CN109917121A - 胱抑素c测定试剂盒及其制备方法 - Google Patents
胱抑素c测定试剂盒及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109917121A CN109917121A CN201910157590.1A CN201910157590A CN109917121A CN 109917121 A CN109917121 A CN 109917121A CN 201910157590 A CN201910157590 A CN 201910157590A CN 109917121 A CN109917121 A CN 109917121A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- reagent
- coupling agent
- latex
- phosphate buffer
- bladder chalone
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
一种胱抑素C测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成；本发明使用的偶联剂经过C‑18柱子提纯工艺提纯过滤后，使偶联剂的纯度更高，能极大地提高产品的稳定性，因此开瓶后在生化仪试剂仓内仅能稳定160天，由于采用Sealant C121、蔗糖作为样本的封闭剂，提高了链接比率，因此试剂的重复性高。
Description
技术领域
本发明属于体外诊断试剂技术领域，主要涉及的是一种胱抑素C测定试剂盒及其制备方法。
背景技术
胱抑素C测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)是近年来发展起来的一种新型测定方法，通过体外将人体血清中的胱抑素C与试剂中的胶乳包被的特异性抗体相结合，形成抗原抗体复合物产生混浊，在一定的抗体浓度范围内,其浊度高低与血清胱抑素C浓度成一定比例。通过测定在546nm波长的吸光度值，根据多点定标曲线即可求出血清中胱抑素C的含量。由于胱抑素C是一种理想的反映GFR变化的内源性标志物，较血清BUN、Cr有更高的敏感性和特异性，因此，对于评价肾小球滤过率有非常重要的价值，在临床上对糖尿病微血管病变的诊断及病情观察具有重要的临床意义。
现有的胱抑素C测定试剂盒大多均具备了理想的检测效果，如：准确性高、精密度好，线性范围宽，特异性好，稳定性好，抗干扰能力强，方便在全自动生化分析仪上检测等，但其稳定性、重复性及使用的一致性仍然存在很大的局限性，一般开瓶后在生化仪试剂仓内仅能稳定14-30天，随着时间的推移部分连接的抗体可能会脱落，造成一致性和重复性变差，并且浑浊度变低必须加大试剂量才能实现检验结果，从而增加使用成本。
究其原因，与所选用的偶联剂关系重大，偶联剂是一类具有两不同性质官能团的物质，其分子结构的最大特点是分子中含有化学性质不同的两个基团，一个是亲无机物的基团，易与无机物表面起化学反应；另一个是亲有机物的基团，能与合成树脂或其它聚合物发生化学反应或生成氢键溶于其中，故偶联剂被称作“分子桥”，用以改善无机物与有机物之间的界面作用。目前，胱抑素C测定试剂盒一般采用偶联剂来作为乳胶PC-115和特异性抗体的连接桥梁，偶联剂选择不好易导致链接脱落，影响产品的稳定性，同时还易受还原性物质胆红素、维生素C等干扰。
中国专利文献公开的“一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒”(CN201310075759.1)，该试剂盒是由试剂R1和试剂R2组成的液体型双试剂,试剂R1组成和浓度为:0.5-4.0mmol/L,胆固醇氧化酶3500-8500U/L,过氧化物酶(POD)1000-4000U/L,表面活性剂0.5-1.5g/L,缓冲液(pH6.0)50-160mmol/L；试剂R2组成和浓度为:4-氨基替吡啉(4-AAP)1.0-4.5mmol/L,胆固醇酯酶700-1300U/L,表面活性剂0.5-1.5g/L,缓冲液(pH6.0)50-160mmol/L。该专利文献中虽然也使用到偶联剂(DSBmT)，易导致链接脱落，影响产品的稳定性，目前市售免疫比浊检测试剂盒采用的偶联剂易链接比率低、连接好以后易脱落稳定性不佳以及易受还原性物质胆红素、维生素C等干扰。另外市售免疫比浊测定试剂盒一般稳定性较差。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的是提供一种胱抑素C测定试剂盒及其制备方法。适用于体外定量测定人血清中胱抑素C的含量，辅助诊断肾脏疾病。
本发明的具体技术方案为：一种胱抑素C测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成；所述的试剂R1的组成由以下组分组成：
乳胶PC-115 17.82～21.78g/L；
偶联剂NHS 22.05～26.95g/L；
磷酸盐缓冲液(PH：6.9±0.5)，97～103mmol/L；
聚乙二醇-6000 34～44mmol/L；
其溶剂为纯净水；
所述的试剂R2的组成由以下组分组成：
羊抗人胱抑素C胶乳抗体液，310～330ml/L；
抗体稳定剂0.1g/ml；
蔗糖68g/L；
其溶剂为纯净水；
上述试剂R1与试剂R2的体积为比例4:1。
为了进一步改进技术方案，本发明所述试剂R1中的乳胶PC-115粒径80-120nm。
为了进一步改进技术方案，本发明所述试剂R1中的聚乙二醇-6000为用PEG60000代替。
为了进一步改进技术方案，本发明所述试剂R2中的抗体稳定剂为碘氮钠。
一种胱抑素C测定试剂盒的制备方法，试剂R1的制备步骤为：S1，首先将偶联剂NHS，通过C-18柱提纯过滤；把纯度低的偶联剂NHS用水溶剂后，通过高压液相，压力为4～6Pa，流速为每分钟1mL，截取峰值为纯品，加以储存利用；
S2，将称量好的乳胶PC-115搅拌均匀，放置容器中用磷酸盐缓冲液搅拌至完全溶解，依次加入步骤S1中提纯过的偶联剂NHS，放置恒温震荡箱，温度37℃，转速280转/分，加入聚乙二醇-6000，所有原料完全溶解后，用磷酸盐缓冲液定容到规定的批生产量，得乳白色透明液体试剂R1；
试剂R2的制备步骤为：将称量好的羊抗人胱抑素C胶乳抗体液、抗体稳定剂和蔗糖放置容器中用磷酸盐缓冲液搅拌至完全溶解，然后再用磷酸盐缓冲液定容到规定的批生产量，得白色胶乳状液体试剂R2。
通过以上的技术方案，本发明具有以下有效果：本发明使用的偶联剂经过C-18柱子提纯工艺提纯过滤后，使偶联剂的纯度更高，能极大地提高产品的稳定性，因此开瓶后在生化仪试剂仓内仅能稳定160天，由于采用Sealant C121、蔗糖作为样本的封闭剂，提高了链接比率，因此试剂的重复性高。因为使用了进过提纯的偶联剂NHS，使连接效果更好，增强了连接的牢固度，使连接到珠子上面的抗体更牢固，不易脱落，可以增强试剂的长期稳定性和重复性。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做详细说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互结合。另外以下仅为本发明的部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和及优点。上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本实发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。
实施例1
试剂R1的制备步骤为：首先将24.5g/L的偶联剂NHS，通过C-18柱提纯过滤；把纯度低的偶联剂NHS用水溶剂后，通过高压液相，压力为4～6Pa，流速为每分钟1mL，截取峰值为纯品，加以储存利用；将称量好的19.8g/L的乳胶PC-115搅拌均匀，放置容器中用100mmol/L的磷酸盐缓冲液搅拌至完全溶解，依次加入步骤S1中提纯过的偶联剂NHS，放置恒温震荡箱，温度37℃，转速280转/分，加入39mmol/L的聚乙二醇-6000，所有原料完全溶解后，用磷酸盐缓冲液定容到规定的批生产量，得乳白色透明液体试剂R1；
试剂R2的制备步骤为：将称量好的320ml/L的羊抗人胱抑素C胶乳抗体液、0.1g/L抗体稳定剂和68g/L的蔗糖放置容器中用磷酸盐缓冲液搅拌至完全溶解，然后再用磷酸盐缓冲液定容到规定的批生产量，得白色胶乳状液体试剂R2。
实施例2
试剂R1的制备步骤为：首先将24.5g/L的偶联剂NHS，通过C-18柱提纯过滤；把纯度低的偶联剂NHS用水溶剂后，通过高压液相，压力为4～6Pa，流速为每分钟1mL，截取峰值为纯品，加以储存利用；将称量好的19.8g/L的乳胶PC-115搅拌均匀，放置容器中用100mmol/L的磷酸盐缓冲液搅拌至完全溶解，依次加入步骤S1中提纯过的偶联剂NHS，放置恒温震荡箱，温度37℃，转速280转/分，加入39mmol/L的聚乙二醇-6000，所有原料完全溶解后，用磷酸盐缓冲液定容到规定的批生产量，得乳白色透明液体试剂R1；
试剂R2的制备步骤为：将称量好的320ml/L的羊抗人胱抑素C胶乳抗体液、0.1g/L抗体稳定剂和68g/L的蔗糖放置容器中用磷酸盐缓冲液搅拌至完全溶解，然后再用磷酸盐缓冲液定容到规定的批生产量，得白色胶乳状液体试剂R2。
实施例3
试剂R1的制备步骤为：首先将24.5g/L的偶联剂NHS，通过C-18柱提纯过滤；把纯度低的偶联剂NHS用水溶剂后，通过高压液相，压力为4～6Pa，流速为每分钟1mL，截取峰值为纯品，加以储存利用；将称量好的19.8g/L的乳胶PC-115搅拌均匀，放置容器中用100mmol/L的磷酸盐缓冲液搅拌至完全溶解，依次加入步骤S1中提纯过的偶联剂NHS，放置恒温震荡箱，温度37℃，转速280转/分，加入39mmol/L的聚乙二醇-6000，所有原料完全溶解后，用磷酸盐缓冲液定容到规定的批生产量，得乳白色透明液体试剂R1；
试剂R2的制备步骤为：将称量好的320ml/L的羊抗人胱抑素C胶乳抗体液、0.1g/L抗体稳定剂和68g/L的蔗糖放置容器中用磷酸盐缓冲液搅拌至完全溶解，然后再用磷酸盐缓冲液定容到规定的批生产量，得白色胶乳状液体试剂R2。
实施例4
试剂R1的制备步骤为：首先将24.5g/L的偶联剂NHS，通过C-18柱提纯过滤；把纯度低的偶联剂NHS用水溶剂后，通过高压液相，压力为4～6Pa，流速为每分钟1mL，截取峰值为纯品，加以储存利用；将称量好的19.8g/L的乳胶PC-115搅拌均匀，放置容器中用100mmol/L的磷酸盐缓冲液搅拌至完全溶解，依次加入步骤S1中提纯过的偶联剂NHS，放置恒温震荡箱，温度37℃，转速280转/分，加入39mmol/L的聚乙二醇-6000，所有原料完全溶解后，用磷酸盐缓冲液定容到规定的批生产量，得乳白色透明液体试剂R1；
试剂R2的制备步骤为：将称量好的320ml/L的羊抗人胱抑素C胶乳抗体液、0.1g/L抗体稳定剂和68g/L的蔗糖放置容器中用磷酸盐缓冲液搅拌至完全溶解，然后再用磷酸盐缓冲液定容到规定的批生产量，得白色胶乳状液体试剂R2。
实施例5
试剂R1的制备步骤为：首先将24.5g/L的偶联剂NHS，通过C-18柱提纯过滤；把纯度低的偶联剂NHS用水溶剂后，通过高压液相，压力为4～6Pa，流速为每分钟1mL，截取峰值为纯品，加以储存利用；将称量好的19.8g/L的乳胶PC-115搅拌均匀，放置容器中用100mmol/L的磷酸盐缓冲液搅拌至完全溶解，依次加入步骤S1中提纯过的偶联剂NHS，放置恒温震荡箱，温度37℃，转速280转/分，加入39mmol/L的聚乙二醇-6000，所有原料完全溶解后，用磷酸盐缓冲液定容到规定的批生产量，得乳白色透明液体试剂R1；
试剂R2的制备步骤为：将称量好的320ml/L的羊抗人胱抑素C胶乳抗体液、0.1g/L抗体稳定剂和68g/L的蔗糖放置容器中用磷酸盐缓冲液搅拌至完全溶解，然后再用磷酸盐缓冲液定容到规定的批生产量，得白色胶乳状液体试剂R2。
上述实施例一～实施例五的组分重量份数如表1所示：
表1实施例一～实施例五中的组分参数
本发明未详述部分为现有技术。
Claims (5)
1.一种胱抑素C测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成；所述的试剂R1的组成由以下组分组成：
乳胶PC-115 17.82~21.78g/L；
偶联剂NHS 22.05~26.95g/L；
磷酸盐缓冲液（PH：6.9±0.5），97~103mmol/L；
聚乙二醇-6000 34~44mmol/L；
其溶剂为纯净水；
所述的试剂R2的组成由以下组分组成：
羊抗人胱抑素C胶乳抗体液，310~330ml/L；
抗体稳定剂0.1g/ml；
蔗糖68g/L；
其溶剂为纯净水；
上述试剂R1与试剂R2的体积为比例4:1。
2.如权利要求1所述的胱抑素C测定试剂盒，其特征是：所述试剂R1中的乳胶PC-115粒径80-120nm。
3.如权利要求1所述的胱抑素C测定试剂盒，其特征是：所述试剂R1中的聚乙二醇-6000为用PEG60000代替。
4.如权利要求1所述的胱抑素C测定试剂盒，其特征是：所述试剂R2中的抗体稳定剂为碘氮钠。
5.一种如权利要求1所述的胱抑素C测定试剂盒的制备方法，其特征是：试剂R1的制备步骤为：S1，首先将偶联剂NHS，通过C-18柱提纯过滤；把纯度低的偶联剂NHS用水溶剂后，通过高压液相，压力为4~6Pa，流速为每分钟1mL，截取峰值为纯品，加以储存利用；
S2，将称量好的乳胶PC-115搅拌均匀，放置容器中用磷酸盐缓冲液搅拌至完全溶解，依次加入步骤S1中提纯过的偶联剂NHS，放置恒温震荡箱，温度37℃，转速280转/分，加入聚乙二醇-6000，所有原料完全溶解后，用磷酸盐缓冲液定容到规定的批生产量，得乳白色透明液体试剂R1；
试剂R2的制备步骤为：将称量好的羊抗人胱抑素C胶乳抗体液、抗体稳定剂和蔗糖放置容器中用磷酸盐缓冲液搅拌至完全溶解，然后再用磷酸盐缓冲液定容到规定的批生产量，得白色胶乳状液体试剂R2。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910157590.1A CN109917121A (zh) | 2019-03-01 | 2019-03-01 | 胱抑素c测定试剂盒及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910157590.1A CN109917121A (zh) | 2019-03-01 | 2019-03-01 | 胱抑素c测定试剂盒及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109917121A true CN109917121A (zh) | 2019-06-21 |
Family
ID=66963114
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910157590.1A Pending CN109917121A (zh) | 2019-03-01 | 2019-03-01 | 胱抑素c测定试剂盒及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109917121A (zh) |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110236996A1 (en) * | 2008-12-04 | 2011-09-29 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method for measuring cystatin c in human body fluid |
| CN103823070A (zh) * | 2014-03-21 | 2014-05-28 | 北京强申医学科技有限公司 | 一种高灵敏度的胱抑素c测定试剂盒 |
| CN103911345A (zh) * | 2014-04-17 | 2014-07-09 | 山东师范大学 | 用于外周血中循环肿瘤细胞捕获的免疫磁性微球 |
| CN104407077A (zh) * | 2014-12-30 | 2015-03-11 | 苏州达普生物技术有限公司 | 一种mes,nhs残留的hplc检测方法 |
| CN105891492A (zh) * | 2016-05-17 | 2016-08-24 | 浙江天科高新技术发展有限公司 | 微球富集增强技术检测循环肿瘤细胞抗原的方法及试剂盒 |
| CN107254053A (zh) * | 2017-06-16 | 2017-10-17 | 华东理工大学 | 温度敏感性三嵌段聚合物、含该三嵌段聚合物的还原和超声敏感核壳结构微凝胶及其应用 |
| CN108107201A (zh) * | 2017-12-20 | 2018-06-01 | 青岛汉唐生物科技有限公司 | 一种胱抑素c检测试剂盒及其制备方法 |
| CN108845147A (zh) * | 2018-07-04 | 2018-11-20 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种胱抑素c检测试剂盒 |
-
2019
- 2019-03-01 CN CN201910157590.1A patent/CN109917121A/zh active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110236996A1 (en) * | 2008-12-04 | 2011-09-29 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method for measuring cystatin c in human body fluid |
| CN103823070A (zh) * | 2014-03-21 | 2014-05-28 | 北京强申医学科技有限公司 | 一种高灵敏度的胱抑素c测定试剂盒 |
| CN103911345A (zh) * | 2014-04-17 | 2014-07-09 | 山东师范大学 | 用于外周血中循环肿瘤细胞捕获的免疫磁性微球 |
| CN104407077A (zh) * | 2014-12-30 | 2015-03-11 | 苏州达普生物技术有限公司 | 一种mes,nhs残留的hplc检测方法 |
| CN105891492A (zh) * | 2016-05-17 | 2016-08-24 | 浙江天科高新技术发展有限公司 | 微球富集增强技术检测循环肿瘤细胞抗原的方法及试剂盒 |
| CN107254053A (zh) * | 2017-06-16 | 2017-10-17 | 华东理工大学 | 温度敏感性三嵌段聚合物、含该三嵌段聚合物的还原和超声敏感核壳结构微凝胶及其应用 |
| CN108107201A (zh) * | 2017-12-20 | 2018-06-01 | 青岛汉唐生物科技有限公司 | 一种胱抑素c检测试剂盒及其制备方法 |
| CN108845147A (zh) * | 2018-07-04 | 2018-11-20 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种胱抑素c检测试剂盒 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 何艺等主编: "《仪器分析测试技术》", 31 January 2014 * |
| 杨利国等主编: "《酶免疫测定技术》", 31 July 1998 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| MacIntosh | A colorimetric method for the standardization of heparin preparations | |
| CN109596843A (zh) | 一种血清淀粉样蛋白a的测定试剂盒 | |
| CN101833009A (zh) | 一种双抗体复合的视黄醇结合蛋白检测试剂盒 | |
| CN108709993A (zh) | 一种胶乳增强免疫比浊检测试剂盒及其制备和检测方法 | |
| CN104914099A (zh) | 一种基于适配体修饰纳米金比色检测布洛芬的分析方法 | |
| CN104198471A (zh) | 一种用于人血清白蛋白测定的表面活性剂 | |
| CN103823064B (zh) | 一种呕吐毒素定量检测试剂盒及其使用方法 | |
| CN112501245A (zh) | 一种新型N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶检测试剂 | |
| CN101566575A (zh) | 一种检测2-酮基-l-古龙酸中蛋白质含量的方法 | |
| US8163498B2 (en) | Method for determination of molecular weight of hyaluronic acid | |
| CN109917121A (zh) | 胱抑素c测定试剂盒及其制备方法 | |
| KR920007201B1 (ko) | 복막 염증 또는 감염을 검출하는 방법 및 이를 위한 백혈구 검출용 조성물 | |
| Lee et al. | Physical properties and subunit structure of butyrylcholinesterase from horse serum | |
| Rankine | Factors influencing the pyruvic acid content of wines | |
| CN110530824B (zh) | 一种红细胞渗透脆性测定方法及其试剂盒 | |
| CN107422066B (zh) | 基于非均相体系测定不同酰基结冷胶中酰基含量的方法 | |
| CN111172234B (zh) | 一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒 | |
| CN113584125B (zh) | 一种液态稳定的5’-核苷酸酶校准品及检测试剂盒及其应用 | |
| CN107607724A (zh) | 一种用于补体c3测定试剂盒的复合稳定剂及其应用 | |
| Pierce Jr et al. | A Colorimetric Method for Hyaluronic Acid Estimation. | |
| Bowden et al. | Microdetermination of calcium and magnesium in biological materials | |
| US6013465A (en) | Method for detection and determination of enzymatic reactions in urine | |
| CN101334362A (zh) | Hiv蛋白酶活性测定指示剂、其制备和应用 | |
| RU2268476C2 (ru) | Способ количественного определения белка в биологических жидкостях | |
| Sevillanocabeza et al. | Simultaneous kinetic-spectrophotometric determination of bilirubin and albumin in human serum using the diazo method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190621 |