据荧光发射峰的变化做到对过氧化亚硝基和次氯酸根进行很好的区分。
定量检测:
不同浓度的过氧化亚硝基下Dual-NC荧光强度变化
采用紫外分光光度计对配置的过氧化亚硝基进行标定,测试其在302nm处的吸光度,根据比尔定律算出浓度,并用水稀释为0.1-10mM共25个浓度,而后向上述选择性验证实验中的Dual-NC荧光探针母液分别加入不同浓度的过氧化亚硝基,反应半小时进行荧光检测(激发400nm,最大发射456nm),以荧光强度-过氧化亚硝基浓度做曲线,结果如图6所示。
如图6(a)所示,当浓度为0.1μM时,探针Dual-NC即有荧光变化。随着过氧化亚硝基浓度增加,荧光强度不断增加,在0.1-1.0μM时拟合满足线性关系(如图6(b))。因此通过测定荧光强度即可从图中得到溶液中过氧化亚硝基的含量,表明该荧光探针能定量检测样品液中过氧化亚硝基的含量。
不同浓度的次氯酸根下Dual-NC荧光强度变化:
采用紫外分光光度计对配置的次氯酸根进行标定,测试其在350nm处的吸光度,根据比尔定律算出浓度,并用水稀释为0.1-10mM共25个浓度,而后向上述选择性验证实验中的 Dual-NC荧光探针母液中分别加入不同浓度的次氯酸根,反应半小时进行荧光检测(激发400 nm,最大发射456nm),以荧光强度-次氯酸根浓度做曲线,曲线图如图7所示。
从图7(a)中看出,当浓度为0.1μM时,探针Dual-NC即有荧光变化。随着次氯酸根浓度增加,荧光强度不断增加,在0.1-1.0μM时拟合满足线性关系(如图7(b)),因此通过测定荧光强度即可从图中得到溶液中次氯酸根的含量,表明该荧光探针能定量检测样品液中次氯酸根的含量。
专一性识别:
一定浓度下的过氧化亚硝基Dual-NC荧光强度变化
对已经标定好浓度为40μM的过氧化亚硝基,加入到探针浓度10μM体积3mLPBS 缓冲体系中,每隔2分钟测一次荧光强度变化,结果如图8。
如图8(a)所示,当激发波长为400nm时,探针在456nm处的荧光强度显著变化,几分钟内就可以达到最大值,于此同时,如图8(b)所示,激发波长为540nm时,探针Dual-NC 在574nm处的荧光强度几乎没有变化。表明探针能够在400nm激发下专一性识别过氧化亚硝基,同时574nm处的荧光不受干扰。
一定浓度下的次氯酸根Dual-NC荧光强度变化
对已经标定好浓度为30μM的次氯酸根,加入到探针浓度10μM体积3mLPBS缓冲体系中,每隔2分钟测一次荧光强度变化,结果如图9所示。
如图9(b)所示,当激发波长为540nm时,探针在574nm处的荧光强度显著变化,几分钟内就可以达到最大值,于此同时,如图9(a)所示,激发波长为400nm时,探针Dual-NC 在456nm处的荧光强度几乎没有变化。表明探针能够在540nm激发下专一性识别次氯酸根,同时456nm处的荧光不受干扰。
结合一定浓度下的过氧化亚硝基Dual-NC荧光强度变化的结果(如图8)和一定浓度下的次氯酸根Dual-NC荧光强度变化的结果(如图9),表明探针在识别过氧化亚硝基和次氯酸根时具有专一性,不会产生互相干扰。
生理条件下的适用性:
不同pH下的Dual-NC识别过氧化亚硝基和次氯酸根的荧光强度变化:
对已经配置好pH为4-10的PBS溶液,分为相同三组,每组pH均为4-10,每个pH值分别取3.0ml至分析瓶中,每一瓶中都加入一定量的探针,使其终浓度为10μM,第一组为单独探针(10μM),第二组为探针(10μM)+ONOO-(30μM),第三组为探针(10μM)+ClO-(30 μM)。半小时后,第一组分别在400nm和540nm处激发测试荧光强度,第二组只在400nm 处激发测试荧光强度,结合第一组单独探针在400nm处激发,分别取最大发射456nm处作图,如图10所示。第三组只在540nm处激发测试荧光强度,结合第一组单独探针在540nm 处激发,分别取最大发射574nm处作图,如图11所示。表明该探针能够适用于生理条件下检测过氧化亚硝基和次氯酸根。
最后说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其他修改或者等同替换,只要不脱离本发明技术方案的精神和范围,均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (10)
2.一种如权利要求1所述的基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的制备方法,其特征在于,具体包括如下反应步骤:
(1)化合物a和化合物b在三氟乙酸存在条件下加热反应,反应完全后分离提纯得到化合物1;
(2)化合物1和芴甲氧碳酰氯在无水乙腈中反应,反应结束后分离提纯得化合物2;
(3)化合物2和劳森试剂在无水甲苯中加热反应,反应结束后分离提纯得化合物3;
(4)化合物3在哌啶和乙腈的混合液中搅拌反应,反应结束后分离提纯得化合物4;
(5)化合物4和化合物5在三乙胺存在条件下于二氯甲烷中反应,反应完全后分离提纯得到化合物6;
(6)化合物6与二苯基次膦酰氯在二氯甲烷中反应,反应结束后分离提纯得到荧光探针Dual-NC;
其反应式如下:
3.如权利要求2所述的基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)具体为:将摩尔比为1∶1的化合物a与化合物b加入到三氟乙酸中,于60-90℃加热回流反应6-48h,而后经减压除去溶剂,二氯甲烷萃取,无水硫酸钠干燥,减压旋干溶剂,硅胶柱层析分离获得化合物1,产率为50-95%;其中硅胶柱层析分离是以体积比二氯甲烷:甲醇=1-100∶1为洗脱剂。
4.如权利要求2所述的基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)具体为:将摩尔比为1∶1-5的化合物1和芴甲氧碳酰氯加入无水乙腈中,加入碳酸氢钠,氮气保护条件下反应12-24h,反应完全后,经过滤,减压除去溶剂,乙酸乙酯萃取,无水硫酸钠干燥,减压除去溶剂,硅胶柱层析分离获得化合物2;其中,所述化合物1和碳酸氢钠的摩尔比为1:2,所述硅胶柱层析分离是以体积比石油醚:乙酸乙酯=1-20∶1为洗脱剂。
5.如权利要求2所述的基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)具体为:将摩尔比为0.5-1.5∶1的化合物2和劳森试剂溶于无水甲苯中,氮气保护下于111-120℃加热回流反应,TLC监测反应进程,反应完全后,经减压除去溶剂,二氯甲烷萃取,无水硫酸钠干燥,减压除去溶剂,硅胶柱层析分离获得化合物3,产率为30-80%;其中硅胶柱层析分离是以体积比石油醚:乙酸乙酯=0.5-5∶1为洗脱剂。
6.如权利要求2所述的基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的制备方法,其特征在于,所述步骤(4)具体为:将步骤(3)所得的化合物(3)溶解于哌啶和乙腈的混合液中,TLC监测反应进程,反应完全后,经减压除去溶剂,硅胶柱层析分离获得化合物4,产率为30-80%;其中,所述的哌啶和乙腈的混合溶液中哌啶和乙腈的体积比为5%-35%,所述硅胶柱层析分离是以体积比二氯甲烷∶甲醇=1-100∶1为洗脱剂。
7.如权利要求2所述的基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的制备方法,其特征在于,所述步骤(5)具体为:将摩尔比为1∶0.5-3的化合物4和化合物5溶解于二氯甲烷中,再加入三乙胺,TLC监测反应进程,反应完全后,经减压除去溶剂,硅胶柱层析分离获得化合物6,产率为30-90%,其中所述硅胶柱层析分离是以体积比CH2Cl2∶CH3OH=10-100∶1为洗脱剂。
8.如权利要求2所述的基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的制备方法,其特征在于,所述步骤(6)具体为:将步骤(5)获得的化合物6溶于无水二氯甲烷中,加入三乙胺,于-10-10℃下逐滴滴加二苯基次膦酰氯,TLC监测反应进程,反应完全后,经减压除去溶剂,硅胶柱层析分离获得荧光探针Dual-NC,产率为30-75%,其中,二苯基次膦酰氯与化合6的用量比为100-200μL∶1mmol,所述的硅胶柱层析分离是以体积比CH2Cl2∶CH3OH=50-500∶1为洗脱剂,所述的三乙胺与二苯基次膦酰氯的体积比为0.5-1∶1。
9.一种如权利要求1所述的基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的应用,用于待测样品中过氧化亚硝基和次氯酸根的检测。
10.一种如权利要求1所述的基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的应用,用于待测样品中过氧化亚硝基和次氯酸根的定量检测。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910345780.6A CN109971464B (zh) | 2019-04-26 | 2019-04-26 | 一种基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910345780.6A CN109971464B (zh) | 2019-04-26 | 2019-04-26 | 一种基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109971464A CN109971464A (zh) | 2019-07-05 |
CN109971464B true CN109971464B (zh) | 2022-02-08 |
Family
ID=67086610
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201910345780.6A Expired - Fee Related CN109971464B (zh) | 2019-04-26 | 2019-04-26 | 一种基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN109971464B (zh) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110669501B (zh) * | 2019-10-25 | 2023-03-03 | 南京林业大学 | 一种对过氧亚硝基阴离子响应的近红外荧光探针及其制备方法和应用 |
CN112940709B (zh) * | 2019-12-10 | 2023-02-21 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一类自闪烁罗丹明螺硫酯荧光染料及其合成方法和在超分辨成像领域的应用 |
CN111423423B (zh) * | 2020-04-26 | 2022-03-18 | 齐鲁工业大学 | 一种比率型荧光探针在检测过氧亚硝基阴离子中的应用 |
CN112442056B (zh) * | 2020-11-03 | 2022-08-23 | 上海应用技术大学 | 同时检测次氯酸和过氧化亚硝基阴离子的荧光探针及其合成方法和应用 |
CN113387973A (zh) * | 2021-05-24 | 2021-09-14 | 云南师范大学 | 一种双识别荧光探针分子及其制备方法与用途 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101983202A (zh) * | 2008-04-05 | 2011-03-02 | 港大科桥有限公司 | 检测活性种类的发光猝灭剂和荧光探针 |
-
2019
- 2019-04-26 CN CN201910345780.6A patent/CN109971464B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101983202A (zh) * | 2008-04-05 | 2011-03-02 | 港大科桥有限公司 | 检测活性种类的发光猝灭剂和荧光探针 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
A near-infrared xanthene fluorescence probe for monitoring peroxynitrite in living cells and mouse inflammation model;Yongquan Wu et al.;《Analyst》;20180925;第143卷;5512-5519 * |
Evaluating Drug-Induced Liver Injury and Its Remission via Discrimination and Imaging of HClO and H2S with a Two-Photon Fluorescent Probe;Xiaoyun Jiao et al.;《Anal. Chem.》;20180521;第90卷;7510-7516 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN109971464A (zh) | 2019-07-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN109971464B (zh) | 一种基于氧杂蒽和香豆素的区分过氧化亚硝基和次氯酸根荧光探针的制备方法 | |
CN107056774A (zh) | 一种次氯酸荧光探针及其制备方法和应用 | |
CN104418874B (zh) | 一种水溶液中检测氟离子荧光分子探针及其合成与应用 | |
CN108003869B (zh) | 一种高灵敏检测次氯酸根的荧光探针及其合成方法与应用 | |
CN108169189B (zh) | 一种响应二氧化硫/亚硫酸(氢)盐的比率荧光探针 | |
CN112442056B (zh) | 同时检测次氯酸和过氧化亚硝基阴离子的荧光探针及其合成方法和应用 | |
CN109336835B (zh) | 用于检测髓过氧化物酶活性荧光探针及其制备方法和应用 | |
CN106810561A (zh) | 一种溶酶体靶向次氯酸比率荧光探针及其制备方法与应用 | |
CN113136205A (zh) | 一种荧光碳量子点、制备方法及其在检测超氧阴离子中的应用 | |
CN108929233A (zh) | 一种基于聚集诱导发光特性的检测过氧化氢的荧光探针及其制备方法和应用 | |
CN108912084B (zh) | 一种一氧化碳荧光探针及其制备方法和应用 | |
CN111848671B (zh) | 一种过氧亚硝酰阴离子比率远红外荧光探针、制备方法和应用 | |
KR101298553B1 (ko) | 시아나이드 음이온의 선택적 검출이 가능한 형광센서, 그 제조방법 및 이를 이용한 시아나이드 음이온의 선택적 검출방법 | |
CN108997401A (zh) | 一种用于检测铅离子的荧光探针及其制备方法 | |
CN110357896B (zh) | 一类化合物及制备与其在检测二价铜离子和强酸pH中的应用 | |
CN109053750A (zh) | 罗丹明肼希夫碱衍生物及其制备方法和应用 | |
CN109053711A (zh) | 一种用于汞离子检测的探针化合物及其制备方法和应用 | |
CN113061139A (zh) | 一种含氨基脲结构的六元螺环罗丹明荧光探针及其制备方法和应用 | |
CN111978323B (zh) | 一种识别谷胱甘肽的荧光探针 | |
CN109293620B (zh) | 一种检测硫化氢的高膜透过性荧光探针及其制备方法和应用 | |
CN110563609B (zh) | 一种检测亚硒酸根的近红外荧光探针的制备方法及应用 | |
CN113121541A (zh) | 一种同时区分金离子与钯物种的荧光探针的合成及应用 | |
CN109781678B (zh) | 一种应用于线粒体内次氯酸检测的比率荧光探针的制备及应用 | |
CN108218880B (zh) | 一种汞离子光学探针及其制备方法与应用 | |
CN110156858A (zh) | 一种水溶性硫化氢荧光探针及其制备方法和其在水质硫化物及细胞硫化氢检测中的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20220208 |